黑树莓花青素联合奥沙利铂或喜树碱通过Akt信号通路协同增强结直肠癌化疗药物的治疗效果及作用机制研究

目的 探究黑树莓花青素联合奥沙利铂或喜树碱在结直肠癌细胞和氧化偶氮甲烷（azoxymethane,AOM）诱导的结直肠癌模型小鼠中的协同作用。方法 结直肠癌细胞系SW480和Caco-2给予黑树莓花青素、奥沙利铂或喜树碱进行干预,AOM诱导的结直肠癌模型小鼠给予黑树莓花青素或奥沙利铂进行干预。采用MTT法检测黑树莓花青素联合奥沙利铂或喜树碱对结直肠癌细胞增殖的影响;采用Western blotting法检测结直肠癌细胞和小鼠肠上皮细胞中蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)信号通路相关蛋白表达;采用苏木素-伊红（HE）染色检测小鼠结肠组织病理变化。结果 黑树莓花青素与奥沙利铂或喜树碱联合使用可显著抑制SW480和Caco-2细胞的增殖（P<0.05、0.01、0.001）;黑树莓花青素与奥沙利铂联合使用显著改善结直肠癌模型小鼠的状态,增加小鼠体质量,减少肠道肿瘤数量（P<0.01）;黑树莓花青素可能通过下调Akt信号通路相关蛋白的表达进而增强化疗药物的治疗效果（P<0.01、0.001）。结论 黑树莓花青素可以协同增加奥沙利铂或喜树碱的抗肿瘤作用。     

当归超临界提取物对AOM/DSS诱导的小鼠炎症相关性结直肠癌的化学预防作用

采用氧化偶氮甲烷/葡聚糖硫酸钠（AOM/DSS）诱导的雄性小鼠结肠癌模型,研究当归超临界提取物对诱发小鼠结肠癌的化学预防作用,并探讨其可能的作用机制。给予雄性Balb/c小鼠单剂量皮下注射AOM（10 mg·kg^-1）,1周以后,给予2%DSS饮用7 d,诱导结直肠癌。分别按照15,30,60 mg·kg^-1灌胃给予药物组当归超临界提取物至第17周。当归超临界提取物组肿瘤发生率、小鼠的荷瘤数及荷瘤体积均低于AOM/DSS模型对照组。这可能与当归超临界提取物能够显著降低AOM/DSS诱导的小鼠炎症相关结直肠癌模型中PCNA,COX-2,iNOS的表达有关。研究结果表明,当归超临界提取物对AOM/DSS诱导的小鼠炎症相关性结直肠癌的发生、发展有一定的干预作用,可进一步用于人类结直肠癌的化学预防研究。     

双参消瘤汤调控Wnt/β-catenin信号通路防治胃癌的分子机制研究

目的：基于Wnt/β-catenin信号通路研究双参消瘤汤抑制胃癌细胞增殖防治胃癌的分子机制。方法：动物实验采用健康雄性BALB/c-nu小鼠依据MNNG喂养法建立胃癌小鼠模型，根据干预方法不同分为模型组、双参消瘤汤高剂量组、双参消瘤汤低剂量组、miR-338-3p agomir组、联合组（双参消瘤汤+miR-338-3p agomir）；连续干预8周后采用ELISA法测定血清胃动素（MTL）、胃蛋白酶原Ⅰ（PGⅠ）、胃泌素（GAS）等水平，HE染色观察肿瘤组织病理，Real-time PCR法检测肿瘤组织miR-338-3p、SIRT2、Wnt、β-catenin mRNA表达水平，Western blot检测肿瘤组织SIRT2、Wnt、β-catenin蛋白表达水平。细胞实验根据干预方法不同分为模型组、双参消瘤汤高剂量组、双参消瘤汤低剂量组、miR-338-3p mimics组、miR-Con组；干预后采用MTT法检测细胞活性，Real-time PCR法检测细胞miR-338-3p、SIRT2、Wnt、β-catenin mRNA表达水平。结果：干预后，与模型组相比，双参消瘤汤高剂量组、双参消瘤汤低剂量组、miR-338-3p agomir组和联合组小鼠血清MTL、PGⅠ及GAS水平明显升高（P <0.05）。HE染色发现，双参消瘤汤高剂量组、双参消瘤汤低剂量组、miR-338-3p agomir组和联合组的胃组织病理学较模型组得到不同程度的改善。干预后，与模型组相比，双参消瘤汤高剂量组、双参消瘤汤低剂量组、miR-338-3p agomir组和联合组肿瘤组织miR-338-3p、SIRT2、Wnt、β-catenin mRNA表达水平明显升高（P <0.05）。干预后，与模型组相比，双参消瘤汤高剂量组、双参消瘤汤低剂量组、miR-338-3p agomir组和联合组肿瘤组织SIRT2、Wnt、β-catenin蛋白表达水平明显升高（P <0.05）；干预后，与模型组相比，双参消瘤汤高剂量组、双参消瘤汤低剂量组和miR-338-3p mimics组细胞存活率均明显升高（P <0.05）；与模型组相比，双参消瘤汤高剂量组、双参消瘤汤低剂量组和miR-338-3p mimics组胃癌细胞miR-338-3p、SIRT2、Wnt、β-catenin mRNA表达水平明显升高（P <0.05）。结论：双参消瘤汤抑制胃癌细胞增殖防治胃癌的分子机制与通过miR-338-3p靶向调控SIRT2促进Wnt/β-catenin信号通路活化有关。     

肾阳虚大鼠肾组织中microRNA差异性表达与信号通路分析

目的:采用基因芯片检测腺嘌呤造模诱导肾阳虚证大鼠肾组织中显著差异表达的小分子核糖核酸(miRNA),并用生物信息学方法分析其意义。方法:模型组大鼠灌胃150 mg·kg-1腺嘌呤诱导肾阳虚肾损伤模型,正常组灌服等量生理盐水。麻醉处死后取部分肾组织病理切片做苏木素-伊红(HE)染色并检测血液中血尿素氮(BUN),血肌酐(SCr)的含量,尿液中24 h尿蛋白(24U-TP)含量; trizol法提取肾脏组织中RNA,RNA经检测质量合格后用于后续芯片分析。μParaflo微流体芯片分析肾组织中差异表达的miRNA;通过实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)进一步验证芯片结果;利用生物信息学网站分析差异表达miRNA的靶基因及其功能。结果:基因芯片结果显示造模后共有50个miRNA差异表达,与正常组比较,模型组只有9个miRNA在肾组织中高表达且具有显著性差异,其中,与正常组比较,模型组中rno-miR-21-5p,rno-let-7i-5p,rno-miR-146b-5p和rno-miR-15b-5p表达明显升高(P0.05,P0.01); rno-miR-6215,rno-miR-192-5p,rno-miR-378b,rno-miR-378a-3p和rno-miR-194-5p表达明显降低(P0.05)。经PCR验证表明,与正常组比较,rno-miR-21-5p,rno-miR-146b-5p表达显著上升(P0.01); rno-miR-192-5p,rno-miR-378b,rno-miR-378a-3p,rno-miR-194-5p表达显著下降(P0.01)。其中,miR-192,miR-21,miR-378与上皮细胞-间充质转化/间充质-上皮细胞转化(EMT/MET)平衡相关,miR-192和miR-378可作为抗纤维化因子保护肾脏,而miR-21可作为促纤维化因子诱导肾脏损伤。miR-194可通过靶向调控脑Ras同源蛋白(Rheb)拮抗缺氧再灌注诱导的人肾近端肾小管上皮细胞HK-2损伤。这些差异miRNA的靶基因主要富集在Wnt和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路上。这两条信号通路与EMT/MET平衡密切相关。结论:通过基因芯片表达谱,发现4个参与肾间质纤维化(RIF)作用调节和2个未知功能miRNA表达。为进一步深入分析肾阳虚的调控网络提供了一个新的线索。     

清络通痹方对佐剂性关节炎大鼠破骨细胞分化相关miRNA表达的影响

目的观察清络通痹方(Qingluo Tongbi Compound,QTC)对佐剂性关节炎(adjuvant induced arthritis,AIA)大鼠骨破坏相关miRNA表达的影响,探讨其治疗类风湿关节炎的机制。方法建立AIA大鼠滑膜成纤维细胞和单核细胞共培养诱生破骨样细胞模型,应用miRNA芯片的方法初步筛选破骨细胞分化后期miRNA的异常表达谱,并采用实时定量PCR(RT-PCR)对芯片结果进行验证。制备QTC含药血清和空白血清,将破骨细胞随机分为空白组、空白血清组及QTC组,采用RT-PCR检测QTC对差异表达miRNA的影响,并应用生物信息学软件对关键性miRNA进行分析。结果与单核细胞比较,破骨样细胞分化过程中存在明显差异表达的miRNAs共211个,其中表达上调88个,表达下调123个。RT-PCR验证结果与芯片检测结果表达趋势一致。RT-PCR结果显示,QTC干预后miR-140-5p表达明显上调,生物信息学分析结果显示miR-140-5p靶基因显著富集在肌动蛋白细胞骨架的调节、Ras信号通路、c AMP信号通路和Rap1信号通路等信号通路上。结论破骨样细胞分化后期存在多种miRNAs失调,QTC可能通过影响miR-140-5p的表达参与调控破骨细胞的分化。     

当归超临界提取物和酚酸类成分配伍预防结直肠癌作用研究

该文旨在考查当归酚酸类提取物配伍低、中、高3个剂量的当归超临界提取物在氧化偶氮甲烷/葡聚糖硫酸钠(AOM/DSS)小鼠结直肠癌模型上的癌症预防作用。采用AOM单剂量注射启动癌症发生,口服DSS诱导小鼠慢性结直肠炎发生,促进肿瘤发展,模拟人类炎症相关的结直肠癌的发生发展全过程。在结直肠癌模型启动阶段,当归酚酸以1 g·kg~(-1)体质量剂量口服给药,在模型发展阶段,低、中、高3个剂量(15,30,60 mg·kg~(-1)体质量)的当归超临界提取物对小鼠进行灌胃给药,在第12周实验结束时取出小鼠结直肠组织,计算肿瘤发生率,测量肿瘤的体积,进行组织病理学分析,免疫组化考察肿瘤组织中PCNA和8-羟基鸟嘌呤表达,Western blot法分析肿瘤组织中γ-H2AX,i NOS和COX-2表达量。结果显示,当归酚酸配伍超临界提取物能够有效抑制肿瘤的发生发展,降低结直肠组织中细胞增殖活性,减轻DNA损伤,抑制炎性反应,并且表现出一定的剂量依赖性。其作用机制可能与当归酚酸类提取物在模型前期抵抗AOM造成的DNA氧化损伤,当归超临界提取物在模型后期抑制DSS诱导的慢性炎性反应相关。综上,当归酚酸配伍超临界提取物对于AOM/DSS诱导的小鼠结直肠癌的发生发展具有一定的干预作用,具有开发成癌症化学预防药物的潜力。     

miR-150-5p在非酒精性脂肪性肝纤维化中的表达及靶基因的生物信息学分析

目的通过对miR-150-5p进行靶基因预测及生物信息学分析,为miR-150-5p靶基因相关实验验证提供数据支持,并为深入研究miR-150-5p在非酒精性脂肪性肝纤维化中的调控机制及生物学功能提供理论指导。方法将健康雄性C57BL/6J小鼠随机分为2组,模型组10只采用胆碱-蛋氨酸缺乏饲料喂养制备非酒精性脂肪性肝纤维化模型,正常组10只采用胆碱-蛋氨酸充足的饲料喂养,均饲养8周。采用microRNA(miRNA)芯片检测2组小鼠肝组织中miR-150-5p表达水平,选择TargetScan、PicTar及miRanda靶基因预测软件预测miR-150-5p靶基因的交集作为分析的基因集合,分别进行功能富集分析,应用DAVID数据库进行靶基因信号转导通路富集分析。结果模型组小鼠肝组织中miR-150-5p表达水平显著高于正常组(P0.05),miR-150-5p靶基因集合分别富集在ATP结合、嘌呤核苷酸结合以及蛋白酶的活性等分子功能(P均0.05),主要参与磷脂代谢、蛋白质氨基酸的磷酸化和去磷酸化、血管再生与重建及促凋亡等生物学过程(P均0.05),靶基因信号转导通路显著富集于胰岛素信号通路、MAPK信号通路、TGF-β信号通路等信号转导通路中。结论 miR-150-5p参与了非酒精性脂肪性肝纤维化发生发展过程,为非酒精性脂肪性肝纤维化新型诊断标志物与治疗靶点的研究提供了理论依据。     

基于miRNA组学探讨慈菇消脂方调控TGF-β1诱导LX2细胞活化的作用机制北大核心CSCD

目的:运用生物信息学方法筛选慈菇消脂方干预人肝星状LX2细胞中差异表达微小RNA(micro RNA,miRNA),并进一步探讨差异miRNA对活化LX2细胞刺猬(Hedgehog, Hh)信号通路的影响及慈菇消脂方含药血清的干预机制。方法:CCK-8法检测不同浓度含药血清,不同时间处理对细胞活性影响,筛选最佳作用时间和作用浓度。6%慈菇消脂方含药血清干预LX2细胞72 h,以空白血清组作为正常对照,进行总RNA提取、RNA质检、文库构建,使用测序平台为illumina HiSeqTM2500进行高通量测序,以P<0.05的标准筛选差异miRNA,利用miRanda和RNAhybrid两个软件进行miRNA靶基因预测,得到miRNA和靶基因间的对应关系。对差异miRNA靶基因分别进行Gene Ontology和KEGG富集分析,筛选Hh信号通路差异表达miRNA。转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导建立LX2细胞活化模型。试验随机分为正常对照组、模型对照组、6%慈菇消脂方含药血清组、环靶明脂组、微小RNA-199a-5p(miR-199a-5p)过表达组及其阴性对照组。CCK-8法检测细胞增殖情况;Q-PCR和Western-blot技术检测细胞中miR-199a-5p、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型-胶原(Col-I)及Hh信号通路相关蛋白表达,以此探究miR-199a-5p对活化LX2细胞Hh信号通路的影响及慈菇消脂方含药血清的干预机制。结果:与正常对照组比较,模型对照组细胞活力显著升高(P<0.01),miR-199a-5p表达上调(P<0.01),Sonic刺猬信号通路(Sonic Hedgehog, Shh)、脑胶质瘤相关癌基因1(Glioma related oncogene homology-1,Gli-1)、Gli-2、Col-I、α-SMA蛋白及mRNA表达显著上调(P<0.01);与模型对照组比较,6%慈菇消脂方含药血清组细胞活力显著降低(P<0.01),miR-199a-5p表达显著下调(P<0.01),Gli2、α-SMA蛋白表达显著下调(P<0.05)。结论:慈菇消脂方含药血清可以抑制TGF-β1诱导的LX2细胞活化,其机制可能通过下调miR-199a-5p进而抑制Hh信号通路蛋白表达发挥作用。     

基于miR-124-3p/IL-6信号通路的槲皮素和表儿茶素协同调节炎症相关性结直肠癌研究

目的 基于miR-124-3p/白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)信号通路探究槲皮素与表儿茶素协同作用对炎症相关性结肠癌模型小鼠的干预作用及作用机制。方法 采用氧化偶氮甲烷（azoxymethane,AOM）/葡聚糖硫酸钠（dextran sodium sulfate,DSS）诱导小鼠建立炎症相关性结肠癌模型,同时单独或联合给予槲皮素和表儿茶素,待整个造模周期结束,测量各组小鼠结直肠长度,统计结直肠组织肿瘤数量;采用苏木素-伊红（HE）染色观察各组小鼠结肠组织病理变化;采用qRTPCR检测结直肠组织中炎症相关基因[Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)、IL-1β、IL-6、IL-17]及肿瘤相关基因[c-myc、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）]和miR-124-3p的m RNA表达;采用Western blotting检测结直肠组织中磷酸化信号转导与转录活化因子3(phosphorylated signal transducer and activator of t...     

miRNA在喉鳞癌及癌旁正常组织的相关表达分析

目的:利用基因芯片技术,研究miRNA在喉鳞癌和癌旁正常组织中的表达水平差异,寻找可能的分子生物学指标。方法:8例经手术的喉鳞癌及其周边(1cm)的正常组织,以Trizol法提取总RNA,经Cy3荧光标记后与含有人723条miRNA探针的芯片进行杂交,筛选在喉鳞癌及周边正常组织中差异表达的miRNA。结果:共有132个miRNA在8例喉鳞癌中均有表达。喉鳞癌和癌旁正常组织中差异表达的miRNA有53个,其中22个出现上调,31个出现下调,差异表达5倍以上的miRNA共有8个,分别为miR-196b、miR-196a、miR-375、miR-139-5p、miR-7、miR-338-3p、miR-183和miR-370。其中,miR-196b、miR-196a和miR-375差异表达8倍以上。结论:通过基因芯片的方法,发现了喉鳞癌中53个异常表达的miRNA,其中8个miRNA有明显差异的表达,在这些差异表达的miRNA中寻找可能存在的靶基因,为进一步探索喉鳞癌发病机制奠定基础。     

壮药莪术油对卵巢癌miR-223-3p的调控机制研究＊

目的 探讨壮药莪术油对卵巢癌miRNA-223-3p的调控机制；方法 生物信息学技术确定miRNA-223-3p在卵巢癌中调控的关键靶点；利用PCR、WB等实验检测技术验证壮药莪术油通过miR-223-3p对该关键靶点影响卵巢癌的生长发展。结果 生物信息学显示：miRNA-223-3p在卵巢癌中调控的关键靶点确定为癌症通路上的Wnt2B、NKX3-1。实验显示：壮药莪术油、紫杉醇、莪术醇能够降低瘤体组织miRNA-223-3p、Wnt2B mRNA的表达，并上调NKX3-1 mRNA的表达；壮药莪术油、紫杉醇、莪术醇能上调瘤体组织中NKX3-1蛋白的表达，并下调瘤体组织中Wnt2B蛋白的表达。结论 壮药莪术油能够抑制卵巢癌的增长，提高模型裸鼠生存质量，并可能是通过miRNA-223-3p调控Wnt2B、NKX3-1的表达实现的。     

马钱苷联合miR-3619-5p靶向迁移侵袭增强因子1对宫颈癌SiHa细胞迁移和凋亡的影响

目的 研究马钱苷联合miR-3619-5p靶向迁移侵袭增强因子1(migration and invasion enhancer 1,MIEN1)对宫颈癌SiHa细胞迁移和凋亡的影响。方法 采用qRT-PCR法检测宫颈癌SiHa、Hela、CasKi细胞和正常宫颈上皮Ect1/E6E7细胞中miR-3619-5p m RNA表达。在宫颈癌SiHa细胞中转染miR-3619-5p mimics上调miR-3619-5p的表达,给予马钱苷处理,采用CCK-8法分析细胞增殖;流式细胞术分析细胞凋亡;Transwell小室分析细胞迁移和侵袭能力的变化;Western blotting法分析剪切型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved cystein-asparate protease-3,cleaved Caspase-3)和基质金属蛋白酶-2(matrix metalloprotease-2,MMP-2)蛋白表达。生物信息学软件预测miR-3619-5p的靶基因,利用荧光素酶报告系统鉴定二者的靶向关系。在宫颈癌SiHa细胞中共转染miR-3619-5p mimics和MIEN1过表达载体...     

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??OBJECTIVE To study the effects and mechanisms of apple polysaccharides(AP) on tumorigenesis in a mouse model of colitis-associated colon cancer. METHODS AP was obtained from apple pomace and its protective efficacy was evaluated on carcinogenesis in a mouse model of colitis-associated colon cancer induced by azoxymethane (AOM) and dextran sodium sulfate (DSS). The effects of AP on TLR4/MyD88/NF-??B pathway were measured using immunohistochemistry , ELISA and Western blot.The serum were collected and TNF-?? was measured by ELISA kits. RESULTS After 20 weeks of continuous treatment, the incidence of colon cancer formation was 95% in the mice treated with AOM/DSS (model group), and these reduced to 26%, 10% and 5% in AP (1.25%, 2.5% and 5%) treatment group respectively. Western blot analysis demonstrated that TLR4 (membrane protein), MyD88, NF-??B p65 (nuclear protein) expression decreased significantly at protein level; and the secretion of TNF-?? decreased in control group(P<0.05). CONCLUSION AP could protect ICR mice from CACC effectively and the possible mechanism may be related to the inhibition of TLR4/MyD88/ NF-??B pathways.     

健脾消癌方对小鼠大肠癌皮下移植瘤细胞凋亡及相关蛋白表达的影响

目的:通过体内实验研究健脾消癌方对小鼠大肠癌皮下移植瘤细胞凋亡及相关蛋白表达的影响,探讨其抗大肠癌复发转移的作用机制。方法:通过皮下注射结肠癌细胞CT-26构建大肠癌皮下移植瘤小鼠模型,随机分为模型组,健脾消癌方低(15.75 g·kg~(-1)),中(31.5 g·kg~(-1)),高(63 g·kg~(-1))剂量组及5-氟尿嘧啶(5-Fu)组,分别给药14 d后,处死小鼠,剪取瘤体、称取瘤质量后剪碎瘤组织,采用流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,并采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞凋亡相关蛋白表达情况。结果:与模型组比较,健脾消癌方(15.75,31.5,63 g·kg~(-1))组瘤质量均减轻(P0.05),细胞凋亡率均升高(P0.05);B细胞淋巴瘤-2基因相关X蛋白(Bax),半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),半胱氨酸蛋白酶-8(Caspase-8)表达增高(P0.05),B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)表达降低(P0.05);与健脾消癌方(15.75,31.5 g·kg~(-1))组比较,健脾消癌方(63 g·kg~(-1))组Bax,Caspase-3,Caspase-8增高明显(P0.05)。结论:健脾消癌方可通过促进小鼠大肠癌皮下移植瘤细胞凋亡实现抑瘤作用,其机制可能与其调节细胞凋亡相关蛋白表达有关。     

Protective Effects of Turbinaria ornata and Padina pavonia against Azoxymethane‐Induced Colon Carcinogenesis through Modulation of PPAR Gamma,NF‐κB and Oxidative Stress

The aim of this study was to investigate the antiproliferative and protective effects of the brown seaweeds, Turbinaria ornata and Padina pavonia, against azoxymethane (AOM)‐induced colon carcinogenesis in mice. Both algal extracts showed anti‐proliferative effects on the human carcinoma cell line HCT‐116 in vitro, with T. ornata demonstrating a more potent effect. Male albino Swiss mice received intraperitoneal injections of AOM (10 mg/kg) once a week for two consecutive weeks and 100 mg/kg of either T. ornata or P. pavonia extracts. AOM‐induced mice exhibited alterations in the histological structure of the colon, elevated lipid peroxidation and nitric oxide, declined glutathione content and reduced activity of superoxide dismutase and glutathione peroxidase. In addition, AOM induced downregulation of peroxisome proliferator activated receptor gamma (PPARγ) and p53 mRNA expression, with concomitant upregulation of nuclear factor‐kappa B (NF‐κB) in colon tissue. Administration of either algal extract markedly alleviated the recorded alterations. In conclusion, the current study suggests that T. ornata and P. pavonia, through their antioxidant and anti‐inflammatory effects, are able to attenuate colon inflammation by downregulating NF‐κB expression. Furthermore, the protective effects of both algae against AOM‐initiated carcinogenesis were attributed, at least in part, to their ability to upregulate colonic PPARγ and p53 expression. Copyright © 2015 John Wiley & Sons, Ltd.     

健脾消癌方抑制结肠癌增殖的作用机制

目的:观察健脾消癌方对结肠癌HCT116细胞中微小RNA-21(microRNA-21,miR-21),第10号染色体丢失的磷酸酶基因(phasphatase and tensin homo-log deleted in chromosome 10,PTEN)表达的影响,探讨健脾消癌方抑制结肠癌转移的可能作用机制。方法:10%,15%,20%健脾消癌方含药血清处理HCT116细胞后,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测miR-21,PTEN mRNA的表达水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测PTEN蛋白的表达水平。结果:与空白组比较,健脾消癌方低剂量组miR-21 mRNA相对表达量降低,PTEN mRNA相对表达量升高,但差异无统计学意义;健脾消癌方中剂量组miR-21mRNA相对表达明显降低,PTEN mRNA相对表达明显升高(P0.05);健脾消癌方高剂量组miR-21 mRNA相对表达量显著降低,PTEN mRNA相对表达量显著升高(P0.01);与健脾消癌方中、低剂量组比较,健脾消癌方高剂量组miR-21 mRNA相对表达量明显降低,PTEN mRNA相对表达量明显升高(P0.05)。与空白组比较,健脾消癌方中、低剂量组PTEN蛋白相对表达量升高,差异无统计学意义;与空白组比较,健脾消癌方高剂量组PTEN蛋白相对表达量明显上升(P0.05);与健脾消癌方中、低剂量组比较,健脾消癌方高剂量组PTEN蛋白相对表达量明显升高(P0.05)。结论:健脾消癌方可能通过降低miR-21的表达,上调miR-21靶基因PTEN蛋白表达抑制结肠癌的增殖。     

结直肠癌转移模型裸鼠血管因子变化及健脾消癌方干预作用

目的:探讨结直肠癌裸鼠转移模型组织中血管内皮生长因子(VEGF),内皮抑素(ES),血管生成素(ANG),血管抑素(AS),基质金属蛋白酶-9(MMP-9),组织金属蛋白酶抑制物(TIMP)变化及健脾消癌方干预的机制。方法:在BALB/C-nu裸鼠盲肠内注射HCT116细胞50μL,造裸鼠结直肠癌转移模型。将模型裸鼠分为模型组、健脾消癌方组(40 g·kg-1),另设空白组。所有动物灌胃给予相应药物4周后,蛋白免疫印迹法(Western blot)测定裸鼠结肠、肝、肺及盲肠肿瘤组织中相关血管因子蛋白表达。结果:HCT116结直肠癌模型裸鼠的结肠、肝、肺与肿瘤组织的VEGF,MMP-9,TIMP明显升高(P0.05,P0.01);ANG在结肠、肝与肿瘤组织也明显升高(P0.05,P0.01);ES在结肠、肺与肿瘤组织显著降低,AS在肝、肺及肿瘤组织显著降低(P0.05)。健脾消癌方组的结肠MMP-9,肿瘤TIMP,肝组织ANG,MMP-9及肺组织VEGF明显降低,肺组织AS明显升高(P0.05)。结论:HCT116结直肠癌模型裸鼠VEGF,ANG,MMP-9在结肠、肝、肺及肿瘤组织中蛋白表达升高,ES,AS降低,TIMP升高;健脾消癌方能比较全面地改善机体抗肿瘤血管生成的能力。     

消癌解毒方诱导人肝癌SMMC-7721细胞miRNA表达变化

目的:探讨消癌解毒方对人肝癌SMMC-7721细胞增殖及微小核糖核酸(microRNA,miR)-25-3p,miR-29a-5p,miR-122-3p,miR-124-3p,miR-182-5p表达谱的影响。方法:将12只雄性大耳白兔随机分为4组,分别为消癌解毒方高、中、低剂量(15.12,7.56,3.78 g·kg-1)组和空白组,各组分别给予消癌解毒方及生理盐水灌胃4 d。4 d后于颈动脉中取血清并配制培养基。用消癌解毒方(15.12,7.56,3.78 g·kg-1)含药血清及空白血清的培养基处理人肝癌细胞株SMMC-7721,噻唑蓝(MTT)比色法检测肿瘤细胞增殖活性、实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(Real-time polymerase chain reaction,Real-time PCR)法验证人肝癌细胞SMMC-7721中miR-25-3p,miR-29a-5p,miR-122-3p,miR-124-3p和miR-182-5p的表达水平。结果:经过12,24,48 h后,消癌解毒方(15.12,7.56,3.78 g·kg-1)含药血清对人肝癌SMMC-7721细胞的增殖均存在抑制作用。随着消癌解毒方含药血清浓度的增加,其对人肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖的抑制率也相应增加。其中高剂量组含药血清的抑制效果最好,其干预12,48 h的吸光度A较同期空白组明显降低(P0.05)。高剂量组干预24 h A比同期空白组显著降低(P0.01),该组抑制率为42.86%。Real-time PCR证实消癌解毒方(15.12,7.56,3.78 g·kg-1)含药血清的培养基能诱导miR-25-3p,miR-182-5p表达下调,诱导miR-29a-5p,miR-122-3p,miR-124-3p表达上调。且高剂量组的调控作用较空白组更显著(P0.01)。结论:消癌解毒方可能通过诱导miRNA表达谱的改变而参与抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖作用,但其具体机制仍有待进一步研究。