下瘀血汤下调NLRP3改善高脂饮食诱导小鼠非酒精性脂肪性肝炎

目的探讨下瘀血汤对高脂饮食诱导的非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的干预作用及机制。方法24只雄性C57/BL6小鼠随机分为低脂饮食(LFD)组(8只)、高脂饮食(HFD)组(16只),喂养6周。第7周始,HFD组随机分为HFD-water组(简称HFD组,8只)和下瘀血汤干预组(高脂饮食+下瘀血汤治疗组,简称XYX组,8只),灌胃共计16周。22周结束后,检测小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)含量;采用HE染色、油红O染色,观察小鼠肝脏组织形态、脂滴沉积;实时定量PCR检测肝组织中脂肪代谢途径相关因子固醇调节元件结合蛋白1(SREBP-1)、脂肪酸合成酶(FASN)、乙酰辅酶羧化酶α(ACCα),炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素18(IL-18)、簇分化抗原68(CD68)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及核苷酸结合寡聚化结构域蛋白样受体3(NLRP3)炎性小体相关基因等;Western Blot、免疫组化检测NLRP3表达;天狼猩红染色、免疫组化检测a-SMA观察肝脏纤维化。结果与LFD组比较,HFD组血清ALT活性、TC、TG含量显著升高(P0.05,P0.01)。肝脏脂肪变明显,NAS评分显著升高(P0.05); SREBP-1、FANS、ACCα等脂肪代谢合成相关因子显著上调,CD68、MCP-1等炎症相关因子mRNA表达显著升高(P0.05);NLRP3炎性小体相关基因的表达显著上调(P0.01,P0.05);与HFD组比较,XYX组的肝脏脂肪变改善,NAS评分下调,脂肪代谢合成相关因子、炎症因子的mRNA表达下调,NLRP3炎性小体相关基因下调和NLRP3蛋白表达下调(均P0.05)。天狼猩红染色及α-SMA染色显示HFD组的染色面积较LFD组增加(P0.05),XYX组则较HFD组减少(P0.05)。结论下瘀血汤对HFD诱导小鼠NASH有显著改善作用;抑制NLRP3是下瘀血汤改善NASH的作用机制之一。     

茵陈芍甘汤对内毒素性急性肝损伤小鼠NLRP3炎症小体的影响

目的:观察茵陈芍甘汤对内毒素性急性肝损伤的影响及对NLRP3炎症小体表达的影响。方法:取健康雄性ICR小鼠50只,按数字表法随机分为正常组、模型组、水飞蓟素组、茵陈芍甘汤高剂量组及茵陈芍甘汤低剂量组。各组第一次给药干预1 h后,除正常组腹腔注射生理盐水1 m L外,其余各组均以10μg/kg LPS+600mg/kg D-Gal N用1 m L生理盐水溶解后腹腔注射造成急性肝损伤模型。观察造模并药物干预后各组小鼠肝脏病理组织改变,检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、IL-1β水平及肝脏组织Cryopyrin、Caspase-1蛋白表达。结果:与正常组比较,造模后小鼠肝脏组织炎症明显,肝细胞水肿、坏死。血清IL-1β含量明显上升(P0.01),肝组织Caspase-1、Cryopyrin蛋白的表达水平显著升高(P0.05或P0.01),但ALT和AST水平变化不明显(P0.05)。与模型组比较,茵陈芍甘汤治疗组肝细胞肿胀及空泡样变性减轻,肝细胞呈少量点状坏死,炎症细胞浸润减少。血清IL-1β含量明显下降(P0.05),肝组织Caspase-1、Cryopyrin蛋白的表达水平明显降低(P0.05或P0.01),ALT和AST水平变化不明显(P0.05)。结论:茵陈芍甘汤对内毒性急性肝损伤小鼠有明显的保护作用,其机制可能与其降低了急性肝损伤小鼠血清IL-1β以及肝组织Caspase-1、Cryopyrin蛋白的表达水平有关。     

六味五灵片对小鼠急性乙醇性肝损伤的保护作用及机制初步研究

该文旨在研究六味五灵片对小鼠急性乙醇肝损伤的保护作用,并初步探讨其作用机制。实验将C57BL/6小鼠随机分成7组,即空白对照组,模型组,阳性药联苯双酯组(150 mg·kg-1),六味五灵片极低、低、较高、高剂量组(0.1,0.5,4,8 g·kg-1)。采用改良的造模方法(给药4 d后给予56%乙醇,6 g·kg-1灌胃2次,12 h/次)建立小鼠急性肝损伤模型。检测小鼠血清中ALT,AST活性及肝组织中MDA,TG,TNF-α,IL-1β的含量和GSH,SOD的活性;HE和油红O染色,观察肝组织病理学变化。结果显示,与模型组相比,六味五灵片各剂量组均能显著降低血清ALT,AST的含量(P0.05),提高GSH,SOD活性,减少肝组织MDA,TG的生成,降低肝组织中TNF-α,IL-1β的含量(P0.05),且呈一定剂量依赖关系。同时,HE和油红O染色结果表明,六味五灵片可显著改善乙醇引起的肝细胞肿胀度,水样变性和脂滴形成等肝组织损伤。结果表明,六味五灵片对急性乙醇肝损伤具有较好的保护作用,其保护机制可能与减轻脂质过氧化,提高抗氧化酶活性,抑制氧化应激和炎症因子过表达相关。     

竹节参多糖对LPS/D-GalN诱导小鼠急性肝损伤的保护作用

目的:探究竹节参多糖对LPS/D-GalN诱导急性肝损伤小鼠的保护作用及其机制。方法:采用腹腔注射LPS(8μg/kg)和D-GalN(800 mg/kg)诱导小鼠急性肝损伤。记录小鼠死亡时间并绘制生存曲线和计算肝脏指数并观察肝脏组织病理学变化,检测动物血清中肝脏酶水平以及肝匀浆中氧化应激因子和炎症因子,评价竹节参多糖对小鼠急性肝损伤的保护作用。结果:竹节参多糖能剂量依赖性地降低LPS/D-GalN诱导的肝损伤并提高肝损伤型动物在24 h内的生存率,剂量依赖性缓解肝脏病变。经竹节参多糖给药处理后,模型动物肝组织SOD、GSH活性升高,MDA、TNF-α、IL-1β和IL-6及血清ALT、AST均降低。结论:竹节参多糖能减轻LPS/D-GalN诱导的小鼠急性肝损伤,其作用机制可能与降低氧化应激和缓解炎症反应有关。     

淫羊藿苷对类风湿关节炎小鼠NLRP3炎性小体信号通路的影响

目的探讨淫羊藿苷对类风湿关节炎小鼠的干预作用及NLRP3炎性小体信号通路的影响。方法将50只雄性DBA/1小鼠随机分为对照组、模型组、淫羊藿苷10 mg/kg组、淫羊藿苷20 mg/kg组、淫羊藿苷40 mg/kg组,每组10只。模型组和淫羊藿苷各组尾巴根部皮下注射含Ⅱ型胶原的完全弗氏佐剂诱导类风湿关节炎模型,在第21天二次免疫造模后,淫羊藿苷各组开始给予相应剂量淫羊藿苷灌胃,对照组和模型组灌胃等体积的生理盐水,均每天1次,连续3周。观察各组小鼠关节炎评分和关节肿胀度;眼球取血,采用ELISA法检测各组小鼠血清白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)水平;分离关节滑膜组织,采用HE和番红O染色观察各组小鼠关节滑膜的病理变化;采用RT-PCR检测各组小鼠滑膜组织中IL-1β和IL-18 mRNA表达水平;采用Western blot法检测各组小鼠滑膜组织中NLRP3炎性小体信号通路分子(IL-1β、Caspase-1及NLRP3)表达水平。结果首次免疫21 d后,模型组及淫羊藿苷各组小鼠的关节炎评分开始增加,模型组小鼠的关节炎评分持续增加至实验结束;从第27天开始,淫羊藿苷各组小鼠的关节炎评分与模型组比较呈剂量依赖性降低(P均0.05)。淫羊藿苷各组关节肿胀度均明显低于模型组(P均0.05),且呈剂量依赖性降低。模型组小鼠血清中IL-1β、IL-18水平和滑膜组织中IL-1βmRNA、IL-18 mRNA、IL-1β、Caspase-1、NLRP3表达水平均显著高于对照组(P均0.05);淫羊藿苷各组小鼠血清中IL-1β、IL-18水平和滑膜组织中IL-1βmRNA、IL-18 mRNA、IL-1β、Caspase-1、NLRP3表达水平均显著低于模型组(P均0.05),且呈剂量依赖性降低。病理结果显示模型组小鼠滑膜组织中出现严重的炎性细胞浸润、基质破坏及钙含量显著减少,淫羊藿苷各组炎性症状及基质破坏减轻,钙含量显著增加。结论淫羊藿苷可通过抑制NLRP3炎性小体介导的炎症反应来缓解类风湿关节炎,对类风湿关节炎的治疗具有潜在价值。     

健脾理气方通过下调NLRP3炎症小体的活化防治内毒素性急性肝损伤大鼠

目的:在网络药理学研究基础上,基于NLRP3炎性小体活化通路探讨健脾理气方对大鼠急性肝损伤(ALI)的防治作用。方法:(1)利用网络药理学技术预测分析健脾理气方通过抗炎和免疫调节治疗ALI的潜在靶点。(2)将雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为正常对照组、模型对照组以及健脾理气方6. 05、12. 1、24. 2 g/kg组,除正常对照组大鼠按体重一次性腹腔注射生理盐水外,其余各组大鼠给予腹腔注射600 mg/kg D-氨基半乳糖(D-GalN)诱导ALI模型。造模后健脾理气方6. 05、12. 1、24. 2 g/kg组立即分别灌胃相应体积药物,每日两次,给药间隔为12 h,连续给药2 d。末次给药后立即取材,采用HE染色观察肝脏组织病理形态学的改变;生物化学法检测大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和γ-谷氨酰转肽酶(GGT)及肝脏组织中的Caspase-1活性,ELISA法检测血清炎症因子IL-1β、IL-18和NF-κB含量; Western Blot法检测肝脏组织中衔接分子(ASC)和炎性小体(NLRP3)蛋白表达水平的变化。结果:(1)网络药理学预测结果显示,健脾理气方可能通过NLRP3炎性小体等信号通路防治ALI。(2)与正常对照组相比,模型对照组大鼠肝脏组织损伤指数显著升高,血清ALT、AST、IL-1β、NF-κB含量明显升高,Caspase-1酶活性均明显升高,肝组织NLRP3和ASC蛋白表达水平明显上调(P <0. 05或P <0. 01);与模型对照组相比,健脾理气方12. 1、24. 2 g/kg组的大鼠肝脏组织损伤指数显著降低,12. 1 g/kg组的血清ALT、AST、GGT和NF-κB含量明显降低,及肝组织NLRP3、ASC蛋白表达量均明显下调(P <0. 05或P <0. 01),24. 2 g/kg组的血清GGT、IL-18和NF-κB含量明显降低,Caspase-1酶活性明显降低及肝组织NLRP3和ASC蛋白表达量明显下调(P <0. 05或P <0. 01)。结论:健脾理气方12. 1、24. 2 g/kg组对D-GalN诱导的急性肝损伤均具有一定的保护作用,其中以12. 1 g/kg组的健脾理气方防治的效果最佳;其作用的分子机制可能在于下调NLRP3炎症小体的活化;这一结果与网络药理学的预测结果相一致。     

金花茶多糖对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作用及其机制的研究

目的:研究金花茶多糖对四氯化碳(CCl_4)诱发的小鼠急性肝损伤的保护作用及其作用机制。方法:60只小鼠随机分为正常对照组、模型组、联苯双酯组(120 mg/kg)和金花茶多糖组(200 mg/kg,100 mg/kg,50 mg/kg)。除正常对照组及模型组外,各治疗组按20 ml/kg剂量灌胃给药,每天按时灌胃1次,共7天。末次给药后,除正常对照组外,其余组腹腔注射0.12%CCl_4花生油(10 ml/kg)建立急性肝损伤模型。禁食不禁水24 h后,眼球取血,收集肝脏。生化法测定血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性或含量;酶联免疫吸附法(ELISA)检测肝组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)表达水平和一氧化氮(NO)含量;蛋白质印迹法(Western blot)检测肝组织NF-κB蛋白表达情况;HE染色肝切片,显微镜观察肝组织病理改变。结果:与CCl_4模型组相比,金花茶多糖剂量组(200mg/kg,100 mg/kg)小鼠血清中ALT、AST及MDA含量降低,SOD及GSH-Px的活性升高;肝组织中NO含量显著降低;肝组织中TNF-α、IL-1β、IL-6及NF-κB表达水平呈下降趋势;病理切片表明金花茶多糖剂量组(200 mg/kg,100 mg/kg)小鼠肝损伤显著减轻。而金花茶多糖50 mg/kg剂量组对CCl_4诱发的小鼠急性肝损伤无明显改善作用。结论:金花茶多糖对CCl_4诱导的小鼠急性肝损伤有明显的保护作用,其机制可能与抗氧化应激,清除自由基代谢产物,抑制脂质过氧化反应及抗炎有关。     

衢枳壳提取物对CCl_4诱导的肝纤维化小鼠肝脏炎症及NF-κB/NLRP3炎性体通路的影响

研究衢枳壳提取物(QAF)对四氯化碳(CCl_4)诱导的肝纤维化小鼠肝脏炎症的影响及其机制。将60只C57BL/6雄性小鼠按照随机数字表法随机分为对照组(蒸馏水灌胃)、模型组(蒸馏水灌胃)、秋水仙碱组(Col,秋水仙碱2 mg·kg~(-1)·d~(-1)灌胃)、QAF低剂量组(QAF-L,QAF 100 mg·kg~(-1)·d~(-1)灌胃)和QAF高剂量组(QAF-H,QAF 300 mg·kg~(-1)·d~(-1)灌胃)。模型组和各给药组用1 mL·kg~(-1)CCl_4(CCl_4-橄榄油1∶4)腹腔注射,每周2次。给药和造模共6周。末次给药后16 h,处死小鼠,收集血清以及肝脏组织。检测血清谷丙转氨酶(alanine aminotransferase, ALT)和谷草转氨酶(aspartate aminotransferase, AST)水平,并观察小鼠肝功能情况;HE染色法观察各组小鼠肝组织病理学变化;F4/80免疫组化法观察各组小鼠肝脏炎症细胞浸润情况;采用RT-PCR法检测各组小鼠肝脏肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素(interleukin, IL)-18和IL-1β mRNA表达;采用Western blot法检测各组小鼠肝脏IκBα,p-IKKα/β,p-p65,NLRP3,caspase-1和cleaved caspase-1表达情况。结果显示,不同剂量QAF显著缓解肝损伤程度,并降低肝纤维化小鼠肝功能指标血清ALT和AST水平。免疫组化结果显示,QAF显著减少肝纤维化小鼠肝脏炎症细胞浸润。RT-PCR和Western blot结果显示,QAF显著降低肝纤维化小鼠肝组织TNF-α,IL-18和IL-1β基因表达,并抑制肝脏IκBα蛋白降解,以及p-IKKα/β,p-p65,NLRP3和cleaved caspase-1蛋白表达。综上所述,QAF具有改善CCl_4诱导的小鼠肝纤维化的作用,其机制可能与抑制NF-κB/NLRP3炎性体介导的炎症信号通路有关。     

老鹳草素对D-氨基半乳糖诱导的肝损伤小鼠的保护作用及机制

目的:研究老鹳草素对D-氨基半乳糖(D-GalN)致急性肝损伤小鼠的保护作用及机制。方法:60只小鼠随机分为正常组,模型组,水飞蓟素组(180 mg·kg~(-1)),老鹳草素低,中,高剂量组(50,100,200 mg·kg~(-1)),灌胃给药每天1次,正常组及模型组小鼠灌胃生理盐水连续10 d。末次给药2 h后,除正常组外,其余各组腹腔注射D-GalN(500 mg·kg~(-1)),建立D-GalN致小鼠急性肝损伤模型。16 h后,收集血清和肝组织。生化法测定血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST),碱性磷酸酶(ALP),总胆红素(TBIL)和肝脏中丙二醛(MDA),总超氧化物歧化酶(T-SOD),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性或含量;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β(IL-1β),白细胞介素-6(IL-6)和γ-干扰素(IFN-γ)含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)分析肝组织中Toll样受体-4(TLR-4)和核转录因子-κB(NF-κB)蛋白表达情况;苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织病理学变化。结果:与正常组比较,模型组小鼠血清中ALT,AST,ALP,TBIL和肝脏MDA水平显著升高(P 0. 01),与模型组比较,老鹳草素各给药组能够明显降低肝损伤小鼠血清中ALT,AST,ALP,TBIL和肝脏MDA(P 0. 05,P 0. 01),且增强肝脏T-SOD和GSH-Px活性(P 0. 05,P 0. 01),同时抑制血清中TNF-α,IL-1β,IL-6和IFN-γ含量的升高和TLR-4,NF-κB的蛋白表达(P 0. 05,P 0. 01); HE染色结果显示其对肝组织损伤程度有明显改善作用。结论:综上所述,老鹳草素对D-GalN诱导的急性肝损伤小鼠具有显著的保护作用,其保肝作用机制可能与抑制氧化应激、炎症反应以及TLR-4/NF-κB信号通路有关。     

染料木素对APAP诱导小鼠肝纤维化的影响

目的:研究染料木素对对乙酰氨基酚(APAP)诱导小鼠肝纤维化的保护作用。方法:将40只雄性BALB/c小鼠随机分为正常对照组、模型组、染料木素低(50 mg/kg)、高剂量组(100 mg/kg),每组10只。采用灌胃APAP建立小鼠肝损伤肝纤维化模型,观察染料木素药物干预后的影响。应用HE染色和Masson染色检测肝脏组织病理学变化;TUNEL法检测肝细胞凋亡情况;免疫组织化学染色检测结缔组织生长因子(CTGF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白介素6(IL-6)的表达。结果:HE和Masson染色结果显示,染料木素可明显减轻模型小鼠肝脏炎性损伤及坏死,减少胶原纤维沉积;TUNEL染色结果显示,染料木素组小鼠肝细胞凋亡数量显著低于模型组(P0.01);免疫组织化学染色结果显示,染料木素组小鼠肝脏中CTGF、TNF-α、IL-6表达显著低于模型组(P0.05或P0.01)。结论:染料木素具有改善APAP诱导小鼠肝损伤和肝纤维化的作用。     

茵虎清肝方对D-氨基半乳糖脂多糖诱导的急性肝衰竭模型大鼠肝损伤的影响

目的观察茵虎清肝方对D-氨基半乳糖脂多糖诱导的急性肝衰竭模型大鼠肝损伤的影响并探讨其作用机制。方法 60只大鼠随机分为空白组、模型组、阳性组、实验组。采用腹腔注射D-氨基半乳糖脂多糖建立急性肝衰竭大鼠模型。阳性对照组给予安宫牛黄丸灌胃、实验组给予茵虎清肝方药液灌胃。检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(GOT)以及总胆红素(TBIL)水平,观察肝脏组织病理学变化,采用ELISA检测检测肝脏组织中炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、I白细胞介素-6(L-6)表达以及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)水平的变化,检测肝脏纤维化指标透明质酸酶(HA)、层黏连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(Ⅲ-PC)和Ⅳ型胶原及肝细胞凋亡情况。结果模型组肝细胞排列紊乱、细胞水肿变性坏死,肝索紊乱,炎性细胞浸润,纤维组织增生,肝窦区扩张并充血。给予药物干预后,阳性组和实验组大鼠的肝细胞形态结构稍紊乱,肝细胞肿胀减轻,坏死肝细胞减少,结节状也少,纤维组织减少。模型组大鼠的ALT、GOT、TBIL、肝脏指数以及肝纤维化指标明显升高(P <0.05)。给予药物干预后,阳性组和实验组的ALT、GOT、TBIL、肝脏指数、HA、LN、Ⅲ-PC以及Ⅳ-C水平明显低于模型组,两组间差异有统计学意义(P <0.05)。模型组大鼠的SOD和GSH含量明显降低,TNF-α、IL-1β、IL-6水平和MDA含量明显升高;药物干预后,阳性组和实验组大鼠SOD和GSH含量明显升高(P <0.05),TNF-α、IL-1β、IL-6水平和MDA含量明显降低(P <0.05)。阳性组和实验组大鼠的SOD、GSH和MDA含量、TNF-α、IL-1β以及IL-6水平差异有统计学意义(P <0.05)。结论茵虎清肝方通过抑制炎症反应、减少氧化应激,阻断肝脏纤维化对D-氨基半乳糖脂多糖诱导的大鼠急性肝衰竭发挥保护作用。     

木犀草素抑制类风湿关节炎大鼠NLRP3炎性小体活化增强关节骨保护作用研究

目的:考察木犀草素对胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠NLRP3炎性小体调节作用,观察木犀草素对动物模型关节骨保护表现。方法:随机选取雌性SD大鼠分为空白组、模型组、木犀草素100mg/kg组(木犀草素组)、木犀草素50mg/kg+MCC95020mg/kg组(联合给药组)。除空白组外,其余各组构建关节炎模型。连续给药5周并测量大鼠足跖容积,免疫组化法检测骨组织内骨保护素(OPG)表达,免疫蛋白印迹法检测足跖内NLRP3、胱天蛋白酶-1(Caspase-1)、RANKL、血管内皮生长因子(VEGF)、低氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白表达,ELISA试剂盒检测血浆白介素(IL)-1β和IL-18表达。结果:与模型组比较,木犀草素组、联合给药组大鼠足跖肿胀度显著降低(P<0.01);免疫组化显示木犀草素组、联合给药组骨组织内OPG蛋白表达较高(P<0.01);免疫蛋白印迹显示木犀草素组、联合给药组关节滑膜内NLRP3、Caspase-1、RANKL、VEGF和HIF-1α蛋白表达下调(P<0.01,P<0.05);ELISA显示木犀草素组、联合给药组血浆IL-1β、IL-18表达下调(P<0.01)。结论:木犀草素可抑制类风湿关节炎NLRP3炎性小体的表达,进一步降低足跖内Caspase-1、RANKL、VEGF和HIF-1α蛋白表达并增强骨组织内骨保护素OPG蛋白表达,从而起到骨关节保护作用。     

金钗石斛多糖调控炎性小体NLRP3对非酒精性脂肪肝大鼠的保护作用

目的:研究金钗石斛多糖对NAFLD大鼠的干预作用,并从NLRP3信号通路分析作用机制。方法:将72只SD大鼠分为正常、模型、金钗石斛多糖高、中、低剂量和多烯磷脂酰胆碱干预组,除正常组外,NAFLD模型构建成功治疗4周后处死,取出肝脏检测肝脏病理学和NLRP3、Caspase-1蛋白及mRNA表达,收集血液检测谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)含量。结果:正常组肝小叶清晰,细胞核分布均匀,模型组有明显脂肪空泡和炎症反应浸润,金钗石斛多糖与多烯磷脂酰胆碱组明显改善;与正常组比较,模型组AST、ALT、TG、TC、HDL-C、LDL-C、IL-1β、IL-18、Caspase-1和NLRP3蛋白及mRNA均升高(P<0.05),与模型组比较,金钗石斛多糖组和多烯磷脂酰胆碱组上述指标均降低(P<0.05),此外金钗石斛多糖组与多烯磷脂酰胆碱组AST、ALT和HDL-C没有差异,高剂量组TG、TC和LDL-C低于多烯磷脂酰胆碱组(P<0.05),中和高剂量组IL-1β、IL-18、Caspase-1和NLRP3蛋白及mRNA明显低于多烯磷脂酰胆碱组(P<0.05)。结论:金钗石斛多糖可明显改善高脂高糖饮食诱导的NAFLD大鼠肝功能和血脂,这与其可调节炎性小体NLRP3,进而降低炎症反应有关。     

金黄霉素A对脂多糖诱导小鼠急性肾脏炎症的作用及其可能机制

目的 研究金黄霉素A(chrysomycin A,Chr-A)对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导小鼠急性肾脏炎症反应的作用及机制。方法 BALB/c小鼠随机分为正常对照组、LPS模型组、Chr-A 3 mg·kg^-1和10 mg·kg^-1给药组。Chr-A连续给药7 d后,LPS模型组和各Chr-A给药组腹腔注射5 mg·kg^-1的LPS,6 h后取血清和肾脏组织进行检测。检测血清尿素氮(BUN)评价肾功能;ELISA法检测肾组织中白细胞介素1β(Interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素6(Interleukin-6,IL-6)、单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemoattractant protein,MCP-1)以及肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)水平;Western blot检测炎症相关蛋白环氧合酶2(cyclooxygenase 2,COX2)、NLRP3炎性小体及嘌呤能离子通道型受体7(P2X7)的表达。结果 Chr-A剂量依赖性降低LPS刺激引起的血清BUN水平升高;此外,Chr-A剂量依赖性降低LPS刺激引起的肾脏组织中IL-β,IL-6,TNF-α,MCP-1及COX2炎症因子的升高;进一步研究发现,Chr-A显著下调炎症通路相关蛋白P2X7和NLRP3的表达。结论 Chr-A具有抗LPS诱导的小鼠急性肾脏炎症反应作用,机制可能与下调炎症蛋白P2X7和NLRP3相关。     

滇黄精多糖对低浓度链脲佐菌素所致的糖尿病肾病小鼠的影响

目的:探究滇黄精多糖对糖尿病肾病小鼠的影响。方法:向空腹昆明种小鼠尾静脉注射链脲佐菌素,40 mg/kg,1次/d,连续注射3 d。末次注射1周后,检测小鼠空腹血糖(FBG),以FBG≥11.1 mmol/L为糖尿病小鼠,继续予高脂高糖饮食饲料喂养90 d。通过检测小鼠24 h尿量、尿蛋白的肾功能指标证明其损伤的存在,糖尿病肾病小鼠模型形成。将成模的小鼠随机分为模型组,缬沙坦组和滇黄精多糖低、中、高剂量组,每组10只。各组小鼠连续灌胃予对应药物90 d,1次/d。另取健康昆明种小鼠设为空白对照组,空白对照组和模型组给予等量生理盐水。末次给药1 d后,检查小鼠FBG,收集尿液计算尿量,并检测24 h尿蛋白(UP)含量,测定血清中肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)。HE染色法观察糖尿病肾病小鼠肾脏的病理学变化。透射电镜观察肾脏组织超微结构的变化。ELISA法检测肾脏组织中炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)的含量及纤维化因子转化生长因子-β1(TGF-β1)、纤维连接蛋白(FN)的含量。结果:与模型组比较,缬沙坦组及滇黄精多糖低、中、高剂量组小鼠尿量、Scr、BUN、24 hUP含量明显降低(P<0.05),肾脏组织中炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6和纤维化因子TGF-β1、FN的含量明显下降(P<0.05)。滇黄精多糖高剂量组小鼠血清中BUN含量、血糖低于缬沙坦组,TNF-α的含量高于缬沙坦组(P<0.05或P<0.01),但小鼠24 h尿量、尿蛋白、Scr、IL-1β、IL-6、TGF-β1、FN含量与缬沙坦组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:滇黄精多糖能有效降低低浓度链脲佐菌素所致糖尿病肾病小鼠血糖,调节肾脏中炎症因子和纤维因子的含量,改善肾功能状态,对肾脏有一定的保护作用。     

双黄连口服液对3型鼠肝炎病毒致急性肝衰竭模型C57BL/6J裸小鼠的保护作用机制研究

目的观察双黄连口服液对3型鼠肝炎病毒(MHV-3)致裸小鼠急性肝衰竭(ALF)模型的影响,探讨其可能作用机制。方法将32只C57BL/6J裸小鼠随机分为正常组、急性肝衰竭组、双黄连低剂量组和双黄连高剂量组,每组8只。除正常组外,其余组均采用腹腔注射MHV-3建立急性肝衰竭模型。建模成功后,双黄连低剂量组和双黄连高剂量组分别给予0.25 mL/(10 g·d)和0.5 mL/(10 g·d)双黄连口服液灌胃,正常组、急性肝衰竭组分别给予等体积生理盐水灌胃,均1次/d,连续灌胃28 d。取静脉血检测天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、谷氨酰转移酶(GGT)、总胆红素(TBil)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、胆汁酸(TBA)水平,取肝脏组织检测干扰素-γ(IFN-γ)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-9(IL-9)表达水平。结果急性肝衰竭组小鼠血清AST、GGT、TBil、ALT、TBA水平和肝组织中IFN-γ、TNF-α、TGF-β1、IL-1β、IL-6、IL-9表达水平均显著高于正常组(P均<0.05);双黄连高剂量组和双黄连低剂量组小鼠血清AST、GGT、TBil、ALT、TBA水平和肝组织中IFN-γ、TNF-α、TGF-β1、IL-1β、IL-6、IL-9表达水平均显著低于急性肝衰竭组(P均<0.05),且双黄连高剂量组各指标水平均显著低于双黄连低剂量组(P均<0.05)。结论双黄连口服液对MHV-3致C57BL/6J裸小鼠急性肝衰竭具有保护作用,主要体现在改善肝功能并抑制细胞因子合成、减轻炎症性肝损伤方面。     

参苓白术散对NAFLD大鼠肝细胞mTORC1/STAT3信号通路的影响

目的:观察参苓白术散对高脂饮食饲养的非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肝细胞哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合体1(mTORC1)/细胞信号转导因子及转录激活因子3(STAT3)信号通路的影响,从炎症角度揭示参苓白术散抗大鼠NAFLD的作用机制。方法:取SD大鼠80只,随机分为4组,分别为正常组、模型组、参苓白术散高、低剂量组(30,10 g·kg^-1),每组20只。采用高脂饲料喂养大鼠8周,建立NAFLD大鼠模型,各药物干预组大鼠灌服相应剂量的参苓白术散,8周后取血和肝组织样本,全自动生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST),总胆固醇(TC),甘油三酯(TG),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)定量;对肝组织进行油红O,苏木素-伊红(HE)染色;采用Ⅳ型胶原酶离体循环灌注法分离肝细胞;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测肝细胞肿瘤坏死因子(TNF)-α,白细胞介素(IL)-1β,IL-5及IL-6含量变化,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠肝细胞mTORC1,STAT3 mRNA及蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠病理组织学改变表明,肝组织炎症及脂肪蓄积显著,血清ALT,AST,TC,TG及LDL-C含量显著升高,HDL-C显著下降,肝细胞TNF-α,IL-1β,IL-5及IL-6水平显著升高,mTORC1,STAT3 mRNA及蛋白相对表达量显著升高(P<0.01)。与模型组比较,参苓白术散高、低剂量组肝组织脂质蓄积明显改善,血清ALT,AST,TC,TG及LDL-C含量明显下降,肝细胞TNF-α,IL-1β,IL-5及IL-6水平明显下降,肝细胞mTORC1,STAT3 mRNA及蛋白相对表达量明显降低;参苓白术散高剂量组在改善脂质蓄积,抑制肝组织炎症反应方面,效果优于参苓白术散低剂量组,mTORC1,STAT3 mRNA及蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论:参苓白术散能够改善高脂饮食诱导的NAFLD大鼠脂肪代谢紊乱、减轻肝脏脂质蓄积及炎症反应,其作用机制可能与抑制肝细胞内mTORC1/STAT3通路相关mRNA及蛋白表达有关。     

补中益气汤对刀豆蛋白A致小鼠急性肝衰竭的保护作用

目的:研究补中益气汤对刀豆蛋白A(Con A)致急性肝衰竭小鼠的保护作用及机制。方法:80只小鼠随机分为正常组,模型组,环孢素A(Cs A)组,补中益气汤低、高剂量(10.5,21 g·kg^-1)组,每组16只。除正常组外,其余各组静脉注射15 mg·kg^-1Con A诱导小鼠急性肝衰竭模型。治疗组于Con A注射30 min后分别静脉注射50 mg·kg^-1Cs A,口服灌胃补中益气汤,正常组和模型组采用同时间、同体积双蒸水灌胃对照。造模3,10 h后取眼球血、肝脏、脾脏,采用流式微球技术检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素(IL)-6,IL-12,γ-干扰素(IFN-γ)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)水平,采用全自动生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性,苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织病理学变化,流式细胞术分析脾脏CD4+T淋巴细胞活化程度,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝脏细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2),p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)的表达及磷酸化水平。结果:与正常组比较,模型组小鼠血清ALT和AST水平均显著升高(P<0.01),肝组织病理损伤明显,血清炎性细胞因子TNF-α,IL-6,IL-12,IFN-γ和MCP-1水平显著升高(P<0.01),脾脏CD4+T淋巴细胞中IL-2,IFN-γ和IL-4表达显著上调(P<0.01),肝脏ERK1/2和p38 MAPK磷酸化水平显著升高(P<0.01);与模型组比较,补中益气汤高剂量组血清ALT和AST水平明显降低(P<0.05,P<0.01),肝组织病理损伤程度减轻,血清炎性细胞因子TNF-α,IL-6,IL-12,IFN-γ和MCP-1水平明显降低(P<0.05,P<0.01),脾脏CD4+T淋巴细胞中IL-2和IFN-γ表达明显下调(P<0.05,P<0.01),肝脏ERK1/2和p38 MAPK磷酸化水平明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论:补中益气汤对Con A诱导的急性肝衰竭小鼠具有明显的保护作用,其保护作用机制可能通过抑制ERK1/2和p38 MAPK信号通路,从而降低T淋巴细胞活化和炎性细胞因子分泌。     

四氯化碳诱导的小鼠急性肝损伤药理作用研究

目的探讨白藜芦醇对四氯化碳(CCl₄)引起的小鼠急性肝损伤的药理作用。方法购买SPF级健康昆明种雄性小鼠50只,体质量18~22 g,随机分为5组,通过腹腔注射CCl₄致使小鼠肝急性炎症损伤,不同剂量的白藜芦醇给予治疗,2周后,收集小鼠静脉血检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总胆红素(TBIL)及门冬氨酸氨基转移酶(AST)的表达量;适量肝组织匀浆后,ELISA试剂盒检测各组小鼠肝内炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6和IL-1β的表达差异。肝匀浆后对丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性进行检测,观察白藜芦醇对急性肝损伤的保护作用。结果 CCl₄能够成功诱导小鼠急性肝损伤,白藜芦醇降低肝损伤小鼠血清中ALT、TBIL和AST活性,降低肝内MDA含量,提高肝内SOD、CAT活性,逆转血清中IL-6、IL-1β和TNF-α的表达,各项指标呈剂量依赖性地受到改变。结论白藜芦醇对CCl₄诱导的肝损伤小鼠具有抗炎和抗氧化作用,降低MDA的活性,提高了SOD、CAT活性,同时抑制促炎因子IL-6、IL-1β和TNF-α的表达。     

藏红花素对慢性阻塞性肺疾病急性加重期大鼠肺组织NOD样受体蛋白3表达及血清IL-1β水平的影响

目的:探讨藏红花素对慢性阻塞性肺疾病(COPD)急性加重期大鼠NOD样受体蛋白3(NLRP3)表达及血清白细胞介素-1β(IL-1β)水平的影响。方法:将40只大鼠随机分为对照组、模型组和藏红花素小、大剂量组。采用肺功能检测仪检测大鼠肺功能指标,TUNEL染色检测肺上皮细胞凋亡情况,比色法检测血清丙二醛(MDA)和乳酸脱氢酶(LDH)水平,RT-qPCR和Western blot法检测NLRP3表达,ELISA法检测大鼠血清IL-1β水平。结果:与对照组比较,模型组大鼠呼气峰流量(PEF)、吸气峰流量(PIF)、0.3秒用力呼气容积与用力肺活量比值(FEV0.3/FVC)显著降低(均P<0.05),肺泡上皮细胞凋亡率、肺组织NLRP3表达水平以及血清IL-1β、MDA和LDH水平显著升高(均P<0.05)。与模型组比较,藏红花素小、大剂量组大鼠PEF、PIF、FEV0.3/FVC显著升高(均P<0.05),肺泡上皮细胞凋亡率、肺组织NLRP3表达水平及血清IL-1β、MDA和LDH水平显著降低(均P<0.05)。结论:藏红花素可有效改善COPD急性加重期大鼠的肺功能,抑制氧化应激和炎症反应,减少肺泡上皮细胞凋亡,其机制与下调NLRP3表达有关。