温胆汤对精神分裂症模型大鼠海马组织PI3K，Akt和GSK3β的影响

目的:研究温胆汤对精神分裂症模型鼠海马组织磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/糖原合成酶激酶3β(GSK3β)信号通路的影响。方法:将60只大鼠随机分为6组,分别为正常组、模型组、氯氮平组、温胆汤高、中、低剂量组,每组10只。正常组和模型组灌胃生理盐水,氯氮平组灌胃氯氮平原药20 mg·kg~(-1);温胆汤高、中、低剂量组分别灌胃温胆汤生药40,20,10 g·kg~(-1); 1次/d,共21 d。在最后1次给药2 h后,除正常组外,其余各组采用一次性左侧腹腔注射MK8010. 6 mg·kg~(-1),以诱发精神分裂症。观察并记录大鼠的刻板行为,3 d后,处死并取其海马组织待测。依照Sams Dodd和Hoffman标准对大鼠的刻板行为评分;蛋白免疫印迹法(Western blot)测定海马组织PI3K,Akt和GSK3β蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测海马组织PI3K,Akt,GSK3βmRNA表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠刻板行为评分显著升高(P 0. 01),海马组织PI3K,Akt,GSK3β蛋白和mRNA表达水平显著下降(P 0. 01)。与模型组比较,温胆汤给药组能明显降低大鼠刻板行为评分(P 0. 05),升高海马组织PI3K,Akt,GSK3β蛋白和mRNA表达水平(P 0. 05,P 0. 01)。结论:温胆汤通过改善精神分裂症模型鼠刻板行为、升高其海马组织PI3K,Akt,GSK3β的表达,调控PI3K/Akt/GSK3信号通路,从而达到治疗精神分裂症的目的。     

电针通过PI3K/Akt/GSK3β信号通路调节抑郁大鼠糖代谢紊乱

目的:探讨电针“足三里”改善应激后抑郁大鼠糖代谢紊乱的作用机制。方法:SD大鼠随机分为空白组、模型组、电针组，每组10只。采用慢性束缚应激复制抑郁大鼠模型。电针组造模期间同时进行双侧“足三里”电针干预，每次30 min,每日1次，持续4周。造模前后记录大鼠体质量并计算体质量增加量；造模结束后行糖水偏好实验、强迫游泳实验观察大鼠行为学；生化法检测大鼠血清中葡萄糖含量及糖化白蛋白水平；HE染色、PAS染色观察大鼠肝脏组织病理形态及肝糖原含量；Western blot法检测肝脏组织中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化(p)-PI3K、蛋白激酶B(Akt)、p-Akt、糖原合成酶激酶-3(GSK3β)、p-GSK3β蛋白表达量。结果:与空白组相比，模型组大鼠体质量增加量、糖水偏好指数降低(P<0.01),游泳不动时间延长(P<0.01),血清中葡萄糖含量及糖化白蛋白水平升高(P<0.05),肝脏组织中p-Akt蛋白表达量及p-Akt/Akt比值降低(P<0.001),p-GSK3β蛋白表达量及p-GSK3β/GSK3β比值升高(P<0.01,P<0.00...     

葛根素通过PI3K/Akt/GSK-3β信号通路调节HepG2细胞胰岛素抵抗

目的:观察葛根素对胰岛素抵抗Hep G2细胞内磷脂酰肌醇3激酶(PI3K),蛋白激酶B(Akt),糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)信号分子的影响。方法:通过0.5 mmol·L~(-1)棕榈酸联合9×10~(-4)U·L~(-1)胰岛素孵育24 h诱导Hep G2胰岛素抵抗细胞模型,噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞存活率以确定葛根素给药浓度。实验设正常组、模型组和葛根素各剂量组(40,80,160,320μg·L~(-1))。葡萄糖检测试剂盒检测细胞培养液上清葡萄糖的含量,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞培养液上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6)的含量,肝糖原测定试剂盒测定Hep G2细胞内肝糖原含量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞内PI3K,Akt,磷酸化(p)-Akt,GSK-3β,p-GSK-3β的蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组Hep G2细胞葡萄糖消耗率明显下调(P0.05),细胞内糖原含量减少(P0.05),细胞培养液上清中TNF-α和IL-6的含量增加(P0.05),PI3K和p-Akt蛋白表达下降(P0.05),GSK-3β蛋白表达增加(P0.05);与模型组比较,葛根素可呈剂量依赖性增加细胞葡萄糖消耗率(P0.05),增加细胞内肝糖原含量(P0.05),降低细胞培养液上清中TNF-α和IL-6的含量(P0.05),增加PI3K蛋白表达,上调Akt蛋白磷酸活化水平(P0.05),下调GSK-3β蛋白表达并增强其磷酸失活水平(P0.05)。结论:葛根素可通过增强PI3K/Akt/GSK-3β信号转导过程,增加肝细胞内糖原含量从而改善Hep G2细胞的胰岛素抵抗状态。     

电针对阿尔茨海默病模型大鼠GSK3β信号通路相关蛋白的影响＊

目的 观察电针“百会”“肾俞”穴对阿尔茨海默病（AD）模型大鼠学习记忆能力及海马CA1区GSK3β信号通路相关蛋白的影响及机制研究。方法 30只SPF级SD雄性大鼠随机分成假手术组、模型组和电针组，每组10只。除假手术组外，其余各组大鼠双侧海马区各注射5 μL β淀粉蛋白25-35（Aβ_25-35）制备AD模型，假手术组给予同等剂量生理盐水注射。假手术组、模型组正常喂养，不做干预处理，电针组选取百会及肾俞穴（两侧肾俞穴交替选择）进行电针治疗，频率2 Hz，电流1 mA，每日1次。每个疗程6天，共2个疗程，两个疗程间隔1天。治疗结束后第2天上午8点开始Morris水迷宫（Morris water maze，MWM）检测大鼠学习记忆能力，行为学实验结束后第2天取材。苏木精-伊红染色（Hematoxylin eosin staining，HE）观察海马CA1区病理形态改变。免疫组化法（Immunohistochemical method，IHC）检测大鼠海马区Tau蛋白磷酸化的表达，及糖原合成酶激酶3β（glycogen synthase kinase3β，GSK3β）信号通路相关蛋白表达。免疫印迹法（Western blot，WB）检测磷脂酰肌醇3激酶（phosphatidylinositol 3 kinase，PI3K）、蛋白激酶B（protein kinase B，AKT）、GSK3β相关蛋白的表达。聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）检测AKT、GSK3β mRNA的表达。结果 与假手术组相比：模型组大鼠逃避潜伏期明显延长（P < 0.01），穿越平台次数明显减少（P < 0.01），目标象限停留时间明显缩短（P < 0.01）；模型组海马区Tau蛋白磷酸化水平明显提高（P < 0.01），GSK3β蛋白表达水平明显提高（P < 0.01）；模型组PI3K（P85）、AKT（Ser473）、GSK3β（Ser9）蛋白相对表达量降低（P < 0.05）；模型组AKT mRNA表达水平明显降低（P < 0.01），GSK3β mRNA表达水平明显提高（P < 0.01）。与模型组相比：电针组大鼠逃避潜伏期明显缩短（P < 0.01），穿越平台次数明显增加（P < 0.01），目标象限停留时间明显延长（P < 0.01）；电针组海马区Tau蛋白磷酸化水平明显降低（P < 0.01），GSK3β蛋白表达水平明显降低（P < 0.01）；电针组PI3K（P85）、AKT（Ser473）、GSK3β（Ser9）蛋白相对表达量增加（P < 0.05）；电针组AKT mRNA表达水平明显提高（P < 0.01），GSK3β mRNA表达水平明显降低（P < 0.01）。结论 电针治疗能够有效改善AD大鼠学习记忆能力，其机制可能与影响GSK3β信号通路相关蛋白表达从而抑制Tau蛋白磷酸化有关。     

基于PI3K/Akt/GSK-3β信号通路探讨七味白术散对糖尿病脑病大鼠认知功能障碍的影响

目的 观察七味白术散对糖尿病脑病（DE）大鼠模型的治疗作用，基于磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）通路探究其可能存在的机制。方法 选取SPF级雄性Wistar大鼠48只，随机分为空白组8只、高脂饲料组40只。高脂饲料组大鼠喂养12周后，连续2 d腹腔注射35 mg·kg^-1的1%链脲佐菌素构建DE模型，空白组大鼠注射等量柠檬酸钠缓冲液。造模成功后，按血糖和体质量随机分为模型组、七味白术散低、中、高剂量组（3.15、6.3、12.6 g·kg^-1）、联合西药组（二甲双胍+罗格列酮，0.21 g·kg^-1），每组各6只。给药组灌胃给予相应剂量药物，空白组和模型组灌胃等体积生理盐水，1次/d，连续给药6周。采用Morris水迷宫检测DE大鼠空间记忆能力，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测空腹胰岛素（FINS）水平并计算胰岛素抵抗指数（HOMA-IR），苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠海马组织病理变化，ELISA检测海马组织氧化应激指标，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测海马组织PI3K、Akt、核转录因子-κB（NF-κB）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、和白细胞介素-1β（IL-1β）mRNA表达，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠海马中PI3K、Akt、磷酸化（p）-Akt、GSK-3β、p-GSK-3β蛋白表达情况。结果 与空白组比较，模型组大鼠FINS、HOMA-IR值均显著增高（P<0.01）；找到平台原位置的路径显著增长，逃避潜伏期显著延长（P<0.01）；海马组织神经细胞形态破坏；大鼠海马活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）水平升高和超氧化物歧化酶（SOD）活性降低（P<0.05，P<0.01）；PI3K、Akt mRNA表达水平显著降低（P<0.01），NF-κB、TNF-α和IL-1β mRNA表达水平升高（P<0.05，P<0.01）；PI3K、p-Akt、p-GSK-3β蛋白表达水平下降（P<0.05，P<0.01），GSK-3β表达显著增加（P<0.01）。与模型组比较，七味白术散中剂量组和联合西药组FINS、HOMA-IR值均显著下降（P<0.01）；大鼠找到平台原位置的路径显著缩短，逃避潜伏期缩短（P<0.01）；大鼠海马组织结构逐渐恢复，神经细胞形态破坏程度明显改善；大鼠海马组织中ROS、MDA含量降低和SOD水平升高（P<0.01）；PI3K、Akt mRNA表达水平显著升高（P<0.01），NF-κB、TNF-α和IL-1β mRNA表达水平降低（P<0.05，P<0.01）；PI3K、p-Akt、p-GSK-3β蛋白表达升高，GSK-3β表达显著降低（P<0.01）。结论 七味白术散可以缓解DE大鼠的胰岛素抵抗，其可能是通过激活PI3K/Akt/GSK-3β信号通路来修复DE大鼠海马神经元损伤，改善DE大鼠学习认知能力。     

化浊解毒疏肝方对癫痫大鼠学习记忆及PI3K/Akt/GSK-3β信号通路的影响

目的 观察化浊解毒疏肝方对癫痫大鼠学习记忆及磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）通路相关蛋白表达的影响，探讨其可能的作用机制。方法 选取SPF级雄性SD大鼠48只，随机分为正常组、模型组、丙戊酸钠组、化浊解毒疏肝方低、中、高剂量组，每组8只。正常组给予0.9%氯化钠溶液腹腔注射（0.035 g·kg^-1），其余5组给予同等剂量戊四氮（PTZ）腹腔注射制备大鼠慢性癫痫模型，共14次。化浊解毒疏肝方低、中、高剂量组分别灌胃化浊解毒疏肝方2.7，5.4，10.8 g·kg^-1，丙戊酸钠组灌胃丙戊酸钠0.19 g·kg^-1，正常组和模型组灌胃同等体积0.9%氯化钠溶液，每天1次，持续28 d。药物干预期间，各造模组大鼠在第7，14，21，28天给予PTZ腹腔注射以维持癫痫模型。应用Morris水迷宫观察大鼠的行为学变化，苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠海马神经元病理形态学变化，免疫组化检测磷酸化（p）-Akt，p-GSK-3β蛋白的表达，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测PI3K，Akt，p-Akt，GSK-3β，p-GSK-3β蛋白表达情况。结果 与正常组比较，模型组大鼠寻找平台时间延长（P<0.01），穿越平台次数减少（P<0.01），海马CA1区神经元结构损伤，海马CA1区p-Akt，p-GSK-3β蛋白表达降低（P<0.05），海马组织PI3K，p-Akt，p-GSK-3β相对表达量降低（P<0.01）。与模型组比较，丙戊酸钠组、化浊解毒疏肝方各剂量组大鼠寻找平台时间缩短（P<0.01）；丙戊酸钠组、化浊解毒疏肝方高、中剂量组大鼠穿越平台次数升高（P<0.01），各治疗组海马CA1区神经元结构明显改善，化浊解毒疏肝方高、中剂量组、丙戊酸钠组海马CA1区p-Akt，p-GSK-3β蛋白表达升高（P<0.05），化浊解毒疏肝方高、中剂量组、丙戊酸钠组PI3K，p-Akt，p-GSK-3β相对表达量升高（P<0.01）。结论 化浊解毒疏肝方可改善癫痫大鼠学习记忆能力，可能与激活PI3K/Akt/GSK-3β通路相关蛋白有关，从而发挥抗癫痫作用。     

温胆汤含药血清对谷氨酸环境下星型胶质细胞凋亡及PI3K，Akt，GSK3β表达的影响

目的:探讨温胆汤含药血清对谷氨酸环境下星型胶质细胞的保护作用及磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/糖原合成酶激酶3β(GSK3β)信号通路的影响。方法:将60只大鼠随机分为5组,其中正常组20只,氯氮平组、温胆汤高、中、低剂量组,每组10只。正常组给予20 mL·kg-1生理盐水灌胃,氯氮平组给予氯氮平原药20 mg·kg-1灌胃,温胆汤组分别给予剂量为40,20,10 g·kg-1的温胆汤灌胃,1次/d,8 d后处死大鼠,取血,离心取血清,灭活,过滤除菌,离心管分装备用。将星型胶质细胞分为空白组、模型组、氯氮平组、温胆汤高、中、低剂量组,其中空白组、模型组给予空白血清培养,其余各组给予相应含药血清培养;除空白组外,其余各组用10 mmol·L-1谷氨酸处理24 h后予流式细胞仪检测星形胶质细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法(Western blot),实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)分别检测星型胶质细胞PI3K,Akt,GSK3β蛋白和mRNA的表达。结果:与空白组比较,模型组细胞凋亡率显著升高(P0. 01);与模型组比较,温胆汤各剂量组细胞凋亡率则显著下降(P0. 01)。与空白组比较,模型组细胞PI3K,Akt,GSK3β蛋白、磷酸化蛋白表达显著降低(P0. 01);与模型组比较,温胆汤各剂量组细胞PI3K,Akt,GSK3β蛋白、磷酸化蛋白表达明显升高(P0. 05,P0. 01)。与空白组比较,模型组细胞PI3K,Akt,GSK3βmRNA的表达显著降低(P0. 01);与模型组比较,温胆汤各剂量组细胞PI3K,Akt,GSK3βmRNA表达明显升高(P0. 05,P0. 01)。结论:温胆汤含药血清可有效升高PI3K,Akt,GSK3β表达,从而调控PI3K/Akt/GSK3β信号通路,保护神经细胞。     

天王补心丸对慢性不可预知应激抑郁模型小鼠行为学，HPA轴，海马GSK3β磷酸化及BDNF表达的影响

目的:研究天王补心丸对慢性应激抑郁模型小鼠行为学、下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA轴),海马糖原合酶激酶3β(GSK3β)磷酸化及脑源性神经营养因子(BDNF)表达的影响,初步探讨其抗抑郁作用机制。方法:将60只雄性ICR小鼠按照糖水偏嗜度随机分为正常组、慢性应激模型组、盐酸氟西汀组(10 mg·kg~(-1))以及天王补心丸高、中、低剂量组(3.6,1.8,0.9 g·kg~(-1))。采用慢性不可预知应激实验(CUS)建立抑郁症小鼠模型,各给药组灌胃给药28 d后通过糖水偏好实验、开场行为实验、新奇抑制摄食实验检测其行为学变化。之后分别取小鼠血、肾上腺及海马组织,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测小鼠血清中促肾上腺皮质激素(ACTH)和皮质酮(CORT)含量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马组织中GSK3β磷酸化及BDNF表达的变化,并计算肾上腺指数。结果:与正常组比较,模型组小鼠的蔗糖水偏嗜度显著降低(P0.01),开场活动次数明显减少(P0.05),新奇抑制摄食潜伏期延长(P0.01),血清ACTH,CORT含量民明显升高(P0.05,P0.01),海马组织中GSK3β磷酸化及BDNF表达显著降低(P0.01),肾上腺指数显著升高(P0.01);与模型组比较,天王补心丸可以逆转抑郁症模型小鼠行为学变化(P0.05,P0.01),显著降低抑郁症模型小鼠血浆ACTH和CORT的含量(P0.01)和肾上腺指数(P0.01),同时增加小鼠海马GSK3β磷酸化及BDNF表达水平(P0.05,P0.01),其作用效果与盐酸氟西汀相当。结论:天王补心丸对慢性不可预知应激抑郁模型小鼠具有显著的抗抑郁作用,其作用机制与抑制HPA轴活性、上调海马GSK3β磷酸化及BDNF的蛋白表达有关。     

养阴通络方对脑缺血大鼠海马p-Akt、Akt及PI3K蛋白表达的影响

目的:观察养阴通络方对脑缺血损伤大鼠磷酸化Akt(P-Akt)、蛋白激酶B(Akt)及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)蛋白表达作用,对其神经保护作用机制进行探讨。方法:在长期激怒法致肝肾阴虚证动物模型基础上,采用大鼠线栓法复制局灶性脑缺血再灌注模型,免疫印迹法检测海马p-Akt(Ser473)、Akt、PI3K蛋白的表达。结果:与模型组比较,养阴通络方16g/kg组大鼠海马Akt蛋白表达增加(P<0.01),p-Akt(Ser473)、PI3K蛋白表达水平有升高趋势。结论:养阴通络方对脑缺血损伤保护作用的机制,可能是通过上调PI3K、Akt的表达,促进Akt的磷酸化。     

桂皮醛通过PI3K/Akt信号通路抑制TGF-β1诱导的结肠癌细胞LoVo上皮间质转化

目的:探讨桂皮醛对转化生长因子-β_1(Transforming growth factor-β_1,TGF-β_1)诱导的结肠癌LoVo细胞增殖、侵袭及上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响及其与磷酯酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路的关系。方法:通过TGF-β_1诱导结肠癌细胞株LoVo发生上皮间质转化,使用桂皮醛(0,20,40,80 mg·L-1)干预由TGF-β_1诱导的LoVo细胞的增殖,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测桂皮醛对TGF-β_1诱导的细胞增殖能力的影响。转移小室(transwell)侵袭实验检测细胞侵袭能力变化。蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测E-钙黏蛋白(E-cadherin),N-钙黏蛋白(N-cadherin),波形蛋白(Vimentin)及PI3K/Akt信号通路关键蛋白的表达。采用PI3K/Akt抑制剂LY290004来验证桂皮醛通过PI3K/Akt信号通路抑制TGF-β_1诱导的EMT。结果:与空白组比较,桂皮醛能有效抑制TGF-β_1诱导的增殖及侵袭能力(P0.01),显著增加E-cadherin的表达,抑制N-cadherin,Vimentin及TGF-β_1刺激的p-Akt和p85的表达(P0.01);同时通过抑制PI3K/Akt信号通路的激活逆转TGF-β_1诱导的EMT(P0.01)。结论:桂皮醛可通过调节PI3K/Akt信号通路抑制TGF-β_1诱导的结肠癌细胞LoVo的上皮间质转化,降低其侵袭能力。     

复方地黄方调控GSK3β信号转导通路缓解帕金森病异动症模型大鼠的机制研究

目的:探讨复方地黄方对帕金森病(PD)异动症(LID)模型大鼠GSK3β信号转导通路的影响。方法:采用6-羟基多巴胺(6-OHDA)偏侧损毁黑质制备PD大鼠模型,在成功制备PD大鼠模型基础上,腹腔注射左旋多巴+苄丝阱制备LID大鼠模型。将大鼠随机分为正常对照组、假手术组、PD组、LID组、复方地黄方组,在治疗4周后取纹状体,应用Real-time PCR和Western blot测定各组大鼠纹状体内GSK3βmRNA、GSK3β蛋白及pGSK3β表达及磷酸化情况。结果:PD组和LID组大鼠纹状体中GSK3βmRNA和GSK3β蛋白相对表达水平较正常对照组、假手术组均显著升高(P0.01),且LID组显著高于PD组(P0.01),复方地黄方干预后其GSK3βmRNA和GSK3β蛋白相对表达水平显著降低(P0.01)。PD组和LID组大鼠纹状体中p-GSK3β(phospho S9)蛋白相对表达水平较正常对照组、假手术组均显著降低(P0.01),且LID组显著低于PD组(P0.01),复方地黄方干预后其p-GSK3β(phospho S9)蛋白相对表达水平显著升高(P0.01)。结论:复方地黄方可能通过调控GSK3β信号通路,缓解GSK3β蛋白的激活,对β-catenin磷酸化作用减弱,游离的β-catenin转移进核内,与结合蛋白一起触发下游α-syn,使α-syn异常聚集和错误折叠受限,影响细胞凋亡,从而缓解帕金森病及异动症。     

加减薯蓣丸通过Akt/GSK3β/Nrf2通路改善APP/PS1小鼠神经元凋亡

目的:探讨加减薯蓣丸对APP/PS1模型小鼠神经保护的效应和作用机制。方法:5月龄雄性APP/PS1小鼠20只和野生型小鼠10只,分为空白组、模型组、加减薯蓣丸组(14 g·kg-1·d-1),灌胃28 d,空白组、模型组给予等体积生理盐水;APP/PS1背景和野生型背景原代神经元,分为空白组、模型组、加减薯蓣丸组、衣霉素组和磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)抑制剂组,空白组、模型组给予10%空白血清,加减薯蓣丸组给予5%加减薯蓣丸含药血清干预,衣霉素组和PI3K/Akt抑制剂组分别在加减薯蓣丸基础上加用2 mg·L-1的衣霉素和10μmol·L-1的LY294002。采用Morris水迷宫检测小鼠学习记忆能力;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马核因子E2相关因子2(Nrf2)蛋白表达; Western blot检测内质网应激相关蛋白糖调节蛋白78(GRP78),蛋白激酶样内质网激酶(PERK),磷酸化(p-) PERK,凋亡通路蛋白真核生物的翻译起始因子2的α亚基(e IF2α),p-eIF2α,增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP),半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和p-Akt,Akt,糖原激酶3β(GSK3β),Nrf2蛋白表达。结果:体内实验中,与空白组比较,模型组APP/PS1小鼠学习记忆能力显著下降(P 0. 01),海马Nrf2表达显著下调(P 0. 01);与模型组比较,加减薯蓣丸干预4周后,加减薯蓣丸组APP/PS1小鼠学习记忆能力明显提升,海马Nrf2表达水平显著增加(P 0. 01)。体外实验中,与空白组比较,模型组GRP78,p-PERK/PERK,p-eIF2α/e IF2α,CHOP,cleaved Caspase-3蛋白表达显著增加(P 0. 01);与模型组比较,加减薯蓣丸含药血清明显降低GRP78,p-PERK/PERK,p-eIF2α/e IF2α,CHOP,cleaved Caspase-3蛋白表达(P 0. 05,P 0. 01);而衣霉素抑制加减薯蓣丸对内质网应激诱导凋亡的保护效应(P 0. 05);与空白组比较,模型组p-Akt/Akt,Nrf2蛋白表达显著下降,GSK-3β表达显著增加(P 0. 01);与模型组比较,加减薯蓣丸含药血清干预后p-Akt/Akt,Nrf2蛋白表达显著增加,GSK-3β表达明显降低(P 0. 05,P 0. 01); LY294002抑制加减薯蓣丸对p-Akt/Akt,Nrf2和GSK3β蛋白表达的影响(P 0. 05,P 0. 01)。结论:加减薯蓣丸通过PI3K/Akt/GSK3β信号通路上调Nrf2蛋白表达,减轻内质网应激诱导的神经元凋亡,改善APP/PS1模型小鼠学习记忆能力。     

黄芪甲苷通过调控FoxO3a/Wnt2/β-catenin通路抑制去卵巢大鼠骨质疏松的作用

目的:通过调控转录因子叉头框蛋白O3a(FoxO3a)/分泌型糖蛋白2(Wnt2)/β-连环蛋白(β-catenin)通路评价黄芪甲苷对去卵巢大鼠骨质疏松的作用,并探讨其作用机制。方法:雌性SD大鼠随机均分6组,分别为假手术组,模型组,阳性药组(尼尔雌醇,1.5 mg·kg-1),黄芪甲苷低、中、高剂量组(20,40,80 mg·kg-1),每组8只。通过摘除大鼠双侧卵巢复制绝经后大鼠骨质疏松模型。术后6周,灌胃给药,每日1次,连续8周。酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测大鼠骨钙素(bone gla protein,BGP),降钙素(calcitonin,CT),骨保护素(osteoprotegerin,OPG),核转录因子-κB(NF-κB)受体活化因子配体(receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL),丙二醛(malondialdehyde,MDA),过氧化氢酶(catalase,CAT),谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)含量,双能X射线骨密度检测仪分别测定股骨和腰椎的骨密度值(bone mineral density,BMD),采用三点弯曲法测量胫骨生物力学指标,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠股骨组织中β-catenin,FoxO3a,Wnt2,p66~(shc),p-p66~(shc)蛋白的表达。结果:与模型组比较,黄芪甲苷组CT和OPG水平显著升高,BGP和RANKL水平则显著降低(P0.05,P0.01);黄芪甲苷显著升高腰椎、股骨的BMD和胫骨的最大载荷及最大应力(P0.05,P0.01);同时,黄芪甲苷显著降低MDA水平(P0.05),升高CAT,SOD和GSH-Px水平(P0.05,P0.01)。Western blot显示,黄芪甲苷显著降低p-p66~(shc)/p66~(shc)水平(P0.05);升高β-catenin和Wnt2蛋白表达水平(P0.05,P0.01),抑制FoxO3a蛋白表达水平(P0.01)。结论:黄芪甲苷能够有效缓解氧化应激介导的去卵巢大鼠的骨质疏松,该作用可能与其调节FoxO3a/Wnt2/β-catenin通路有关。     

基于Wnt/β-catenin信号通路探讨大补元煎促进APP/PS1双转基因阿尔茨海默病小鼠海马神经发生的作用机制

目的:通过研究大补元煎对淀粉样前体蛋白/早老素1(APP/PS1)小鼠海马Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的作用,探讨大补元煎促进神经发生的可能机制。方法:5月龄APP/PS1小鼠30只和野生鼠10只,分为正常组、模型组、奈哌齐组(6.5×10~(-4)g·kg~(-1)·d~(-1))和大补元煎组(13.2 g·kg~(-1)·d~(-1)),灌胃30 d,正常组和模型组给予等体积生理盐水。应用水迷宫评价小鼠学习记忆力;应用苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠海马神经元病理形态变化;应用免疫组化(IHC)检测5-溴脱氧尿苷(Brdu),肾上腺皮质激素(Dcx)和神经元核抗原(Neu N)的阳性细胞数;应用实时荧光定量聚合酶链式反应(Realtime PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠海马中β-catenin,糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)mRNA和蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组小鼠平台潜伏期和游泳总路程显著升高(P0.01),而穿越平台次数和目标象限时间显著降低(P0.01);与模型组比较,多奈哌齐组和大补元煎组小鼠平台潜伏期和游泳总路程降低(P0.05,P0.01),而穿越平台次数和目标象限时间升高(P0.05)。与正常组比较,模型组小鼠海马齿状回(DG)区神经元层次和数量减少,可见明显坏死的神经元;与模型组比较,多奈哌齐组和大补元煎组小鼠海马DG区神经元层次和数量增多,坏死神经元数量减少。与正常组比较,模型组小鼠海马DG区Brdu,Dcx和Neu N标记的阳性细胞数明显降低(P0.01);与模型组比较,多奈哌齐组和大补元煎组小鼠海马DG区Brdu,Dcx和Neu N标记的阳性细胞数增加(P0.05,P0.01)。与正常组比较,模型组小鼠海马中β-catenin mRNA和蛋白表达水平显著下降(P0.01),而GSK-3β的基因和蛋白表达水平显著升高(P0.01);与模型组比较,多奈哌齐组和大补元煎组小鼠海马β-catenin mRNA和蛋白表达水平升高(P0.05,P0.01),而GSK-3βmRNA和蛋白表达水平下降(P0.05,P0.01)。结论:大补元煎通过调节Wnt/β-catenin信号通路促进APP/PS1双转基因小鼠海马神经发生。     

基于PI3K/Akt/GSK3β信号通路研究心宝丸对慢性心力衰竭大鼠心肌肥厚的影响

目的探讨心宝丸是否能够通过调控PI3K/Akt/GSK3β信号通路抑制慢性心力衰竭（CHF）大鼠模型心肌肥厚。方法将60只雄性SD大鼠按体重随机分为假手术组、模型组、心宝丸低、中、高剂量组和贝那普利组。除假手术组外所有大鼠采用腹主动脉缩窄法复制CHF模型，假手术组只分离腹主动脉，不结扎，术后4周心宝丸药物干预组［40、80、120 mg/（kg·d）］和贝那普利组［1.05 mg/（kg·d））］开始灌胃给药8周，假手术组和模型组用等体积生理盐水灌胃8周。术后12周用超声心动图检测大鼠心脏功能，全部大鼠禁食24 h后处死， HE染色法观察心肌组织形态，小麦胚凝集素染色（WGA）观察心肌细胞大小， ELISA法检测血清NT-proBNP值， Real-time PCR法检测肥厚相关基因ANP、Myh7 mRNA表达水平，Western Blot法检测心肌组织PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、GSK3β、p-GSK3β蛋白表达水平。结果与假手术组比较，模型组大鼠术后第12周左心室射血分数（LVEF）、短轴缩短率（FS）降低（P<0.01），左心室收缩末期内径（LVIDs）升高（P<0.05），心肌细胞横截面积（CSA）增大（P<0.01），血清NT-proBNP水平升高（P<0.01），ANP、Myh7 mRNA及p-PI3K、p-AKT、p-GSK3β蛋白表达水平上调（P<0.01，P<0.05），GSK3β表达水平下调（P<0.01）；与模型组比较，心宝丸低、中、高剂量组和贝那普利组LVEF升高（P<0.05，P<0.01），心肌细胞大小减小（P<0.01），Myh7 mRNA表达水平降低（P<0.05，P<0.01），血清中NT-proBNP水平降低（P<0.01），p-PI3K、p-AKT、p-GSK3β表达水平下调（P<0.01），GSK3β表达水平上调（P<0.01），心宝丸中、高剂量组FS升高（P<0.05），心宝丸中、高剂量组和贝那普利组LVIDs减小（P<0.05），心宝丸高剂量组和贝那普利组ANPmRNA表达水平降低（P<0.01）；HE染色结果显示：心宝丸可以改善心肌肥厚，心肌细胞排列紊乱，间隙增宽的病理变化。结论心宝丸可以抗心肌肥厚，提升心脏功能，其机制可能与抑制PI3K/Akt信号的磷酸化激活，抑制GSK3β的磷酸化有关。     

基于PI3K/Akt/mTOR信号通路探讨炙甘草汤抗大鼠MIRI致室速和室颤的作用机制

目的:通过磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路,探讨炙甘草汤干预心肌缺血再灌注损伤(MIRI)致心律失常(室速和室颤)的作用及其机制。方法:将72只SD大鼠随机分为假手术组,模型组,炙甘草汤低、中、高剂量组(11.43,22.86,45.72 g·kg~(-1)),稳心颗粒组(2.43 g·kg~(-1)),连续给药干预10 d。末次给药2 h,采用结扎冠状动脉左前降支法制备大鼠MIRI模型,记录心电图的变化。造模成功后采集血液及心脏组织,检测血清中肌酸肌酶(CK),乳酸脱氢酶(LDH)及丙氨酸氨基转移酶(AST)的含量;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测心肌肌钙蛋白(CtnI)的含量;免疫组化法检测心肌PI3K,Akt,mTOR的表达;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测心肌自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC-3),自噬标志物Beclin1和PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达及磷酸化p-PI3K,p-Akt,p-mTOR的水平。结果:模型组大鼠100%发生室速,91.67%发生室颤;与假手术组比较,模型组大鼠血清CK,LDH,AST以及CtnI的含量显著升高(P0.01),心肌组织中PI3K,Akt,mTOR表达显著升高(P0.01),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ与Beclin1的相对表达量显著升高(P0.01),p-PI3K/PI3K,p-Akt/Akt,p-mTOR/mTOR显著降低(P0.01);与模型组比较,炙甘草汤高剂量组室速、室颤发生率显著降低(P0.01),较其他给药组持续时间短(P0.01);炙甘草汤高剂量组CK,LDH,AST水平及CtnI含量显著降低(P0.01);炙甘草汤给药组的PI3K,Akt,mTOR的表达随剂量的增加而显著降低(P0.01);LC-3,Beclin1的表达随炙甘草汤各剂量组的增加有不同程度地下降(P0.01),而PI3K/Akt/mTOR相关蛋白表达比值明显升高(P0.05,P0.01)。结论:炙甘草汤预处理能使异常升高的心肌酶CK,LDH,AST,CtnI降低,抑制细胞的过度自噬,上调PI3K,Akt和mTOR的表达,说明炙甘草汤抗MIRI致心律失常的作用可能与PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。     

痰脂消汤调控PCOS-IR模型大鼠卵巢PI3K/Akt途径探讨

目的:观察痰脂消汤对来曲唑灌胃联合高脂膳食诱导的多囊卵巢综合征胰岛素抵抗(PCOS-IR)模型大鼠卵巢胰岛素信号转导途径的影响。方法:来曲唑灌胃联合高脂膳食喂养SD大鼠建立PCOS-IR模型,大鼠随机分为模型组、痰脂消汤组(35 g·kg~(-1)·d~(-1))、二甲双胍组(200 mg·kg~(-1)·d~(-1)),连续灌胃20 d;另设正常组。实验结束后,腹主动脉采血,测定血清空腹血糖(FPG)和空腹胰岛素(FINS)浓度,并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测大鼠卵巢胰岛素受体(INSR),胰岛素受体底物(IRS)-1,酯酰肌醇-3激酶(PI3K),蛋白激酶B(Akt)mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测卵巢组织INSR,IRS-1,PI3K,Akt蛋白及其相应磷酸化水平表达。结果:与空白组比较,模型组大鼠空腹胰岛素(FINS),HOMA-IR水平均显著升高(P0.01),FPG无明显升高;模型组大鼠卵巢INSR,IRS,PI3K,Akt mRNA表达水平明显降低(P0.05);INSR,p-INSR,IRS,p-IRS,PI3K,p-PI3K,Akt,p-Akt等蛋白表达水平明显降低(P0.05);INSR,IRS,PI3K及Akt磷酸化比例明显降低(P0.05)。与模型组比较,中药和二甲双胍治疗后大鼠FINS,HOMA-IR均显著降低(P0.01);大鼠卵巢INSR,IRS,PI3K,Akt mRNA表达水平均明显升高(P0.05);INSR,p-INSR,IRS,p-IRS,PI3K,p-PI3K,Akt,p-Akt等蛋白表达水平明显升高(P0.05);INSR,IRS,PI3K及Akt磷酸化比例明显升高(P0.05)。结论:PCOS大鼠存在IR,卵巢内PI3K/Akt信号途径转导存在异常。痰脂消汤能够显著改善大鼠胰岛素抵抗,可能与调控胰岛素信号转导通路中关键的蛋白表达有关。     

交泰丸对糖尿病小鼠认知功能障碍的影响及机制

目的:观察交泰丸(Jiaotaiwan,JTW)不同配伍比例对糖尿病胰岛素抵抗、认知功能障碍的作用,并探讨其机制。方法:自发性糖尿病db/db小鼠40只,随机分为模型组,交泰丸1号组(1.68 g·kg-1),交泰丸2号组(3.36 g·kg-1),交泰丸3号组(8.40 g·kg-1),每组8只,另设同周龄C57BL/6J小鼠8只为正常组。干预8周后,检测小鼠学习记忆,空间探索能力;检测空腹血糖(fasting blood glucose,FBG),胰岛素水平(fasting insulin,Fins),计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),总甘油三酯(total triglyceride,TG),总胆固醇(total cholesterol,TC),游离脂肪酸(free fatty acids,FFA),高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL),低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)等;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测tau蛋白p Ser199,p Ser202,p Ser214位点,磷酸化蛋白激酶B (p-Akt),糖原合酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β),磷酸化GSK-3β(p-GSK-3β)蛋白表达。结果:与模型组比较,交泰丸2,3号组FBG,Fins和HOMA-IR显著降低(P0.01); TG,TC,HDL,FFA显著降低(P0.01);分辨指数、穿越平台次数显著提高(P0.01);小鼠海马tau蛋白p Ser199,p Ser202,p Ser214位点,GSK-3β蛋白表达明显降低(P0.05,P0.01),p-Akt,p-GSK-3β表达显著升高(P0.01)。结论:交泰丸3号(黄连-肉桂10∶1)具有改善胰岛素抵抗及认知功能障碍的作用,可能与其抑制tau蛋白过度磷酸化,下调GSK-3β蛋白表达和上调p-Akt,p-GSK-3β表达有关。     

基于Wnt/β-catenin信号通路探讨黑逍遥散对AD模型大鼠神经炎症的影响

目的 研究黑逍遥散是否可以通过调控激活Wnt β-连环蛋白（β-catenin）信号通路抑制阿尔茨海默病（AD）大鼠海马区炎症反应，改善AD大鼠认知和记忆功能障碍。方法 90只雄性Wistar大鼠先随机分别选择12只作为空白组和假手术组，剩余大鼠在左右两侧海马区注射β淀粉样蛋白₄₂（Aβ₄₂）制造AD模型大鼠，随机分为模型组、黑逍遥散低、中、高剂量组和多奈哌齐组，每组12只，并连续42 d给予相应剂量黑逍遥散和多奈哌齐灌胃。尼氏染色观察海马CA1区病理形态学变化；Morris水迷宫实验检测1~5 d大鼠逃避潜伏期的变化，第6天的空间探索能力。酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠海马组织和血清中白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-10（IL-10）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的表达，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测检测海马中海马区糖原合成激酶-3β（GSK-3β）、β-catenin、过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）的蛋白表达水平；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠GSK-3β、β-catenin、PPARγ mRNA的水平。结果 与空白组比较，模型组大鼠海马CA1区神经元数量明显减少，排布不均，细胞体损坏比较明显，尼式小体不清；模型组大鼠第3~5天的逃避潜伏期均相比治疗组显著延长（P<0.01），跨台次数显著减少（P<0.01）；模型组大鼠血清和海马组织中IL-10水平显著降低，IL-6、TNF-α水平显著升高（P<0.01）；模型组GSK-3β蛋白和mRNA显著升高，β-catenin、PPARγ蛋白表达显著降低（P<0.01），差异较为明显；与模型组比较，黑逍遥散中、高剂量组和盐酸多奈哌齐组大鼠神经元细胞数量分布较多，排列整齐，结构完整，尼式小体清晰明确；黑逍遥散中、高剂量组和多奈哌齐组的第3~5天逃避潜伏期显著缩短（P<0.01），跨越平台次数显著增多（P<0.01）；大鼠海马组织和血清中IL-10的表达水平明显升高，IL-6和TNF-α显著降低（P<0.01）；大鼠海马中GSK-3β蛋白和GSK-3β mRNA表达明显降低，β-catenin、PPARγ蛋白和β-catenin、PPARγ mRNA表达水平显著升高（P<0.01）。盐酸多奈哌齐组与黑逍遥散高剂量组之间各指标比较，差异无统计学意义。结论 黑逍遥散可以通过调控Wnt/β-catenin信号通路抑制AD大鼠海马区炎症反应，改善AD模型大鼠认知和记忆障碍。     

青蒿琥酯通过PI3K/GSK-3β通路对1型糖尿病小鼠胰岛素抵抗的改善作用研究

[目的] 观察青蒿琥酯对1型糖尿病小鼠胰岛素抵抗的影响,以及探究其作用机制。[方法] 取Balb/c小鼠腹腔注射200 mg/kg STZ建立1型糖尿病小鼠模型,随机分为模型组、青蒿琥酯组和胰岛素组。另随机选10只Balb/c小鼠为健康对照组,腹腔注射等量的生理盐水。建模成功后,青蒿琥酯组灌胃100 mg/kg青蒿琥酯,健康对照组和模型组灌胃等量的生理盐水,每日1次,共4周,胰岛素组皮下注射4 U/kg甘精胰岛素注射液,每日1次,连续5 d。检测各组小鼠空腹血糖（FBG）、空腹胰岛素（FINS）、胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）、肝脏三酰甘油（TG）、丙二醛（MDA）、血清游离脂肪酸（FFA）;苏木精-伊红（HE）染色观察小鼠胰岛病理学;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组兔抗鼠磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶（p-PI3K）、蛋白激酶B（Akt）、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）、糖原合成酶激酶-3（GSK3β）、磷酸化糖原合成酶激酶-3（p-GSK3β）和谷氨酰胺合成酶（GS）蛋白表达水平。[结果] 与健康对照组比较,模型组的FBG、FINS、HOMA-IR、TG、MDA和FFA含量显著增加（P＜0.05）,p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt的蛋白比值以及GS蛋白表达量显著降低（P＜0.05）,p-GSK3β/GSK3β蛋白表达量比值显著增加（P＜0.05）。与模型组比较,青蒿琥酯组、胰岛素组的FBG、FINS、HOMA-IR、TG、MDA和FFA含量显著降低（P＜0.05）,p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt的蛋白比值以及GS蛋白表达量显著增加（P＜0.05）,p-GSK3β/GSK3β蛋白表达量比值显著降低（P＜0.05）。[结论] 青蒿琥酯可显著降低1型糖尿病小鼠胰岛素抵抗,降低葡萄糖含量,其作用机制可能抑制PI3K/GSK3β信号通路传导有关。