昆山合剂对类风湿关节炎合并贫血患者滑膜成纤维细胞增殖及MyD88、IL-6 表达的研究

探讨昆山合剂（昆明山海棠、山血丹组成）对体外培养的类风湿关节炎（RA）致慢性病贫血患者滑膜成纤维细胞（FLS）增殖以及人类髓样分化蛋白88（MyD88）mRNA 及其下游因子IL-6 表达的影响和机制。方法：制备甲氨蝶呤和昆山合剂高、中、低剂量组的家兔含药血清;离体培养RA-FLS,取第3 至5 代细胞加入各组含药血清干预,MTT 法检测各含药血清组和对照组RA-FLS 的增殖情况,RT-PCR 检测含药血清对该细胞MyD88 mRNA 表达的影响。结果：干预24、48、72 h 之后,与空白组比较,各浓度组的昆山合剂组和甲氨蝶呤含药血清作用均能明显抑制RA-FLS 增殖（P＜0.05）,对脂多糖诱导的MyD88 mRNA 高表达也有明显抑制作用（P＜0.05）,与脂多糖诱导组比较,48 h 后昆山合剂高剂量组细胞培养上清的IL-6 含量明显降低（P＜0.05）。结论：昆山合剂含药血清能显著抑制RA-FLS 增殖,并可下调脂多糖诱导的TLR4mRNA 及其下游炎症因子IL-6 的表达,这可能为该方治疗RA 的机制之一。     

断藤益母汤含药血清对人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖及TLR4表达的影响

目的探讨断藤益母汤(DYD)含药血清对体外培养的类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者滑膜成纤维细胞(fibrolast-like synoviocytes,FLS)增殖以及TLR4(Toll like receptor 4)mRNA表达的影响和作用机制。方法体外培养RA-FLS,取第3~5代细胞,分别加入来氟米特和DYD高、中、低剂量家兔含药血清,空白组加入正常家兔血清,MTT法检测24 h、48 h、72 h后各组含药血清对RA-FLS的影响。取RA-FLS,空白组不加脂多糖(LPS),阳性对照组加LPS20μg.mL-1,实验组在加入LPS后分两组,分别加入来氟米特和细胞抑制率最高的DYD含药血清。Realtime-PCR法检测以上4组细胞TLR4 mRNA的表达。结果来氟米特和DYD高剂量组含药血清作用48 h、72 h,二者均能显著抑制RA-FLS增殖(Ρ<0.05);对LPS诱导的TLR4的mRNA表达也有显著抑制作用(Ρ<0.05);来氟米特和DYD药效相当,两者比较差异无统计学意义。结论断藤益母汤高、中剂量含药血清作用48 h、72 h后能显著抑制RA-FLS增殖,且高剂量血清可下调LPS诱导的TLR4mRNA表达,这可能是该方治疗RA的机制之一。     

新风胶囊含药血清对TNF-α诱导的类风湿关节炎滑膜成纤维细胞凋亡和炎症的影响

观察新风胶囊(XFC)含药血清对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的类风湿关节炎(RA)滑膜成纤维细胞(FLS)凋亡和炎症的影响,探讨XFC治疗RA的作用机制。建立RA-FLS永生化细胞系,制备XFC含药血清,用cell counting kit-8(CCK-8)、酶联免疫吸附法(ELISA)、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、免疫荧光、原位末端转移酶标记(TUNEL)法观察XFC含药血清对RA-FLS凋亡和炎症指标的影响。CCK-8结果显示,TNF-α对RA-FLS最佳干预浓度和时间分别为10 ng·mL-1和48 h,XFC对RA-FLS的最佳干预浓度和时间分别为6.48 mg·g^-1和72 h。ELISA结果表明,与RA-FLS组相比,TNF-α+RA-FLS组TNF-α,白细胞介素(IL)-1β,IL-6,IL-8的表达均显著升高,IL-4和IL-10的表达均显著降低(P<0.01);经XFC含药血清干预后,TNF-α,IL-1β,IL-6,IL-8的表达均显著下降,IL-4和IL-10的表达均显著升高(P<0.01)。RT-qPCR结果表明,与RA-FLS组相比,TNF-α+RA-FLS组Fas、FasL、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、caspase-8、Bax、Bcl-X1 mRNA的表达均显著降低,B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)mRNA的表达显著升高(P<0.001);经XFC含药血清干预后,Fas,FasL,caspase-3,caspase-8,Bax,Bcl-X1 mRNA的表达均显著升高,Bcl-2 mRNA的表达显著下降(P<0.01)。免疫荧光结果表明,与RA-FLS组相比,TNF-α+RA-FLS组caspase-3和Bax蛋白表达显著降低,Bcl-2蛋白表达显著升高(P<0.05);经XFC含药血清干预后,caspase-3和Bax蛋白表达显著升高,Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05)。TUNEL结果表明,与RA-FLS组相比,TNF-α+RA-FLS组细胞凋亡减少(P<0.05);经XFC含药血清干预后,细胞凋亡显著增多(P<0.05)。促进RA-FLS凋亡、抑制其炎症反应是XFC治疗RA的作用机制之一。     

苗药白龙须对RA滑膜细胞STAT-3/IL-17炎症通路的影响

目的:观察苗药白龙须对类风湿关节炎患者滑膜成纤维细胞(RA-FLS)增殖及STAT-3相关炎症通路的影响，揭示白龙须对RA滑膜炎症的调控机制。方法:培养3～5代RA-FLS细胞，分为空白组(胎牛血清)、正常组(正常兔血清)、雷公藤多苷(TG)组、来氟米特(LEF)组、白龙须低剂量组、白龙须中剂量组和白龙须高剂量组，按各组剂量加含药血清培养，用CCK8法检测各组RA-FLS增殖抑制率的差异，ELISA法检测RA-FLS与CD4⁺T细胞共培养上清液中炎症细胞因子IL-6、IL-17、IL-23和TNF-α浓度，蛋白印迹法(Wersten Blots)检测RA-FLS中pSTAT-3、SOCS-3的蛋白表达。结果:白龙须能够抑制RA-FLS的增殖，降低共培养体系细胞上清中IL-6、IL-17、IL-23、TNF-α等4种炎症细胞因子的浓度，降低RA-FLS中pSTAT-3的表达量，同时上调SOCS-3蛋白表达。结论:白龙须可能通过抑制STAT-3/IL-17炎症通路的活化发挥抗炎作用，抑制RA-FLS持续性增殖。     

三水白虎汤对滑膜成纤维细胞增殖及IL-6、IL-17分泌的影响

目的 观察三水白虎汤含药血清对体外培养的类风湿关节炎（RA）、骨关节炎（OA）滑膜成纤维细胞（FLS）增殖及分泌白细胞介素-6（IL-6）、IL-17的影响,探讨三水白虎汤的作用机制。方法 组织块培养法收集RA、OA患者的关节FLS,体外培养传代,取3～6代细胞,加入20%三水白虎汤含药血清培养72 h,MTT法连续检测FLS的增殖率,ELISA法检测上清液中IL-6、IL-17的水平,以来氟米特和生理盐水含药血清作对照。结果 三水白虎汤含药血清对RA、OA FLS增殖有显著抑制作用,同时还能显著抑制RA-FLS分泌IL-17,抑制效率与来氟米特相当;但对RA-FLS的IL-6分泌无影响。对OA-FLS的IL-17、IL-6的分泌均无显著影响。结论 复方中药三水白虎汤能抑制FLS的增殖,并能抑制RA-FLS分泌IL-17,这可能是该方治疗RA的药理机制之一。     

丹参酮及电针对脊髓缺血再灌注损伤细胞因子IL-1β、IL-1Ra、IL-8的影响

目的:通过观察细胞因子指标,研究丹参酮及电针对脊髓缺血再灌注损伤免疫途径的干预作用。方法:将新西兰家兔24只,随机分为模型组、丹参酮组、电针组和丹参酮+电针组。采用Zivin法改进复制模型,于造模前1h给予相应治疗。各组家兔分别于治疗前、缺血30min后再灌注0.5、1、4、8、12h分别采家兔股静脉血。检测血清白介素1β(IL-1β)、白介素1受体(IL-1Ra)、白介素8(IL-8)指标。结果:与造模前比较,模型组家兔血清IL-1β、IL-1Ra、IL-8再灌注各时点均升高(P0.01)。3种治疗手段在不同时间点抑制IL-1β、IL-8的升高(P0.05);促进IL-1Ra的升高(P0.05);在再灌注1h点,丹参酮+电针组抑制IL-8的升高效果优于丹参酮组及电针组(P0.05)。结论:家兔脊髓缺血再灌注损伤后,可导致家兔血清IL-1β、IL-1Ra、IL-8升高。丹参酮及电针对脊髓缺血再灌注损伤免疫途径的干预作用是通过抑制IL-1β、IL-8、促进IL-1Ra的升高,而起到治疗作用。丹参酮+电针治疗手段疗效优于单用丹参酮或电针,针药结合的优势明显。3种治疗手段存在时间窗效应。     

风湿清对RANKL诱导的RAW264.7细胞向破骨细胞分化的影响

目的:通过观察风湿清(Fengshiqing,FSQ)含药血清对RAW264.7细胞向破骨细胞分化及细胞分泌骨免疫相关因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素-17(IL-17)的影响,初步探讨FSQ缓解类风湿性关节炎(RA)骨破坏的机制。方法:5%,10%,15%3个不同体积分数的FSQ含药血清与核因子-κB受体活化因子配体(receptor activator for nuclear factor-κBligand,RANKL)诱导的RAW264.7共孵育6 d,抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色观察TRAP阳性多核细胞的形成;FSQ含药血清(5%,10%,15%)与白介素-1β(IL-1β)诱导的RAW264.7细胞共孵育24 h后收集细胞上清液,ELISA方法检测TNF-α和IL-17的含量。结果:RANKL诱导RAW264.7细胞形成TRAP阳性多核细胞,IL-1β诱导TNF-α和IL-17在RAW264.7细胞中异常高表达,5%～15%FSQ含药血清能剂量依赖地降低TRAP阳性细胞数;10%和15%的FSQ含药血清能显著抑制TNF-α(P<0.05)以及IL-17(P<0.01)的表达量。结论:FSQ能抑制破骨前体细胞向破骨细胞分化,降低TNF-α和IL-17在RAW264.7细胞中的异常高表达,这可能是FSQ抑制骨破坏治疗RA的作用机制之一。     

复方七芍降压片含药血清对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:观察复方七芍降压片含药血清对炎症因子及其诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响。方法:采用自发高血压大鼠模型灌喂蒸馏水、复方七芍降压片和厄贝沙坦,分别制备对照血清和含药血清。使用炎症因子TNF-α、嘌呤受体P2Y6抑制剂MRS2578和含药血清对大鼠VSMC进行干预,检测不同处理下大鼠VSMC的细胞活力和细胞周期以及炎症因子IL-6、IL-1β的表达差异。结果:TNF-α可促进细胞增殖,促进IL-6和IL-1β表达;MRS2578可抑制细胞增殖,抑制IL-6和IL-1β表达;复方七芍降压片含药血清和厄贝沙坦含药血清可抑制细胞增殖,抑制IL-6和IL-1β表达。结论:复方七芍降压片含药血清能抑制炎症因子诱导的VSMC增殖,抑制细胞炎症因子的表达。复方七芍降压片降低血压的功效可能与抑制VSMC炎症反应有关。     

壮骨健膝方含药血清对经IL-1β诱导的大鼠膝关节退变软骨细胞Wnt/β-catenin信号通路抑制因子蛋白表达的影响

目的观察壮骨健膝方含药血清对大鼠膝关节退变软骨细胞Wnt/β-catenin信号通路抑制因子Dkk-1、sFRP-3蛋白表达的影响,揭示该方保护膝关节软骨细胞的可能分子机制。方法取清洁级2周龄SD大鼠膝关节软骨细胞,采用含10 ng/mL IL-1β的10%FBS/DMEM培养,干预24 h后制备退变软骨细胞模型,模型鉴定成功后随机分为空白血清组和含药血清组,分别采用含10%大鼠空白血清、10%壮骨健膝方大鼠含药血清的DMEM进行干预,干预24、36、48、72 h时分别采用Western blot法检测软骨细胞Dkk-1、s FRP-3蛋白的表达水平。结果空白血清组DKK-1、sFRP-3蛋白表达水平随着干预时间延长而逐渐下降,干预48 h和78 h均显著低于24 h(P均0.05);含药血清组DKK-1、sFRP-3蛋白表达水平随着干预时间延长而逐渐增强,其中干预36 h高于24 h(P0.05),干预48 h和72 h显著高于24 h(P均0.01),干预48 h和72 h高于36 h(P均0.05);与空白血清组同一时间点比较,含药血清组DKK-1、sFRP-3蛋白表达水平在干预36 h、48 h和72 h时均显著增高(P0.05或0.01)。结论壮骨健膝方含药血清可能通过提高Dkk-1、s FRP-3蛋白的表达水平,抑制Wnt/β-catenin信号通路激活,从而对经IL-1β诱导退变的大鼠膝关节软骨细胞起保护作用,其效果在一个细胞培养换液周期内随培养时间延长而增强。     

景虎通脉方含药血清对巨噬细胞炎症反应及泡沫化形成的作用研究

目的:通过研究景虎通脉方含药血清对巨噬细胞炎症反应及泡沫化形成的影响,探讨景虎通脉方抗动脉粥样硬化的可能机制。方法:大鼠灌胃后制备不同浓度的景虎通脉方含药血清,观察其对小鼠单核巨噬细胞白血病细胞株(RAW264.7)增殖的影响;观察1%景虎通脉方含药血清对氧化型低密度脂蛋白(Ox-LDL)诱导RAW264.7细胞脂质沉积和泡沫细胞形成的影响,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测白介素-1β(IL-1β)及白介素-6(IL-6)水平,油红O染色观察细胞脂质沉积,流式细胞术检测巨噬细胞CD36与CD204表达。结果:与正常对照组比较,10%、5%、2.5%景虎通脉方含药血清均对RAW264.7细胞增殖有不同程度的抑制作用,1%、0.5%含药血清对RAW264.7细胞增殖无明显影响。与模型组比较,1%景虎通脉方含药血清组RAW264.7细胞胞内脂质沉积减少,细胞中IL-1β、IL-6表达明显降低(P0.01),CD36和CD204表达明显降低(P0.01)。结论:景虎通脉方含药血清可能通过减少CD36和CD204的表达,抑制脂质的沉积和泡沫细胞的形成,减少炎症反应,达到抗动脉粥样硬化的目的。     

绞股蓝总皂苷含药血清对皮肤光老化HaCaT细胞分泌炎症因子IL-1β、IL-6的影响

目的:研究绞股蓝总皂苷含药血清对皮肤光老化HaCaT细胞分泌炎症因子IL-1β、IL-6表达的影响.方法:选取20只大鼠,随机分为四组,每组5只,分别设为空白血清组、低剂量绞股蓝总皂苷含药血清组、中剂量绞股蓝总皂苷含药血清组、高剂量绞股蓝总皂苷含药血清组,采用UVB照射人工模拟光老化HaCaT细胞模型,照射后用含不同浓度绞股蓝总皂苷的大鼠血清进行干预,12h后采用ELISA方法检测各组细胞分泌IL-1β、IL-6的表达水平.结果:与空白对照组比较,UVB模型组细胞IL-1β、IL-6表达显著上调;与UVB模型组比较,低剂量绞股蓝总皂苷含药血清组、中剂量绞股蓝总皂苷含药血清组、高剂量绞股蓝总皂苷含药血清组细胞中IL-1β、IL-6表达显著下调(P＜0.01).结论:绞股蓝总皂苷含药血清可能通过抑制UVB辐射人皮肤角质细胞诱导炎症信号分子防护皮肤光老化.     

风湿宁胶囊含药血清干预对CIA-FLS细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨风湿宁胶囊(FSN)含药血清干预对CIA-FLS细胞增殖及凋亡的影响。方法:采用CCK-8法检测各组血清干预24、48、72 h后对CIA-FLS细胞增殖状态的影响;采用Annexin V-FITC/PI双染法通过流式细胞仪观察各组血清干预48 h后对CIA-FLS细胞早期和晚期凋亡情况的影响。结果:CCK-8法结果表明,在24 h,FSN各浓度(20%、10%和5%)含药血清干预对CIA-FLS细胞的增殖无抑制作用;在48 h,20%FSN含药血清和10%FSN含药血清干预对CIA-FLS细胞的增殖都表现出不同程度的抑制。在72 h,FSN各浓度(20%、10%和5%)含药血清对CIA-FLS细胞增殖均可见显著的抑制效果,其中20%风湿宁胶囊含药血清效果最好。Annexin V-FITC/PI双染检测结果表明,风湿宁胶囊含药血清各浓度(20%、10%和5%)组都不同程度地提高了细胞总凋亡率,其中20%风湿宁胶囊含药血清组对CIA-FLS细胞凋亡促进作用最强。结论:风湿宁胶囊含药血清对CIA-FLS细胞增殖的抑制及凋亡的促进可能是其治疗类风湿关节炎的机制之一。     

健脾益气方含药血清对人肝癌细胞SMMC-7721增殖与侵袭能力的影响

目的:观察健脾益气方含药血清对人肝癌细胞SMMC-7721增殖与侵袭能力的影响。方法:以TGF-β1诱导人肝癌细胞SMMC-7721上皮-间质转化(EMT)模型,制备健脾益气方大鼠含药血清,分别以0%、5%、10%、15%、20%、30%含药血清浓度干预人肝癌细胞SMMC-7721 12 h、24 h、48 h、72 h后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞的增殖能力,采用Transwell细胞体外侵袭实验观察细胞的侵袭能力。结果:健脾益气方对SMMC-7721 EMT细胞的增殖有抑制作用,且随含药血清浓度增高而递增,呈时间依赖性;12 h 10%含药血清,24 h 15%、20%、30%含药血清,48 h 15%含药血清与相对应浓度空白血清比较,均具有显著性差异(P0.01),其中以48 h 15%含药血清浓度对细胞增殖的抑制效果最明显。健脾益气方含药血清各个浓度组与对照组相比,细胞侵袭能力均有不同程度的下降,其中10%、15%、20%、30%浓度的含药血清都具有显著性差异(P0.01);而与空白血清组相比,15%、20%、30%浓度的含药血清均具有显著性差异(P0.01),其中以15%浓度的含药血清对细胞侵袭的抑制作用最明显。结论:15%健脾益气方含药血清作用48 h,对人肝癌细胞SMMC-7721EMT模型增殖与侵袭的抑制效果最好。     

绞股蓝总皂苷干预光老化人皮肤角质形成细胞炎症分泌因子的研究

目的:研究绞股蓝总皂苷对光老化人皮肤角质形成细胞分泌炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α表达的影响。方法:选取10只大鼠,随机分为2组,每组5只,分别设为空白血清组、绞股蓝总皂苷含药血清组,分别用以制备空白大鼠血清和绞股蓝含药血清。应用UVB人工照射方法制备光老化人皮肤角质形成细胞模型,用含绞股蓝总皂苷的大鼠血清进行干预,12h后采用ELISA方法检测各组细胞培养上清液中IL-1β、IL-6和TNF-α的水平。结果:与空白对照组比较,UV模型组细胞IL-1β、IL-6和TNF-α表达显著上调(P<0.01);与UV模型组比较,绞股蓝总皂苷含药血清组细胞中IL-1β、IL-6和TNF-α表达均显著下调(P<0.01);与空白血清组比较,绞股蓝总皂苷含药血清组细胞中IL-1β、IL-6和TNF-α表达均显著下调(P<0.01)。结论:绞股蓝总皂苷可抑制UV辐射人皮肤角质细胞分泌炎症因子,抑制皮肤光老化。     

清络通痹颗粒对类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞增殖及RANKL表达的影响

目的 观察清络通痹颗粒(QLT)含药血清对类风湿关节炎(RA)患者成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖及核因子κB受体活化子配体(RANKL)表达的影响.方法 取3～5代FLS,MTT比色法检测含药血清对FLS增殖的影响,RTPCR检测含药血清对FLS RANKL表达的影响.结果 QLT大剂量含药血清作用72 h,RA患者FLS增殖受到抑制,对RANKL表达有抑制作用.结论 QLT大剂量含药血清可抑制RA患者FLS的异常增殖,并下调RANKL的表达,这可能是清络通痹颗粒治疗RA的重要机制之一.     

阳和汤对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、凋亡及其Akt/mTOR信号通路的影响

目的:通过阳和汤大鼠含药血清干预MDA-MB-231细胞,探索阳和汤对MDA-MB-231细胞增殖、凋亡及其Akt/mTOR信号通路的影响。方法:阳和汤含药血清(或阳性药)干预MDA-MB-231细胞24、48、72h后,CCK-8法检测细胞OD值,计算细胞抑制率。阳和汤含药血清(或阳性药)干预MDA-MB-231细胞24h后,流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测细胞Akt/mTOR信号通路蛋白的表达。结果:干预24、48、72h后,与空白对照组相比,阳和汤低、高剂量组和阳性药物组细胞抑制率分别均增高(P0.01)。干预24h后,与空白对照组相比,阳和汤低、高剂量组和阳性药物组细胞凋亡率均增高(P0.01);Bcl-2/Bax值均降低(P0.05或0.01)。干预24h后,与空白对照组相比,阳和汤低、高剂量组和阳性药物组mTOR磷酸化率、Akt磷酸化率均降低(P0.05或0.01)。结论:阳和汤治疗乳腺癌的作用机制可能是通过抑制Akt/mTOR信号通路的活化,从而抑制乳腺癌细胞的增殖、诱导其凋亡,发挥抗癌作用。     

林秀鸿,陈鑫颖,江睿轩,沈陈沂,何才姑

目的:探讨玉女煎含药血清对胰岛β细胞株INS-1增殖和凋亡的影响。方法:用SPF级Wistar大鼠制备含药血清;MTT法测INS-1的生长曲线,选取浓度分别为5%、10%、15%和20%的玉女煎含药血清作用于对数生长期的INS-1细胞,分别作用24h、48h和72h,采用MTT法检测细胞增殖;选取5%、10%、20%的玉女煎含药血清作用于对数生长期的INS-1细胞,分别作用24h和48h,采用流式细胞术检测细胞的凋亡。结果:从生长曲线可知,INS-1的对数生长期在第3～6天;与对照组比较,10%玉女煎含药血清在所测时间段均能促进细胞增殖(P0.05),5%和15%含药血清作用24h促进细胞增殖(P0.05)。与对照组比较,玉女煎各组作用24h后均显著抑制细胞凋亡(P0.01或P0.05),作用48h后,10%组继续显著抑制细胞凋亡(P0.05)。结论:玉女煎含药血清能促进INS-1细胞的增殖并减少INS-1细胞的凋亡。     

加味独活寄生合剂含药血清对兔退变软骨细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的观察加味独活寄生合剂含药血清对兔退变软骨细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法将体外培养的兔关节软骨细胞按随机数表分为6组:空白对照组,模型组,加味独活寄生合剂含药血清低、中、高剂量组及Wnt信号通路阻断剂组,后五组予白介素-1β诱导为退变软骨模型,然后予不同剂量的含药血清及s FRP-3干预。采用流式细胞仪检测细胞生长及周期情况,实时荧光定量PCR检测Wnt/β-catenin mRNA的表达。结果流式细胞仪检测结果显示,与空白对照组比较,模型组及加味独活寄生合剂含药血清低、中、高剂量组细胞生长情况明显减慢。实时荧光定量PCR检测结果显示,与模型组相比,加味独活寄生合剂含药血清低、中、高剂量组β-catenin mRNA均有降低。结论加味独活寄生合剂含药血清对白介素-1β诱导为退变软骨模型有一定的保护作用,其作用机制可能与调控Wnt信号通路有关。     

鳖甲-莪术药对含药血清对MCF-7人乳腺癌细胞的影响

目的基于Wnt/β-catenin信号通路探讨鳖甲-莪术药对含药血清对乳腺癌细胞增殖的抑制作用。方法细胞悬液加入不同剂量的鳖甲含药血清、莪术含药血清、鳖甲-莪术药对含药血清孵育48、72 h后,用MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞周期,Western blot法检测β-Catenin、c-Myc、cyclin D1蛋白表达。结果与空白血清组比较,各含药血清组处理48、72 h均可抑制细胞增殖(P0.05,P0.01);处理48 h后,其G0/G1期细胞比例增加(P0.05,P0.01)、S期细胞比例降低(P0.05,P0.01),β-Catenin、c-Myc、cyclin D1蛋白表达均降低(P0.05,P0.01)。结论各组含药血清对MCF-7细胞的增殖均有抑制作用。此外,鳖甲-莪术药对抑制作用高于单独用药,其抗乳腺癌的机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin的表达,下调β-catenin以及β-catenin下游靶基因cyclin D1,c-Myc蛋白表达有关。     

基于TNF-α-HIF-1α-iNOS-NO信号通路探讨大黄素对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞的影响

目的研究大黄素对人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(RA-FLS)肿瘤坏死因子ɑ(TNF-α)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)以及一氧化氮(NO)表达的影响,探讨大黄素通过调控TNF-α-HIF-1α-iNOS–NO信号通路干预RA的机制。方法培养来源于人的RA-FLS与正常-FLS,设立正常组、模型组、高剂量组、中剂量组、低剂量组、阳性组。正常组用正常-FLS,其余5组用RA-FLS。高/中/低剂量组分别予80μmol·L~(-1)、40μmol·L~(-1)及20μmol·L~(-1)的大黄素溶液。阳性组予0.1mg·L~(-1)地塞米松溶液。药物干预24h、48h、72h、96h,用HE染色法观测滑膜细胞的生长和形态学改变;用ELISA法与硝酸还原酶法检测滑膜细胞培养液中TNF-α、HIF-1α、iNOS及NO表达变化;用Western blot法检测滑膜细胞中TNF-α、HIF-1α以及iNOS表达水平。结果 HE染色结果显示:以梭形为主的滑膜细胞均贴壁生长,卵圆形胞核居于细胞中央,RA-FLS明显比正常-FLS增长迅速。ELISA与硝酸还原酶法检测结果显示:RA-FLS细胞培养液中TNF-α、HIF-1α、iNOS以及NO表达在24h、48h、72h、96h均明显高于正常组(P0.05),不同浓度大黄素不同时间段给药后TNF-α、HIF-1α、iNOS以及NO表达均有降低,尤其是给药80μmol·L~(-1),干预96h下降最多(P0.05)。Western blot检测结果显示:药物干预96h后,大黄素组和阳性组RA-FLS细胞中TNF-α、HIF-1α及iNOS蛋白表达较之模型组均有减少,其中高剂量组下降幅度最大,低剂量组下降幅度最小,差异有统计学意义(P0.05)。结论大黄素对RA具有治疗作用,其机制可能与抑制RA-FLS TNF-α-HIF-1α-iNOS–NO信号通路开放有关。