大鼠口服红花水提物和红花黄色素后羟基红花黄色素A的排泄研究

建立简便的高效液相色谱法（HPLC）测定大鼠口服红花水提物和红花黄色素后尿、粪和胆汁中主要活性成分羟基红花黄色素A（HSYA）的含量。色谱柱为Hypersil BDS-C18（250×4．6mm,5μm）,流动相为乙腈-0．3%冰醋酸水溶液梯度洗脱,检测波长320nm,葛根素或对羟基苯甲醛为内标。尿、粪和胆汁中的HSYA的日内精密度小于3．1%,日间精密度小于5．8%。提取回收率为79．2%～102．1%。该方法首次研究了大鼠口服红花水提物和红花黄色素后羟基红花黄色素A的排泄情况。     

羟基红花黄色素A、红花提取物及复方脑得生片中羟基红花黄色素A在大鼠体内的排泄比较研究

 目的 研究比较大鼠口服羟基红花黄色素A单体、红花提取物及复方脑得生片后羟基红花黄色素A胆汁及尿、粪排泄动力学差异。方法 采用反相高效液相色谱法测定给药后大鼠胆汁及尿、粪中羟基红花黄色素A的含量,分别计算羟基红花黄色素A的累计排泄量及排泄率。结果 灌胃给予羟基红花黄色素A单体、红花提取物和复方脑得生片后24 h的胆汁累计排泄率分别为(0.164±0.072)%、(0.125±0.044)%、(0.056±0.016)%;尿中累计排泄率分别为(0.075±0.004)% 、(0.156±0.01)%、(0.024±0.002)%;粪中累计排泄率分别为(46.7±20.4)%、(54.5±18.8)%、(26.8±8.61)%,其累计排泄率在各组间均有显著性统计学意义。结论 羟基红花黄色素A单体、红花提取物、复方脑得生片中羟基红花黄色素A在大鼠体内的排泄存在明显差异,显示红花中的其他成分影响了羟基红花黄色素A在体内的吸收与利用,而复方配伍后可增加红花中羟基红花黄色素A在体内的利用程度,减少羟基红花黄色素A以原型排出体外。
     

大孔树脂柱色谱法制备红花黄色素和羟基红花黄色素A

目的 建立简便有效的制备红花有效部位红花黄色素(safflor yellow，SY)及有效成分羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A，HSYA)的方法。方法 室温水提减压浓缩所得红花水提液上D-4020型非极性大孔树脂柱，水洗脱糖类等杂质，以30％和10％乙醇洗脱分别得SY和HSYA；采用分光光度法和HPLC法分析水洗脱除糖过程中SY和HSYA的损失率及醇洗脱SY和HSYA的回收率。结果 聚酰胺薄膜色谱结果显示SY和HSYA洗脱液分别可见4～5个和1个黄色荧光斑点。HPLC分析结果表明，两洗脱液中所含SY和HSYA纯度分别为92．4％和83．0％。在水洗除杂质和稀醇洗脱过程中，损失率和回收率分别为SY：7．5％和80．6％，HSYA：1．64％和77．3％。结论 本法适于大规模制备SY和HSYA。     

红花中羟基红花黄色素A的提取纯化工艺研究

目的：优化红花中羟基红花黄色素A（HSYA）的提取纯化工艺。方法：以羟基红花黄色素A的提取率为考核指标,采用正交试验设计对红花提取工艺参数进行考察,进而考察大孔树脂对羟基红花黄色素A的纯化。结果：红花提取工艺条件是20倍量水浸泡40min;再采用HPDl00大孔树脂对羟基红花黄色素A纯化,得到纯度较高的HSYA。结论：优选羟基红花黄色素A的提取纯化工艺操作简单、科学合理,可用于其单体及制剂的制备。     

羟基红花黄色素A人工抗原的制备

目的研究羟基红花黄色素A(HSYA)与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)的偶联方法,获得具有免疫原性的羟基红花黄色素A人工抗原。方法通过偶联物透析液的颜色变化、紫外图谱、红外扫描图谱及动物免疫试验来鉴定制备的人工抗原。结果HSYA-BSA人工抗原在紫外扫描中表现出HSYA和BSA的特征吸收峰;在红外扫描中HSYA-BSA具有HSYA特征官能团的吸收峰和氨基酸的特征吸收峰;间接ELISA检测结果显示产生抗HSYA的特异性抗体,血清效价可达1∶3 200;标准曲线方程计算得BSA和HSYA的结合率是1∶50。结论通过直接偶联法成功制备出具有免疫原性的羟基红花黄色素A人工抗原。     

苏木对红花中羟基红花黄色素A的药代动力学影响

目的:研究苏木对红花中羟基红花黄色素A(HSYA)的药代动力学的影响.方法:RP-HPLC测定红花单煎液和红花-苏木配伍液灌胃后正常大鼠血浆中HSYA的血药浓度,DAS 2.0药动学软件计算药动学参数.结果:红花单独给药、红花-苏木配伍给药,HSYA在体内代谢动力学模型均为二室开放模型;配伍后,HSYA的分布半衰期t1、2α、吸收半衰期t1/2Ka、表观分布容积VL/F显著减小,达峰时间tmax有所提前.结论:苏木可加快HSYA在体内的吸收和分布,加快HSYA在体内的代谢过程,减少HSYA在体内的蓄积.     

羟基红花黄色素A抗氧化作用的研究

红花Carthamus tinctorius L.为活血化瘀药，可活血通经、化瘀止痛，临床上主要以水煎液人药。组织缺血一再灌注等过程中，自由基引发的氧化反应为许多血液循环障碍疾病的重要损伤机制。红花水提液可清除羟自由基，抑制小鼠肝匀浆脂质过氧化。羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A，HSYA)为红花主要水溶性活血化瘀有效成分，     

羟基红花黄色素A的Caco-2细胞摄取转运研究

 目的研究羟基红花黄色素A(HSYA)的胃肠吸收转运机制。方法采用Caco-2细胞模型考察孵育时间、介质pH、药物浓度及抑制剂(环孢菌素A和叠氮钠)对羟基红花黄色素A摄取转运的影响,并分析HSYA灌胃给药后在大鼠尿及粪中的累积排泄。结果HSYA的摄取符合被动扩散过程,pH7.8环境下药物的细胞摄取量[(1.05±0.045)mg·g^-1]低于pH5.4[(1.24±0.09)mg·g^-1](P<0.05),其在Caco-2单细胞层的表观透过系数(Papp)为(2.16±1.21)×10^-8cm·s^-1,加入环孢菌素A和叠氮钠后其Papp显著提高(P<0.05),分别为(47.92±17.8)×10^-8和(12.53±4.55)×10^-8cm·s^-1。HSYA大鼠灌胃给药(5.6mg·kg^-1)后31h,其尿和粪中的累积排泄量分别为给药剂量的0.74%和28.57%。结论HSYA的吸收基本符合被动扩散过程并有P-gp的参与,其黏膜透过性较差,碱性环境相对不利于药物的吸收。HSYA口服后的胃肠吸收较差,大量的药物被排出体外或在胃肠道内被代谢转化。     

HPLC法测定兔房水中羟基红花黄色素A

目的建立兔眼房水中羟基红花黄色素A测定的高效液相色谱法,为红花黄色素全身用药后眼内药动学研究提供依据。方法兔静脉注射红花黄色素10 mg/kg,采用高效液相色谱法测定房水中羟基红花黄色素A质量浓度。以Diamonsil C18为色谱柱,甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液(26∶2∶72)为流动相;体积流量0.8 mL/min;检测波长403 nm;柱温50℃。结果在0.28⁴.48μg/mL质量浓度范围内,羟基红花黄色素A峰面积和质量浓度呈良好的线性关系(r=0.999 8),回收率大于90%,日内、日间精密度RSD均小于6.0%。结论该方法准确、可靠,可用于测定兔房水中羟基红花黄色素A。     

不同产地和采摘时间对红花有效成分的影响

以羟基红花黄色素A（HSYA）的含量为定量指标,采用高效液相色谱法（HPLC）测定其含量,考察不同产地和不同采摘时间对红花有效成分的影响。结果表明,新疆塔原1号红花中羟基红花黄色素A（HSYA）的含量最高,为0.5091mg/ml,湖北红花中HSYA含量最低,为0.3357mg/ml。在早、中、晚三个时间段对花期为第3、4天的红花进行采摘,HSYA含量较第5、6天高,早上采摘且花期为第3、4天的红花,其HSYA含量最高,为0.5968mg/ml。     

羟基红花黄色素A脂质载体及水溶液在大鼠体内的代谢、排泄、生物利用度研究

目的：研究不同的羟基红花黄色素A（HSYA）剂型对HSYA代谢、排泄、生物利用度的影响。方法：大鼠灌胃给予HSYA脂质制剂和水溶液,采用HPLC及LC-MS检测血浆、胆汁、粪便、尿液样品。结果：大鼠灌胃给予HSYA脂质制剂和水溶液后,在大鼠胆汁中均发现HSYA及其II相代谢产物;HSYA原药的质荷比为611,而两个II相代谢产物的质荷比分别为918和691,结合酶降解实验表明这两个代谢产物分别为HSYA的谷胱甘肽结合物和硫酸酯结合物。但是同水溶液相比,HSYA脂质制剂显著性降低了HSYA及其II相代谢产物从胆汁的排泄量。大鼠灌胃给予HSYA脂质制剂后,HSYA原药从胆汁、粪便、尿液中24h的累积排泄量分别为（0.05±0.03）%、（8.80±2.30）%、（37.99±17.50）%,其cmax、AUC0-8h分别为2.79μg·mL^-1、402.51μg·min·mL^-1;而大鼠灌胃给予HSYA水溶液后,HSYA原药从胆汁、粪便、尿液中24h的累积排泄量分别为（0.32±0.22）%、（44.66±8.00）%、（5.58±1.30）%,其cmax、AUC0-8h分别为0.08μg·mL^-1、10.73μg·min·mL^-1。结论：实验结果表明脂质制剂可能不会改变HSYA的代谢机制,但是显著性降低了HSYA从粪便和胆汁的排泄量,提高了其生物利用度。     

Pharmacokinetic comparisons of hydroxysafflower yellow A in normal and blood stasis syndrome rats

Ethnopharmacological relevance

Safflower is a popular Traditional Chinese Medicine (TCM) to invigorate the blood and dispel ‘blood stasis’, which arises from poor blood circulation. The differences of pharmacokinetic properties between normal and blood stasis syndrome rats were seldom reported.

Aim of the study

The present study was conducted to evaluate the pharmacokinetics of hydroxysafflower yellow A (HSYA) following oral administration of hydroxysafflower yellow A and safflower extract with approximately the same dose of HSYA 100 mg/kg in both normal and acute blood stasis rats.

Materials and methods

The animals were orally administered with HYSA monomer and safflower extract. The blood samples were collected according to the time schedule. The concentrations of HSYA in rat plasma were determined by HPLC. Various pharmacokinetic parameters were estimated from the plasma concentration versus time data using non-compartmental methods.

Results

It was found that AUC_0–t, C_max, Vd and CL of HSYA in both HSYA monomer and safflower extract in acute blood stasis rats were with significant difference (P < 0.05) comparing with that in normal rats.

Conclusions

The results indicated that HSYA was with high uptake and eliminated slowly in the animals with blood stasis syndrome, suggesting that the rate and extent of drug metabolism was altered in acute blood stasis animals.     

柠檬苦素在大鼠体内的排泄途径分析

目的:考察柠檬苦素在大鼠体内的代谢途径,为阐明该药物的作用机制提供参考。方法:大鼠按80 mg·kg~(-1)灌胃给予柠檬苦素,收集胆汁、尿液和粪便,利用HPLC和LC-MS/MS测定大鼠胆汁、尿液和粪便中柠檬苦素的含量,计算其累积排泄量和累积排泄分数。结果:柠檬苦素在大鼠粪便、尿液和胆汁中的累积排泄分数合计约50%,只有近一半的药物以原型形式排泄出体外。原药从尿液和胆汁中的总排泄量1%,大部分以原型药物通过粪便排出。结论:柠檬苦素在大鼠体内的主要排泄途径为粪便,少量药物吸收进入血液后通过肝脏代谢,少量药物通过尿液排出体外。     

荆芥内酯在大鼠体内的排泄研究

 目的 研究荆芥内酯在大鼠体内的排泄情况。方法 建立液-液萃取后HPLC测定大鼠尿液、粪便和胆汁中荆芥内酯含量的方法,并对大鼠灌胃/静脉注射荆芥内酯后的排泄情况和排泄特点进行分析。结果 大鼠灌胃荆芥内酯（24 mg·kg^-1）后,胆汁12 h内、尿液36 h内的排泄具有明显的雌雄差异（P0.05）;静脉注射荆芥内酯（12 mg·kg^-1）后,尿液36 h内的排泄具有明显的雌雄差异（P0.05）。结论 荆芥内酯在大鼠尿液和胆汁中的排泄具有明显的雌性差异,以原型形式随尿液、粪便和胆汁排泄的量很少,可能主要以代谢产物的形式排出体外。     

HPLC法测定红花微乳中羟基红花黄色素A的含量

目的:建立HPLC法测定红花微乳中羟基红花黄色素A的含量。方法:采用色谱柱:Diamonsil C18(2)5μm,250mm×4.6mm;流动相:甲醇-0.4%的磷酸水溶液(三乙胺调至pH=3.3)为30∶70;检测波长:402nm;柱温:室温。结果:羟基红花黄色素A在0.3128～3.128μg的范围内呈良好的线性关系(r=0.9990)。结论:本测定方法快捷,简便,准确,重现性好。     

红花黄色素在急性血瘀大鼠体内的药代动力学研究

目的考察红花黄色素(saffloryellow,SY)在急性血瘀大鼠体内的药代动力学特征.方法通过皮下注射肾上腺素(0.07ml/kg)和冰水刺激造成大鼠急性血瘀模型后,将正常组和模型组分别尾静脉注射红花黄色素注射液(37.08mg/kg),并测定大鼠在5、10、30、60、120、180、300和480nin血清样品中药物浓度.结果血瘀大鼠的血药浓度-时间曲线符合二室开放模型,曲线下的面积(AUC)为49633μg@min/ml,分布半衰期(t1/2a)为1.43min,消除半衰期(t1/2β)为95.65min;而正常大鼠为一室模型,曲线下的面积(AUC)为42267μg@min/ml,半衰期(t1/2)为66.27min.结论红花黄色素在急性血瘀大鼠体内代谢明显慢于正常大鼠体内的代谢.     

大鼠口服羟基红花黄色素A的药动学特征研究

目的考察羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A,HSYA)在大鼠体内的线性动力学特征。方法将18只雄性SD大鼠随机分成3组,以给药剂量30、60和120 mg·kg^-1分别灌胃给予HSYA,给药后按预设时间点于大鼠眼底静脉丛取血,采用HPLC测定HSYA的血药浓度运用描述法和置信区间法分析HSYA在大鼠体内的线性动力学特征。结果HSYA的非房室模型和房室模型药动学参数清除率(clearance,CL)均在6L·h^-1·kg^-1左右,无剂量依赖性,且血药浓度-时间曲线下面积(area under concentration-time curve,AUC)和峰浓度(peak concentration,ρmax)均与给药剂量呈线性关系。结论30~120mg·kg^-1内HSYA在SD大鼠体内呈现线性动力学过程。     

注射用红花黄色素与羟基红花黄色素A对大鼠急性心肌缺血的保护作用比较

目的 比较注射用红花黄色素(SY)和羟基红花黄色素A(HSYA)对急性心肌缺血(acute myocardial ischemia,AMI)损伤大鼠的保护作用.方法 采用随机数字表法将60只雄性大鼠随机分为5组各12只:假手术组和模型组(生理盐水)、注射用SY组(90 mg/kg)、HSYA小、大剂量组(20mg/kg,40mg/kg).采用冠状动脉结扎法复制急性心肌缺血损伤大鼠模型,经腹腔注射给予不同剂量的注射用SY和HSYA.NBT染色法检测心肌梗死面积,记录并分析心电图ST段的改变、检测血清CK-MB、cTnT、SOD、MDA的变化.结果 注射用SY和HSYA大剂量组可明显降低大鼠心电图ST段抬高程度[分别为(0.087±0.022)mv、(0.091±0.014)mv],减小心肌梗死面积[分别为(20.13±9.17)%、(18.36±9.38)%],降低血清CK-MB[分别为(1460.70±219.73)U/L、(1472.72±185.61)U/L],cTnT[分别为(2.345±0.883)ng/ml、(2.358±0.843)ng/ml],MDA[分别为(5.71±0.67)mmol/ml、(5.76±0.84)mmol/ml]的含量,升高血清SOD[分别为(58.27±7.99)U/ml、(56.49±5.19)U/ml]活性.结论 注射用SY和HSYA对急性心肌缺血损伤大鼠均具有保护作用.

Abstract：

Objective The comparison research of protective effect between intravenous infusion injection of safflor yellow and hydroxyl safflor yellow A on acute myocardial ischemia injury in rats. Methods Qualified 60 male Wistar rats were divided into 5 groups at random (12 in each group):Blank control group, AMI model (treated with normal saline) group, intravenous infusion injection of safflor yellow (90 mg/kg) group, HSYA low dosage (20 mg/kg) group and high dosage (40 mg/kg) group. The acute myocardial ischemia injury in rats was induced by ligating the anterior descending coronary artery in Wistar rats and administered different dosage of safflor yellow and hydroxyl safflor yellow A with intraperitoneal injection. Myocardial infarction degree (MID) was calculated by detecting myocardial infarction area with nitroblue tetrazolium(NBT) assay. The changes of ST-elevation, CK-MB, cTnT, SOD activities and MDA contents were detected and analyzed. Results The intravenous injection of safflor yellow and HSYA low dosage group can significantly decreased ST-elevation [difference is (0.087?.022)mv,(0.091?.014)mv],MID[difference is (20.13?.17)%,(18.36+9.38)%], CK-MB [difference is (1460.70+219.73)U/L, (1472.72?85.61)U/L], cTnT[difference is (2.345?.883)ng/ml, (2.358?.843)ng/ml], and MDA [difference is(5.71 ?.67) mmol/ml, (5.76?.84)mmol/ml] contents in serum, increased SOD[difference is(58.27?.99)U/ml,(56.49+5.19)U/ml]activities in serum.Conclusion It showed that intra venous injection of safflor yellow and hydroxyl safflor yellow A had the same protective effect on acute myocardial ischemia injury in rats. Hydroxyl safflor yellow A is an important portion of safflor yellow.