"更年春"方对大鼠成骨细胞增殖与分化及矿化的影响

目的观察中药复方“更年春”药物血清对新生大鼠成骨细胞增殖、分化和矿化的影响。方法用酶消化法分离培养新生大鼠颅盖骨成骨细胞,加入含不同药物浓度的更年春药物血清条件培养液培养,生理盐水作为阴性对照组,尼尔雌醇作为阳性对照药物。MTT法测定细胞增殖率,对硝基苯酚法(PNPP)检测碱性磷酸酶(ALP)活性以观察成骨细胞活性,茜素红染色观察矿化结节个数。结果与生理盐水组相比,更年春组成骨细胞MTT值(OD570)及OD405值明显增加(P均<0.01),更年春高剂量组矿化结节数显著高于生理盐水组(P<0.01)。与雌激素组相比,中药高剂量组成骨细胞的OD570值(P<0.01)、OD405值(P<0.05)及矿化结节数均增高(P<0.05)。结论更年春在体外对成骨细胞的增殖、分化和矿化有明显促进作用,更年春高剂量明显优于雌激素,提示更年春防治骨质疏松的作用可能与其促进成骨细胞活性有关。     

补肾健脾药物血清对大鼠成骨细胞Smad2 mRNA表达影响的研究

目的:研究补肾健脾中药吸收后不同浓度血清对离体大鼠成骨细胞转化生长因子(TGF)-β1细胞内信号转导分子Smad2表达的调节作用,探讨补肾健脾中药治疗绝经后骨质疏松症(OP)的作用机制.材料方法:采用胶原-胰蛋白酶消化法获得新生大鼠的成骨细胞(rOB),用改良钙钻法测定碱性磷酸酶(ALP)活性以鉴定rOB;以补肾健脾药物吸收后药物血清,加入体外培养的rOB中进行培养,分别以RT-PCR法及免疫细胞化学方法检测rOB的Srnad2 mRNA和蛋白的表达.结果:补肾健脾吸收后药物血清可上调rOB的Smad2的mRNA和蛋白的表达,并呈一定的浓度依赖性(P＜0.01).结论:补肾健脾中药通过诱导rOB TGF-β1的信号转导分子Smad2的mRNA和蛋白的表达而促进rOB的增长与分化.     

骨康含药血清对新生大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响

观察中药骨康含药血清对新生大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响.方法:将实验动物随机分成中药组、罗盖全组和蒸馏水组3组,通过体外分离和培养成骨细胞体系,运用分光光度计测定含药血清对新生大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响.结果:成骨细胞在10%的血清中培养7天时,用分光光度计测定ALP活性,发现骨康含药血清和罗盖全含药血清均能明显提高成骨细胞的ALP活性,骨康血清组和罗盖全血清组对成骨细胞ALP活性的平均影响率分别为128.1%和129.1%.结论:中药骨康含药血清能明显提高成骨细胞的碱性磷酸酶活性.     

补肾健脾药物血清对大鼠成骨细胞TGF-β1表达的影响

目的 :研究补肾健脾中药吸收后不同浓度血清对离体大鼠成骨细胞转化生长因子 (TGF) β1表达的调节作用 ,探讨补肾健脾中药治疗绝经后骨质疏松症 (OP)的作用机制。材料与方法 :采用胶原 胰蛋白酶消化法获得新生大鼠的成骨细胞 (rOB) ,用改良钙钴法测定碱性磷酸酶 (ALP)活性以鉴定rOB ;以补肾健脾药物吸收后药物血清 ,加入体外培养的rOB中进行培养 ,分别以RT PCR法及Westernblot法检测rOB的TGF β1mRNA和蛋白的表达。结果 :补肾健脾中药吸收后药物血清可上调rOB的TGF β1的mRNA和蛋白的表达 ,并呈一定的浓度依赖性 (P <0 0 1)。结论 :补肾健脾中药通过诱导rOBTGF β1的信号转导分子TGF β1的mRNA和蛋白的表达而促进rOB的增长与分化。     

补肾健脾活血方对成骨细胞增殖分化及BMP-2、Smad5影响的研究

目的:研究中药复方补肾健脾活血方对大鼠成骨细胞增殖分化及骨形成蛋白-2 (BMP-2)、Smad5表达的影响。方法:将60只3月龄雌性SD大鼠随机分为空白组、补肾健脾活血方组、阿仑膦酸钠组,每组20只。制备对应的含药血清后分别干预成骨细胞,采用细胞计数法(CCK-8)检测成骨细胞增殖活性,碱性磷酸酶染色(ALP)检测成骨细胞分化能力,实时荧光定量PCR (RT-qPCR)检测BMP-2、Smad5 m RNA表达,蛋白免疫印迹法检测BMP-2、Smad5蛋白表达。结果:干预12 h、24 h、48 h时,各组细胞活性逐渐增强,干预48 h后各组细胞活性均降低。干预48 h时,与空白组、阿伦磷酸钠组比较,补肾健脾活血方组细胞活性最强(P0.05)。补肾健脾活血方组成骨细胞ALP染色最深,明显深于空白组和阿仑膦酸钠组。与空白组比较,补肾健脾活血方组BMP-2、Smad5蛋白及mRNA表达升高(P0.05);阿仑膦酸钠组BMP-2 mRNA表达降低(P0.05)。与阿仑膦酸钠组比较,补肾健脾活血方组BMP-2、Smad5蛋白及mRNA表达升高(P0.05)。结论:中药复方补肾健脾活血方可以促进大鼠成骨细胞增殖分化,提高BMP-2、Smad5 mRNA和蛋白表达。     

益骨汤含药血清对新生大鼠成骨细胞成骨性的影响

目的探讨益骨汤含药血清对新生大鼠成骨细胞增殖及其成骨分化的影响。方法实验分为益骨汤高剂量组、益骨汤中剂量组、益骨汤低剂量组、a-D3胶丸组、空白组,先制备各组相应含药血清,然后采用酶消化法获得新生大鼠的成骨细胞,每组给予相应含药血清培养成骨细胞,分别检测各组成骨细胞增殖情况及碱性磷酸酶(ALP)活性、钙盐沉积量、骨钙素分泌量。结果益骨汤高、中、低剂量组和a-D3胶丸组成骨细胞增殖情况均明显优于空白组(P均0.05),益骨汤高、中、低剂量组间比较差异无统计学意义;成骨细胞ALP活性、钙盐沉积量、骨钙素分泌量均明显高于空白组(P均0.05),而与a-D3胶丸组比较差异均无统计学意义(P均0.05)。益骨汤中剂量组ALP活性、钙盐沉积量、钙素分泌量均明显高于益骨汤低剂量组。结论益骨汤含药血清可促进成骨细胞的增殖及成骨分化。     

健骨康胶囊配方血清药理学筛选研究

目的:研究健骨康胶囊不同配方不同浓度含药血清对体外培养大鼠成骨细胞活性和及成骨细胞碱性磷酸酶(ALP)活性的影响。方法:以健骨康胶囊不同配方口服吸收后的血清,加入体外培养大鼠成骨细胞中进行培养,MTT法测成骨细胞活性,比色法测定培养ALP活性。结果:健骨康胶囊不同配方中药吸收后血清能促进成骨细胞的增殖和分化,提高成骨细胞碱性磷酸酶(ALP)活性,以配方2药物灌胃后10%药物血清浓度最佳。结论:健骨康胶囊药物血清体外具有抗骨质疏松症作用;健骨康胶囊配方2为优选方。     

骨康含药血清对新生大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响

观察中药骨康含药血清对新生大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响。方法：将实验动物随机分成中药组、罗盖全组和蒸馏水组3组，通过体外分离和培养成骨细胞体系，运用分光光度计测定含药血清对新生大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响。结果：成骨细胞在10％的血清中培养7天时，用分光光度计测定ALP活性。发现骨康含药血清和罗盖全含药血清均能明显提高成骨细胞的ALP活性，骨康血清组和罗盖全血清组对成骨细胞ALP活性的平均影响率分别为128．1％和129．1％。结论：中药骨康含药血清能明显提高成骨细胞的碱性磷酸酶活性。     

骨碎补总黄酮含药血清对成骨细胞增殖、分化、周期及调亡的影响

目的:观察含骨碎补总黄酮大鼠血清对体外培养SD大鼠成骨细胞增殖、分化、周期及凋亡的影响.方法:取新生的SD大鼠的颅骨,胶原酶法培养成骨细胞.应用MTT法、对硝基苯磷酸盐法(PNPP)及流式细胞术观察不同浓度的含骨碎补总黄酮大鼠血清在不同时段对体外培养成骨细胞的光密度D(λ)值、碱性磷酸酶(ALP)活性及细胞周期和凋亡的影响.结果:不同浓度的骨碎补总黄酮大鼠含药血清均可促进成骨细胞增殖、分化,使处于DNA合成期细胞比例增加,使早期和晚期凋亡细胞比例减少,与对照组比较均具有统计学意义(P＜0.05). 结论: 骨碎补总黄酮含药血清具有促进体外成骨细胞增殖、分化,抑制成骨细胞凋亡的作用,即具有抗骨质疏松活性.     

菟丝子总黄酮对成骨细胞骨代谢的影响

目的:探讨菟丝子总黄酮(TFCC)对体外培养大鼠成骨细胞骨代谢的影响。方法:取新生SD大鼠的颅盖骨,采用改良的组织块法培养成骨细胞。应用MTT法、对硝基苯二钠基质动力学法(PNPP),放射免疫法及ELISA法分别测定TFCC0.01,0.1,1,10,100μg.L-1对成骨细胞增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性、骨钙素(BGP)含量及Ⅰ型胶原(COL-I)分泌的影响。结果:TFCC在48 h和72 h能显著促进成骨细胞增殖并提高ALP活性;48 h时TFCC可促进细胞上清液中BGP和COL-I的分泌。结论:TFCC能够明显促进大鼠成骨细胞的增殖与分化,并通过提高COL-I的分泌影响骨代谢。     

补肾中药诱导骨髓间充质干细胞增殖分化防治骨质疏松的研究进展

骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)是干细胞研究领域的热点。BMSCs增殖分化成成骨细胞与中医"肾藏精"理论有一定联系,应用补肾中药干预BMSCs增殖分化防治OP具有良好研究的前景。从中医"肾藏精"理论与BMSCs的关系以及补肾中药(单味中药与单体,中药复方)两个方面,对近年来补肾中药诱导BMSCs增殖分化防治OP的研究进展进行了综述。     

肾系膜细胞在补肾药物基础上进一步上调成骨细胞collagenⅠ和cbfα1基因表达

目的:观察系膜细胞是否影响补肾药物对成骨细胞的作用。方法:空白组大鼠灌服蒸馏水,药物组大鼠以熟地鳖甲1:1配比制成浸膏,3.3g浸膏/kg体质量/d灌服,3d后取血离心,获得无药血清和熟地鳖甲含药血清。无药血清、熟地黄鳖甲含药血清及肾系膜细胞处理的熟地鳖甲含药血清作用于成骨细胞3d,MTT法观察成骨细胞增殖率,实时荧光定量PCR检测成骨细胞Ⅰ型胶原(collagenⅠ)和核心结合因子α1(cbfα1)基因表达。结果:熟地黄、鳖甲含药血清可促进成骨细胞增殖,经肾系膜细胞处理后的含药血清进一步促进细胞增殖(P0.05),荧光定量PCR显示含药血清组成骨细胞collagenⅠ和cbfα1基因表达量明显上调(P0.05),经肾系膜细胞处理后的含药血清2种基因表达量进一步增加(P0.05)。结论:肾脏固有细胞——肾系膜细胞可在补肾药物基础上进一步促进成骨细胞的增殖和成骨相关基因的表达。     

补肾活血方含药血清通过PI3K/Akt信号通路促进成骨细胞增殖分化研究

目的：观察补肾活血方含药血清对人成骨细胞增殖分化以及PI3K/Akt信号通路的影响,探讨补肾活血方防治骨质疏松症的作用机制。方法：通过新西兰大白兔制备补肾活血方含药血清,将人成骨细胞株分为空白组（Control组）、补肾活血方组（Z组）、补肾活血方含药血清＋10%μmol/L的抑制剂LY294002组（Z＋LY组）,采用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测各组成骨细胞的增殖情况,生化方法检测成骨细胞的碱性磷酸酶（ALP）活性,Western blot法检测AKT的活化情况。结果：补肾活血方含药血清能促进成骨细胞的增殖,并使之分化增强,且较Control组差异有统计学意义（P〈0.01）;阻断PI3K/AKT信号通路后,Z＋LY组对成骨细胞增殖分化的抑制较Z组差异有统计学意义（P〈0.05）,且对成骨细胞的分化功能有显著抑制作用（P〈0.01）;Western blot结果显示,补肾活血方含药血清能促进磷酸化AKT（p-AKT）的表达,用LY294002阻断PI3K/Akt信号通路后,p-AKT表达含量明显减少（P〈0.01）。结论：补肾活血方可能通过PI3K/Akt信号通路促进成骨细胞的增殖,并促进成骨细胞分化功能,这可能是补肾活血方防治骨质疏松症的机制之一。     

湖北海棠总黄酮对成骨细胞增殖分化及破骨细胞活性的影响

目的：探讨湖北海棠总黄酮及其主要成分根皮苷对大鼠成骨细胞增殖分化及破骨细胞活性的影响。方法：取新生大鼠颅骨,用改良组织块消化法分离成骨细胞。MTT法检测药物对成骨细胞增殖的影响,对硝基苯二钠基质动力学法测定细胞内碱性磷酸酶（AKP）的活性。分离培养大鼠破骨细胞。加药共培后检测抗酒石酸酸性磷酸酶（TRACP）活性,检查骨吸收陷窝变化。结果：湖北海棠总黄酮能明显促进成骨细胞增殖;提高成骨细胞内碱性磷酸酶活性。湖北海棠主要成分根皮苷能提高成骨细胞内碱性磷酸酶活性;降低抗酒石酸酸性磷酸酶活性,减少骨吸收陷窝数目,与对照组比较差异有统计学意义。结论：湖北海棠总黄酮能促进成骨细胞的增殖和分化,其主要成分根皮苷能促进成骨细胞的分化,抑制破骨细胞的活性和嗜骨活性。     

益气解毒中药对肝卵圆细胞系WB—F344作用机制的研究

目的研究具有益气解毒功效的牛黄参（牛黄、西洋参）含药血清对大鼠肝卵圆细胞系WB-F344诱导分化及增殖的影响,探讨其作用机制。方法用不同浓度的牛黄参含药血清（5%、10%、20%）作用于WB-F344细胞,以正常大鼠血清（5%、10%、20%）处理的WB-F344为空白组,以单纯培养体系处理的WB-F344为正常组。四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测细胞的增殖情况,反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测WB-F344肝干细胞表面标志物甲胎蛋白（AFP）和肝白蛋白（ALB）mRNA表达情况。结果经具有益气解毒功效的牛黄参含药血清干预后,MTT结果显示,10%、20%浓度的牛黄参含药血清能促进WB-F344的增殖（P〈0.01）,且10%为增殖的最佳浓度梯度;RT-PCR结果显示,经10%牛黄参含药血清处理的WB-F344细胞AFP mRNA的表达随时间的延长逐渐下降（P〈0.01）,而ALB mRNA的表达则逐渐升高（P〈0.01）。结论益气解毒中药可诱导WB-F344细胞向肝细胞特性方向的分化,可促进WB-F344细胞的增殖,这可能是其抗肝损伤、促进肝再生的机制之一。     

补肾活血方对大鼠成骨细胞增殖、分化及矿化的影响

目的观察中药补肾活血方对体外培养SD大鼠成骨细胞增殖、分化及矿化的影响。方法取新生的SD大鼠的颅骨,胶原酶法培养成骨细胞：应用MTT法,对硝基苯磷酸盐法（PNPP）及茜素红染色方法观察不同浓度补肾活血方对体外培养成骨细胞在24、48、72h不同时段的增殖、碱性磷酸酶（ALP）活性及矿化结节形成的影响。结果不同浓度的补肾活血方均可促进成骨细胞增殖率提高,以中、高浓度组的作用较为明显（P〈0．01）;不同浓度补肾活血方可使ALP活性增强（P〈0．01）;中、高浓度组补肾活血方矿化结节数量,显著多于对照组（P〈0．01）。结论补肾活血方具有促进成骨细胞的增殖、分化及矿化的作用。     

抗疲劳防治亚健康中药整理与研究

以抗疲劳防治亚健康为中心,以补益养生方剂为切入点,用文献学等方法,从近百本中医古籍、10万余首方剂中筛选出1079首方剂,对其按气、血、阴、阳及五脏进行了分类整理,在1079首方剂中其使用中药378味,20类,其中补虚药最多,为100味且使用频率较高,在补虚药中,补气、补阳、补脾、补肾占优势,说明补虚药在抗疲劳防治亚健康中起主导作用。     

抗疲劳防治亚健康中药整理与研究

以抗疲劳防治亚健康为中心，以补益养生方剂为切入点，用文献学等方法，从近百本中医古籍、10万余首方剂中筛选出1079首方剂，对其按气、血、阴、阳及五脏进行了分类整理，在1079首方剂中其使用中药378味，20类，其中补虚药最多，为100味且使用频率较高，在补虚药中，补气、补阳、补脾、补肾占优势，说明补虚药在抗疲劳防治亚健康中起主导作用。     

不同中药含药血清对体外培养成骨细胞影响的实验研究

目的:研究中药骨康及其中补肾、健脾、活血各成分吸收后不同血清对离体大鼠成骨细胞增殖的影响及其对成骨细胞分泌白介素-6(1L-6)的影响。方法:采用胶原-胰蛋白酶消化法获得新生大鼠的成骨细胞,然后以中药骨康及其中补肾、健脾、活血成分吸收后血清,加入体外培养成骨细胞中进行培养,MTT法测成骨细胞增殖,ELISA法测培养上清中IL-6含量。结果:发现中药骨康吸收后血清能促进成骨细胞的增殖和分化,补肾成分吸收后血清亦能促进成骨细胞的增殖和分化,健脾、活血各成分吸收后血清对成骨细胞无明显影响,同时,中药骨康及其中补肾成分含药血清可作用于成骨细胞,使分泌其IL-6的能力下降。而中药骨康含药血清的作用明显优于补肾成分含药血清的作用。结论:中药骨康及其中补肾成分含药血清能够促进成骨细胞的增殖与分化从而促进骨形成,同时可抑制成骨细胞分泌IL-6,健脾、活血二法是补肾法的良好补充。