银杏叶提取物761对乳鼠心室肌细胞钙通道的影响

银杏叶提取物761(以下简称 EGb761)已被证实能抗氧自由基,减轻狗、兔心肌缺血—再灌注损伤,抑制室颤发生。本实验采用 Fura-2荧光探针(Fura-2/AM)的方法研究 EGb761有无抑制 SD 乳鼠心室肌细胞外钙内流的作用。材料与方法1 动物 3天龄 SD 乳鼠由上海中医药大学动物中心提供,经组胚教研室制备成培养的乳鼠心肌细胞。2 药物、试剂及仪器 EGb761由德国 Willmar Schwabe 药厂生产;Verapamil(Ver)由德国 Alemanier 药厂生产;Fura-2/AM、Tri-ton-100、DMSO 为 Sigma 公司产品。隔水式电热恒温培养箱,由上海跃进医疗器械厂生产;F-3020型荧光分光光度计为日本日     

愈风汤含药血清对5—HT,L—Glu所致新生大鼠脑细胞内游离钙升高的影响

1 材料与方法1.1 药物及试剂 愈风汤由防风、秦艽、白芷、桂枝等为主组成,由湖北中医附院提供,其生药含量为2g·ml~(-1);5-HT、L-Glu、DMSO、Hepes、胰蛋白酶为Sigma产品;DMEM为Gibco产品;Fura-2/AM由中国医学科学院药物研究所合成室提供,测试前用重蒸DMSO溶解,分装后于-20℃避光保存;其它试剂均为国产AR级。1.2 含药血清的制备 选择纯种新西兰家兔2只,体重为2.0±0.05kg,1只按9g·k~(-1)·d~(-1)给予愈风汤灌胃,另1只给予等体     

丹参滴注液含药血清对缺氧海马神经元Caspase 3的影响

目的观察丹参滴注液含药血清对缺氧海马神经元Caspase 3蛋白表达的影响。方法制备丹参滴注液含药血清,以含药血清干预原代培养缺氧海马神经元,MTT法检测神经元增殖活力,免疫荧光法检测神经元Caspase 3蛋白的表达。结果缺氧组海马神经元增殖活力低于正常组(P0.05),神经元Caspase 3蛋白表达高于正常组(P0.05),丹参滴注液含药血清能减少缺氧组海马神经元caspase 3蛋白表达,改善细胞增殖活力(P0.05)。结论丹参滴注液含药血清能明显抑制缺氧海马神经元Caspase 3表达,促进缺氧神经元增殖,起到神经保护作用。     

正交设计考察丹参总酚酸水提取工艺

1引言丹参(Salvia m iltiorrhizaBge)为中医常用的活血化瘀药,常用来治疗心脑血管之类的疾病,其主要有效成分为丹参素、原儿茶醛及丹参酮等。近年来对丹参药理[2]的研究较多,尤其是丹参酚酸(salvianolic ac id)的临床药用价值的研究表明,该成分对心脑血管疾病具有显著性疗效,而目前对于丹参总酚酸提取工艺的研究鲜为报道,为此,本文采用正交法考察了丹参总酚酸的最佳提取工艺。2实验部分2.1实验试剂与仪器试剂:试剂均采用分析纯试剂;丹参(购于成都理工大学校医院);丹酚酸B对照品(中国药品生物制品检定所);仪器:721紫外分光光度计(上海第三…     

丹参对ox-LDL孵育的乳鼠心肌细胞缺氧-复氧所致细胞凋亡的保护作用

目的:观察丹参对ox-LDL孵育的乳鼠心肌细胞缺氧-复氧损伤的保护作用,并探讨其可能机制。方法:采用原代培养乳鼠的心肌细胞,ox-LDL孵育24小时,再采用95%N2+5%CO2模拟缺氧培养3小时后,更换为正常DMEM培养液培养9小时的方法建立心肌细胞缺氧/复氧模型。乳鼠心肌细胞随机分为6组:正常对照组(Control group);ox-LDL组(ox-LDL group);ox-LDL缺氧-复氧组(ox-LDL+A/R group);丹参保护组,加丹参低剂量(SM L/ox-LDL+A/R group)、中剂量(SM M/ox-LDL+A/Rgroup)、高剂量(SM H/ox-LDL+A/R group)组。利用MTT比色法检测心肌细胞存活率,Hoechst33342染色检测凋亡率,采用Western blot分别观察Cytc、Bax、bcl-2、caspase-3的蛋白表达。结果:通过MTT比色法检测,加入丹参高剂量组对细胞保护最有效。与Control组比较,ox-LDL组:细胞核有固缩和断裂,Cytc、Bax和caspase-3的表达升高,细胞存活率和bcl-2表达降低;与ox-LDL组比较,ox-...     

氧化槐定碱对新生大鼠海马神经元缺氧损伤的保护作用及其作用机制

目的:研究氧化槐定碱(oxysophoridine,OSR)对原代培养的新生大鼠海马神经元缺氧损伤的保护作用及其机制。方法:以原代培养的新生大鼠海马神经元为研究对象,用无糖培养液结合物理性缺氧建立缺氧损伤模型,测定神经细胞的存活率、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率以及细胞中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、一氧化氮合酶(NOS)和一氧化氮(NO)水平的变化。采用荧光双波长分光光度计测定神经细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)的变化。结果:缺氧损伤模型组能在短时间内造成神经元的死亡,LDH漏出率的增多,MDA,NO含量增多,NOS活性升高,SOD,GSH-PX活性降低,细胞内[Ca2+]i增加。OSR组(0.625,5,10μg.L-1)能不同程度地降低缺氧模型对神经元的损伤。结论:氧化槐定碱对新生大鼠海马神经元缺氧损伤具有明显的保护作用,其机制可能与减轻细胞内钙离子超载以及抗氧化损伤有关。     

缺氧预适应及大花红景天预给药对缺氧小鼠海马神经元线粒体损伤的保护机制研究

目的:研究缺氧预适应及大花红景天预给药对缺氧小鼠海马神经元线粒体损伤的保护机制。方法:将雄性BALB/c小鼠随机分为空白组、缺氧组、缺氧预适应组、大花红景天口服液0. 67g/kg组、大花红景天水提物1、2、4 g/kg组。用低压低氧动物舱建立缺氧脑损伤模型,通过常压缺氧耐受实验、Morris水迷宫、TUNEL染色、透射电镜观察CA1区线粒体结构及检测线粒体膜电位(MMP)研究缺氧预适应和大花红景天对海马神经元缺氧损伤的保护作用。结果:与空白组比较,缺氧预适应组和大花红景天1、2和4 g/kg剂量组小鼠耐缺氧存活时间均明显延长。与缺氧组比较,缺氧预适应组和各药物组小鼠定位航行和空间探索能力明显改善。TUNEL结果显示,与空白组比较,缺氧组小鼠CA1区神经元凋亡明显,缺氧预适应组和各药物组可显著抑制神经元凋亡。线粒体形态及膜电位检测显示,与空白组比较,缺氧组小鼠线粒体损伤明显,MMP显著升高,缺氧预适应组和大花红景天1、2和4 g/kg剂量组可显著降低线粒体损伤和MMP。结论:缺氧预适应及大花红景天可通过抑制海马神经元凋亡、维持线粒体形态结构及降低MMP发挥抗缺氧脑保护作用。     

SUMO-2/3活化介导丹参对缺血神经元的保护机制

[目的]从类泛素化(SUMO)角度研究丹参对缺血性脑血管病后的神经元保护机制。[方法]原代分离培养SD大鼠海马神经元细胞,免疫荧光方法予以鉴定;制作神经元体外氧糖剥夺(OGD)模型,分为对照组、OGD组和丹参治疗组;酶联免疫吸附(ELISA)法检测乳酸脱氢酶(LDH)含量,原位凋亡法检测凋亡细胞率;蛋白印记和免疫荧光方法检测SUMO-1和SUMO-2/3在细胞内的表达定量和定位情况。[结果]所培养细胞高表达神经元特异性烯醇化酶(NSE)和微管相关蛋白-2(MAP-2),胶质纤维酸性蛋白(GFAP),神经元纯度大于95%;ELISA结果显示,3组中LDH含量对照组丹参治疗组OGD组;凋亡细胞率对照组丹参治疗组OGD组;蛋白印记结果显示,神经元接受OGD处理后SUMO-2/3的蛋白表达量明显上升(P0.05),但SUMO-1无明显变化(P0.05),而丹参治疗能够进一步提高SUMO-2/3的表达(P0.05);免疫荧光结果显示OGD神经元发生了SUMO-2/3由细胞浆向细胞核的明显移位现象,而丹参治疗能够进一步增强这种效果。[结论]丹参能够通过诱导SUMO-2/3,而非SUMO-1的活化机制,发挥对缺血神经元的保护作用。     

丹参破壁饮片、传统饮片中水溶性成分对心肌细胞保护作用对比研究

目的初步探讨丹参破壁饮片与传统饮片水溶性成分对缺血缺氧H9c2心肌细胞保护作用及分子机制,通过对比两者的药效差异分析丹参破壁饮片应用前景。方法将H9c2心肌细胞随机分为正常组,模型组,丹参破壁饮片水溶性成分低、中、高剂量组(1.6×10~(-5)、4×10~(-4)、10~(-2) mg·mL~(-1)),丹参传统饮片水溶性成分低、中、高剂量组(1.6×10~(-5)、4×10~(-4)、10~(-2) mg·mL~(-1))。采用CCK-8法检测细胞存活率;比色法测LDH、MDA、CK、T-SOD、ATP含量及活性;RT-PCR、Western Blot测Bax、Bcl-2、Caspase3 mRNA及蛋白表达。结果与模型组比较,丹参破壁饮片高剂量组可显著提高缺血缺氧H9c2细胞存活率,降低上清液LDH含量(P0.05);丹参传统饮片高剂量组及丹参破壁饮片中、高剂量组均可显著降低缺血缺氧H9c2细胞内MDA、CK浓度(P0.05),升高T-SOD浓度、ATP浓度(P0.05);丹参传统饮片高剂量组及破壁饮片中、高剂量组均可提高缺血缺氧模型H9c2细胞内Bcl-2 mRNA和蛋白表达量(P0.05),降低Bax、Caspase3 mRNA、蛋白表达水平(P0.05)。丹参破壁饮片高剂量组调节Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表达量效果最佳。结论丹参破壁饮片、传统饮片水溶性成分均可改善H9c2心肌细胞缺血缺氧,作用机制可能与调控MDA、LDH、CK、T-SOD、ATP含量及调节Bax、Caspase3、Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平相关,且丹参破壁饮片水溶性成分对H9c2心肌细胞损伤的保护作用优于传统饮片。     

加味脑泰方对大鼠缺氧/复氧损伤海马神经元炎性通路SIRT1/NF-κB的影响

目的观察加味脑泰方对大鼠缺氧/复氧损伤海马神经元炎性通路SIRT1/NF-κB的影响,初步探讨其作用机制。方法原代分离、培养及鉴定SD大鼠胎鼠海马神经元,采用缺氧24 h、复氧2 h干预构建缺氧/复氧细胞模型。将培养的原代海马神经元随机分为正常组、空白血清对照组、模型组、阳性药药物血清组和加味脑泰方药物血清组,待缺氧24h后,除正常组和模型组给予等量培养液外,其余各组分别给予相应体积分数10%药物血清或空白血清,继续复氧共孵育培养2h;采用MTT法检测海马神经元细胞活力,高内涵细胞成像分析系统检测海马神经元沉默信息调节蛋白1(SIRT1)、核因子-κB抑制蛋白(IκBα)、核因子-κB(NF-κB)蛋白表达。结果与正常组比较,模型组海马神经元细胞活力显著降低(P0.01),神经网络及树突、树突棘断裂或减少,细胞明显受损,且神经元内SIRT1、IκBα蛋白表达显著降低(P0.05),NF-κB蛋白表达明显增加(P0.05);与模型组比较,阳性药药物血清组和加味脑泰方药物血清组海马神经元细胞活力明显增加(P0.05),神经网络、树突棘受损明显改善,且神经元内SIRT1、IκBα蛋白表达明显上调(P0.05),NF-κB蛋白表达明显下调(P0.05)。结论加味脑泰方对缺氧/复氧损伤海马神经元内炎性相关信号通路SIRT1/NF-κB具有明显的调控作用,这可能是其保护缺氧/复氧损伤海马神经元继而抗血管性痴呆的重要机制之一。     

丹参素对缺氧/缺糖损伤的神经细胞线粒体膜电位和凋亡的影响

目的:观察丹参素对神经细胞SH-SY5Y缺氧/缺糖损伤时线粒体膜电位(MMP)和凋亡的影响。方法:将SH-SY5Y细胞分为5组:对照组、模型组、尼莫地平组及丹参素15、30mg/L组,给予相应处理后分别培养2、4、6、12h。四甲基偶氮唑盐(MTT)比色实验检测线粒体活性,流式细胞术检测细胞凋亡百分率和线粒体膜电位,荧光显微镜观察细胞形态学变化和坏死百分率。结果:缺氧/缺糖损伤2h,模型组的线粒体活性和MMP水平较对照组显著降低(P<0.01),并随缺氧/缺糖损伤时间的延长而变化越显著。而细胞凋亡和坏死的百分率均较对照组显著升高(P<0.01),形态学观察也发现染色质凝聚,核碎裂,凋亡小体产生,随着缺氧/缺糖时间的延长,细胞凋亡的发生也越来越多,坏死的细胞也增多。丹参素能显著提高SH-SY5Y细胞线粒体膜电位和活性,降低细胞凋亡及坏死的百分率,其作用随剂量增加而作用增加。结论:丹参素可抑制缺氧/缺糖损伤所致的线粒体膜电位和活性的降低,从而具有稳定线粒体膜电位的作用,抑制神经细胞凋亡的发生。     

黄芪总苷对地塞米松和β-淀粉样蛋白联合诱导大鼠海马神经元损伤的影响

目的探讨黄芪总苷(astragalosides)对地塞米松(Dexamethasone,DEX)与β-淀粉样蛋白(Amyloidβ-peptide protein,Aβ)联合诱导大鼠海马神经元损伤的影响。方法通过检测海马神经元细胞活性,探讨黄芪总苷能否抑制Aβ和DEX引起海马神经元活力下降;通过检测海马神经元胞内Ca2+浓度([Ca2+]i),探讨黄芪总苷是否通过降低[Ca2+]i抑制海马神经元凋亡;通过检测P-tau-Thr231蛋白水平,进一步探讨黄芪总苷抗Aβ和DEX引起的海马神经元毒性机制。结果 黄芪总苷(10、20、40μg/mL)对体外DEX(10μmo/L)+Aβ25-35(5μmol/L)引起胎鼠海马神经元的损伤有保护作用(P0.01);黄芪总苷能明显降低DEX(10μmol/L)+Aβ25-35(5μmol/L)升高的海马神经元[Ca2+]i、P-tau蛋白水平(P0.05)。结论黄芪总苷对Aβ和DEX诱导的大鼠海马神经元损伤有一定的保护作用。     

红景天甙对心肌细胞保护作用的实验研究

红景天及其主要有效成分(红景天甙、酮等)对心血管系统有重要的作用。本研究从培养心肌细胞角度探讨红景天甙对细胞缺氧再给氧损伤(anoxia-reoxygenation injury,AR-I)的保护作用。观察心肌细胞在缺氧及缺氧再给氧时细胞内钙离子、Na~ -K~ -ATP 酶和 cAMP 的变化及红景天甙对这些变化的影响。材料与方法1 动物新生2～4天的 SD 大鼠,雌雄不拘,购自上海医科大学实验动物部。2 药物与试剂红景天甙:由华东理工大学分析测试中心从大珠红景天中提取,溶液为每毫升含原药材1g 的提取物;丹参注射液:上海第一制药厂生产,3g/2ml,批号001065;黄芪注射     

红花黄色素对缺血再灌注大鼠心肌高能磷酸化合物含量的影响

1 材料与方法 动物:健康雄性Wistar大鼠,体重200～300g,哈医大动物学部提供。主要试剂:一磷酸腺苷(AMP)、二磷酸腺苷(ADP)、二磷酸腺若(ATP)、硫酸氢四铵(TBAHS)为Sigma公司产品,其它为国产优级纯试剂;精制红花黄色素注射液:33g生药/ml,采用王承颂报道的方法自制(以下简称红花);刺五加注射液:黑龙江完达山制药厂。     

原儿茶醛对人红细胞胞浆游离钙浓度的影响

目的观察丹参水溶性有效成分原儿茶醛对人红细胞胞浆游离钙浓度的影响.方法采用 Fura- 2定量分析法观测原儿茶醛对人红细胞胞浆 Ca2 浓度的影响.结果原儿茶醛能够降低人红细胞胞浆 Ca2 浓度,并呈剂量依赖性.结论 丹参注射液增强红细胞变形能力的作用可能与其有效成分原儿茶醛降低红细胞胞浆 Ca2 浓度有关.     

脑脉宝对大鼠脑缺血再灌注后LPO、SOD、GSH-Px的影响

1 材料与方法1.1 药品与试剂 脑脉宝,由生黄芪、丹参、当归、川芎、地龙、水蛭、大黄、牛磺酸等组成,组成中药均经北京中医药大学中药鉴定室李家实教授鉴定为正品,水煎浓缩成2g生药/ml,维脑路通片剂(山西省芮城制药厂,批号9410090)。5.5-二硫代双(2-硝基苯甲酸)(DTNB)(Sigma公司),MDA、SOD试剂盒(南京建成生物工程研究所),还原型谷胱甘肽(生化试剂,上海化学试剂采购供应站提供),其余均为国产分析纯。     

丹参-川芎有效成分配伍对氧糖剥夺海马神经元细胞保护作用研究

观察丹参-川芎有效成分(丹参素、原儿茶醛、川芎嗪、阿魏酸)配伍对体外原代培养的海马神经元细胞缺糖缺氧(氧糖剥夺)损伤的保护作用,并优选较佳组合。方法原代培养乳鼠海马神经元细胞,免疫组化法进行神经元特异性烯醇化酶(NSE)鉴定,并建立海马神经元细胞氧糖剥夺模型。MTT法确定丹参素、原儿茶醛、川芎嗪、阿魏酸及尼莫地平的非细胞毒性剂量范围,以L9(34)正交表设计安排成分配伍给药。将培养的细胞随机分为12组:对照组、模型组、尼莫地平阳性对照组及正交配伍1～9组。采用比色法、WST-1法、硫代巴比妥酸(TBA)法分别检测细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活力、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)水平,酶联免疫吸附试验检测细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6水平变化,Hoechst33258荧光染色法观察海马神经元细胞凋亡情况,流式细胞术检测细胞早期凋亡率。采用极差分析法分析正交试验结果。结果药物正交配伍组合均可显著改善缺氧海马神经元细胞的形态,显著减弱LDH活力,增强SOD的活性以及降低MDA的水平,显著抑制细胞TNF-α的释放,降低IL-1β和IL-6的水平,明显减少了细胞的凋亡。丹参-川芎有效成分对LDH活力的影响大小依次为丹参素川芎嗪原儿茶醛阿魏酸,最佳配伍组合为丹参素(120μg/m L)、原儿茶醛(120μg/m L)、川芎嗪(80μg/m L)、阿魏酸(20μg/m L)。对SOD活性的影响主次因素依次为阿魏酸川芎嗪丹参素原儿茶醛,最佳配伍组合为丹参素(120μg/m L)、原儿茶醛(120μg/m L)、川芎嗪(80μg/m L)、阿魏酸(40μg/m L)。对MDA水平的影响主次因素依次为丹参素原儿茶醛阿魏酸川芎嗪,最佳配伍组合为丹参素(60μg/m L)、原儿茶醛(60μg/mL)、川芎嗪(80μg/m L)、阿魏酸(20μg/m L)。对TNF-α水平影响的主次因素依次为川芎嗪原儿茶醛丹参素阿魏酸,最佳配伍组合为丹参素(60μg/m L)、原儿茶醛(60μg/m L)、川芎嗪(40μg/m L)、阿魏酸(10μg/m L)。影响IL-1β水平的主次因素依次为川芎嗪阿魏酸丹参素原儿茶醛,最佳配伍组合为丹参素(30μg/m L)、原儿茶醛(30μg/m L)、川芎嗪(80μg/m L)、阿魏酸(20μg/m L)。影响IL-6水平的主次因素依次为原儿茶醛川芎嗪阿魏酸丹参素,最佳配伍组合为丹参素(120μg/m L)、原儿茶醛(120μg/m L)、川芎嗪(80μg/m L)、阿魏酸(10μg/m L)。影响细胞早期凋亡率主次因素为阿魏酸原儿茶醛川芎嗪丹参素,最佳配伍组合为丹参素(60μg/m L)、原儿茶醛(30μg/m L)、川芎嗪(20μg/m L)、阿魏酸(40μg/m L)。结论丹参-川芎有效成分配伍对氧糖剥夺海马神经元细胞的保护作用机制可能与减轻氧化应激损伤、减轻炎症损伤和抑制细胞凋亡有关,可参考实验结果为临床不同病程需要更改组方配比,指导临床用药。     

初均速法测定丹参注射液的稳定性

丹参注射液是由唇形科植物丹参经提取制成的灭菌水溶液 ,有活血化瘀、通脉养心的作用 ,临床上常用于冠心病引起的胸闷、心绞痛等症。自丹参水溶性成分中分离出的酚性成分丹参素抗心肌缺血和对冠状动脉作用的药理学研究提示[1] ,丹参素可能是丹参的主要有效成分。本实验以丹参素含量为指标 ,对丹参注射液的稳定性进行考察 ,以初步研究其稳定期。1　实验材料与仪器丹参注射液 (某药厂近期产品 ) ;TU- 1 2 2 1紫外分光光度计 (北京通用仪器有限公司 ) ;DH64型电热恒温干燥箱 (创新医疗器械厂 )。2　实验方法与结果2 .1　高温加速试验　取样品…     

促红细胞生成素对脑缺氧的保护作用

 目的在细胞水平探讨促红细胞生成素(EPO)对缺氧诱发的神经元损伤的改善作用及缺糖缺氧诱发的脑片损伤的改善作用。方法　采用原代新生大鼠皮层培养和小鼠脑片的方法,分别以形态学和二苯基四氮唑溴盐(MTT)及2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色为指标观察神经元及脑片的损伤和药物的改善作用。结果EPO在10^-11,10^-12mol·L^-1能显著改善缺氧24 h引起的培养神经元死亡,其在10^-9mol·L^-1能改善缺氧45min或缺糖缺氧15min引起的脑片梗死。结论EPO对缺氧诱发的神经元死亡和缺糖缺氧诱发的脑片梗死具有保护作用。     

丹参注射液及其活性成分丹参素、原儿茶醛对人红细胞胞浆Ca2+浓度影响的实验研究

目的 :探讨丹参水溶性部位钙拮抗作用的主要有效成分。方法 :采用荧光探针Fura-2定量分析法 ,分别测定丹参注射液及其活性成分丹参素、原儿茶醛对离体健康成人红细胞胞浆Ca²⁺ 浓度的影响。结果 :丹参素和原儿茶醛均有降低成人红细胞胞浆Ca²⁺ 浓度的作用 ,并表现出剂量依赖性 ,二者合并用药 ,药效相加 ,作用与丹参注射液相似。结论 :丹参素和原儿茶醛可能是丹参注射液钙拮抗作用的主要有效成分。