基于铁死亡途径探讨龟鹿二仙胶治疗少弱精子症的作用及机制

目的 通过网络药理学和体内外实验研究，探讨铁死亡在龟鹿二仙胶治疗少弱精子症中的作用。方法 通过TCMSP数据库、HERB数据库、PubChem数据库和Swiss数据库获取龟鹿二仙胶的活性成分和作用靶点，Genecard数据库和FerrDb数据库检索铁死亡基因，GEO数据库获取少弱精子症差异基因，三者取交集构建蛋白互作网络，进行基因本体（gene ontology,GO）功能和京都基因与基因组百科全书（Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG）通路富集分析。使用H2O2刺激小鼠睾丸支持细胞构建氧化应激损伤模型，并用龟鹿二仙胶含药血清干预损伤模型细胞，观察细胞形态，检测细胞活性氧（reactive oxygen species,ROS）、乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）、总铁和亚铁离子含量，透射电镜观察细胞超微结构，qRT-PCR和Western blotting检测细胞谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)和酰基辅酶A合成酶长链家族成员4(acyl-CoA synt...     

两种剂型龟鹿二仙胶对于腺嘌呤诱导肾阳虚型少弱精子症大鼠的干预作用＊

目的 探究两种剂型龟鹿二仙胶对于腺嘌呤诱导肾阳虚型少弱精子症大鼠的干预作用。方法 32只8周龄SD大鼠，体质量200 g-220 g，随机分4组，分别为空白组（Control）、模型组（Model）、龟鹿二仙胶饮片膏组（GLEX_T）、龟鹿二仙胶颗粒膏组（GLEX_G），每组8只；空白组灌胃等体积蒸馏水，其余4组给与腺嘌呤混悬液灌胃，连续灌胃30天；从31天起，空白组及模型组灌胃等体积蒸馏水，龟鹿二仙胶饮片膏组予龟鹿二仙胶饮片膏灌胃，龟鹿二仙胶颗粒膏组予龟鹿二仙胶颗粒膏灌胃，连续灌胃至60天。每日灌胃剂量10 mL?kg^-1。给药完毕后处死，检测血清性激素（T、E2、FSH、LH）、精液参数（精子活力、活率、密度）和睾丸HE染色实验。结果 龟鹿二仙胶饮片膏组与龟鹿二仙胶颗粒膏组都能调节性激素分泌、改善大鼠精液参数（P < 0.01，P < 0.05），且在干预效果上无显著差异（P > 0.05）；龟鹿二仙胶饮片膏组与龟鹿二仙胶颗粒膏都对大鼠睾丸组织有保护作用。结论 两种剂型龟鹿二仙胶对于腺嘌呤诱导肾阳虚型少弱精子症大鼠有干预作用且疗效相近，可能与其对下丘脑-垂体-睾丸轴的调控、内分泌激素的改变，睾丸组织的保护有关。     

姚芷龄运用龟鹿二仙胶经验浅析

龟鹿二仙胶具有滋阴填精、益气壮阳的功效,本方乃阴阳气血同补之剂,既能滋补肝肾,又可补益脾胃。本文介绍姚芷龄运用龟鹿二仙胶治疗月经过少症,绝经前后诸症,腰椎间盘突出症经验,并对其经验进行浅析。     

龟鹿二仙胶对少弱精子症小鼠的保护作用及机制研究

目的：研究龟鹿二仙胶对少弱精子症模型小鼠的保护作用及其机制。方法：50只KM小鼠随机分为正常组(Control)、模型组(Model)、左卡尼汀组(L-car)、龟鹿二仙胶低剂量组(GLEXJ-L)和龟鹿二仙胶高剂量组(GLEXJ-H),每组10只，正常组注射等剂量生理盐水，其余各组按照75 mg/kg的剂量给予环磷酰胺进行腹腔注射，连续3 d,建立少弱精子症模型。模型建立后，各组按照临床等效剂量给予相应药物或等量生理盐水灌胃4周，观察各组动物一般情况；记录动物体质量、脾脏和睾丸质量，并计算脾指数和睾丸指数；取附睾进行精子数量和活动率计算；HE染色观察各组动物睾丸和脾脏病理变化；免疫组化法定位各组动物睾丸组织ZO-1、TGF-β3、Smad1和Smad4蛋白并检测其表达水平；ELISA法检测各组小鼠血清中黄体生成素(LH)和睾酮(T)的水平。结果：与正常组比较，模型组小鼠睾丸组织中生精细胞变性，数量减少，排列紊乱；睾丸指数、脾脏指数、精子数量和活动率、血清T水平和ZO-1蛋白表达水平显著降低(P<0.05),LH水平显著升高(P<0.05);与模型组比较，左卡尼汀组、龟鹿二...     

基于肠道菌群探讨补肾益精法治疗少弱精子症的作用机制

少弱精子症是引起男性不育的主要原因,其病因复杂多样,目前临床上仍有部分少弱精子症的病因未明,称为特发性少弱精子症。随着高通量测序技术的发展,发现肠道菌群紊乱可能是少弱精子症发病的一个重要促进因素。中医学认为“肾精亏虚”为少弱精子症的核心病机,临床上采用补肾益精法治疗少弱精子症疗效显著,但其作用机制尚未完全阐明。结合中医基础理论及分子生物学研究发现,“肾精”与肠道菌群具有相似性,在少弱精子症发病过程中,肠道菌群紊乱与中医“肾精亏虚”病机有共通之处,且补肾益精类中药可调节肠道菌群紊乱,这或许是补肾益精法有效治疗少弱精子症的机制之一。基于此,该文从肠道菌群角度探讨中医补肾益精法治疗少弱精子症的作用机制,以期为中医药治疗少弱精子症提供新的思路。     

龟鹿二仙胶源流考辨与研究进展

龟鹿二仙胶始载于《医便》，为阴阳气血交补之剂。由龟甲、鹿角、人参、枸杞子组成，主要含有胶原蛋白、脂肪酸、人参皂苷、枸杞多糖、氨基酸等成分。实验研究发现龟鹿二仙胶通过多种作用机制发挥抗炎镇痛、调节免疫、抑制肿瘤等作用，临床广泛应用于治疗骨骼、血液、生殖、神经系统疾病以及辅助治疗肿瘤。现围绕龟鹿二仙胶的源流与研究进展梳理相关文献，以期为后续深入研究提供参考。     

基于网络药理学和分子对接探讨龟鹿二仙胶治疗少、弱精子症作用机制＊

目的 基于网络药理学和分子对接探讨龟鹿二仙胶治疗少、弱精子症（AS）的物质基础及作用机制。方法 运用TCMSP数据库筛选龟鹿二仙胶中枸杞子、人参的活性成分及靶标，检索文献及BATMAN-TCM、DrugBank、ETCM、化学专业数据库获取鹿角胶、龟板胶活性成分及靶标；运用GeneCards、OMIM、DrugBank、TTD、DisGeNET数据库筛选AS靶标；运用R语言软件映射得到龟鹿二仙胶治疗AS靶标，运用Cytoscape平台构建龟鹿二仙胶-药物活性成分-靶标及龟鹿二仙胶-药物活性成分-靶标-AS间的互作网络图；运用STRING平台构建治疗靶标间互作网络图；运用ClueGo插件对治疗靶标行GO生物功能分析，R语言软件行KEGG通路富集分析；并运用ZINC、RCSB PDB数据库，AutoDock、PyMOL软件对药物有效活性成分与关键靶标作分子对接。结果 从龟鹿二仙胶中共获得83个有效活性成分，得到53个龟鹿二仙胶治疗AS的潜在靶标，这些靶标主要涉及氧化应激、脂质沉积负调节等生物学过程，并主要富集在PI3K/Akt，HIF-1等信号通路上；分子对接验证显示对接得分 < -5 kcal·mol^-1占82.5%，即大部分靶标与成分的结合活性较好。结论 通过网络药理学及分子对接证实了龟鹿二仙胶多成分、多靶标、多途径的作用特点，预测了龟鹿二仙胶可能通过PI3K/Akt，HIF-1等途径，从而调控氧化应激、脂质代谢等生物学过程治疗AS的可能作用机制，为进一步研究其活性成分和作用机制提供理论依据。     

李发枝运用龟鹿二仙胶经验

介绍李发枝运用龟鹿二仙胶治疗骨质疏松症、肌萎缩侧索硬化症、进行性肌营养不良经验,认为龟鹿二仙胶具有温肾壮阳、益精填髓功效,可沟通任督二脉,峻补阴阳精血,使阴生阳长、气血充固.     

龟鹿二仙胶汤及其拆方对大鼠软骨细胞凋亡基因表达的影响

目的:通过观察龟鹿二仙胶汤及其拆方对SD大鼠软骨细胞凋亡基因表达的影响,比较龟鹿二仙胶汤中各药物组成在全方中的作用。方法:取1月龄SD大鼠膝关节软骨建立软骨细胞体外培养体系,采用实时荧光定量PCR检测Bax、Bcl-2、Caspase-3、p53mRNA表达。结果:龟鹿二仙胶、龟甲、鹿角、人参、枸杞、盐酸氨基葡萄糖均可显著抑制大鼠软骨细胞Bax、Caspase-3、P53的表达;龟鹿二仙胶、龟甲、鹿角与盐酸氨基葡萄糖效果相当,人参、枸杞弱于盐酸氨基葡萄糖。结论:龟甲和鹿角是龟鹿二仙胶抑制凋亡的主要物质。龟甲、鹿角峻补阴阳以生气血精髓的作用可以一定程度上从抑制软骨细胞凋亡来体现。人参大补元气、枸杞滋补肾阴,抑制凋亡有效,但效果明显不如龟鹿二仙胶;而4味药共同作用,具有填补精髓、益气壮阳之功,人参、枸杞可以在一定程度上加强龟甲、鹿角抑制软骨细胞凋亡基因的表达。     

龟鹿二仙胶对去势大鼠骨骼肌Akt蛋白表达的影响

目的:探讨龟鹿二仙胶对去势大鼠骨骼肌Akt蛋白表达的影响。方法:40只6月龄SD大鼠随机分为假手术、模型组、龟鹿二仙胶组、雌激素组各10只,假手术组、模型组灌胃生理盐水,龟鹿二仙胶组给予龟鹿二仙胶颗粒剂灌胃,雌激素组给予戊酸雌二醇。治疗12周后活体骨密度(BMD)检测,同时检测骨骼肌Akt蛋白、mRNA表达。结果:模型组BMD明显低于假手术组(P0.05),龟鹿二仙胶组和雌激素组高于模型组(P0.05);模型组蛋白Akt、p-Akt表达量明显低于假手术组(P0.05);而龟鹿二仙胶组和雌激素组高于模型组(P0.05);模型组Akt1 mRNA表达量明显低于假手术组(P0.05),而龟鹿二仙胶组和雌激素组明显高于模型组(P0.05)。结论:龟鹿二仙胶对去势大鼠有明显的治疗作用,能改善BMD,提高骨骼肌Akt蛋白和基因的表达量。     

基于阴阳平衡理论探讨针灸与肠道微生态的关系＊

肠道微生态平衡具有维系人体正常的生命活动的重要作用，肠道微生态失衡会导致疾患的发生或促使病情进一步恶化。针灸治疗疾病在于调和阴阳，促进机体向阴阳平衡的状态发展。针灸可有效改善肠道微生物的多样性，增加机体的免疫功能，从而达到改善疾病状况、恢复肠道微生态平衡的目的。针灸维持机体阴阳平衡与针灸维系肠道微生态平衡从本质上讲是相通的，以阴阳平衡理论为切入点探讨针灸与肠道微生态的关系，为针灸从阴阳平衡论治肠道微生态失衡相关病症提供理论基础。     

肠道微生态与多囊卵巢综合征发病机制的相关性

多囊卵巢综合征与肠道微生态密切相关。肠道微生态在中医证候方面的研究主要集中在脾虚证、肾阳虚衰证、湿热证、脾虚湿盛证等方面,其中与肠道菌群密切相关的胰岛素抵抗、代谢综合征的中医病机证候与多囊卵巢综合征的病机不谋而合,其共性阐释主要有:(1)阴阳失衡,同为发病根本;(2)"脑-肠"理论贯穿其中。现代作用机制方面,多囊卵巢综合征患者肠道微生态及通透性确有改变,且肠道菌群紊乱与相关临床症状密切相关,主要表现有:(1)高雄激素血症;(2)胰岛素抵抗;(3)肥胖。目前,多囊卵巢综合征的治疗仍集中在针对特定症状,还无法达到患者内环境稳态、子代健康的理想结果。肠道菌群作为内环境因素,可与宿主相互作用,多项研究已经证实,肠道菌群可能通过多种途径、多种因素参与多囊卵巢综合征的病理生理过程的发生和发展,但究竟谁是机理的引导者,尚未知晓。目前,国内关于中医药干预治疗对多囊卵巢综合征患者肠道微生态影响的临床研究报道较少,尚需进一步深入研究。     

慢性阻塞性肺疾病Th1/Th2、Th17/Treg失衡与阴阳失衡的关系

中医学认为阴平阳秘是机体处于“稳态”的条件,而阴阳失衡则会使机体处于“病态”。现代医学认为免疫自稳、免疫平衡与机体的“自稳态”有着密切关系,若免疫功能出现失衡则相关疾病就会发生。慢性阻塞性肺疾病(Chronic Obstructive Pulmonary Disease,COPD)简称慢阻肺,与免疫失衡有着密切关系,Th1/Th2失衡及Th17/Treg失衡就是其中重要的2组免疫失衡。慢阻肺阴阳失衡与慢阻肺Th1/Th2、Th17/Treg失衡相关,慢阻肺阴阳失衡可能会导致机体Th1/Th2、Th17/Treg失衡,进而加快疾病进展;反之,慢阻肺阴阳失衡状态可能是由慢阻肺Th1/Th2、Th17/Treg失衡所致。本研究通过论述慢阻肺Th1/Th2及Th17/Treg失衡的相关中西医研究进展,探究慢阻肺免疫失衡与阴阳失衡之间的关系,从新角度探讨中西医结合辨证论治慢阻肺。     

Comparative Analysis of Amino Acid Composition between Granules and Traditional Paste of Guilu Erxian JiaoFormula and Their Effect on Serum Levels of Immunoglobulin in Rats

目的 对比龟鹿二仙胶配方颗粒膏与传统饮片膏中的13种氨基酸类成分以及二者对大鼠血清免疫球蛋白的影响。方法 采用柱前衍生-UPLC法分析19批龟鹿二仙胶配方颗粒膏与传统饮片膏样品，建立二者的指纹图谱，并采用标准品对照，对其中氨基酸成分进行定性分析，并取其中含量最高的几种成分进行定量分析。建立大鼠阳虚型模型，分别采用龟鹿二仙胶配方颗粒膏与传统饮片膏进行干预，检测各组大鼠血清中IgA、IgG、IgM免疫球蛋白的含量。结果 成功建立龟鹿二仙颗粒膏与饮片膏的指纹图谱，发现19批膏方的相似度接近（P > 0.99），采用标准品确定其中13种氨基酸成分，其中各批次中成分含量较高的4种氨基酸，L-羟脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、L-脯氨酸含量无明显差别。且二者对阳虚型大鼠血清免疫球蛋白的影响也基本相似（P > 0.05）。结论 龟鹿二仙胶配方颗粒膏较与传统饮片膏比较，氨基酸类成分的定性与主要氨基酸类成分的定量分析均无明显区别，其基本的药理作用也较为接近。但配方颗粒成膏技术较传统成膏技术更加简便与高效，具有巨大的市场潜力与发展前景，值得深入研究     

加味龟鹿二仙汤时辰用药调节乳腺癌化疗后骨髓造血功能的临床研究

目的:探讨加味龟鹿二仙汤及时辰用药方案在防治乳腺癌化疗后骨髓抑制方面的作用。方法:共纳入乳腺癌术后患者120例,随机分为3组,其中西药对照组36例(化疗后予利血生、鲨肝醇、V itB4服用);中药(加味龟鹿二仙汤)不拘时口服组43例;中药时辰用药组(加味龟鹿二仙汤组酉时服用)41例。结果:经统计学分析,中药不拘时口服组与时辰用药组在减轻乳腺癌化疗后血液学毒性方面(白细胞、血红蛋白、血小板减少方面)均优于西药对照组(P=0.000),而在白细胞数减少方面,中药时辰用药组尚优于中药不拘时服用组(P=0.035)。此外,中药组相比于西药对照组,可以明显减少集落细胞刺激因子粒生素的使用量(P<0.01)。结论:补肾中药加味龟鹿二仙汤能明显改善乳腺癌患者化疗后骨髓造血功能,尤以按时辰用药(酉时服用)效果为著。     

从阴阳平衡论失眠

正常的睡眠与阴阳的升降平衡有直接关系,阴阳升降出入正常,则人体可正常寐寤。阴阳升降平衡失常,则发为失眠。若阳偏亢,不能正常下潜入于阴,则发为失眠,多表现为入睡困难,可用栀子豉汤或酸枣仁汤加减,以滋阴清热,清心除烦,亦可依据不同病因采用龙胆泻肝汤加减、交泰丸加减、百合地黄汤加减等治疗。阳扰于阴,表现为入睡容易,但是多梦、易醒,此类失眠与三焦、肝、胆、胃关系密切,可采用保和丸或温胆汤加减治疗,如属血瘀证可选用血府逐瘀汤加减治疗,属心肝血虚证者可采用安神定志汤、逍遥丸或归脾汤等治疗。阳早出于阴,表现为入睡不难,但睡眠持续时间不长、醒后不易再入睡、早醒,此类失眠和三焦、胆、肺、大肠等关系密切,患者多为老年人或抑郁症患者。老年人失眠,可采用老人不寐丸、左归饮、桂枝龙骨牡蛎汤等加减治疗。抑郁症患者,可采用柴胡加桂枝龙骨牡蛎汤、柴桂温胆定志汤等治疗。治疗时要综合分析,找准病机,平衡阴阳,调畅气机,方能显效。同时,要适当调整作息时间,顺应阴阳变化,养阴养阳,使人体处于阴阳相对平衡的状态,则失眠自愈。     

龟鹿二仙胶及其拆方对豚鼠软骨细胞Ⅱ型胶原蛋白多糖合成的影响

目的:通过观察龟鹿二仙胶及其拆方对豚鼠软骨细胞Ⅱ型胶原和蛋白多糖合成的影响,探讨龟鹿二仙胶的配伍机制。方法:体外培养豚鼠膝关节软骨细胞,免疫组化染色检测龟鹿二仙胶及其拆方对软骨细胞Ⅱ型胶原合成的影响,Alcian Blue染色检测软骨细胞蛋白多糖合成。结果:龟鹿二仙胶促进软骨细胞Ⅱ型胶原和蛋白多糖表达极显著(P<0.01),龟板和鹿角均能显著提高Ⅱ型胶原和蛋白多糖表达(P<0.05),但药效显著低于龟鹿二仙胶(P<0.05);人参和枸杞对Ⅱ型胶原和蛋白多糖表达均无明显促进作用。结论:龟鹿二仙胶可显著促进软骨细胞Ⅱ型胶原和蛋白多糖的表达,这是其保护软骨细胞,延缓软骨退变的作用机制之一。龟鹿二仙胶发挥此作用的主要药物是龟板和鹿角;人参和枸杞本身并不能促进Ⅱ型胶原和蛋白多糖表达,而与龟板和鹿角配合,可明显增强龟板和鹿角的促进软骨细胞Ⅱ型胶原和蛋白多糖表达的作用。     

阴阳理论与《内经》十二经脉命名初探

十二经脉名称命定与中医阴阳理论关系十分密切,其中,“经”、“脉”及十二之数均受阴阳应象思维的启发,又由于经脉“阴阳之气,各有多少”,而分类命之为三阴经与三阳经。十二经脉依表里上下前后的对应定位命名,还体现了人体阴阳的整体协调与平衡。     

王灿晖二仙汤加减治疗围绝经期综合征经验

目的：总结王灿晖运用二仙汤加减治疗围绝经期综合征的临床经验。方法：通过跟师学习,收集、整理、归纳王灿晖教授运用二仙汤加减治疗围绝经期综合征的临床疗效。结果：王灿晖教授从本病的病因病机入手,提出补肾养肝、滋阴降火、调补阴阳的治疗原则。结论：王灿晖运用二仙汤加减治疗围绝经期综合征的临床疗效显著。