Comparative Analysis of Amino Acid Composition between Granules and Traditional Paste of Guilu Erxian JiaoFormula and Their Effect on Serum Levels of Immunoglobulin in Rats

目的 对比龟鹿二仙胶配方颗粒膏与传统饮片膏中的13种氨基酸类成分以及二者对大鼠血清免疫球蛋白的影响。方法 采用柱前衍生-UPLC法分析19批龟鹿二仙胶配方颗粒膏与传统饮片膏样品，建立二者的指纹图谱，并采用标准品对照，对其中氨基酸成分进行定性分析，并取其中含量最高的几种成分进行定量分析。建立大鼠阳虚型模型，分别采用龟鹿二仙胶配方颗粒膏与传统饮片膏进行干预，检测各组大鼠血清中IgA、IgG、IgM免疫球蛋白的含量。结果 成功建立龟鹿二仙颗粒膏与饮片膏的指纹图谱，发现19批膏方的相似度接近（P > 0.99），采用标准品确定其中13种氨基酸成分，其中各批次中成分含量较高的4种氨基酸，L-羟脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、L-脯氨酸含量无明显差别。且二者对阳虚型大鼠血清免疫球蛋白的影响也基本相似（P > 0.05）。结论 龟鹿二仙胶配方颗粒膏较与传统饮片膏比较，氨基酸类成分的定性与主要氨基酸类成分的定量分析均无明显区别，其基本的药理作用也较为接近。但配方颗粒成膏技术较传统成膏技术更加简便与高效，具有巨大的市场潜力与发展前景，值得深入研究     

基于肾脑相关的龟鹿二仙膏抗阿尔茨海默病作用及其机制

目的 基于“肾脑相关”理论,探讨龟鹿二仙膏对氢化可的松联合β淀粉样蛋白（Aβ）诱导的阿尔茨海默病（AD）大鼠模型的作用及其机制。方法 采用腹腔注射氢化可的松并脑室注射Aβ诱导大鼠AD模型,龟鹿二仙膏不同浓度进行干预。测定大鼠的海马、肾脏和肾上腺指数;采用Morris水迷宫实验观察大鼠空间学习记忆能力;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清样品中皮质酮（CORT）及睾酮（T）水平;液相色谱-质谱联用（LC-MS）代谢组学技术采集和分析模型大鼠血清代谢数据;利用中药系统药理学数据库及分析平台（TCMSP）、中药分子机制的生物信息学分析工具（BATMAN-TCM）和中医药综合数据库（TCMID）收集龟鹿二仙膏活性成分及相应靶点;利用人类基因数据库（GeneCards）和在线人类孟德尔遗传数据库（OMIM）检索得到的AD相关靶标信息;构建蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络,进行京都基因与基因组百科全书（KEGG）代谢通路富集分析、基因本体论（GO）富集分析;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠海马组织中白细胞介素-6（IL-6）的表达水平。结果 与模型组比较,龟鹿二仙膏高、中、低剂量组海马指数、肾脏指数和肾上腺指数均显著升高,其中龟鹿二仙膏高剂量组升高最为显著（P<0.01）;龟鹿二仙膏高、低剂量组大鼠穿越平台次数均显著增加（P<0.05,P<0.01）,Ⅲ象限路程（%）和Ⅲ象限时间（%）均显著延长（P<0.05,P<0.01）;龟鹿二仙膏高、中、低剂量组大鼠血清CORT含量均显著降低（P<0.01）;龟鹿二仙膏高、中、低剂量组大鼠海马组织中IL-6表达水平均显著降低（P<0.01）。代谢组学技术共鉴定了24个与AD相关的血清差异代谢物;网络药理学方法共筛选出50个治疗AD的高频共性化合物,高频共性靶点187个,得出磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信号通路在AD复杂的病理机制网络中起到重要作用。结论 龟鹿二仙膏可显著改善氢化可的松并Aβ诱导的AD模型大鼠认知功能障碍,降低血清CORT,抑制海马组织炎症因子IL-6表达,并调节AD模型大鼠的代谢水平,为其临床应用提供依据。     

龟鹿二仙胶对糖尿病大鼠生殖损伤的保护作用及机制

目的 探索龟鹿二仙胶改善糖尿病大鼠生殖损伤的疗效及可能作用机制。方法 将53只SD雄鼠随机分成5组，选取其中1组作为正常组，剩余4组合并成造模组用高脂饲料喂养联合30 mg·kg^-1链脲佐菌素（STZ）腹腔注射建立糖尿病模型，以连续3次随机血糖均>16.7 mmol·L^-1作为纳入糖尿病生殖损伤模型标准。将成模的大鼠按血糖高低随机分成模型组、龟鹿二仙胶组（2 g·kg^-1）、维生素E组（0.03 g·kg^-1）、五子衍宗丸组（0.6 g·kg^-1），给予相应药物剂量灌胃，每天1次，连续治疗4周，每周测体质量和血糖。4周后取材进行指标检测，苏木素-伊红（HE）染色观察睾丸及附睾组织形态学变化，原位末端标记法（TUNEL）染色观察睾丸细胞凋亡情况；精液分析仪检测精子浓度和精子活力；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）、睾酮（T）水平；ELISA检测睾丸组织超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醇（MDA）、活性氧（ROS）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）含量；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测睾丸组织Nrf2、HO-1、Bax、Bcl-2蛋白表达。结果 与正常组比较，模型组大鼠睾丸组织萎缩，生精小管数量减少，附睾管壁增生，管腔狭窄；精子浓度和活力下降（P<0.01）；血清T、FSH和LH水平降低（P<0.01）；睾丸中ROS和MDA含量增加（P<0.01），SOD和GSH-Px水平减少（P<0.01）；Bax表达增加（P<0.01），Nrf2、HO-1、Bcl-2表达降低（P<0.01）。与模型组比较，龟鹿二仙胶组睾丸及附睾组织病变得到一定改善；精子浓度和活力提升（P<0.05，P<0.01）；血清T和LH含量上升（P<0.05，P<0.01），FSH含量差异无统计学意义；睾丸中ROS和MDA含量降低（P<0.01），SOD和GSH-Px水平增加（P<0.01）；Bax表达下降（P<0.01），Nrf2、HO-1、Bcl-2表达上升（P<0.05，P<0.01）。结论 龟鹿二仙胶能在一定程度上改善糖尿病大鼠生殖损伤，提升精子质量，其机制可能与改善氧化应激，抗凋亡作用有关。     

基于NELL2 Lumicrine信号通路探索引阳索胶囊对肾阳虚型精子损伤的保护作用及机制

目的 研究引阳索胶囊对腺嘌呤诱导的肾阳虚大鼠精子损伤的保护作用,并从睾丸神经表皮样生长因子2（neuralEGFL like 2,NELL2）Lumicrine信号通路探索其作用机制。方法 雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、引阳索（432mg/kg）组和左卡尼汀（100mg/kg）组,每组10只。连续ig腺嘌呤（200mg/kg）14d建立大鼠肾阳虚模型,并通过观察大鼠肾阳虚证候表现、眼眶取血检测血清中睾酮水平判断造模是否成功;造模同时给予药物干预49d后取材,计算睾丸、附睾脏脑系数;计算机辅助精子分析（computer assisted sperm analysis,CASA）检测附睾精子动力学参数;光镜下进行精子计数、精子畸形率检测;精子荧光检测精子活率;苏木素-伊红（HE）染色观察睾丸、附睾组织病理变化;ELISA 法检测血清中睾酮水平;免疫荧光法观察睾丸NELL2分泌及附睾c-ros癌基因1（ROS proto-oncogene 1,ROS1）表达;Western blotting 检测附睾蛋白酶卵磷脂酶2（ovochymase 2,OVCH2）和精子去整合素金属蛋白酶3（a disintegrin and metalloproteinase 3,ADAM3）表达。结果 与模型组比较,引阳索胶囊可改善肾阳虚大鼠毛发粗糙脱落、精神不振、蜷缩拱背、尿量增多、体质量降低等肾阳虚证候表现,升高睾丸、附睾脏脑系数（P＜0.01）;显著提高精子数量、精子活率、各精子动力学参数（P＜0.05、0.01、0.001）,降低精子畸形率,降低曲细精管病变率（P＜0.001）,升高14、49d血清中睾酮水平（P＜0.01、0.001）;显著升高睾丸NELL2及附睾ROS1、OVCH2、ADAM3蛋白表达水平（P＜0.05、0.01、0.001）。结论 引阳索胶囊对腺嘌呤诱导的肾阳虚大鼠精子损伤具有保护作用,其机制可能与其调节NELL2 Lumicrine信号通路参与精子发生成熟过程有关。     

艾烟对弱精子症模型大鼠精子参数和血清性激素的影响＊

目的 观察艾烟对奥硝唑灌胃所建立的弱精子症模型大鼠生殖功能的保护作用。方法 将32只雄性SD大鼠按体质量随机分为溶剂对照组（8只）、弱精子症模型组（8只）、艾烟组（8只）、香烟对照组（8只）。模型组、艾烟组、香烟组：每组均使用奥硝唑溶液灌胃，每次400 mg/kg，每日1次，连续灌胃10天。从第11天起，将三个组的奥硝唑剂量调至200 mg/kg，每日1次，并开始艾烟和香烟干预，每天20min，每日1次，每周6天。实验共8周。溶剂对照组：只给与等体积的0.2%羧甲基纤维素钠溶液灌胃，每日1次，共灌胃8周，不进行其他干预。观察各组大鼠附睾中精子浓度、精子活力、精子活率、A级精子数、A+B级精子数指标的变化，血清中性激素睾酮、促黄体生成素含量的变化，睾丸HE染色组织形态学改变。结果 ①与溶剂组相比：模型组和香烟组大鼠的精子活力、精子活率、A级精子数、A+B级精子数明显下降（P < 0.01），而艾烟组上述指标无差异（P > 0.05）；②与模型组相比，艾烟组大鼠的上述精子参数均明显上升（P < 0.01），香烟组的精子活力、精子活率、A + B级精子数有所上升（P < 0.05）；③与香烟组相比，艾烟组的精子活力、精子活率、A级精子数、A + B级精子数明显上升（P < 0.01）；④与溶剂组相比，模型组和香烟组大鼠的血清睾酮的含量显著下降（P < 0.01）、促黄体生成素的含量上升（P < 0.01）；⑤与模型组相比，艾烟组睾酮的含量上升（P < 0.01）、促黄体生成素的含量下降（P < 0.05）；⑥病理结果显示，模型组大鼠睾丸组织受损，艾烟组大鼠的组织有所恢复，香烟组的睾丸损伤程度最重。结论 艾烟可以提高弱精子症模型大鼠的精子质量，提高精子活力、精子活率、A级精子数、A + B级精子数，调节血清睾酮和促黄体生成素水平，减轻睾丸组织病变。     

疏肝补肾毓麟汤调节VDAC2基因甲基化影响弱精症大鼠精子线粒体功能改善精子质量

目的 明确疏肝补肾毓麟汤抑制电压依赖性阴离子通道2（VDAC2）基因甲基化，通过环磷酸腺苷/蛋白激酶A（cAMP/PKA）通路，调节线粒体功能，提高精子活力的作用机制。方法 雄性SD大鼠40只随机分成空白组、模型组、疏肝补肾毓麟汤高、低剂量组及左卡尼汀组，每组8只。采用腺嘌呤（0.05 g·kg^-1）灌胃14 d，复制少弱精症大鼠模型；疏肝补肾毓麟汤组给予疏肝补肾毓麟汤高、低剂量（32.4，8.1 g·kg^-1）灌胃；左卡尼汀组予以左卡尼汀（0.27 g·kg^-1）灌胃。全自动精子分析仪检测精子活力；苏木素-伊红（HE）染色观察睾丸组织病理形态学变化；流式细胞法检测精子线粒体膜电位差；免疫荧光法检测睾丸VDAC2的表达；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测睾丸组织VDAC2 mRNA表达；亚硫酸氢盐测序法检测睾丸组织VDAC2基因甲基化；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测睾丸组织cAMP表达；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测睾丸组织PKA蛋白表达。结果 与空白组比较，模型组精子密度及活动率均显著降低（P<0.01），线粒体膜电位显著增高（P<0.01），睾丸组织VDAC2的mRNA及蛋白，PKA蛋白，cAMP含量均显著降低（P<0.01），VDAC2甲基化程度显著增高（P<0.01）；与模型组比较，左卡尼汀组、疏肝补肾毓麟汤高、低剂量组精子密度及活动率、线粒体膜电位均显著升高（P<0.01），睾丸组织VDAC2的mRNA及蛋白，PKA蛋白，cAMP含量均显著升高（P<0.01），VDAC2甲基化程度显著降低（P<0.01）；与左卡尼汀组比较，疏肝补肾毓麟汤低剂量组精子密度及活动率、线粒体膜电位均显著降低（P<0.01），睾丸组织VDAC2的mRNA及蛋白，PKA蛋白，cAMP含量表达均显著降低（P<0.01），VDAC2甲基化程度显著升高（P<0.01）。结论 疏肝补肾毓麟汤可能通过抑制VDAC2基因甲基化，增加VDAC2表达，调节cAMP/PKA通路，改变线粒体膜电位增强精子活力。     

基于网络药理学和分子对接探讨龟鹿二仙胶治疗少、弱精子症作用机制＊

目的 基于网络药理学和分子对接探讨龟鹿二仙胶治疗少、弱精子症（AS）的物质基础及作用机制。方法 运用TCMSP数据库筛选龟鹿二仙胶中枸杞子、人参的活性成分及靶标，检索文献及BATMAN-TCM、DrugBank、ETCM、化学专业数据库获取鹿角胶、龟板胶活性成分及靶标；运用GeneCards、OMIM、DrugBank、TTD、DisGeNET数据库筛选AS靶标；运用R语言软件映射得到龟鹿二仙胶治疗AS靶标，运用Cytoscape平台构建龟鹿二仙胶-药物活性成分-靶标及龟鹿二仙胶-药物活性成分-靶标-AS间的互作网络图；运用STRING平台构建治疗靶标间互作网络图；运用ClueGo插件对治疗靶标行GO生物功能分析，R语言软件行KEGG通路富集分析；并运用ZINC、RCSB PDB数据库，AutoDock、PyMOL软件对药物有效活性成分与关键靶标作分子对接。结果 从龟鹿二仙胶中共获得83个有效活性成分，得到53个龟鹿二仙胶治疗AS的潜在靶标，这些靶标主要涉及氧化应激、脂质沉积负调节等生物学过程，并主要富集在PI3K/Akt，HIF-1等信号通路上；分子对接验证显示对接得分 < -5 kcal·mol^-1占82.5%，即大部分靶标与成分的结合活性较好。结论 通过网络药理学及分子对接证实了龟鹿二仙胶多成分、多靶标、多途径的作用特点，预测了龟鹿二仙胶可能通过PI3K/Akt，HIF-1等途径，从而调控氧化应激、脂质代谢等生物学过程治疗AS的可能作用机制，为进一步研究其活性成分和作用机制提供理论依据。     

参苓白术散调节Nrf2/ARE通路改善高尿酸血症型少弱精子症小鼠的生精功能

目的 探讨参苓白术散对高尿酸血症（HUA）型少弱精子症异病同治的作用及机制。方法 将32只雄性昆明种（KM）小鼠随机分为空白组（n=6）、模型组（n=6）、参苓白术散高剂量组（n=7）、参苓白术散低剂量组（n=7）和非布司他组（n=6）。除空白组外，其余各组连续腹腔注射氧嗪酸钾悬液（600 mg·kg^-1）7 d。造模完成后，参苓白术散高、低剂量组分别给予参苓白术散20.14、10.07 g·kg^-1灌胃，非布司他组给予非布司他0.25 g·kg^-1灌胃，空白组和模型组给予同体积生理盐水灌胃，每天灌胃1次，连续14 d后取材。生化法检测血清尿酸（UA），睾丸组织超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）；苏木素-伊红（HE）染色法观察睾丸组织病理学变化并进行生精功能评分；全自动精子分析仪检测精子密度和活动率；单细胞凝胶电泳（SCGE）检测精子DNA完整性；原位末端标记法（TUNEL）检测睾丸细胞凋亡率；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测睾丸组织Kelch样ECH相关蛋白1（Keap1）、核因子E₂相关因子2（Nrf2）、血红素加氧酶-1（HO-1）、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、胱天蛋白酶-3（Caspase-3）蛋白表达；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测睾丸组织Keap1、Nrf2、HO-1 mRNA表达水平。结果 与空白组比较，模型组小鼠血清UA显著升高（P<0.01），睾丸生精功能、精子密度和活动率均显著下降（P<0.01），精子拖尾率、睾丸细胞凋亡率均显著升高（P<0.01）。与模型组比较，参苓白术散高剂量组小鼠上述指标均有明显改善（P<0.05， P<0.01），且睾丸组织Keap1、Bax、Caspase-3表达量明显降低，Nrf2、HO-1、Bcl-2表达量明显升高（P<0.05， P<0.01），Keap1 mRNA水平明显降低（P<0.05， P<0.01），Nrf2、HO-1 mRNA水平明显升高（P<0.05，P<0.01）。结论 参苓白术散能明显改善HUA型少弱精子症，其机制可能与Nrf2/抗氧化反应元件（ARE）信号通路有关。     

龟鹿二仙膏助阳药理作用研究

目的：观察龟鹿二仙膏助阳的药理作用。方法：测定去势大鼠性腺器官指数及皮质激素阳虚模型小鼠的自主活动增加及常压耐寒冷环境中的存活时间。结果：龟鹿二仙膏能显著增加去势大鼠前列腺及精囊腺指数，使腺细胞增生、扩大、萎缩明显改善；龟鹿二仙膏还能明显提高肾阳虚小鼠自主活动，显著延长在寒冷状态下存活时间。结论：龟鹿二仙膏有较好助阳作用。     

加味龟鹿二仙胶汤联合顺铂对Lewis肺癌小鼠耐药相关基因及IL-7介导的Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的 通过建立气阴两虚型Lewis肺癌小鼠模型,观察加味龟鹿二仙胶汤联合顺铂对Lewis肺癌小鼠免疫功能、耐药相关基因及白细胞介素-7（IL-7）介导的Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路的影响,阐明加味龟鹿二仙胶汤的抗癌机制,为其临床应用提供依据。方法 建立气阴两虚型Lewis肺癌小鼠模型,分为正常组（不造模）,模型组（等体积生理盐水）,顺铂组（顺铂,2 mg·kg^-1）,中药组（加味龟鹿二仙胶汤,19.63 g·kg^-1·d^-1）,联合组（加味龟鹿二仙胶汤,19.63 g·kg^-1·d^-1+顺铂,2 mg·kg^-1）,每组10只,分别给药,干预21 d。观察小鼠一般情况、脏器指数,计算抑瘤率,流式细胞仪检测CD4⁺CD25⁺调节性T细胞（CD4⁺ CD25⁺Treg）,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清中细胞因子水平IL-7,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测肿瘤组织中耐药相关基因P-糖蛋白（P-gp）,多药耐药相关蛋白1（MRP1）mRNA的表达水平,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肿瘤组织中Wnt/β-catenin信号通路蛋白表达。结果 与模型组比较,中药组及联合组摄食量增加,精神状态较好,反应灵敏,体质量增加。与顺铂组比较,联合组胸腺指数、脾脏指数显著升高（P<0.01）,联合组抑瘤率明显升高（P<0.01）。与顺铂组比较,中药组、联合组CD4⁺ CD25⁺Treg /CD4⁺明显降低（P<0.05,P<0.01）,中药组、联合组IL-7水平显著升高（P<0.01）。与顺铂组比较,中药组、联合组P-gp,MRP1 mRNA表达明显降低（P<0.05,P<0.01）,中药组、联合组Wnt1,β-catenin蛋白表达显著降低（P<0.01）。结论 加味龟鹿二仙胶汤与顺铂联用可明显抑制Lewis肺癌小鼠体内肿瘤的生长,其作用机制可能与其能够解除机体免疫抑制状态,促进机体产生IL-7,调节IL-7介导的Wnt/β-catenin信号通路,减少肺癌组织中耐药相关基因的表达有关。     

基于肠道菌群稳态探析龟鹿二仙胶治疗少弱精子症思路＊

肠道菌群的稳态、与人体阴阳平衡、脾肾功能密切相关，且与正常精子的发生有着密切关联。本文从肠道菌群稳态角度对龟鹿二仙胶治疗少弱精子症进行方药探析，认为龟鹿二仙胶通过调节人体肠道菌群稳态平衡阴阳，从而达到改善少弱精子症作用，为进一步研究龟鹿二仙胶对肠道菌群的影响以及与精液质量的关系提供理论依据。     

接骨创伤膏联合中药离子导入对创伤性骨折愈合的影响

目的:探讨接骨创伤膏联合中药离子导入对骨折愈合的影响,明确该项联用技术是否有加强骨折愈合的作用及可能的机制。方法:将雄性健康新西兰兔160只随机等分为正常组,接骨创伤膏联合中药离子导入给药组(简称联合治疗组),接骨创伤膏组(仅给予接骨创伤膏,简称对照组),模型组4组,每组40只,除正常组外,均建立右侧桡骨骨折模型,以第2,4,6,8周4个时间点将每组动物随机等分成4小组,每组10只,联合治疗组所有动物右侧骨折部位给予接骨创伤膏联合中药离子导入治疗,接骨创伤膏组右侧骨折部位单纯给予接骨创伤膏治疗,正常组和模型组不予治疗。术后治疗的第2,4,6,8周4个时间组进行血清碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)活性及骨钙素(bone gla protein,BGP)含量测定,骨密度,X射线影像学检查,组织切片和形态学检测。结果:与正常组比较,模型组血清AKP活性水平,BGP含量,断段骨密度,X射线片影像学积分明显降低(P0.01),病理学和形态学检测显示骨折较明显;与模型组比较,联合治疗组治疗的第2,4,6,8周,血清AKP活性水平及BGP含量较对照组显著升高(P0.05,P0.01),骨密度,X射线片影像学积分明显显高(P0.05,P0.01),病理学和形态学检测亦显示联合治疗组骨折愈合明显提前,各时间点两组间比较差异均有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论:接骨创伤膏联合中药离子导入通过对骨折愈合的整个过程施加影响从而加速了骨折的愈合。     

白及多糖对GU模型大鼠胃组织PI3K/Akt的影响

目的:探讨白及多糖对胃溃疡(GU)模型大鼠胃组织磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K),蛋白激酶B(Akt) m RNA及蛋白,以及其介导细胞因子白细胞介素-2受体(IL-2R),白细胞介素-4(IL-4)表达水平的影响。方法:将60只SPF级Wistar大鼠随机分为空白组和模型组,模型组大鼠采用乙酸直接烧灼法复制GU模型,将GU模型大鼠按随机数字表法分为模型组、盐酸雷尼替丁组和白及多糖高、中、低剂量组共5组,每组10只。空白组和GU模型组大鼠给予10 m L·kg~(-1)·d~(-1)蒸馏水灌胃,白及多糖高、中、低剂量组分别予0. 5,0. 25,0. 125 g·kg~(-1)·d~(-1)白及多糖灌胃,盐酸雷尼替丁组给予0. 3 g·kg~(-1)·d~(-1)盐酸雷尼替丁灌胃,治疗15 d。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组大鼠血清一氧化氮(NO)含量及胃组织胃蛋白酶活性及细胞因子IL-2R,IL-4含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法检测胃溃疡病灶组织PI3K及Akt m RNA表达水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测胃溃疡病灶组织PI3K及Akt蛋白表达水平。结果:与空白组比较,胃组织细胞因子IL-2R,IL-4含量及m RNA表达显著升高,PI3K,Akt m RNA及蛋白表达水平显著升高(P 0. 01);与GU模型组比较,白及多糖高、中、低剂量组IL-2R,IL-4含量及m RNA表达均降低,以白及多糖高剂量组降低显著,PI3K,Akt m RNA及蛋白表达水平均降低,以白及多糖高、中剂量组降低显著(P 0. 05,P 0. 01)。结论:白及多糖可通过下调PI3K及Akt m RNA和蛋白表达水平,抑制细胞因子IL-2R及IL-4异常分泌而发挥保护胃黏膜的作用。     

基于津液理论探讨改良枳术方对便秘大鼠AQP3/AQP9、MUC2的影响＊

目的 在津液理论指导下探讨改良枳术方对于便秘大鼠AQP3/AQP9、MUC2的影响。方法 48只Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、莫沙必利组、改良枳术方低、中、高剂量组，每组8只。除空白组外，其他各组均采用洛哌丁胺灌胃制备慢传输便秘大鼠模型。改良枳术方低、中、高剂量组大鼠分别给予4.725、7.875、11.024 g/（kg·d）灌胃，莫沙必利组以1.56 mg/（kg·d）莫沙必利混悬液灌胃，空白组和模型组灌胃等剂量的蒸馏水。每天一次，共持续7天。检测各小组大鼠24 h粪便颗粒数，粪便含水量、肠道转运时间、肠道推进率、免疫组化和蛋白免疫印迹法（Western blot， WB）测定结肠水通道蛋白3（Aquaporin3， AQP3）、水通道蛋白9（Aquaporin9， AQP9）、黏蛋白2（Mucin 2， MUC2）蛋白表达。结果 与空白组比，模型组大鼠24 h粪便颗粒数及粪便含水量明显减少、肠道转运时间延长、肠道推进率降低，结肠AQP3蛋白表达升高、MUC2蛋白表达降低（P<0.05）；与模型组比，改良枳术方各组大鼠24 h粪便颗粒数及粪便含水量明显增加、肠道推进率增加，改良枳术方各组结肠AQP3表达下降、MUC2蛋白表达增加（P<0.05）；与模型组比，改良枳术方高剂量组结肠AQP9蛋白表达明显下降（P<0.05）。结论 AQP3/AQP9、MUC2介导的结肠“津”“液”代谢在便秘发生发展中发挥重要作用，改良枳术方用于便秘疗效确切，其中以中、高剂量效果更佳，可能的作用机制为通过AQP3/AQP9、MUC2从而调控结肠的“津”“液”代谢。     

促精汤对小鼠生精细胞凋亡的影响

目的： 探讨促精汤对模型小鼠精液常规、性激素和精子凋亡的影响。 方法： 40只雄性小鼠用环磷酰胺60 mg·kg^-1 ip 5 d造少精、弱精症模型,并随机分为模型组、促精汤低、中、高剂量组,每组10只,另设空白对照组。造模后,空白组与模型组给予生理盐水（0.5 mL/只）灌胃;促精汤低、中、高剂量（10,5,2.5 g·kg^-1）灌胃,均持续30 d。采用CASA技术检测精子质量,采用酶联免疫法检测血清性激素,采用流式细胞仪检测精子凋亡率。 结果： 造模后模型组小鼠各级精子密度、活力和活率均明显减少 （P<0.05）;促精汤各剂量组明显提高小鼠精子密度、活力和活率 （P<0.05）,高剂量组已与空白组小鼠无显著性差异;造模后,血清黄体生成素（LH）、睾酮（T）、雌二醇（E₂） 显著升高,促卵泡生成激素（FSH）、催乳素（PRL）无明显变化,促精汤各剂量组能明显降低LH,T,E₂水平（P<0.05）,其中高剂量组已与空白组无显著差异。造模后,模型组小鼠精子凋亡显著升高（P<0.05）,促精汤各组均能降低小鼠生精细胞凋亡率,高剂量组最明显,已与空白组比较无明显差异。 结论： 促精汤可增加各级精子密度、增强精子活力和活率,可修复睾丸病理损伤,有降低睾丸生精细胞凋亡率的作用。     

陈元膏膏摩对膝骨性关节炎大鼠血清NO和PGE2及下肢功能的影响

目的:观察陈元膏膏摩对膝骨性关节炎大鼠血清中一氧化氮(NO)和前列腺素E₂(PGE₂)及下肢功能恢复的影响,探讨陈元膏膏摩对膝骨性关节炎是否具有抗炎作用。方法:将52只SD大鼠随机分为正常组、模型组、陈元膏膏摩组(2 g/只)、和手法对照组(凡士林,2 g/只),每组13只,除正常组外,其余各组采用石膏固定法建立膝骨性关节炎动物模型,8周后,正常组、模型组不作干预,对陈元膏膏摩组、手法对照组大鼠分别给予陈元膏结合手法和凡士林结合手法治疗,每日1次,持续8周后,HE染色对各组关节软骨病理改变进行Mankin评分,并检测各组血清中NO和PGE₂的浓度水平。结果:与正常组比较,模型 组软骨病理改变进行Mankin评分和血清NO,PGE₂的浓度水平明显升高(P<0.01),其大腿周长和膝关节活动度均有明显降低(P<0.01);陈元膏膏摩组、手法对照组Mankin评分和血清NO,PGE₂的浓度水平均低于模型组(P<0.01),其中陈元膏膏摩组的血清NO,PGE₂浓度水平较低(P<0.05),陈元膏膏摩组、手法对照组的大鼠在治疗后,其大腿周长和膝关节活动度均有明显提高(P<0.01),其中陈元膏膏摩组提高的幅度较大(P<0.05)。结论:陈元膏膏摩疗法可降低KOA大鼠血清中NO和PGE₂的浓度水平,更好地促进大鼠大腿肌力和膝关节活动度的改善,对减轻膝骨性关节炎症状具有一定的作用。     

颗粒剂四君子膏对脾气虚证模型大鼠心功能的影响＊

目的 探讨颗粒剂四君子膏对脾气虚证模型大鼠心功能的影响。方法 将60只SD大鼠随机分为正常组、模型组、四君子汤组、颗粒剂四君子膏高组、颗粒剂四君子膏中组及颗粒剂四君子膏低组。采用隔日饮食加力竭游泳及大黄水灌胃法制备脾气虚证大鼠模型。超声诊断仪测定大鼠的心功能变化，ELISA法测定大鼠血清与心肌组织中脑钠肽（BNP）、环磷酸腺苷（cAMP）的含量，Western blot法及免疫组化法测定心肌组织中BNP的蛋白表达情况。结果 脾气虚证模型大鼠心功能下降，血清及心肌组织中BNP、cAMP的含量增多，心肌组织中BNP蛋白表达增加（P < 0.05），给予四君子汤及不同浓度颗粒剂四君子膏后大鼠脾气虚症状及心功能情况得到改善，体内BNP及cAMP水平均有所下降，BNP蛋白表达下调（P < 0.05）。结论 颗粒剂四君子膏的功效较为理想，可以改善脾气虚证大鼠的心功能，颗粒剂膏亦可运用于临床。     

加味龟鹿二仙汤时辰用药调节乳腺癌化疗后骨髓造血功能的临床研究

目的:探讨加味龟鹿二仙汤及时辰用药方案在防治乳腺癌化疗后骨髓抑制方面的作用。方法:共纳入乳腺癌术后患者120例,随机分为3组,其中西药对照组36例(化疗后予利血生、鲨肝醇、V itB4服用);中药(加味龟鹿二仙汤)不拘时口服组43例;中药时辰用药组(加味龟鹿二仙汤组酉时服用)41例。结果:经统计学分析,中药不拘时口服组与时辰用药组在减轻乳腺癌化疗后血液学毒性方面(白细胞、血红蛋白、血小板减少方面)均优于西药对照组(P=0.000),而在白细胞数减少方面,中药时辰用药组尚优于中药不拘时服用组(P=0.035)。此外,中药组相比于西药对照组,可以明显减少集落细胞刺激因子粒生素的使用量(P<0.01)。结论:补肾中药加味龟鹿二仙汤能明显改善乳腺癌患者化疗后骨髓造血功能,尤以按时辰用药(酉时服用)效果为著。     

参芪复方对GK大鼠骨骼肌线粒体膜电位及相关促凋亡蛋白的影响研究＊

目的 探讨参芪复方对自发性糖尿病（Goto-Kakizaki，GK）大鼠骨骼肌线粒体膜电位及相关凋亡蛋白的影响。方法 采用高脂饲料喂养GK大鼠，建立糖尿病大鼠动物模型，造模成功后将GK大鼠随机分为模型组、罗格列酮组、参芪复方组，每组10只；10只Wistar大鼠作为空白对照组，普通饲料喂养。罗格列酮组灌胃给予0.67 mg/（kg·d）罗格列酮混悬液，参芪复方组灌胃给予14.33 g生药/（kg·d）参芪复方混悬液，空白对照组、模型组均每日灌胃给予同等体积生理盐水，连续给药8周。采用流式细胞检测线粒体膜电位；RT-qPCR和Western blot检测大鼠腓肠肌凋亡诱导因子（Aapoptosis inducing factor，AIF）、细胞色素C（Cytochrome c，Cyt c）、第二个线粒体衍生的半胱天冬蛋白酶激活因子（Second mitochondrial activator of caspase/direct IAP binding protein with low PI，Smac/DIABLO）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9（Cysteinyl aspartate specific proteinase-9，Caspase-9）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Cysteinyl aspartate specific proteinase-3，Caspase-3）的蛋白和mRNA表达情况。结果 与空白对照组比较，模型组GK大鼠腓肠肌线粒体膜电位降低（P < 0.05），AIF、Cyt c、Smac/DIABLO、Caspase-9、Caspase-3蛋白表达、mRNA表达增加（P < 0.05）；与模型组比较，罗格列酮组和参芪复方组线粒体膜电位均升高（P < 0.05），罗格列酮组AIF、Cyt c、Smac/DIABLO、Caspase-9、Caspase-3蛋白表达、mRNA表达均降低（P < 0.05），参芪复方组AIF、Cyt c、Caspase-9、Caspase-3蛋白表达、mRNA表达降低（P < 0.05），Smac/DIABLO 蛋白表达降低（P < 0.05），Smac/DIABLO mRNA表达具有下降趋势，但差异无统计学意义（P > 0.05）。结论 参芪复方可通过上调线粒体膜电位，抑制促凋亡蛋白AIF、Cyt c、Smac /DIABLO从线粒体内释放出来，进而抑制Caspase-9、Caspase-3表达，减少骨骼肌细胞凋亡，发挥骨骼肌保护作用。