抗纤复方对大鼠纤维化肝贮脂细胞自分泌转化生长因子β1的影响

本文采用血清药理学方法,以貂肺上皮细胞 (Mvllu)生长抑制MTT法,观察了抗纤复方对大鼠纤维化肝原代培养贮脂细胞自分泌产生TGFβ_1的影响,检测培养上清中TGFβ_1活性,并以小牛血清、正常鼠血清和秋水仙碱药物血清为对照。结果表明抗纤复方药物血清和秋水仙碱药物血清均能明显抑制贮脂细胞产生TGFβ_1,但抗纤复方的抑制作用更明显。提示抗纤复方能抑制贮脂细胞产生TGFβ_1,阻断肝纤维化时的贮脂细胞自分泌放大过程,从而减少胶原等ECM的合成。     

抗纤软肝冲剂药物血清对激活肝星状细胞表达Ⅰ型前胶原及TGF-β_1 mRNA的影响

目的 :探讨抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的作用机理。方法 :分离正常大鼠肝星状细胞 ,并传代培养。用抗纤软肝冲剂给正常大鼠灌胃 ,制备药物血清 ,温育培养细胞 72h ,提取细胞总RNA ,RT PCR法分析Ⅰ型前胶原、TGF β1mRNA的表达。结果 :抗纤软肝冲剂药物血清能显著抑制肝星状细胞的Ⅰ型前胶原及TGF β1mRNA的表达。结论 :抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的机理之一是调控肝星状细胞的Ⅰ型前胶原及TGF β1mRNA的表达     

加味四逆散对HSC-T6增殖影响的实验研究

目的:观察加味四逆散药物血清对瘦素刺激肝星状细胞增殖的影响,探讨其抗肝纤维化的机制。方法:实验动物灌胃加味四逆散煎剂7d,制备各药物含药血清,并将药物血清用培养基配制成5%、10%、20%、40%四个浓度;培养肝星状细胞,取对数生长期细胞,使用噻唑兰(MTT)比色法检测药物血清对100ng/ml的瘦素刺激HSC-T6增殖的影响。结果:结果显示加味四逆散和秋水仙碱药物血清均有抑制肝星状细胞增殖的作用(P<0.05),且在5%～40%的血清浓度范内,两组对抑制HSC-T6细胞增殖抑制作用呈剂量依赖性的关系,但在10%～40%的血清浓度范围内对HSC-T6细胞增殖抑制率加味四逆散组高于秋水仙碱组(P<0.05)。结论:加味四逆散药物血清具有抑制瘦素刺激HSC-T6增殖的作用。     

保肝宁对HSC-T6细胞增殖及Ⅰ型胶原表达的影响

目的 :探讨复方保肝宁对HSC -T6细胞增殖及Ⅰ型胶原表达的影响。方法 :复方保肝宁给正常大鼠灌胃 ,制备药物血清 ,温育培养HSC -T6细胞 4 8小时。MTT法测定星状细胞增殖 ,ELISA法测定培养上清的Ⅰ型胶原表达量。结果 :复方保肝宁药物血清能明显抑制HSC -T6细胞增殖 ,抑制细胞的Ⅰ型胶原分泌。实验表明 ,在抑制HSC -T6细胞增殖和Ⅰ型胶原蛋白分泌方面 ,高剂量组药物血清无低、中剂量组明显 ,是否为血清药物浓度对细胞的影响 ,尚需进一步研究。结论 :复方保肝宁能明显抑制HSC -T6细胞的活化 ,对HSC -T6细胞Ⅰ型胶原表达的抑制可能是该方抗肝纤维化的主要作用机制之一。     

抗纤软肝冲剂药物血清对肝星状细胞增殖的影响

目的从细胞学水平探讨抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的作用机制.方法采用酶消化法、密度梯度离心法,分离正常大鼠肝星状细胞(HSC),培养、鉴定及传代.制备抗纤软肝冲剂药物血清,温育传一代HSC,并设生理盐水组和秋水仙碱组为对照.3H-proline掺入法测定细胞活力;3H-TdR掺入法和MTT比色法测定细胞增殖.结果抗纤软肝冲剂组药物血清对细胞形态无影响,还能明显提高细胞的3H-proline掺入(P＜0.01),明显抑制细胞的3H-TdR掺入量和MTT转化(P＜0.01),且对MTT的抑制作用呈浓度依赖性递增趋势.结论抗纤软肝冲剂能提高细胞活力,无细胞毒性作用;能抑制HSC的增殖,这可能是该方抗肝纤维化的细胞学机制之.     

剔毒护肝方对肝星状细胞表达Ⅰ型胶原及TGFβ1mRNA的影响

目的：探讨剔毒护肝方抗肝纤维化的作用机理。方法：分离正常大鼠肝星状细胞，并传代培养，用剔毒护肝方给正常大鼠灌胃，制备药物血清，温育培养细胞72h，测定培养上清中Ⅰ型胶原含量及TGF-β1活性，提取细胞总RNA，RT-PCR法分析Ⅰ型胶原，TGF-β1mRNA的表达。结果：剔毒护肝方药物血清能显著降低肝星状细胞培养上清中的Ⅰ型胶原含量及TGFβ1活性，并能抑制Ⅰ型胶原及TGFβ1mRNA的表达。结论：剔毒护肝方抗肝纤维化的机理之一是抑制肝星状细胞自分泌TGFβ1，并通过TGFβ1生成的减少，下调细胞Ⅰ型胶原的基因转录。     

抗纤软肝颗粒对肝星状细胞增殖与凋亡的影响

目的:研究抗纤软肝颗粒(KXR)对肝星状细胞增殖、凋亡及凋亡相关蛋白的影响.方法:传代培养的大鼠肝星状细胞系HSC-T6与中药复方抗纤软肝颗粒(终浓度为5mg/ml、2.5mg/ml、1.25mg/ml)及药物血清(5%、10%、20%)共同培养48小时后,应用MTT法测定细胞增殖,TUNEL法及流式细胞仪测定细胞凋亡、免疫组化检测凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax.结果:抗纤软肝颗粒无论是药物还是含药血清,均能显著抑制HSC-T6增殖,并使细胞周期阻滞于S期,在安全浓度范围内,5mg/ml组和10%药物血清组作用最强(P＜0.01); 并可诱导HSC凋亡, 且凋亡抑制分子Bcl-2表达下调, 促凋亡分子Bax表达增强(P＜0.01).结论:抗纤软肝颗粒抗肝纤维化的作用机制可能在于抑制肝星状细胞增殖,并通过下调Bcl-2/Bax比率,促进HSC凋亡.     

肝舒胶囊含药血清体外抗肝纤维化的实验研究

目的研究肝舒胶囊含药血清对肝星状细胞(HSC-T6)自分泌的TGF-β1和Ⅰ型胶原的增生抑制作用,探讨肝舒胶囊体外抗肝纤维化的机制。方法含药血清作用于HSC-T6后,采用貂肺上皮细胞(Mv-1-Lu)生长抑制MTT法检测HSC-T6分泌的TGF-β1的活性及其总量,ELISA法检测PDGF诱导的HSC-T6的I型胶原含量。结果肝舒胶囊含药血清不仅可减少HSC TGF-β1的分泌总量,并抑制TGF-β1的活化,而且还可降低I型胶原的分泌。结论肝舒胶囊含药血清能抑制肝星状细胞TGF-β1产生并活化及降低I型胶原含量,可能是与其具有抗肝纤维化的作用有关。     

抗纤软肝冲剂对肝星状细胞胶原降解相关基因表达的影响

目的 从细胞分子水平研究抗纤软肝冲剂对肝星状细胞(HSC)胶原降解的影响。方法 抗纤软肝冲剂药物血清温育传一代HSC，以生理盐水和秋水仙碱为对照。ELISA法测定细胞上清I型胶原，并测定细胞层总蛋白以校正胶原含量；半定量RT—PCR法检测间质胶原酶(MMN)和金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1）的mRNA表达。结果 抗纤软肝冲剂组细胞上清中的I型胶原含量明显低于其他两组(P＜0．05或P＜0．01)；明显促进细胞MMN的mRNA表达(P＜0．05或P＜0.01)，显著抑制细胞TIMP-1的mRNA表达(P＜0．05或P＜0．01)。结论 抗纤软肝冲剂能促进MMN基因表达，抑制TIMP-1基因表达，从而促进胶原降解，这可能是该方抗肝纤维化的细胞分子学机制之一。     

人参皂苷Rd抑制肝星状细胞活化作用与机制研究

目的:观察人参皂苷Rd对氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)诱导肝星状细胞(HSCs)活化与分泌胶原作用的影响及其机制。方法:10μg/ml OX-LDL孵育诱导肝星状细胞活化建立体外肝纤维化模型,分别给予人参皂苷Rd(18.8mg/L或37.6mg/L)处理肝星状细胞48小时。MTT法检测肝星状细胞增殖,荧光定量PCR检测转化生长因子(TGF)-β1和CD36 m RNA表达;Western blot检测I型胶原及CD36、Smad2、Smad4表达。结果:与正常对照组相比,模型处理组的I型胶原蛋白表达与TGF-β1 m RNA表达均明显增加;与模型处理组相比,人参皂苷Rd(38.7mg/L)明显抑制肝星状细胞增殖,降低CD36、I型胶原和Smad4蛋白表达,同时,人参皂苷Rd对Smad2蛋白表达没有影响。结论:人参皂苷Rd可能通过降低CD36及Smad4蛋白表达减少细胞外胶原蛋白的合成,进而发挥抗纤维化作用。     

大黄(庶虫)虫丸对大鼠肝星状细胞活化及增殖的影响

目的观察大黄(庶虫)虫丸对大鼠肝星状细胞活化及增殖的影响。方法用链酶蛋白酶和胶原酶原位灌注消化正常大鼠肝脏,Nycodenz 密度梯度离心分离肝星状细胞(HSC),在制备大黄(庶虫)虫丸大鼠药物血清的基础上,温育 HSC。采用 MTT 比色法测定细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡及增殖周期情况。结果药物血清对体外培养的 HSC 有抑制作用,且存在浓度剂量依赖关系,但作用较弱,需在20%以上方见到差异有显著性(P<0.05),对 HSC 凋亡及细胞增殖周期则未见明显影响(p>0.05)。结论大黄座虫丸对 HSC 增殖有一定抑制作用,但可能不是其抗肝纤维化作用的主要途径,其抗肝纤维化作用与诱导细胞凋亡无关。     

保肝宁对肝星状细胞中核转录因子-κB活性影响的实验研究

目的 观察中药复方保肝宁对肝星状细胞（hepatic stellate cell,HSC）中核转录因子-κB（nuclear factor-κB,NF-κB）活性的影响及其相关机制。方法 给正常Wistar大鼠灌胃保肝宁煎剂7天,制备含药血清,用MTT法检测其对肝星状细胞HSC-T6生长的影响,用蛋白印迹实验（Western blotting analysis）检测药物作用不同时间NF-κB蛋白抑制因子IKB磷酸化水平,用凝胶阻滞实验（gel shift assay）检测药物作用30min后NF-κB与DNA的结合水平。结果 中药复方保肝宁对HSC-T6细胞生长有显著的抑制作用;可快速抑制IKB磷酸化,30min达到最高水平,6h恢复至基础水平;可改变NF-κB与DNA结合水平,使其与DNA结合能力下降。结论 中药复方保肝宁能抑制IKB磷酸化,降低NF-κB活性,并改变NF-κB与DNA的结合水平。     

陈皮、姜提取物对血瘀证大鼠血液流变学和血小板聚集率的影响

目的:观察陈皮、姜提取物对寒凝血瘀证大鼠血液流变学和血小板聚集率的作用,评价其对血栓形成的预防作用。方法:将60只大鼠随机均匀分为正常对照组、模型对照组、复方丹参滴丸对照药(81mg/kg)、陈皮、姜提取物高(0.36ml/kg)、中(0.18 ml/kg)、低(0.09 ml/kg)剂量组。各组灌胃给药7天,在第6、7两天给药后1h,除空白对照组外,其余各组采用皮下注射肾上腺素(0.8mg/kg)加冰水刺激法复制大鼠血瘀证模型。在第8天末次药后1h采血,测定血液流变学指标和血小板聚集率。结果:与空白组比较,模型组大鼠表现出全血粘度、血浆粘度、红细胞压积、电泳时间、血浆纤维蛋白原明显增加(P<0.01)、红细胞变形性下降(P<0.01)的血液流变学异常现象;血小板聚集率也明显上升(P<0.01);陈皮、姜提取物低剂量对全血高切粘度、红细胞变形性和血浆纤维蛋白原异常的改善作用不明显(P>0.05),其他给药组(0.36、0.18ml/kg)均具有不同程度的改善以上指标的作用,且与复方丹参滴丸没有明显差异(P>0.05)。结论:陈皮、姜提取物具有改善血瘀证大鼠血液流变学异常和抑制血小板聚集,具预防血栓形成的作用。     

补肾化瘀解毒方药对肺癌耐药细胞的耐药逆转及机制研究

目的 :探讨补肾化瘀解毒方对肺癌耐药细胞的耐药逆转和逆转机制。方法 :选择人肺腺癌 A5 4 9、A5 4 9/DDP细胞株 ,采用细胞毒试验 (MTT)和流式细胞仪法 (FCM) ,分别观察补肾化瘀解毒方荷瘤动物血清对A5 4 9/DDP细胞的细胞毒和耐药逆转作用 ,以及对 A 5 4 9/DDP细胞肺耐药蛋白 L RP- 5 6的表达、耐药细胞内游离Ca2 +浓度等指标的影响。结果 :补肾化瘀解毒方含药血清对肺癌 A5 4 9/DDP耐药细胞有细胞毒作用和增强A5 4 9/DD对顺铂 (DDP)的敏感性 ,并能显著抑制肺耐药蛋白 L RP的表达 (P<0 .0 1) ,降低细胞内 Ca2 +浓度(P<0 .0 0 1)。结论 :补肾化瘀解毒方药物血清对化疗药物具有增敏和化疗耐药逆转作用 ,其机制与抑制肺癌耐药细胞耐药基因表达 ,阻止肺癌耐药细胞内 ca2 +的内流或释放有密切的关系     

益骨胶囊含药血清对大鼠成骨细胞雌激素受体mRNA及其蛋白表达的影响

目的 从mRNA及蛋白水平研究益骨胶囊含药血清对成骨细胞雌激素受体(ER)表达的影响,从雌激素调控途径探讨益骨胶囊防治骨质疏松症的机理。方法 分离、培养新生大鼠成骨细胞,传代后分为3组,即含药血清组、空白血清对照组、DMEM对照组。采用RT-PCR法检测ERα和ERβ的mRNA相对表达量,采用放射性配基结合分析检测ER的亲和力(以平衡解离常数KD表示)和受体数量(以RT表示)。结果 益骨胶囊含药血清组和两对照组比较,ERβmRNA的相对表达量增加,差异有显著性(P<0．05);ERα mRNA表达差异无显著性(P>0．05);益骨胶囊含药血清组和两对照组比较KD值差异无显著性(P>0．05),但RT有提高,差异有显著性(P<0．01)。结论 益骨胶囊含药血清能上调成骨细胞ERβ mRNA表达,能增加雌激素受体数量。通过雌激素调控途径防治骨质疏松症可能是益骨胶囊的药理机制之一。     

活血补气方对胎鼠宫内发育迟缓的防治效果及其机制

目的:探讨活血补气方(丹参、川芎、当归、黄芩和黄芪)对胎鼠宫内发育迟缓(IUGR)的防治效果及其机制,为该方剂的临床应用提供实验依据.方法:被动吸烟法建立孕鼠IUGR妊娠模型.IUGR妊娠鼠被随机分为4组(每组10例),即中药高、中、低剂量干预组和未干预组,每天分别给予活血补气方汤药3、1、0.3 ml/100g和生理盐水1 ml/100 g.另选10只正常妊娠鼠作为正常对照组,每天给予生理盐水1 ml/100g.于妊娠第21天处死孕鼠并剖腹取胎,测定胎鼠体重、鼻-臀长,并计算胎仔重量系数.分别用硝酸还原酶法、放射免疫分析法(RIA)和酶免疫法(EIA)测定妊娠晚期孕鼠血NO、ET-1含量和尿8-epi-PGF2α含量.结果:与未干预组比较,各干预组的胎鼠体重、鼻-臀长及胎仔重量系数均明显增加,差异具有显著性意义(均为P＜0.01);干预组的孕鼠血NO水平升高,血ET-1水平降低,NO/ET-1比值升高,尿8-epi-PGF2α水平降低,差异具有显著性意义(均为P＜0.01).结论:IUGR妊娠时,孕鼠体内脂质过氧化作用增强,并存在着NO/ET-1失衡,可导致胎鼠IUGR的发生;活血补气方具有抗氧化的功能,能抑制IUGR妊娠的脂质过氧化作用和调节NO/ET-1平衡,对胎鼠IUGR具有较好的防治效果.     

正肝方药物血清诱导人肝癌细胞分化的体外实验研究

目的：探讨正肝方对Bel-7402人肝癌细胞分化的诱导作用,及对其端粒酶活性的影响。方法：正肝方水煎液灌喂正常大鼠,采血制备药物血清。以正常鼠血清为阴性对照,维甲酸(RA)为阳性对照,将药血清温育Bel-7402人肝癌细胞。噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖,图像分析系统测定细胞核质比,放射免疫法测定甲胎蛋白(AFP)含量,动态比色法测定γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)和碱性磷酸酶(ALP)活性,多聚酶链反应-酶联免疫吸附法(PCR—ELISA法)检测细胞端粒酶活性。结果：正肝方药物血清可抑制人肝癌细胞的增殖,显著降低细胞核质比,抑制细胞分泌AFP,降低细胞γ-GT活性,升高ALP活性,并有显著抑制人肝癌细胞端粒酶活性的作用。结论：正肝方具有诱导人肝癌细胞分化的作用,其主要机理可能是抑制了Bel-7402细胞端粒酶活性。     

糖通方对体外培养糖尿病大鼠髂动脉血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 用血清药理学与分子生物学相结合的方法，探讨糖通方对糖尿病大鼠模型血管平滑肌细胞增殖的抑制作用。     

香椿总黄酮降血糖作用的实验研究

目的:研究香椿总黄酮(TSTF)对糖尿病小鼠动物模型的降血糖作用.方法:将四氧嘧啶用NS配成0.02 g/ml,按200 mg/kg注射到小鼠腹腔;连续2 d用葡萄糖灌胃(2 g/kg),早晚各一次,以葡萄糖氧化酶法测空腹血糖,大于11.00 mmol/L为造模成功小鼠.将入选小鼠随机分为模型组、TSTF低、高剂量组(0.06、0.12 g/kg)、降糖灵组(0.10 g/kg),另取20只正常小鼠为对照组(蒸馏水),灌胃1次/d,连续15 d,第16 d用葡萄糖氧化酶法测空腹血糖.结果:TSTF组四氧嘧啶小鼠血糖显著降低.结论:TSTF对四氧嘧啶所敛糖尿病模型小鼠有降血糖作用.     

Caffeic acid phenethyl ester protects kidneys against carbon tetrachloride toxicity in rats

Caffeic acid phenethyl ester (CAPE), an active component of propolis produced by honeybees, exhibits antioxidant and anti-inflammatory properties. The aim of this study was to investigate possible protective effects of CAPE on carbon tetrachloride (CCl4)-induced renal damage in rats. A total of 24 animals were divided into three equal groups: the control rats received pure olive oil subcutaneously, rats in the second group were injected with CCl4 (0.5 ml/kg, s.c. in olive oil) and rats in the third group were injected with CCl4 (0.5 ml/kg) plus CAPE (10 micromol/kg, i.p.) every other day for one month. At the end of the experimental period, the animals were sacrificed and blood samples were collected. Serum urea and creatinine levels and renal malondialdehyde (MDA) contents were determined. Histopathological examination of the kidney was also performed using light microscopic methods. It was found that kidney MDA levels were increased significantly following CCl4 exposure and this increase was significantly inhibited by CAPE treatment, while no significant changes were observed in serum urea and creatinine levels. CCl4 administration alone also caused histopathologically prominent damage in the kidney compared to the control group. Glomerular and tubular degeneration, interstitial mononuclear cell infiltration and fibrosis, and vascular congestion in the peritubular blood vessels were observed in the renal cortex. With exception of rare vascular congestions, these histopathological changes were disappeared in rats treated with CCl4 plus CAPE. In view of the present findings, it is suggested that CAPE protects kidneys against CCl4 toxicity.