林蛙皮活性多肽对小鼠皮肤成纤维细胞增殖的影响

目的 研究林蛙皮活性多肽对小鼠皮肤成纤维细胞增殖作用.方法 用传代培养的小鼠皮肤进行成纤维细胞实验,分为空白对照组(正常成纤维细胞+DEME培养液)和增殖实验组(正常成纤维细胞+含林蛙活性肽组分的培养液),采用MTT法观察两组细胞12、24、36和48 h后的生存活性.结果 实验组细胞生存活性明显高于对照组(P＜0.05).结论 林蛙皮活性多肽对培养的小鼠皮肤成纤维细胞具有明显的增殖作用.     

益气活血中药对血管紧张素Ⅱ致培养乳鼠心脏间质成纤维细胞增殖的影响

目的通过研究益气活血药对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)致心脏成纤维细胞增殖的影响,寻找能抑制血管紧张素Ⅱ所致心脏成纤维细胞增殖的益气活血中药.方法通过在培养乳鼠心脏成纤维细胞增殖加入血管紧张素Ⅱ,观察细胞直径和细胞数;在此基础上,进行益气活血中药对血管紧张素Ⅱ致培养乳鼠心脏成纤维细胞增殖实验药理学的研究.结果 Losartan、丹参素和川芎嗪大、中、小剂量组可显著抑制AngⅡ增加心肌成纤维细胞数量的作用,对心肌成纤维细胞直径无明显影响,说明Losartan、丹参素和川芎嗪抑制心肌成纤维细胞的增殖,且呈一定的量效关系,而益气药党参和黄芪无此作用.结论活血药丹参素、川芎嗪可抑制AngⅡ引起的心脏成纤维细胞增殖并呈一定的量效关系;益气药党参、黄芪在本研究中未发现有此抑制作用.     

丝裂霉素C对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖与Smad2/3蛋白表达的影响

目的研究丝裂霉素C(MMC)对增生性瘢痕成纤维细胞增殖及Smad2/3蛋白的影响。方法用组织块法培养人瘢痕成纤维细胞,采用四唑盐比色(MTT)方法,观察不同浓度MMC对体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖活性的影响,采用Western印迹技术检测MMC作用下体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞中Smad2/3蛋白的表达。结果不同浓度的MMC对体外培养的病理性瘢痕成纤维细胞活性的抑制呈时间和剂量依赖性。12.5μg/ml MMC开始对瘢痕疙瘩成纤维细胞中Smad2/3蛋白的表达具有明显减弱效应(P<0.05)。结论 MMC一方面通过抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖,另一方面通过抑制Smad2/3蛋白的表达而发挥抑制瘢痕增生作用。     

miR21介导Ang(1-7)对肺成纤维细胞AngⅡ诱导的NLR3炎性体激活的抑制作用

目的探讨miR21对肺成纤维细胞增殖和凋亡的影响,及其可能的作用机制。 方法将miR21 NC、inhibitor和mimic转染至原代肺成纤维细胞,按照细胞处理方式分为空白对照组、miR21 NC组、inhibitor组和mimic组。利用CCK-8细胞增殖法检测miR21对肺成纤维细胞增殖的影响;流式细胞仪检测miR21对肺成纤维细胞凋亡的影响;通过RT-PCR法检测转染前后肺成纤维细胞miR21、Ang(1-7)基因水平的表达;应用免疫印迹Western blot检测转染前后miR21、NLRP3蛋白表达水平变化。 结果CCK8及流式细胞仪检测显示,miR21具有显著促进肺成纤维细胞增殖、抑制肺成纤维细胞凋亡的作用;RT-PCR分析显示,细胞转染成功后,miR21 mimic/inhibitor组分别抑制/促进了Ang(1-7)表达,促进/抑制了AngⅡ表达(P<0.05),即miR21具有抑制Ang(1-7),促进AngⅡ表达的效果。Western Blot分析表明,miR21 mimic/inhibitor具有上调/下调AngⅡ、NLRP3蛋白表达水平的作用,与NC对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。 结论miR21具有促进肺成纤维细胞增殖、抑制肺成纤维细胞凋亡的作用,其机制可能与miR21介导Ang(1-7)对肺成纤维细胞AngⅡ诱导的NLR3炎性体激活相关。     

重组大鼠IL-18对大鼠肺成纤维细胞的作用及机制研究

目的研究重组大鼠IL-18对大鼠肺成纤维细胞的作用及机制。方法体外分离培养新生大鼠肺成纤维细胞，RT-PCR法检测IL-18基因表达；MTr法检测IL-18对成纤维细胞增殖反应的影响；半定量RT-PCR法检测IL-18干预前后成纤维细胞中Ⅲ型胶原蛋白、TNF-α、MMp9、IL-13的表达。结果①正常细胞未检测到IL-18mRNA表达，IL-18能促进肺成纤维细胞增殖，与对照组比较有统计学差异（P〈0．05）；②IL-18干预早期显著增强成纤维细胞表达Ⅲ型胶原蛋白、TNF-αmRNA，与对照组比较有统计学差异（P〈0．01）；③IL-18不能诱导成纤维细胞表达MMp9和IL-13mRNA。结论IL-18能促进肺成纤维细胞增殖，其机制可能是通过促进成纤维细胞分泌TNF-α产生作用。     

氟对成纤维细胞增殖活性影响的剂量-效应关系

目的观察不同质量浓度氟在不同时间段对小鼠皮肤成纤维细胞株(L929)增殖活力的影响。方法采用四唑盐(MTT)比色法,观察氟对培养的小鼠皮肤成纤维细胞增殖活力的影响。结果0.001、0.002mg/L氟作用1h、0.001mg/L氟作用2h,可使成纤维细胞增殖活力较对照组明显增强。随着氟质量浓度的增加和氟作用时间的延长,成纤维细胞的增殖活力明显减弱。结论氟在一定剂量范围内对成纤维细胞的增殖活力有刺激作用,这种作用亦受作用时间的影响。     

LncRNA 1700020I14Rik调控心脏成纤维细胞活化增殖和纤维化的实验研究

目的长链非编码RNAs(LncRNA)是通过基因组转录的方式辨认RNA物种。但其功能仍然未知,本研究旨在探究LncRNA调控心脏成纤维细胞活化增殖和纤维化的作用机制。方法在LncRNA数据库中鉴定出小鼠心脏高表达的LncRNA 1700020I14Rik。采用实时定量PCR(qRT-PCR)技术,检测小鼠心脏发育过程中LncRNA的表达。在横断主动脉条带介导的小鼠心肌肥大中检测其表达,然后在分离的心肌成纤维细胞中过量表达LncRNA以确定其对心肌成纤维细胞增殖的影响。结果在哺乳动物中LncRNA的功能是保守的。其在小鼠心脏中选择性表达,并在成年期高度表达,这一功能在肥厚型心脏的成纤维细胞中受到抑制。在心脏成纤维细胞中,LncRNA抑制心肌成纤维细胞增殖和胞外基质蛋白的积累。结论 LncRNA 1700020I14Rik是一种心肌富集型LncRNA,在应激性心肌纤维化中表达下调功能。LncRNA 1700020I14Rik有抑制心肌成纤维细胞增殖和胶原合成及抑制心肌纤维化的作用。     

血管紧张素ⅡⅠ型受体反义寡核苷酸逆转心肌成纤维细胞增殖及胶原合成的实验研究

目的 :用血管紧张素 （Ang ） 型受体 （AT1 R）反义寡核苷酸 （AS- ODN）体外逆转心肌成纤维细胞增殖及胶原合成。方法 :将培养的乳鼠心肌成纤维细胞分为正常组、Ang 组、AT1 R- AS- ODN组 ,观察 Ang 及 AT1 R-AS- ODN对心肌成纤维细胞 c- jun基因表达、成纤维细胞增殖、3H- Proline掺入率的影响。结果 :Ang 可刺激心肌成纤维细胞增殖、c- jun基因表达增多、3H - Proline掺入率增加。 AT1 R- AS- ODN能逆转 Ang 的上述作用。结论 :AT1 R- AS- ODN能有效逆转 Ang 诱导的心肌成纤维细胞增殖及胶原合成。     

MiR-143促进心脏成纤维细胞增殖

目的寻找调控心脏成纤维细胞增殖的microRNA。方法微矩阵分析比较正常培养和经TGFβ诱导的人成年心脏成纤维细胞microRNA表达谱,发现受TGFβ调控的microRNA。RealtimePCR验证microRNA的表达改变。通过转染模拟物或antagomir,高表达或敲低miR-143表达,MTT实验观察对心脏成纤维细胞增殖的影响。结果 TGFβ诱导心脏成纤维细胞中多个microRNA表达失调。MiR-143表达被TGFβ特异性诱导上调,但不受AngII、CTGF和TNFα的影响。高表达miR-143能够促进心脏成纤维细胞增殖10%左右,而敲低miR-143则显著抑制心脏成纤维细胞增殖。结论 MiR-143在心脏成纤维细胞中受TGFβ信号通路调控,是心脏成纤维细胞增殖的调控因子。     

高盐对乳鼠心肌成纤维细胞增殖及细胞内pH和钙离子浓度的影响

目的探讨高盐对心肌成纤维细胞增殖及细胞内游离钙离子浓度和pH的影响。方法贴壁法培养SD大鼠乳鼠心肌成纤维细胞,免疫荧光染色法行心肌成纤维细胞波形蛋白鉴定。将心肌成纤维细胞分为对照组(Na~+浓度122.27 mmol/L)、高盐组(Na~+浓度161 mmol/L),处理48 h。用EdU荧光染色法检测细胞增殖状况;负载Fura2-AM和BCECF-AM荧光指示剂后用比率荧光系统分别检测细胞内pH及Ca~(2+)浓度。结果高盐组心肌成纤维细胞增殖明显高于对照组,且高盐组细胞内pH和Ca~(2+)浓度明显高于对照组。结论高盐可以诱导心肌成纤维细胞增殖并导致细胞内Ca~(2+)浓度以及pH值升高。     

抗纤维化短肽N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对大鼠心脏成纤维细胞胶原合成与降解的调节作用

目的探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸（AcSDKP）对血小板源性生长因子（PDGF）诱导的大鼠心脏成纤维细胞增殖、胶原合成和降解代谢的调节作用。方法分离培养新生大鼠心脏成纤维细胞。采用^3H-TdR和。H-脯氨酸掺入法分别检测心脏成纤维细胞增殖与胶原蛋白合成。Western blot法检测心脏成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达和基质金属蛋白酶（MMP）-1蛋白的表达。明胶酶谱法检测心脏成纤维细胞MMP-2和MMP-9活性的表达。结果PDGF促进心脏成纤维细胞增殖、胶原合成,Ⅰ、Ⅲ型胶原表达,以及MMP-2、MMP-9活性和MMP-1表达。AcSDKP对PDGF介导的心脏成纤维细胞增殖、胶原合成均有抑制作用。AcSDKP上调由PDGF介导的心脏成纤维细胞MMP-2、MMP-9活性和MMP-1的表达。结论AcSDKP抑制PDGF介导的心脏成纤维细胞增殖和胶原的合成,上调MMPs活性或表达,促进胶原的降解,这些可能与AcSDKP抗心脏纤维化作用相关。     

Id3基因在心肌营养素1促心肌成纤维细胞增殖中的作用

目的 探讨在高静水压条件下分化抑制因子3(inhibitory of differentiation 3,Id3 )基因在心肌营养素-1 (cardiotrophin-1,CT-1 ) 促心肌成纤维细胞增殖中的作用.方法 3～4代心肌成纤维细胞用于实验,分为对照组( C 组)、CT-1反义寡核苷酸组 (ASODN组) 、正义寡核苷酸组 ( SODN组)、高静水压组( P 组).利用自制压力培养装置,将各组细胞置于160 mmHg压力下培养8 h.CT-1活性通过 Western印迹法分析测定,Id3基因表达通过RT-PCR方法测定,MTT测定心肌成纤维细胞增殖 .结果 高静水压明显促进心肌成纤维细胞增殖 ,CT-1表达上调,Id3 mRNA表达增加;CT-1 ASODN干预后能抑制高静水压所致的细胞增殖,CT-1表达下调,Id3 mRNA表达减少.结论 Id3 mRNA在心肌成纤维细胞中有明显表达,且与CT-1促心肌成纤维细胞增殖密切相关.     

醛固酮促进心肌成纤维细胞增殖的实验研究

目的：研究醛固酮对培养心肌成纤维细胞增殖的影响。方法：培养新西兰白兔心肌成纤维细胞,将第三代心肌成纤维细胞分为醛固酮组（不同浓度）、醛固酮＋螺内酯组和对照组,心肌成纤维细胞的代谢活性与DNA合成分别用WST-1试剂和5′溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）酶联免疫吸附试验（ELISA）进行测定。结果：与对照组比较,不同浓度醛固酮作用后,心肌成纤维细胞的WST-1与BrdU的OD值均增加,并呈浓度依赖性（P〈0．05～〈0．01）;丽螺内酯＋醛固酮组的WST-1与BrdU的OD值明显低于醛固酮组（P〈0．01）。结论：在体外,醛固酮能诱导心肌成纤维细胞增殖,而螺内酯抑制其作用。     

紫杉醇对人胚肺成纤维细胞增殖的影响

目的 观察紫杉醇对人胚肺成纤维细胞增殖的影响,探讨其抑制气道支架植入后肉芽组织增生的作用机制.方法 采用噻唑蓝法测定4.5、13.5及45 μg/ml的紫杉醇作用24、48及72 h后对人胚肺成纤维细胞增殖的抑制率.结果 紫杉醇4.5、13.5及45 μg/ml作用24 h对人胚肺成纤维细胞增殖抑制率分别为43.7%、58.8%及68.1%;作用48 h的抑制率分别为75.5%、77.7%及91.9%;作用72 h的抑制率分别为95.1%、97.1%及97.0%.结论 紫杉醇对人呼吸系统来源的成纤维细胞,即人胚肺成纤维细胞有明显的抑制作用,在一定程度上呈现剂量.时间依赖性,其在抑制气道支架植入后肉芽组织增生方面可能具有潜在价值.     

氟对三维培养中成纤维细胞增殖活性的影响

目的探讨不同浓度氟在不同时间段对三维培养体系中成纤维细胞增殖活性的影响。方法应用鼠尾胶原制备三维培养支架,种植小鼠皮肤成纤维细胞株(L929)。将细胞分为对照组和6个染氟组(0.001、0.002、0.1、1、10和20mg/LF-),采用四唑盐(MTT)比色法,检测氟化物作用1、2、4、24、48、72和96h对成纤维细胞细胞增殖特性的作用。结果成纤维细胞在加氟初期仅个别组(1h和2h的0.002mg/L组和2h的0.1mg/L)细胞增殖活性有增加,其他组下降或明显下降;加氟24、48和72h时间段各加氟组成纤维细胞细胞增殖活力多高于未加氟组,未达统计学差异显著程度。结论氟对三维培养中的成纤维细胞的增殖活力有刺激作用,但作用发生较慢,程度相对较弱。     

L苯丙氨酸抑制自发性高血压大鼠心肌成纤维细胞增殖

目的旨在观察Ｌ－苯丙氨酸对自发性高血压大鼠心肌成纤维细胞的增殖作用的影响。方法取１天龄自发性高血压大鼠心脏组织培养心肌成纤维细胞,分别以不同浓度的Ｌ－苯丙氨酸、酪氨酸和组氨酸干预一定时间后,利用３Ｈ－胸腺嘧啶掺入技术和细胞计数测定各不同浓度的氨基酸对心肌成纤维细胞ＤＮＡ合成和细胞增殖数目的影响。结果随着Ｌ－苯丙氨酸浓度的增加,心肌成纤维细胞的ＤＮＡ合成量减少,细胞增殖数目减低。而Ｌ－酪氨酸和组氨酸随着浓度的增加对心肌成纤维细胞ＤＮＡ的合成量和细胞增殖数目无影响。结论Ｌ－苯丙氨酸可以特异性地抑制ＳＨＲ心肌成纤维细胞的增殖。     

丹参及干扰素对成纤维细胞分泌和形态学的影响

本文探讨了丹参注射液和重组干扰素α－２ｂ（ＩＦＮ）对体外培养成纤维细胞分泌和增殖的形态学作用。结果表明，ＩＦＮ均可促进成纤维细胞的增殖和核分裂增多，发挥丝裂原作用；丹参则抑制细胞增殖和核分裂，使细胞产生羟脯氨酸水平降低。提示丹参通过抑制成纤维细胞增殖和分泌功能，发挥抗纤维化作用。     

卡维地洛抑制心肌成纤维细胞增殖的作用

目的探讨卡维地洛对心肌成纤维细胞增殖及p-蛋白激酶(PK)Cα表达的影响。方法建立大鼠心肌成纤维细胞体外培养增殖模型,分为模型组、给药组。通过改变给药剂量,观察不同组别心肌成纤维细胞增殖情况。应用免疫组织化学法检测p-PKCα的表达情况。结果与模型组比较,给药组成纤维细胞增殖明显降低(P0.01)。与模型组比较,给药组免疫组织化学p-PKCα光密度值明显降低(P0.01)。结论卡维地洛抑制心肌成纤维细胞的增殖,可能机制是通过抑制p-PKCα的表达来实现。     

青黛对结肠黏膜成纤维细胞的影响及作用机制

目的探讨青黛对结肠黏膜成纤维细胞的影响及其作用机制。方法提取青黛,并命名为水提物、醇提物和总提物,试验方法有羟脯氨酸测定、明胶酶谱分析、qRT-PCR、ELISA和Western blotting等。结果水提物可促进小鼠结肠黏膜成纤维细胞增殖和胶原积累,提高MMPs活性和TIMP-1/-2生成,上调TGFβ1和CTGF水平,并激活PI3K/Akt、PKC及ERK/JNK/p38 MAPK信号通路。醇提物能抑制成纤维细胞增殖,减少TGFβ1、CTGF、IL-6、IL-1和TNF-α转录和释放,降低p-Akt和p-p38水平。总提物能促进成纤维细胞增殖和胶原积累,提高MMPs活性和TIMP-1/-2生成,上调TGFβ1和CTGF水平,激活PKC、ERK MAPK通路。结论青黛水提物和醇提物对成纤维细胞增殖和胶原积累的作用相反,其总提物促进溃疡治愈可能依赖于PKC及ERK MAPK信号通路。     

肉桂醛对高糖心肌成纤维细胞增殖及胶原蛋白的影响和机制

目的研究肉桂醛对高糖诱导心肌成纤维细胞增殖,Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白分泌的影响及细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)信号通路的作用。方法体外培养新生大鼠心肌成纤维细胞,MTT检测肉桂醛对高糖环境下细胞增殖的影响;ELISA检测Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达;RT-PCR检测Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白mRNA的表达;Western blot检测ERK1/2、p-ERK1/2的蛋白表达。结果与对照组比较,高糖组成纤维细胞增殖及Ⅰ、Ⅲ胶原蛋白表达增加(P0.05)。与高糖组比较,肉桂醛组心肌成纤维细胞磷酸化ERK1/2蛋白表达降低[(3.14±0.12)vs(2.01±0.08),P0.05)]。结论肉桂醛能抑制高糖诱导的心肌成纤维细胞增殖及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达的增加,其作用可能与下调ERK1/2活性有关。