缺血预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤神经细胞的保护作用

目的探讨大鼠局灶性脑缺血预处理对脑缺血再灌注损伤后神经元的保护作用。方法健康雄性SD大鼠60只,随机分为3组:假手术组、大脑中动脉缺血再灌注(MCAO)组、预处理(BIP)组,每组按照再灌注后12 h、1、2、3 d四个时间点平均分为4个亚组,制备缺血预处理模型,分别用流式细胞术和ELISA法观察脑缺血预处理对缺血再灌注大鼠缺血半暗带神经细胞凋亡率及血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)含量的影响。结果大鼠脑缺血再灌注后12 h,MCAO组细胞凋亡发生率及血清中NSE的含量较假手术组显著增加(P<0.01),1 d时达到高峰,以后时间点逐渐下降,但仍高于假手术组(P<0.01);BIP组各个时间点神经元凋亡发生率及血清NSE较MCAO组显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论大鼠局灶性脑缺血预处理对脑缺血再灌注神经元损伤有保护作用。     

大鼠左右大脑中动脉缺血再灌注模型比较

目的探讨大鼠左右大脑中动脉缺血再灌注模型的差异。方法选择右利雄性Wistar大鼠48只,按照随机数字表分为左侧大脑中动脉缺血再灌注组(左侧优势组)、右侧大脑中动脉缺血再灌注组(右侧非优势组),每组24只,每组使用各自侧别的假手术对照。血管内线栓法阻塞大脑中动脉2h,然后再灌注。测试神经功能,取脑分别进行常规TTC染色和HE染色,测量脑梗死体积,光镜下观察脑组织病理变化。结果左侧优势组再灌注24、48和72h神经功能缺损评分明显低于右侧非优势组(P<0.05)。左侧优势组缺血程度较右侧非优势组重。左侧优势组神经元数量严重缺失,海马细胞排列紊乱,脑梗死体积明显大于右侧非优势组[(102.1±8.8)mm3 vs(97.0±11.2)mm3,P<0.05]。结论大鼠优势半球大脑中动脉阻塞后,神经功能缺损程度较非优势侧严重,脑梗死体积更大。大鼠优势半球局灶性脑缺血模型重复性好,而且可靠。     

阿司匹林联合脑缺血预处理对大鼠脑缺血再灌注后炎性反应的影响

目的 探讨阿司匹林(ASA)联合脑缺血预处理治疗对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制.方法 SD大鼠随机分为假手术组、脑缺血再灌注组、脑缺血预处理组和ASA治疗组.各组采用Zea-Longa等的大脑中动脉线栓法并加以改进,制备缺血预处理及缺血再灌注损伤实验动物模型.在相应时间点比较各组神经功能缺失评分、脑梗死体积、血清神经元烯醇化酶(NSE)含量及脑组织白细胞介素(IL)-1β和肿瘤坏死因子(TNF)-α含量.结果 ASA联合脑缺血预处理可使神经功能缺损减轻、脑梗死体积缩小、血清NSE含量降低,均较缺血预处理组更为明显.脑组织IL-1β和TNF-α含量降低亦更为明显.结论 ASA可增强缺血预处理诱导的脑缺血耐受作用,下调脑组织再灌注损伤时IL-1β和TNF-α的表达,二者具有叠加作用.     

骨髓间充质干细胞对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护机制

目的 :研究骨髓间充质干细胞 (MSC)对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护机制。方法 :192只SD大鼠随机分为假手术组、手术组、对照组和MSC治疗组。MSC移植前应用BrdU标记 ,再灌注 1d后经同侧颈内动脉注射MSC(1× 10 6) ,对照组则注射PBS。采用线栓法建立脑缺血再灌注模型。术后每天应用爬杆法评定大鼠神经功能缺损。缺血 2h再灌注 2、4、6和 8d取脑组织 ,用免疫组织化学方法检测脑组织中bFGF的表达 ,RT PCR技术观察bFGFmRNA的表达。结果 :MSC治疗组大鼠的神经功能缺损评分明显低于手术组和对照组 (P <0 0 5 )。MSC治疗组缺血侧缺血周边区脑组织中观察到BrdU与bFGF免疫组化双染阳性细胞 ,脑组织中bFGFmRNA的表达也高于其他 3组 (P <0 0 1)。结论 :经颈外动脉给予的MSC可促进脑缺血再灌注大鼠的运动功能恢复 ;bFGF表达升高 ,可能是MSC脑保护作用机制之一。     

阿司匹林预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的神经保护作用

目的探讨阿司匹林预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用机制。方法SD大鼠随机分为假手术组、脑缺血再灌注组、阿司匹林预处理组。各组采用大脑中动脉线栓法制备缺血再灌注损伤实验动物模型。比较各组神经功能缺失评分、脑梗死体积、血清神经元烯醇化酶(NSE)含量及脑组织白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子(TNF-α)含量。结果阿司匹林预处理组可使神经功能缺损减轻、脑梗死体积缩小、血清NSE含量降低,均较脑缺血再灌注组明显。同时脑组织IL-1β和TNF-α含量亦较脑缺血再灌注组降低。结论阿司匹林预处理可诱导脑缺血耐受作用,其机制可能与下调脑组织再灌注损伤时IL-1β和TNF-α的表达有关。     

人脐带血间充质干细胞改善大鼠脑梗死免疫炎性反应的研究

目的研究人脐带血间充质干细胞(MSC)移植对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤炎性因子表达和调节性T细胞(Treg)数量及神经功能缺损的影响。方法选择健康雄性SD大鼠40只,随机分为假手术组、缺血再灌注组、MSC组、生理盐水组,每组10只。于缺血前、缺血后30min、缺血再灌注2、3、6h测定血清白细胞介素(IL)-6、干扰素γ(IFNγ)、IL-10、转化生长因子β(TGF-β)水平变化,于1、3、7、14d对大鼠神经功能进行评分,并检测外周血中Treg表达。结果 MSC组缺血后IL-6、IFNγ水平升高,分别在缺血再灌注2h、缺血后30min达高峰,显著小于缺血再灌注组和生理盐水组;缺血后缺血再灌注组和生理盐水组IL-10、TGF-β水平降低,MSC组升高。MSC组缺血再灌注3、7、14d神经功能缺损评分明显低于缺血再灌注组和生理盐水组(P0.05)。结论人脐带血MSC移植可促进缺血再灌注大鼠神经功能恢复,诱导CD4CD25Treg细胞增殖,促炎性因子IL-6、IFNγ水平下降,抗炎性因子IL-10、TGF-β水平升高,从而减轻缺血性脑损伤。     

肌苷对脑缺血再灌流损伤神经功能恢复和NSE表达的影响

目的　观察大鼠脑缺血再灌流损伤脑组织神经元特异性烯醇化酶 (NSE)的变化规律及其意义 ;探讨肌苷对缺血性脑损伤的保护机制。方法　用成年 SD大鼠建立大脑中动脉缺血 (MCAO)再灌流模型 ,腹腔注射肌苷注射液 ,应用神经功能等级评分观察脑缺血再灌流后行为功能的恢复 ,免疫组化法检测脑缺血再灌流各时间点脑组织中 NSE的动态变化。结果　对照组脑缺血再灌流后 3d、7d、1 4 d功能恢复、等级评分减低 ;缺血侧 NSE的免疫阳性反应于脑缺血再灌流后 1 2 h明显增强并达高峰 ,随时间推移逐渐下降 ,至 1 4 d降至假手术组水平。治疗后神经功能评分在 7～1 4 d明显低于对照组 ,同时脑组织中 NSE蛋白表达水平较对照组显著升高。两组中皮层区 NSE的免疫阳性反应均高于纹状体区。结论　肌苷对缺血性脑损伤的功能恢复有一定的促进作用 ,其机制可能与增加脑组织中 NSE的表达有关     

骨髓间充质干细胞在脑缺血再灌注大鼠脑内存活并分化为神经元样细胞的实验研究

目的观察骨髓间充质干细胞(MSCs)经静脉移植在大脑中动脉缺血再灌注(MCAO)大鼠脑内存活并分化为神经元样细胞。方法常规方法分离、培养大鼠MSCs,根据Aspey方法制成MCAO模型,经尾静脉注射3×106溴脱氧尿嘧啶(BrdU)标记的大鼠MSCs,28d后处死大鼠,取脑组织行免疫荧光检测。结果共聚焦显微镜下观察到MSCs移植后脑梗死灶边缘聚大量BrdU阳性细胞,少量神经元特异性烯醇化酶(NSE)和BrdU双染细胞。结论经静脉移植的MSCs可移行至MCAO脑梗死灶周围并分化为神经元样细胞。     

黄芩茎叶总黄酮对缺血再灌注大脑皮质神经元和突触超微结构的保护作用

目的探讨黄芩茎叶总黄酮(SSTF)对大鼠缺血再灌注大脑皮质神经元突触超微结构的保护作用。方法雄性SD大鼠20只,随机分为假手术组、模型组、SSTF组[SSTF 100mg/(kg·d)]和尼莫地平组[尼莫地平1mg/(kg·d)],每组5只。造模前1周给药,后3组建立大脑中动脉局灶性脑缺血再灌注模型,Longa法行神经功能缺损评分,电镜观察大脑皮质缺血区神经元和突触的超微结构变化。结果模型组大鼠神经功能缺损评分(2.81±0.96)分,神经元和突触超微结构破坏;与模型组比较,SSTF组神经功能缺损评分降低,为(1.48±0.98)分,P<0.05,神经元和突触超微结构较明显好转,大部分突触超微结构趋于正常,尼莫地平组变化与SSTF组接近(P>0.05)。结论 SSTF可通过减轻大脑皮质神经元和突触超微结构损伤,保护缺血再灌注脑神经功能。     

大鼠大脑中动脉缺血再灌注后nNOS的表达

一氧化氮合酶 (ＮＯＳ)是催化合成一氧化氮 (ＮＯ)的重要酶 ,有 3种不同的亚型 ,分别为神经元型 (ｎＮＯＳ)、内皮型及诱导型。我们用免疫组织化学的方法测定大鼠大脑中动脉缺血 再灌注后ｎＮＯＳ的表达 ,探讨ｎＮＯＳ在脑缺血 再灌注时的作用。1　材料与方法Ｗｉｓｔａｒ大鼠 2 4只 ,随机分为 6组 :Ｓｈａｍ组 ,大鼠大脑中动脉缺血 再灌注后 3ｈ、6ｈ、12ｈ、2 4ｈ、48ｈ组 ,每组 4只。参照Ｚｅａ Ｌｏｎｇａ的方法制备大鼠大脑中动脉缺血 再灌注模型。动物麻醉后 ,快速取出脑组织 ,梯度脱水及固定 ,在低温切片机下 ,切 30 μｍ及 10 μ…     

人参皂甙Rg1对大鼠局灶性脑缺血后侧脑室下区神经干细胞增殖分化的影响

目的观察人参皂甙Rg1对大鼠局灶性脑缺血后侧脑室下区神经干细胞增殖分化的影响,探讨其促进神经发生的作用。方法将60只Wistar大鼠随机分为假手术组、单纯缺血组及人参皂甙Rg1治疗组。用Longa线栓法制作成年大鼠大脑中动脉闭塞模型。腹腔注射5-溴脱氧尿苷(BrdU)标记处于增殖状态的神经干细胞,用免疫单标及双标免疫荧光技术观察人参皂甙Rg1对局灶性脑缺血后侧脑室下区BrdU免疫活性及BrdU/神经元特异性烯醇化酶和BrdU/胶质纤维酸性蛋白双标免疫活性的影响,并计数作定量分析。结果脑缺血后侧脑室下区存在BrdU阳性细胞分布;应用人参皂甙Rg1后,上述部位及周边脑区BrdU阳性细胞数及双标阳性细胞明显增多(P<0.01)。结论人参皂甙Rg1能诱导侧脑室下区神经干细胞增殖、分化,提示其具有促进神经发生的能力。     

骨髓基质细胞移植对局灶性脑缺血大鼠内源性神经前体细胞增殖的动态影响

目的探讨骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)移植对局灶性脑缺血大鼠内源性神经前体细胞增殖的动态影响。方法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型。24只健康SD大鼠分为假手术组、缺血对照组、缺血移植组。大鼠局灶性脑缺血再灌流24 h后各组腹腔注射5-溴脱氧尿核苷(bromodeoxyuridine,BrdU)标记处于增殖状态的神经前体细胞,最后一次注射后2 h处死。通过神经缺损评分观察移植后神经功能改善情况。应用免疫组织化学染色及原位细胞凋亡检测脑组织BrdU阳性及凋亡细胞。结果脑梗死后侧脑室室管膜下区、海马齿状回区及梗死灶边缘BrdU阳性细胞迅速增多(P<0.05)。移植BMSCs后BrdU阳性细胞明显多于对照组(P<0.05),随移植时间的延长,增加更趋明显。同时,BMSCs移植后大鼠神经功能得到明显康复,缺血边缘区凋亡细胞明显减少伴梗死体积缩小。结论BMSCs可促进局灶性脑缺血大鼠内源性神经前体细胞的增殖、迁移,对脑缺血再灌注损伤起保护作用。     

Inhibition of matrix metalloproteinase-9 activity by trandolapril after middle cerebral artery occlusion in rats.

We investigated whether an angiotensin-converting enzyme (ACE) inhibitor could inhibit matrix metalloproteinase (MMP) activities in cerebral infarct lesions after middle cerebral artery occlusion (MCAO) in rats. After placebo or trandolapril (5 mg/kg per day) was administered orally for 7 days, we permanently occluded the right middle cerebral artery. ACE activity in extracts from the infarct side of placebo-treated rats was significantly higher than that in extracts from the non-infarct side from 5 days after MCAO, though they did not differ at 1 day. ACE activities in extracts from both hemispheric segments in the trandolapril-treated group were significantly decreased compared with those in the placebo-treated group before MCAO, and this significant reduction persisted even at 7 days after MCAO. In the placebo-treated group, MMP-9 and MMP-2 activities in the infarct side were significantly increased at 12 h and at 1 day after MCAO, respectively. Trandolapril treatment significantly reduced MMP-9 and MMP-2 activities to 68.5% and 53.2%, respectively. Seven days after MCAO, the ratios of infarct areas to the hemispheric sectional areas in placebo- and trandolapril-treated rats were 55.4+/-2.1% and 30.9+/-2.9%, respectively, and this difference was significant. Neurological severity scores were significantly improved from 1 to 7 days after MCAO in trandolapril-treated rats. Cumulative survival in trandolapril-treated rats was significantly increased compared with that in placebo-treated rats. Thus, the inhibition of MMP-9 by trandolapril might be part of the mechanism that prevents cerebral damage after cerebral ischemia.     

Post-Occlusion Treatment with BDNF Reduces Infarct Size in a Model of Permanent Occlusion of the Middle Cerebral Artery in Rat

In view of the protective effect of brain derived neurotrophic factor (BDNF) against metabolic/excitotoxic insultsin vitro, we investigated whether BDNF could limit infarct size after permanent occlusion of the middle cerebral artery in rat (MCAO). BDNF was delivered into the territory of the middle cerebral artery via an osmotic mini-pump (1 μg/h). Infusion of BDNF was started shortly after MCAO, and 24 h later brains were removed for infarct volume determination. Intraoperative and postoperative measurements of physiological variables revealed no differences among vehicle-treated and BDNF-infused animals. However, we found a 33% reduction in total infarct volume in BDNF-treated animals (p<0.05), and a 37% reduction in cortical infarct volume (p<0.05).     

浅谈小鼠MCAO模型制作的心得体会

采用线栓法阻断大脑中动脉制作的短暂性大脑中动脉阻塞（MCAO）模型是目前国内外研究局灶性脑缺血最常用的动物模型，其特点为可重复、方便操作，而且成功的模型具有与人类脑血管病相似的临床症状，故得到众多科研人员与临床工作者的亲睐，从而得到广泛利用。但其模型制作并不容易，对操作者的技术要求较高，且术后动物不易存活，死亡率高。本课题组拟从多个角度出发，结合多年来模型制作经验，对MCAO模型制作过程中多个细节进行探讨，以为广大科研人员提供参考。     

骨髓间充质干细胞移植治疗脑缺血大鼠时间窗的研究

目的探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)移植治疗脑缺血模型大鼠的时间窗及最佳移植时间点。方法雄性SD大鼠56只,随机分为移植组32只和对照组24只,在建立大鼠大脑中动脉缺血2 h再灌注模型后分为1、7、14、21 d 4个时间点。对大鼠进行改良神经功能缺损评分、HE染色、Bielshowsky Iuxol Fast Blue染色、直接免疫荧光染色和免疫组织化学染色。结果移植组1、7 d在移植14 d后,14、21 d在移植21 d后改良神经功能缺损评分明显低于对照组(P<0.05)。移植组1、7 d胶质纤维酸性蛋白阳性细胞数、突触素累计吸光度值、胼胝体面积明显高于对照组(P<0.05)。移植组1、7、14、21 d Ki-67阳性细胞数明显高于对照组(P<0.05)。移植组7 d神经元特异性烯醇酶累计吸光度值明显高于对照组(P<0.05)。移植组1、7 d Nogo A阳性细胞数明显低于对照组(P<0.05)。结论 MSCs移植治疗大鼠脑缺血模型的时间窗可延长至制模后的21 d,最佳移植时间点为制模后7 d。MSCs移植治疗脑梗死的作用机制可能与其促进内源性修复相关。     

嗅成鞘细胞的移植和迁移对脑梗死大鼠神经功能恢复的作用

目的探讨对脑梗死大鼠移植嗅成鞘细胞（OEC）促进神经功能恢复的作用及OEC迁移规律。方法从2．5个月龄SD大鼠嗅球取材，利用差异贴壁方法纯化OEC。移植前，用Hoechst 33342标记OEC。按双肾双夹方法制备易卒中型肾血管性高血压大鼠模型，模型制备成功后10周，电凝大脑中动脉制作大脑中动脉梗死（MCAO）模型。MCAO大鼠63只，按随机数字法随机分为梗死侧移植组、健侧移植组及双侧移植组，每组21只大鼠。于移植术前，移植术后第2和6周行大鼠神经运动功能、感觉功能检查；免疫组化法观察脑组织神经生长相关蛋白43（GAP-43）及神经丝蛋白（NF）的表达情况。移植后6周取移植部位脑组织行冷冻切片，荧光显微镜下观察OEC迁移情况。结果①梗死侧移植组、健侧移植组及双侧移植组移植前运动评分中位数评分均为2，移植后第2周分别为5、4、7，第6周分别为6，7、9；移植前感觉功能评价中位数3组均为6．67％，移植后第2周3组分别为20．00％、13．33％和33．33％，移植后第6周分别为26．67％、33．33％和46．67％。以上指标各时间点梗死侧移植组、健侧移植组比较差异无统计学意义；双侧移植组与其他两组比较差异均有统计学意义（P〈0．05，P〈0．01）。②免疫组化染色显示，各时间点梗死侧移植组、健侧移植组梗死灶边缘区GAP-43、NF阳性表达差异无统计学意义；双侧移植组与其他两组比较表达均增强，差异均有统计学意义（P〈0．05，P〈0．01）。③移植OEC后6周3组均观察到OEC向梗死灶及对侧的皮质迁移。结论脑梗死大鼠OEC健侧移植能够起到与患侧移植同样的促进神经功能恢复的作用，这种作用与OEC促进神经纤维再生及较强的自我迁移能力有关。