生物芯片在胃癌研究中的应用进展

胃癌是常见的恶性肿瘤,在我国和日本的发病率极高。近年来胃癌的发病率虽稍有下降,但目前仍是严重威胁人民生命健康的主要恶性肿瘤之一。胃癌是多基因参与的一种渐进积累转化性疾病,胃癌的发生、发展以及组织学分型均与其相关的癌基因、抑癌基因和一些生长因子及其遗传不稳定现象有关。从分子水平探讨胃癌的发病机理,研究相关基因作用路径和寻找理想的胃癌分子靶标对胃癌的早期诊断、治疗和预后以及探索胃癌的基因治疗和进一步提高对胃癌的防治水平具有重要意义。生物芯片技术可以高通量、快速、准确地对恶性肿瘤进行分子水平研究,在胃癌研究中得到了广泛应用,现对相关文献简要综述。基因芯片在胃癌研究中的应用一、基因芯片在胃癌病因学研究中的应用胃癌的发生是多因素综合作用下的结果,目前认为生物因素、环境因素和遗传因素在胃癌发生和发展中发挥重要作用。只有从分子水平认识这些因素在胃癌癌变过程中所发挥的作用,才能透彻认识胃癌的癌变机制。生物因素中幽门螺杆菌(H.pylori)感染是胃癌发生最主要的高危因素,其致癌机制可能涉及H.pylori和宿主两方面的影响。在对H.pylori基因型的研究中,Israel等[1]分别观察从十二指肠溃疡和胃溃疡患者胃内分离出两...     

Livin、caspase-9及p53与胃癌关系的研究进展

胃癌占我国恶性肿瘤死亡率的第一位.胃癌的发生、发展是一个多因素、多基因相互作用的复杂过程,如Ras基因家族、Myc基因家族、ERBB基因家族、53、RB等.     

�ҹ�θ��������״���չ

我国是胃癌高发国家,对胃癌的研究一直非常活跃,关于胃癌早期诊断和早期治疗方面的研究一直是人们关注的焦点。现就我国胃癌诊治现状与进展作一简单介绍。1胃癌诊治的分子生物学研究胃癌基础研究的热点主要集中在胃癌发生的遗传性因素、癌基因与抑癌基因的突变、胃癌细胞的增殖与凋亡、胃癌的浸润与转移,以及肿瘤基因治疗等方面。胃癌的分子生物学研究有助于探讨胃癌的病因学和发病机制,寻找新的早期诊断标志物,并为基因治疗提供一定的理论依据。遗传因素在胃癌发生中占有重要的地位。胃癌的发生是一个多基因多步骤过程已得到公认,涉及C-er…     

PTEN在胃癌中的研究进展

胃癌是我国最常见的消化道恶性肿瘤之一,也是最致命的恶性肿瘤之一,占癌症相关死亡的第二位.胃癌的发生发展是一个多因素、多基因、多步骤参与的癌变过程,而抑癌基因的失活和癌基因的活化在其中发挥了重要的作用.近年来的研究表明,第10号染色体丢失的张力蛋白同源的磷酸酶基因（phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN）作为迄今发现的第一个具有双重特异性磷酸酶活性的抑癌基因[1],在胃癌的发生、发展、浸润、转移中起着重要作用.现就近年来PTEN基因在胃癌中的最新研究进展综述如下.     

可变剪接在胃癌发生和发展中的作用

胃癌已成为严重威胁人类生命健康的恶性肿瘤之一.环境因素和遗传因素的协同作用是胃癌发生和发展的主要诱因,其中环境因素居首要地位.在胃癌的发生和发展过程中常伴随多种肿瘤相关基因结构和表达水平的异常变化,同时伴有多个异常剪接变体的出现.研究剪接变体在胃癌发生中的变化模式有可能为胃癌的早期诊断和病程跟踪提供重要的生物标志物,进...     

胃癌相关基因在癌前病变中的表达

目前认为癌的形成过程是多阶段、多过程的,包括多个连续的独立的事件,是多个遗传物质即基因积累改变的结果．与胃癌发生、发展有关的基因有3种：癌基因、抑癌基因、程序死亡基因．原癌基因的激活和抑癌基因的失活可使细胞增生,程序死亡基因的失活可能使细胞永生化,在胃癌的发生、发展的各个阶段,至少有两种以上的基因突变,他们各自发挥不同作用．研究胃癌相关基因在癌前病变中的表达,总结基因改变在癌变过程中的作用和地位．可以从分子水平揭开胃黏膜癌变的本质,进而明确胃癌发生、发展的分子机制．     

转录因子Snail与胃癌关系的研究进展

胃癌是世界上第二大普遍的癌症,年死亡率约16/10万(男21/10万,女10/10万),是继肺癌、肝癌之后第三个导致死亡的原因。近年来大量研究表明,胃癌的发生、发展及预后是多因素、多基因、多阶段改变的结果,研究胃癌相关蛋白分子及基因不仅在了解胃癌的发病机制方面非常重要,在胃癌的临床分子诊断及预后评估中也起重要作用。锌指转录因子Snail在胃癌侵袭和转移中担当重要角色。在胃癌发生、发展中,Snail作为上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transitions,EMT)的重要诱导因子之一,其过度表达将会导致肿瘤细胞的侵袭、转移。对Snail家族成员的研究不仅可进一步阐明Snail超家族的作用机制,而且为Snail与胃癌关系的研究进展提供新的理论依据。     

细胞凋亡与胃癌及幽门螺杆菌相关胃疾病

0 引言 细胞凋亡对多细胞有机体的发育、内环境的稳定致关重要,他的异常与肿瘤发生密不可分。既往认为胃癌的形成是细胞无限增生所致的细胞集聚,近年发现胃癌中不仅存在细胞增生,同时也存在细胞凋亡,胃癌的发生是细胞凋亡与增生比例失调的结果。细胞凋亡受许多因素(凋亡相关基因、放疗、化疗、细胞因子等)的影响。因此,了解细胞凋亡与胃癌及其癌前疾病,包括幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)相关性胃疾病的关系,有助于揭示胃癌及Hp相关胃疾病的发生机制,同时寻找胃癌治疗的新方法。     

胃癌的表观遗传学研究

胃癌高度恶性且预后较差,目前随着对胃癌基础研究的不断深入,表观遗传学改变在胃癌发生发展中的重要作用逐渐被人们认识,因此可通过检测基因的异常甲基化等表观遗传学改变对胃癌进行早期诊断、治疗及预后评价。本文总结分析胃癌相关基因甲基化状态及表观遗传学的临床应用前景,以期探讨表观遗传学对胃癌的早期诊断及治疗的指导作用。     

胃癌易感因素和病理特征与肿瘤基因表达谱

目的 采用高通量基因芯片,检测胃癌组织基因表达的变化,结合流行病学发病因素调查和临床病理等资料,分析胃癌异常基因表达与发病易感因素和临床病理的相关性.方法 收集23例胃癌患者病变及配对非病变胃黏膜组织,用含有13 824个基因或表达序列标签(EST)序列的SBC-Human 2.3基因芯片进行基因表达谱检测;调查胃癌相关流行病学易感因素,结合内镜检查和外科手术病理等临床资料进行统计学分析.结果 筛选出符合条件的基因53个,其中有12个目前功能不明的基因/EST序列.部分基因异常表达与少食新鲜蔬菜、水果和生活压力过大等易感因素相关(P＜0.05),且与Borrmann分型、幽门螺杆菌感染和淋巴结转移数目多(≥7个)等因素相关(P＜0.05).结论 胃癌基因表达既有一定相似性,又有异质性,其表达与易感因素及肿瘤生物学行为特点相关.分析胃癌基因表达谱有助于追踪癌前状态的转归、发展,了解胃癌的发病与生物学特征.     

alkB基因在胃癌和萎缩性胃炎黏膜组织中的表达改变

背景:DNA或RNA分子异常甲基化导致的抑癌基因沉默、突变或其他功能性障碍是胃癌发生的关键机制之一。最近研究发现alkB基因产物具有修复DNA和mRNA碱基异常甲基化、纠正基因突变、复制转录障碍等功能,但对其在胃癌及其癌前病变组织中的表达情况尚不了解。目的:探讨alkB基因在胃癌及其癌前病变组织中的表达改变。方法:收集11例胃癌、癌旁和远离癌灶正常黏膜组织以及107例慢性萎缩性胃炎和121例非萎缩性胃炎患者的内镜活检黏膜,应用基因表达谱芯片实验评估alkB基因在各组织中的表达。以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检验上述结果。结果:与远离癌灶正常黏膜组织相比,alkB基因在胃癌中的表达降低(Ratio值为0.208);与非萎缩性胃炎黏膜组织相比,alkB基因在萎缩性胃炎黏膜组织中的表达降低(Ratio值为0.378);而alkB基因在癌旁和远离癌灶正常黏膜组织中的表达无显著差异(Ratio值为0.726)。结论:alkB基因在胃癌和萎缩性胃炎黏膜组织中的表达下调,可能参与了胃癌发生过程中基因甲基化紊乱的机制。alkB基因是有潜在研究价值的分子靶标。     

蛋白质组学在胃癌中的研究进展

蛋白质组学研究基因编码的所有蛋白质,近年已成为全面分析蛋白质表达变化的有力手段,并广泛用于肿瘤研究.本文旨在介绍蛋白质组学相关技术在胃癌中的研究进展,通过对胃癌肿瘤组织、血清、细胞株、胃癌相关菌株的蛋白质组学研究,以阐明胃癌发生、发展的分子机制,发现特异性和敏感性较高的肿瘤标记物,从而为胃癌的临床诊治开辟新的途径.     

胃镜下采集的疑似胃癌组织的基因表达谱分析

基因芯片等高通量的研究手段已在肿瘤研究中得到广泛的应用，胃癌方面的研究主要集中住手术切除标本，对胃镜下取得的疑似胃癌组织的基因表达比较研究则较少报道。目的：比较胃镜下取得的病理诊断为胃癌和非癌样品的基因表达谱特征，为识别胃癌早期诊断的指标和疾病的分子分型奠定基础。方法：内镜下取47例胃癌疑似病变组织和对应非病变组织，经病理学诊断为胃癌28例，非癌病变19例。提取RNA，采用含14592个点的人cDNA芯片，经RNA放大技术进行基因表达谱的检测，检测结果采用GeneSpring软件分析，数据标准化用局部加权回归分析（LOWESS）处理，胃癌和非癌两组样品的组内和组间差异的显著性分析应用差异显著性分析（SAM）方法。结果：以30％样品巾的表达调节水平大于1．5倍作为差异基因筛选标准，胃癌组表达上调的基因有133个，卜调的有143个。非胃癌样品中有51个基因表达上调，22个表达下调，其中分别有18个上调基因和13个下调丛因与胃癌组相同。组间差异分析筛选出40个基因，其表达调节可以由之进行胃癌和非癌组样品的区分。结论：基因表达谱芯片技术可以有效地应用于识别胃癌和非癌样品中的差异表达基因，并可用于肿瘤发病机制和分子分型的研究。     

DNA甲基化与胃癌相关性的研究进展

DNA甲基化是表观遗传学修饰的主要方式之一．在基因表达调控中具有重要作用，肿瘤组织多有DNA甲基化紊乱，包括与细胞增生周期密切相关的癌基因低甲基化和抑癌基因高甲基化等。近年研究发现，胃癌相关基因甲基化与胃癌的发生有重要关系，具有作为胃癌诊断的分子标记和基因治疗靶点的潜在价值。     

hMLH1基因高甲基化在胃癌发生、发展中的作用

基因启动子区CpG岛甲基化使许多基因失活，从而导致恶性肿瘤的发生和发展。目的：检测hMLHl基因启动子区CpG岛甲基化水平，探讨其胃癌发生、发展中的作用。方法：以甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测41例胃癌、40例癌前病变和38例对照组织中hMLHl基因启动子区CpG岛甲基化状态，并分析其与胃癌患者临床病理特征的关系。结果：胃癌组织中hMLHl基因启动子区CpG岛甲基化阳性率为34．1％，显著高于癌前病变组的5．0％和对照组的0％（P〈0．05）。hMLHl基因甲基化阳性率与胃癌患者的年龄和肿瘤浸润深度有关（阳性率分别为46．4％对7．7％和55．0％对14.3％，P〈0．05），与性别、肿瘤分化程度和淋巴结转移无关（阳性率分别为34．8％对33．3％、28．0％对43．8％和38．1％对30．0％）。结论：胃癌组织中存在hMLHl基因启动子区CpG岛高甲基化，可能与胃癌的发生、发展有关．且可能在老年胃癌患者的肿瘤发生过程中起重要作用。     

DNA Methylation of NDRG2 in Gastric Cancer and Its Clinical Significance

Background

Gastric cancer is one of the most common digestive malignancies worldwide. N-myc downstream-regulated gene 2 (NDRG2) is a differentiation-related gene that is considered to be a metastasis suppressor gene. In this study, we examined the expression and DNA methylation of NDRG2 in gastric cancer cell lines and tissues, as well as its clinical significance.

Methods

Six gastric cancer cell lines and 42 paired normal and gastric cancer tissue samples were used to assess NDRG2 mRNA expression using RT-PCR. NDRG2 DNA methylation status was evaluated by methylation-specific PCR (MSP) in gastric cancer cell lines and tissues. The suppression of NDRG2 in BGC823 cells by siRNA transfection was utilized to detect the role of NDRG2 in gastric cancer progression.

Results

NDRG2 mRNA was down-regulated in gastric cancer cell lines and tissues, and its expression was just related to lymph node metastasis (p = 0.032). MSP showed methylation of NDRG2 in 54.0 % (47/87) of primary gastric cancer specimens and in 20.0 % (16/80) of corresponding nonmalignant gastric tissues. NDRG2 methylation was related to depth of tumor invasion, Borrmann classification and TNM stage (p < 0.05). Upon treatment with 5-aza-2′-deoxycytidine and trichostatin A, NDRG2 expression was upregulated in HGC27 cells, and demethylation of the highly metastatic cell line, MKN45, inhibited cell invasion. Furthermore, the suppression of NDRG2 by siRNA transfection enhanced BGC823 cells invasion.

Conclusions

Our results suggest that the aberrant methylation of NDRG2 may be mainly responsible for its downregulation in gastric cancer, and may play an important role in the metastasis of gastric cancer.     

Not All Side Population Cells Contain Cancer Stem-Like Cells in Human Gastric Cancer Cell Lines

Introduction

Side population (SP) cells may play a crucial role in tumorigenesis and the recurrence of cancer. Many kinds of cell lines and tissue have demonstrated presence of SP cells including different gastric cancer cell lines. However, is that true all SP cells contain cancer stem-like cells in gastric cancer cell lines?

Materials and methods

MKN-45 and BGC-823 cells labeled with Hoechst 33342 were chosen to obtain SP cells, then characterized the cancer stem-like properties of SP cells both in vitro and in vivo. Five stemness–related genes expression profiles, including OCT-4, SOX-2, NANOG, CD44 and ATP-binding cassette transporters gene ABCG-2, were tested in SP and MP cells using quantitative real-time RT-PCR. Western blot was chosen to show the difference of protein expression between SP and MP cells. When inoculated into non-obese diabetic/severe combined immunodeficiency (NOD/SCID) mice, SP cells from MKN-45 showed higher tumorigenesis tendency than MP cells, but SP cells from BGC-823 showed same tumorgenesis tendency as MP cells.

Conclusion

SP cells from MKN-45 possess cancer stem cell properties and proved that they were gastric cancer stem-like cells. SP cells from BGC-823 didn’t possess cancer stem cell properties and proved that not all SP cells contain cancer stem-like cells in gastric cancer cell lines.     

胃癌血管靶向肽GX1抑制人胃癌血管内皮细胞增殖的机制研究

为提高胃癌血管抑制治疗的选择性,本课题前期研究应用噬菌体呈现肽库技术筛选获得了人胃癌血管靶向性环七肽GX1,并发现GX1能抑制人胃癌血管内皮细胞增殖,诱导细胞凋亡。目的：探讨GX1抑制人胃癌血管内皮细胞增殖的相关机制。方法：分别以40μmolfLGX1和40μmol／L对照肽Pep2处理正常人脐静脉内皮细胞（HUVEC）和与人胃腺癌细胞株SGC7901体外共培养、产生肿瘤血管内皮相关特征的CO—HUVEC。流式细胞术检测细胞周期分布,基因芯片检测筛选GX1组与对照肽Pep2组CO—HUVEC差异表达基因并行GO分类,蛋白质印迹法检测凋亡相关基因蛋白表达。结果：与对照肽Pep2相比,GX1对CO．HUVEC和正常HUVEC的细胞周期分布均无明显影响（P〉0．05）。两组co-HUVEC共存在三百余个显著差异表达基因,其中与肿瘤生长、侵袭、转移相关者-百余个,功能主要涉及信号转导、凋亡、应激、细胞黏附、细胞代谢等。GX1组CO—HUVEC的Bax、CleavedCaspase-3蛋白表达明显上调,Bel-2蛋白表达明显下调,Caspase-8蛋白表达无明显变化。结论：GX1可能通过下调Bcl-2／Bax比值,经线粒体途径诱导靶细胞凋亡,实现对人胃癌血管内皮细胞增殖的抑制作用。     

髓过氧化物酶基因多态性与胃癌易感性的关系

流行病学研究表明髓过氧化物酶（MPO）-463G→A多态性与多种疾病相关.目的：探讨MPO基因多态性与胃癌易感性之间的关系.方法：应用PCR-RFLP检测117例胃癌患者和105例对照者的MPO-463G→A多态性,比较两组MPO基因型频率和等位基因频率,分析MPO基因多态性与胃癌危险性的关系,并行分层分析探讨性别、年龄、吸烟状况、幽门螺杆菌（H.pylori）感染和胃癌家族史对胃癌的影响.结果：胃癌组GA和 AA基因型频率显著低于对照组（GA：25.6%对37.1%,AA：3.4%对11.4%,P〈0.05）,A等位基因频率亦明显降低（16.2%对30.0%,P〈0.05）.与GG基因型患者相比,携带MPO-463GA/AA基因型者罹患胃癌的危险性明显降低（OR=0.43,95% CI：0.25-0.75）.分层分析示男性、年龄≤60岁、不吸烟、H.pylori感染阴性和无胃癌家族史人群携带GA/AA基因型较携带GG基因型者罹患胃癌的危险性降低.结论：MPO基因多态性与胃癌易感性相关,A等位基因对胃癌易感性具有保护作用.     

细小病毒H-1感染对胃癌细胞凋亡相关基因表达的影响

背景:细小病毒H鄄1对肿瘤细胞和转化细胞具有选择性杀伤和抑制生长的作用,是很好的基因治疗用载体。但肿瘤细胞对细小病毒H鄄1杀伤作用敏感或耐受的分子机制目前尚不十分清楚。目的:从mRNA水平观察细小病毒H鄄1感染对胃癌细胞凋亡相关基因表达的影响,探讨细小病毒H鄄1对胃癌细胞细胞毒作用的相关机制。方法:选取对细小病毒H鄄1敏感的人胃癌细胞株HGC鄄27和不敏感的人胃癌细胞株BGC鄄823,于细小病毒H鄄1感染48h后提取细胞总RNA。应用不同荧光染料标记的dUTP逆转录制备荧光探针,与含有8000点人类体细胞基因序列的基因表达谱芯片杂交,再经计算机荧光扫描以分析敏感细胞株HGC鄄27凋亡相关基因表达谱的改变。采用逆转录聚合酶链反应(RT鄄PCR)对敏感细胞株HGC鄄27部分凋亡相关基因,如SARP1、BCL鄄10、CL鄄20、NCDRP和RAIDD等的表达作进一步检证,并比较其与不敏感细胞株BGC鄄823相应凋亡相关基因的表达差异。结果:基因表达谱芯片检测结果显示,HGC鄄27细胞感染细小病毒H鄄148h后,所检测的64对凋亡相关基因中有15对基因表达水平下调至原水平的50%以下,仅有1对基因表达水平上调至2倍以上。RT鄄PCR扩增结果显示,感染细小病毒H鄄148h后,敏感细胞株HGC鄄27的SARP1、BCL鄄10、CL鄄20和NCDRP基因表达明显下调,RAIDD基因