新型抗病毒因子APOBEC3G研究进展

APOBEC3G是一种天然抗病毒活性的胞嘧啶脱氨基酶家族成员,近年来因其独特的抗病毒作用机制受到了广泛的关注。在艾滋病病毒(HIV)复制过程中,APOBEC3G大量包装进入新生成的病毒颗粒内部,诱导病毒负链cDNA胞嘧啶(C)脱氨基突变为尿嘧啶(U),导致病毒丧失活性。而HIV编码的Vif蛋白能拮抗APOBEC3G的脱氨基酶作用,二者形成动态平衡。作为一种机体天然抗病毒因子,APOBEC3G参与了宿主抵抗HIV入侵的防御机制,为新型抗病毒药物的开发和机体天然免疫机制的研究开拓了新的方向,可能对未来的HIV及其他病毒性疾病的防治提供新的线索并产生重要的影响。     

APOBEC3A的功能研究新进展

APOBEC3家族的脱氨酶功能导致ssDNA上的dC→dU,使DNA突变,从而引起基因组的不稳定性和癌症,因此APOBEC3家族成为人体内抑制反转录病毒及反转录元件等的重要因子。APOBEC3A只有一个锌离子结合域,是应答α干扰素时,在巨噬细胞和单核细胞大量表达的唯一APOBEC3成员。APOBEC3A在病毒抑制、DNA分解及细胞周期中的作用,使其成为该家族研究中的热点。若深入了解APOBEC3A的功能与作用机制,可能为基因治疗、疫苗研究、癌症治疗等带来新的机遇和希望。     

一个值得关注的天然免疫抗病毒基因:CEM15基因

2002年英国科学家Sheehy和他的同事发现了一新的天然免疫抗病毒基因，因为该基因首先从CEM—SS细胞系获得，所以称为CEM15基因。CEM15基因位于人的第22号染色体长臂22q13．1-q13．2，含有8个外显子和7个内含子，cDNA长度1155bp，编码384个氨基酸。CEM15能使艾滋病病毒（HIV-1）基因组发生突变，致使病毒不能完成整个复制周期而起到抑制HIV-1复制的作用。进一步研究表明CEM15实际上就APOBEC3G，属于APOBEC家族，目前为止，人APOBEC家族至少有10个家族成员，除APOBEC3G（CEM15）能抑制HIV-1和HBV的复制外，其它成员也有潜在的抗病毒作用。由于CEM15（APOBEC3G）仅特异地作用于逆转录产生的单链DNA，这就尽可能地减少了对宿主DNA的影响，因此CEM15基因是一个非常理想的抗病毒基因。     

含人APOBEC3F启动子荧光素酶报告基因载体的构建

目的构建含人载脂蛋白BmRNA编辑酶催化多肽样蛋白3F（apolipoprotein B mRNA editing enzyme,catalytic polypeptide—like 3F,APOBEC3F）基因启动子的萤光素酶报告基因载体。方法应用5’cDNA末端快速扩增分析（5’rapidam—plification of cDNA ends．5’RACE）技术确定APOBEC3F转录起始位点,利用PCR技术扩增人APOBEC3F启动子序列,构建含人APOBEC3F启动子的萤光素酶报告基因载体,行双酶切及测序鉴定,并通过双萤光素酶报告基因系统检测启动子活性。结果APOBEC3F基因转录起始位点位于GenBank已公布的APOBEC3FcDNA起始位置上游13个核苷酸处,测序结果表明克隆获得的APOBEC3F基因启动子序列与GenBank报道一致。重组载体DGL3-A3F—Prom组F／R值（0．342082±0．023516）与空载体pGL3-basic组（0．007871±0．002357）相比,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论成功构建了含人APOBEC3F基因启动子的萤光素酶报告基因载体,为更深入研究APOBEC3F基因转录调控机制奠定了基础。     

APOBEC3G体外抗乙型肝炎病毒的研究

目的探讨载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3G（apolipoprotein B mRNA editing enzyme catalytic polypeptide like3G,APOBEC3G）（也称为CEM15）体外抗乙型肝炎病毒（HBV）的作用及其机制。方法脂质体转染pcDNA3.1 Human APOBEC3G-Myc-6Xhis、pcDAN3.1/His-C进入HepG2.2.15细胞,转染后,RT-PCR证实转染基因的表达,Western Blot证实蛋白的表达。通过ELISA方法检测细胞上清液中乙型肝炎表面抗原（HBsAg）及乙型肝炎e抗原（HBeAg）,RT-PCR分析APOBEC3G对HBV mRNA转录的影响。结果APOBEC3G基因与蛋白在HepG2.2.15细胞都有表达,与空质粒转染组相比,pcDNA3.1 Human APOBEC3G-Myc-6Xhis转染组HBsAg含量下降70.38%,HBeAg含量下降62.88%,未转质粒细胞为空白对照组。结论APOBEC3G在体外可以抑制HBV复制,可以作为一种新型的抗病毒制剂治疗乙肝病毒感染。     

乙型肝炎病毒X基因-丙型肝炎病毒C基因共表达对血管内皮细胞生长因子的影响

目的建立乙型肝炎病毒X基因-丙型肝炎病毒C基因（HBV X—HCV C）共表达HepG2细胞模型，并探讨其对血管内皮细胞生长因子表达的影响。方法双酶切质粒pXT1—X，得到完整的HBV X基因片段后，将其插入到质粒PBK—CMV和PBK—HCV C的相应酶切位点，得到重组质粒PBK—X和PBK—X—C；再将质粒PBK—CMV、PBK—X、PBK—HCV C和PBK—X—C分别导入肝癌细胞株HepG2中，G418筛选，逆转录聚合酶链反应、Western blot鉴定HBV X和HCV C蛋白表达，免疫组织化学、Western blot检测血管内皮细胞生长因子蛋白质表达。结果质粒PBK—CMV、PBK—X、PBK—HCV C和PBK—X—C在HepG2细胞中有稳定表达。共表达HBV X—HCV C蛋白的细胞血管内皮细胞生长因子蛋白质表达较转染空载体的细胞及单独表达HBV X、HCV C蛋白的细胞明显升高。结论HBV X—HCV C共表达能显著上调血管内皮细胞生长因子蛋白质表达，提示HBV、HCV可能具有协同致癌作用。     

胸膜炎患者血清与胸液ADA和H-CRP的诊断价值探讨

目前结核性、癌性及炎性胸膜炎引起的胸腔积液有时难以鉴别。现通过检测3组胸膜炎患者血清与胸液腺苷脱氨酶（ADA）、超敏C反应蛋白（H—CRP）含量分析其相关性及临床意义。[第一段]     

慢性乙型肝炎患者体内病毒基因G→A超突变的检测及分析

载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样3G(APOBEC3G)是一种胞嘧啶脱氨酶,是Sheehy等[1]在对人类免疫缺陷病毒 (HIV)进行允许细胞和非允许细胞基因差异表达分析过程 中发现的一种新型抗病毒因子;它能使HIV病毒基因组发生鸟嘌呤(G)→腺嘌呤(A)的碱基突变,致使其病毒基因组不能执行正常的功能而具有抗病毒活性[2].     

血清淀粉样蛋白A对脑动脉粥样硬化性狭窄影响的研究进展

血清淀粉样蛋白A（serum amyloid A，SAA）存在于各种哺乳动物和禽类的体内，其合成的部位主要在肝脏，由同一簇基因编码的一组多形性蛋白组成。SAA家族包含不同表达形式的载脂蛋白、急性相蛋白A（acute—phase serum amyloid A，A—SAA）和结构型SAA（constitutive serum amyloid A，C—SAA）。正常人血清SAA值为0—0．78mg／L。当机体受到各种炎性反应因素刺激时，     

乙型肝炎患者外周血单个核细胞APOBEC3G mRNA表达

人类APOBEC3G（A3G）是一种胞苷脱氨酶,是机体固有免疫反应的新成员,具有非特异性的细胞内抗逆转录病毒的保护作用。本实验通过检测各型慢性乙型肝炎、重型肝炎患者病毒载量、肝功能水平以及外周血单个核细胞（PBMC）中A3G mRNA含量,探讨A3G与HBV感染的关系。     

血管内皮生长因子C与肺癌关系的研究进展

包括肺癌在内的恶性肿瘤是严重危害人民健康的疾病。近年，血管内皮生长因子（VEGF）家族与肿瘤关系的研究成为热点。血管内皮生长因子C（VEGF—C）是VEGF家族的新成员，作为第一个被发现的促淋巴管生成因子，由于其强大、特异的促淋巴管生成作用，在与肿瘤、特别是肿瘤淋巴转移的相关研究中备受关注。现就近年VEGF—C与肺癌关系的研究进展作一综述。     

男性急性冠脉综合征与炎症因子相关

近年来研究表明在动脉硬化及其并发症的发生及进展过程中，血管壁的炎症性变化发挥着非常大的作用，认为动脉粥样硬化是慢性炎症性疾病。本研究旨在探讨高敏C反应蛋白（High sensitive C—reactive protein，hs—CRP）、妊娠相关血浆蛋白A（PAPP—A）、基质金属蛋白酶9（Matrix metalloproteinase-9，MMP-9）和Ⅱa型磷脂酶A2（Ⅱa phospholipase A2，Ⅱa sPLA2）在急性冠脉综合征（ACS）中的变化及其意义。     

HIV-1 B'/C亚型毒株辅助受体的利用

目的分析疾病进展不同阶段分离的B’肥亚型毒株辅助受体的利用情况。方法从长期不进展者和AIDS期患者体内分离病毒株,将获得的B’／C毒株进行体外培养,用病毒株感染U87．CD4、GHOST细胞系并进行培养,通过检测、比较培养基上清液中核衣壳蛋白p24量的差异来确定某一毒株利用的辅助受体。再利用辅助受体抑制剂TAK～799、AMD-3100验证从细胞系实验中得到的结论。结果从AIDS期患者体内分离的毒株大部分利用C—C家族趋化因子受体（C—Cchemokinereceptor,CCR）5辅助受体,部分利用C—X～C家族趋化因子受体（C—X—C chemokine receptor,CXCR）4和CCR5辅助受体。从长期不进展者体内分离的毒株利用CCR5辅助受体。结论从长期不进展者体内分离的病毒主要利用CCR5辅助受体。从AIDS期患者体内分离的病毒主要利用CCR5辅助受体,也有同时利用CCR5和CXCR4辅助受体的现象。     

慢性乙肝患者外周血单个核细胞APOBEC3G mRNA表达的水平及意义

目的探讨外周血单个核细胞（PBMC）APOBEC3GmRNA表达水平与乙肝病毒（HBV）慢性感染的关系。方法用实时荧光相对定量RT．PCR的方法检测27例慢性乙肝患者以及16名健康人PBMC中APOBEC3GmRNA的水平，同时检测乙肝患者外周血HBV病毒载量及肝功能ALT。结果慢性乙肝患者PBMC中APOBEC3GmRNA的表达水平高于健康对照组，差异具有统计学意义（P〈0．01），且与外周血HBV病毒载量成正相关（r=0．73，P〈0．01），与ALT水平无明显相关性（P〉0．05）。结论APOBEC3G在人体内对HBV复制的影响可能不是直接的抑制作用。     

乙型肝炎病毒X基因对肝细胞凋亡的影响及其作用机制

乙型肝炎病毒X基因（HBx）在HBV慢性感染导致肝硬化，原发性肝癌（HCC）的发生过程中，起着重要的作用。X连锁凋亡抑制因子（XIAP）为凋亡抑制蛋白（IAPs）家族成员，是一种强效的凋亡抑制蛋白，可以抑制半胱氨酸蛋白酶活性，阻断细胞凋亡过程。我们观察了肝癌细胞株以及正常肝细胞株在转染HBx前后凋亡抑制蛋白XIAP表达的差异，了解和分析HBx对不同肝细胞系细胞凋亡的作用及其是否与凋亡抑制蛋白XIAP基因相关。     

家族性乳腺癌中BRCA1、ER、C—erbB-2的表达及相关性研究

目的探讨家族性乳腺癌和散发性乳腺癌中BRCA1表达的差异,及其与雌激素受体（ER）、C-erbB-2表达的相关性。方法采用SP免疫组化法检测家族性乳腺癌及非家族性乳腺癌组织中BRCA1、ER、C—erbB-2的表达。结果BRCA1蛋白在家族性乳腺癌中表达明显高于散发性乳腺癌（P〈0．05）;BRCA1阳性表达与ER的阳性表达负相关（P〈0．05）,与C-erbB-2的阳性表达无相关性（P〉0．05）。结论BRCA1在家族性乳腺癌中起着十分重要的作用,BRCA1异常表达的患者,其ER的表达阴性居多,而与C-erbB-2蛋白关系不明确。     

靶向X染色体连锁凋亡抑制蛋白的短发夹状RNA诱导肝癌细胞凋亡

X染色体连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）是凋亡抑制蛋白家族中最具有caspase抑制能力的成员，具有较强的抗凋亡能力。有研究表明XIAP在肿瘤中高表达可能是肿瘤进展及导致肿瘤对化疗药物耐药的一个重要机制。我们通过构建以XIAP为靶的短发夹状RNA（shRNA）重组质粒，观察下调XIAP表达对HepG2细胞生长及凋亡的影响。     

真核绿色荧光蛋白表达载体pEGFP—C3-MAGE-12的构建与表达

目的构建黑色素瘤抗原基因-12（MAGE-12）绿色荧光蛋白表达载体pEGFP—C3-MAGE—12，并在真核细胞中表达。方法于2005—10～2005—12对郑州大学第一附属医院应用RT—PCR方法．从人肺癌组织中扩增出MAGE-12cDNA基因片段，经过酶切鉴定后，克隆至质粒载体（pGEM—Teasy），测序证实碱基序列无误后，再克隆至真核绿色荧光蛋白表达载体（pEGFP—C3）上，并转染真核细胞，观察其在真核细胞中表达。结果经酶切及基因序列分析验证，PCR扩增出944bp的MAGE-12基因并成功构建了真核绿色荧光蛋白表达载体pEGFP—C3-MAGE-12，该重组载体能够在真核细胞中广泛表达。结论成功构建真核绿色荧光蛋白表达载体pEGFP—C3-MAGE-12，为建立肿瘤细胞疫苗打下基础。     

胸膜炎患者血清与胸液ADA和H-CRP的诊断价值探讨

目前结核性、癌性及炎性胸膜炎引起的胸腔积液有时难以鉴别。现通过检测3组胸膜炎患者血清与胸液腺苷脱氨酶（ADA）、超敏C反应蛋白（H-CRP）含量分析其相关性及临床意义。     

Idol：一个新的通过转录后途径调节低密度脂蛋白受体的蛋白

肝脏的低密度脂蛋白受体（LDLR）是清除血浆低密度脂蛋白（LDL）的主要途径，并且是一个非常重要的心血管系统疾病的治疗靶点。LDLR的表达量受到转录和转录后两方面的调控。这里介绍一种新近发现的、通过泛素化作用经转录后途径调控LDLR的蛋白Idol（inducible degrader of the LDLR）。Idol是一个肝脏X受体（LXR）的靶分子，具有E3泛素连接酶活性，可以介导LDLR的泛素化，并在溶酶体降解。Idol还有另外两个LDLR家族的靶蛋白VLDLR和ApoER2。尽管Idol和前蛋白转化酶枯草溶菌素9（PCSK9）存在着很多相似之处，但它们在调控LDLR的途径上是不同的。最近的工作显示Idol与人类的LDL水平有关，Idol可能在人类的血脂代谢有重要作用。