五种卵巢癌耐药细胞系的建立及其部分耐药相关基因的表达

目的　建立 5种卵巢癌耐药细胞系 ,并比较耐药与其非耐药卵巢癌细胞系之间部分耐药相关基因的表达差异。方法　用卵巢癌细胞系SKOV3、A2 780分别建立顺铂、卡铂、紫杉醇 (商品名 :泰素 )耐药的细胞系SKOV3/DDP、SKOV3/CBP、A2 780 /DDP、A2 780 /CBP、A2 780 /toxol,验证其有关的生物学指标 ;并用RT PCR技术检测耐药与其非耐药卵巢癌细胞系之间部分基因的表达差异。结果　 (1)所有耐药细胞系对相关药物的耐药指数 (RI)较其非耐药细胞系均升高约 3倍或以上 ,并对临床常用的一些化疗药物表现出不同程度的耐受性 ,RI达 2～ 2 0倍 ;耐药细胞的生长速度较其非耐药细胞明显减慢 (P <0 0 1) ;群体倍增时间明显延长 1 4～ 2 4倍 (P <0 0 1) ,但G1、G2 、S期细胞比例无明显改变 (P >0 0 5 ) ;耐药细胞中药物浓度较其非耐药细胞中下降约 2 0～ 8 5倍 (P <0 0 5 )。 (2 )在检测的耐药相关基因中 ,耐药细胞较其非耐药细胞中表达下降的有p5 3、肺耐药蛋白 (LRP 1)、多药耐药相关蛋白 (MRP 1)基因 ,表达升高的有蛋白激酶C(PKC)、拓扑异构酶 (topo)Ⅰ、topoⅡβ基因 ,无明显改变的有谷胱甘肽 S 转移酶 (GST pi)、topoⅡα基因 ,多药耐药蛋白 (MDR 1)基因的表达改变不确定 ,包括升高和下降。结论　在不同类型的耐     

白细胞介素7基因转染卵巢癌细胞的体外研究

目的　观察白细胞介素 (IL) 7基因体外转染卵巢癌细胞后 ,细胞的增殖特性 ,表面抗原表达和细胞因子分泌的变化 ,及对淋巴因子激活的杀伤细胞 (LAK细胞 )杀伤敏感性的影响。方法　对卵巢上皮性癌细胞株SKOV3进行体外培养 ,将重组质粒pBK CMVIL 7导入SKOV3建立SKOV3 IL 7,将双相表达载体pBK CMV导入SKOV3建立SKOV3 Neo ,应用倒置相差显微镜、四甲基偶氮唑蓝比色试验及流式细胞术 ,观察IL 7基因转染前后 ,SKOV3的增殖特性变化 ;间接标记异硫氰酸荧光素 流式细胞术 ,测定细胞表面抗原表达 ;酶联免疫吸附试验测定细胞因子分泌 ;应用乳酸脱氢酶释放法观察细胞对LAK细胞杀伤敏感性的影响。结果　IL 7基因转染前后 ,SKOV3细胞基本形态、增殖特性及细胞周期分布无明显变化 ;细胞表面人类白细胞抗原ABC(HLA ABC)表达阳性率为 91 8%～99 9% ;人类白细胞抗原DR(HLA DR)未能检测到 ;IL 7基因转染后SKOV3细胞间粘附分子I(ICAM I)表达显著提高 ,SKOV3 IL 7为 (4 0 6± 3 7) % ,SKOV3 Neo为 (2 3 2± 2 7) % ,SKOV3为 (18 9± 7 2 ) % ;转化生长因子 β1 (TGF β1 )表达显著降低 ,SKOV3 IL 7为每 2 4h、10 6 细胞中 (下同 ) 15 8ng L ,SKOV3 Neo为 72 6 μg L ,SKOV3为 396ng L ;IL 7基因转染后 ,SKOV3细胞对LAK细胞     

肿瘤坏死因子相关诱导配体与化疗药物联合诱导抗化疗卵巢癌细胞凋亡的研究

目的探讨肿瘤坏死因子（TNF）相关诱导配体（TNF-related apoptosis inducinglig and，TRAIL）和（或）化疗药物联合使用对人卵巢癌细胞系耐药株A2780与SKOV3细胞凋亡的影响。方法2005-01日本国岐阜大学免疫病理3种化疗药物（顺铂、紫杉醇、阿霉素）和TRAIL分别加入培养的A2780与SKOV3细胞，通过hoechst 33342染色在荧光显微镜下确定细胞凋亡效应；蛋白印记杂交法分析bax，bcl-2，及caspase-3，8蛋白表达量的变化。应用四甲基偶氮唑蓝（MTr）法测定A2780与SKOV3细胞体外增殖活性。结果3种化疗药物与TRAIL对A2780和SKOV3细胞的生长都表现抑制作用，3种化疗药物与TRAIL联合用药组A2780与SKOV3的生长抑制率明显高于单独用药组。结论3种化疗药物与TRAIL联合作用所产生的正效应对卵巢癌临床治疗有潜在的意义。     

具有不同转移潜力的卵巢癌细胞系基因表达谱的比较研究

目的:比较具有不同转移潜力的上皮性卵巢癌细胞系基因表达谱,探讨卵巢癌侵袭转移过程中的关键基因和基因群,为最终揭示卵巢癌侵袭转移过程的分子机制奠定基础。方法:采用人工基底膜侵袭实验比较SKOV3·ip1细胞与其母系SKOV3细胞的侵袭转移能力;用17000点人类基因组cDNA芯片杂交检测两细胞系基因表达谱的差异;用RT-PCR方法验证基因芯片结果。结果:与其母系SKOV3相比,SKOV3·ip1细胞侵袭转移能力更强;基因芯片检测到1557个2倍差异表达基因,其中包括nm23-H2,c-erbB-2等重要的侵袭转移基因及一些差异显著的未知基因和EST片段;nm23-H2基因RT-PCR结果验证了基因芯片实验结果。结论:上皮性卵巢癌细胞系SKOV3.ip1具有更强的侵袭转移能力;卵巢癌的侵袭转移是一个涉及nm23,c-erbB-2等重要基因和其他未知新基因等多个基因共同参与的复杂过程;基因芯片是高通量基因筛选的有利手段。     

白细胞介素6诱导卵巢上皮性癌细胞对化疗药物产生耐药的机制研究

目的 探讨白细胞介素6(IL-6)诱导卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞对化疗药物产生耐药的机制及相关信号传导通路.方法 应用外源性重组IL-6短期处理或将正义IL-6基因(ssIL-6)稳定转染至A2780细胞(不表达IL-6但表达其受体、对顺铂和紫杉醇敏感),同时将反义IL-6基因(asIL-6)稳定转染至SKOV3细胞(高表达IL-6及其受体、对顺铂和紫杉醇耐药),应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、逆转录PCR(RT-PCR)技术及蛋白印迹法(western blot)观察IL-6是否影响卵巢癌细胞对顺铂和紫杉醇的敏感性,并对可能的信号传导通路进行研究.结果 (1)外源性重组IL-6处理A2780细胞后,对顺铂和紫杉醇的耐药倍数分别为6.25和7.31倍;ssIL-6转染A2780细胞后(内源性过表达IL-6),IL-6低、中、高表达细胞对顺铂的耐药倍数分别为7.13、7.47和8.34倍,对紫杉醇的耐药倍数分别为7.61、8.27和10.70倍;而asIL-6转染SKOV3细胞后(抑制内源性IL-6表达),IL-6中、高抑制表达细胞对顺铂的耐药倍数分别为0.15和0.10倍,对紫杉醇的耐药倍数分别为0.10和0.08倍,可恢复SKOV3细胞对顺铂和紫杉醇的敏感性.(2)外源性IL-6作用后,上调了A2780细胞中耐药相关基因MDR1和GST-π以及凋亡抑制基因bcl-2、bcl-xL和XIAP mRNA和蛋白的表达;与此相一致,ssIL-6转染的A2780细胞中MDR1、GST-π及bcl-2、bcl-xL、XIAP mRNA和蛋白的表达水平增加,而asIL-6转染的SKOV3细胞则明显降低.(3)有丝分裂原活化的蛋白激酶-细胞外信号调节激酶(MEK)抑制剂--PD98059和磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂--wortmannin能分别阻断IL-6诱导的卵巢癌细胞细胞外信号调节激酶(ERK)和蛋白激酶B(Akt)的活化作用,且两者均能阻断IL-6诱导的卵巢癌细胞对顺铂和紫杉醇产生的耐药,细胞生长明显减少.结论 IL-6诱导的卵巢癌细胞化疗耐药很可能与其上调卵巢癌细胞耐药相关基因MDR1、GST-π和凋亡抑制基因bcl-2、bcl-xL、XIAP的表达以及活化MEK/ERK和PI3K/Akt信号传导通路有关.     

S1P/S1PR对人卵巢癌SKOV3细胞的促血管生成作用的研究

目的:探究鞘氨醇-1-磷酸/鞘氨醇-1-磷酸受体(S1P/S1PR)对人卵巢癌SKOV3细胞促血管生成作用的影响和机制。方法:管腔形成实验探究S1P对人卵巢癌SKOV3细胞的促血管生成作用的影响;实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测S1P处理后的人卵巢癌SKOV3细胞中血管生成因子白细胞介素8(IL-8)、IL-6、血管内皮生长因子(VEGF)的变化情况;设计合成小干扰RNA(siRNA)干扰序列基因沉默SKOV3细胞中S1PR1、S1PR2和S1PR3的表达,蛋白质印迹(Western-blot)和qRT-PCR检测SKOV3细胞中S1PR的下调结果;qRT-PCR检测S1PR对SKOV3细胞IL-8、IL-6、VEGF表达的影响。结果:管腔形成实验结果显示,S1P处理后的SKOV3细胞培养上清液重悬人脐静脉内皮细胞融合细胞(EA.hy926),其管腔形成的数量多于对照组(t=3.667,P=0.021),表明S1P促进了人卵巢癌细胞SKOV3的促血管形成能力。S1P处理后的SKOV3细胞中血管生成因子IL-8、IL-6、VEGF mRNA的表达水平较对照组升高,差异有统计学意义(均P0.05)。S1PR1和S1PR3基因沉默可显著降低SKOV3细胞中IL-8、IL-6、VEGF的mRNA表达水平,差异有统计学意义(均P0.05),而S1PR2基因沉默后IL-8、IL-6、VEGF的mRNA变化不明显。结论:S1P通过S1PR1/3上调人卵巢癌SKOV3细胞中IL-8、IL-6、VEGF的表达,从而增强了SKOV3细胞的促血管生成作用,S1P/S1PR通路有望成为抑制卵巢癌生长的治疗新靶点。     

IDO与卡铂诱导卵巢癌耐药的免疫学研究

目的:通过卡铂诱导卵巢癌耐药的细胞系对免疫细胞功能影响的研究,从免疫学角度探讨耐药卵巢癌转移或复发的机制。方法:建立卵巢癌SKOV3细胞对卡铂耐药的细胞系SKOV3/CBP,ELISA法检测SKOV3和SKOV3/CBP细胞吲哚2,3双加氧酶(IDO)表达;将两组细胞分别与淋巴细胞、NK细胞及C8~+T细胞培养,MTT法检测淋巴细胞的增殖能力、LDH检测NK细胞的杀伤能力及ELISPOT检测C8~+T细胞的杀伤能力。结果:与SKOV3细胞株相比,耐药细胞株SKOV3/CBP内IDO表达明显增强(P0.05),且与其共培养的淋巴细胞的增殖能力、NK细胞的杀伤能力及CD8+T细胞的杀伤能力较SKOV3组降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论:卡铂耐药SKOV3细胞内IDO表达增加,其可通过降低免疫细胞作用的敏感性而发生免疫逃逸促进耐药肿瘤的转移和复发,IDO可作为卵巢癌卡铂耐药治疗新的靶点。     

莪术醇对人卵巢癌SKOV3细胞株JAK2/STAT3信号通路影响的研究

目的观察莪术醇对人卵巢癌SKOV3细胞株体外生长的影响及对SKOV3细胞株JAK2/STAT3信号通路基因表达的影响,探讨莪术醇治疗卵巢癌的分子机制。方法不同浓度莪术醇作用于人卵巢癌细胞株SKOV3,MTT法检测SKOV3细胞的增殖抑制率,实时荧光定量-PCR法检测SKOV3细胞中JAK2、STAT3基因表达水平。结果莪术醇对卵巢癌SKOV3细胞有明显的增殖抑制作用,其强度随药物作用时间及浓度的增加而增强,呈时间-剂量依赖性。实时荧光定量-PCR法检测证实莪术醇作用后SKOV3细胞中JAK2、STAT3基因表达受到明显抑制。结论莪术醇能明显抑制SKOV3细胞的体外增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能是通过降调节JAK2、STAT3基因的表达来实现的。     

抗人血管内皮生长因子发夹状核酶基因抑制卵巢癌细胞血管内皮生长因子表达

目的 :研究抗血管内皮生长因子发夹状核酶基因对人卵巢癌细胞血管内皮生长因子 (VEGF)表达的抑制作用 ,探讨卵巢癌基因治疗的新途径。方法 :人卵巢癌细胞SKOV3高表达VEGF ,将抗血管内皮生长因子发夹状核酶基因真核表达载体 (pcDNA3 RZ)转染人卵巢癌细胞SKOV3,经G4 18筛选获得阳性细胞克隆 ,RNA斑点杂交检测核酶基因是否在细胞中表达。采用免疫组化、间接免疫荧光、激光共聚焦显微镜荧光定量法及流式细胞仪结合间接免疫荧光检测转染前后细胞VEGF的表达情况。结果 :转染pcDNA3 RZ组细胞VEGF表达明显降低。结论 :抗人VEGF发夹状核酶基因真核表达载体可有效抑制卵巢癌细胞SKOV3中VEGF的表达 ,有望成为治疗卵巢癌的一种新方法。     

RNAi沉默卵巢癌耐药细胞株SKOV3/ADM内源H-ras基因表达对细胞增殖能力的影响

目的:构建靶向于卵巢癌耐药细胞株中高表达的H-ras癌基因的短发夹状RNA重组质粒,研究它对卵巢癌耐药细胞株SKOV3/ADM内源H-ras基因表达的抑制作用以及H-ras基因与卵巢癌发生和耐药的关系。方法:运用基因克隆技术构建靶向于H-ras基因的重组质粒pshRNA/H-ras并转染至卵巢癌耐药细胞株SKOV3/ADM,通过W est-ern blot、RT-PCR检测H-ras蛋白的表达及mRNA转录水平的变化;MTT法检测它对SK-OV3/ADM细胞增殖的抑制作用,AO/EB实验检测pshRNA/H-ras对SKOV3/ADM细胞凋亡的影响。结果:构建的两重组质粒pshRNA/H-ras1、2均能明显抑制H-ras基因的表达。蛋白质印迹结果表明,转染重组质粒pshRNA/H-ras1、2的SKOV3/ADM细胞靶蛋白的抑制率分别为86.87%和92.21%,RT-PCR检测到H-ras基因mRNA转录水平下降;pshR-NA/H-ras1、2明显抑制SKOV3/ADM细胞的增殖,MTT检测转染48h后的抑制率分别为62.4%和47.9%,AO/EB实验观测到转染24h和48h的细胞凋亡率分别为20.3%和35.6%。结论:H-ras基因在耐药的卵巢癌细胞增殖与凋亡过程中发挥作用,重组质粒pshRNA/H-ras可有效地抑制SKOV3/ADM细胞内源H-ras基因的表达和mRNA的转录,并抑制细胞的增殖和促进凋亡的发生,为化疗耐受的肿瘤细胞提供了新的基因治疗手段。     

白细胞介素-2基因转导对卵巢癌细胞SKOV3形态及增殖的影响

OBJECTIVE: To study the effect of interleukin-2 (IL-2) gene transfer on the proliferation and morphology of ovarian cancer cell line SKOV3. METHOD: IL-2 gene was introduced into ovarian cancer cell line SKOV3. The morphologic changes, mitosis, proliferation curve, 3H-uptaking and cell cycle were studied. RESULTS: IL-2 cDNA, 490 bp, was transduced. IL-2 gene expression was detected. IL-2 activity was 30-318 U/10(6) cells/24hr. IL-2 gene modified cell is squamas like with smaller nucleus/cytoplasm ratio, larger cell area and more homogeneous. The ultrastructural study showed that the cytoplasma of IL-2 gene modified cells is markedly vacuolized and the chromatin is condensed. There was less mitosis found in SKOV3/IL-2 cells. SKOV3/IL-2 cell proliferate more slowly, the doubling time prolonged from 38.40 hr to 65.36 hr, 3H-uptaking decreased 52.3% of the parent cell. The cell cycle study showed that SKOV3/IL-2 cell was blocked to phase G1/G0. CONCLUSIONS: The retrovirous vector can transduce Il-2 gene into ovarian cancer cell line SKOV3 effectly. IL-2 gene transfer can induce morphologic changes of SKOV3 cells, which may indicate the biologic behavior changes of the targets. IL-2 gene transfer can induce the proliferation inhibition of SKOV3 cells.     

白细胞介素2基因转导对卵巢癌细胞系SKOV3免疫原性的影响

目的 探讨白细胞介素２（ＩＬ－２）基因转导对卵巢癌细胞系ＳＫＯＶ３免疫原性的影响。方法 应用流式细胞术,测定ＳＫＯＶ３细胞组织相容性白细胞抗原（ＨＬＡ）ＨＬＡ－ＡＢＣ、ＨＬＡ－ＤＱ及ＨＬＡ－ＤＲ分子的表达,＾５１Ｃｒ－４ｈ释放实验显示ＳＫＯＶ３、ＳＫＯＶ３／Ｎｅｏ、ＳＫＯＶ３／ＩＬ－２细胞对自然杀伤（ＮＫ）细胞和淋巴因子激活杀伤（ＬＡＫ）细胞杀伤的敏感性。结果 ＳＫＯＶ３／ＩＬ－２细胞中ＨＬＡ－Ａ     

IL-2基因转移对卵巢癌细胞系SKOV3粘附性的影响

目的：研究ＩＬ－２基因转移对卵巢癌ＳＫＯＶ３细胞系粘附性的影响。方法：细胞对塑料基质、细胞基底膜成分的粘附实验,流式细胞术测定ＣＤ４４Ｈ的表达。结果：ＥＤＴＡ介导的细胞分离实验表明,ＳＫＯＶ３／ＩＬ－２细胞对塑料基质的粘附能力明显下降（Ｐ＜０．０１）;对基质及基底膜成分的粘附实验表明,ＳＫＯＶ３／ＩＬ－２细胞对Ⅳ型胶原和ｍａｔｒｉｇｅｌ的粘附能力下降,但对ＬＮ、ＦＮ的粘附能力无明显改变;粘附分子ＣＤ４４Ｈ的表达：ＳＫＯＶ３、ＳＫＯＶ３／Ｎｅｏ、ＳＫＯＶ３／ＩＬ－２组细胞粘附分子ＣＤ４４Ｈ阳性细胞百分率分别为７６．２％、６６．７％和３７．８％,ＳＫＯＶ３／ＩＬ－２组明显降低（Ｐ＜０．００１）。结论：ＩＬ－２基因修饰可使卵巢癌细胞系ＳＫＯＶ３粘附能力下降。     

人卵巢癌多药耐药细胞株的建立及初步鉴定

目的：为探讨卵巢癌细胞多药耐药的发生机制,找出克服卵巢癌耐药的方法而建立人卵巢癌多药耐药细胞株。方法：用阿霉素为诱导剂,对人卵巢癌细胞株进行逐步长期诱导培养,以建立多药耐药细胞并进行鉴定。结果：成功地建立了人卵巢癌多药耐药细胞株SKOV3/ADM,此细胞株除对阿霉素耐药外,对长春碱类、鬼臼类毒素、足叶乙甙、威猛鬼臼噻吩苷以及蒽环类药物米托蒽醌等有明显的交叉耐药,对博莱霉素和丝裂毒素的耐受性亦有增加,产生多药耐药的机制是MDR1基因过度表达致细胞内阿霉素聚集量减少。结论：SKOV3/ADM细胞具有典型的多药耐药表型,为进一步研究人卵巢癌多药耐药机制和筛选耐药逆转剂提供了实验工具。     

脂质体转染白介素-12基因至卵巢癌SKOV3细胞检测VEGF表达及抗肿瘤作用探讨

目的:观察含mIL-12基因的质粒转染至SKOV3卵巢癌细胞,效应细胞存在情况下对卵巢癌细胞株血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:用脂质体转染技术将基因质粒及空质粒转染至SKOV3卵巢癌细胞(SKOV3/IL-12)及SKOV3/neo;用ELISA法检测IL-12及INF-γ的表达;用逆转录聚合酶联反应(RT-PCR)半定量法测定SKOV3/IL-12+S(脾细胞)0,12,24,36,48,60hVEGFmRNA含量;用ELISA法测定细胞培养上清液中VEGF蛋白含量及其抑制率。结果:基因转染至SKOV3可检测到IL-12蛋白表达;分泌的IL-12蛋白具有活性,使脾细胞产生INF-γ,12h时迅速出现,作用后24h表达量最高;SKOV3/IL-12细胞与脾细胞作用12h后即出现VEGFmRNA表达抑制,24h达到高峰,与对照组有显著差异(P0.05);培养24h后上清中VEGF蛋白含量减少,与对照组有显著差异(P0.05)。结论:将IL-12基因转染至SKOV3卵巢癌细胞并表达IL-12;分泌的IL-12蛋白具有活性,使脾细胞产生INF-γ;SKOV3/IL-12与效应细胞脾细胞作用后产生INF-γ能在核酸水平下调VEGF并能抑制VEGF蛋白的表达。     

S1P/S1PR对人卵巢癌SKOV3细胞的促血管生成作用的研究

目的：探究鞘氨醇-1-磷酸/鞘氨醇-1-磷酸受体（S1P/S1PR）对人卵巢癌SKOV3细胞促血管生成作用的影响和机制。方法：管腔形成实验探究S1P对人卵巢癌SKOV3细胞的促血管生成作用的影响；实时定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测S1P处理后的人卵巢癌SKOV3细胞中血管生成因子白细胞介素8（IL-8）、IL-6、血管内皮生长因子（VEGF）的变化情况；设计合成小干扰RNA（siRNA）干扰序列基因沉默SKOV3细胞中S1PR1、S1PR2和S1PR3的表达，蛋白质印迹（Western-blot）和qRT-PCR检测SKOV3细胞中S1PR的下调结果；qRT-PCR检测S1PR对SKOV3细胞IL-8、IL-6、VEGF表达的影响。结果：管腔形成实验结果显示，S1P处理后的SKOV3细胞培养上清液重悬人脐静脉内皮细胞融合细胞（EA.hy926），其管腔形成的数量多于对照组（t=3.667，P=0.021），表明S1P促进了人卵巢癌细胞SKOV3的促血管形成能力。S1P处理后的SKOV3细胞中血管生成因子IL-8、IL-6、VEGF mRNA的表达水平较对照组升高，差异有统计学意义（均P＜0.05）。S1PR1和S1PR3基因沉默可显著降低SKOV3细胞中IL-8、IL-6、VEGF的mRNA表达水平，差异有统计学意义（均P＜0.05），而S1PR2基因沉默后IL-8、IL-6、VEGF的mRNA变化不明显。结论：S1P通过S1PR1/3上调人卵巢癌SKOV3细胞中IL-8、IL-6、VEGF的表达，从而增强了SKOV3细胞的促血管生成作用，S1P/S1PR通路有望成为抑制卵巢癌生长的治疗新靶点。     

多药耐药基因反义寡脱氧核苷酸对卵巢癌细胞株SKOV3多药耐药性逆转的作用

目的 探讨多药耐药基因（ｍｄｒ１）反义寡脱氧苷酸（ＡＳＯＮ）对卵巢癌细胞多药耐药性的逆转作用。方法 以人ｍｄｒ１基因转导产生的耐药卵巢癌ＳＫＯＶ３／ｍｄｒ１细胞为模型,采用２５０μｇ／ｍｌ ｍｄｒ１－ＡＳＯＮ,作用于ＳＫＯＶ３／ｍｄｒ１细胞,采用流式细胞术及罗丹明１２３排出试验,检测ＳＫＯＶ３／ｍｄｒ１细胞ｍｄｒ１基因产物Ｐ－糖蛋白（Ｐ－ｇｐ）的阳性率及其功能。并进行ＳＫＯＶ３／ｍｄｒ１细胞集落培养,观察耐药性。结果 ｍｄｒ１－ＡＳＯＮ作用后,ＳＫＯＶ３／ｍｄｒ１细胞的Ｐ－ｇｐ阳性率由３８．９％减少至２１．３％（Ｐ〈０．０１）,ＳＫＯＶ３／ｍｄｒ１细胞内罗丹明的潴留率,由３２．１％增加至５０．７％（Ｐ〈０．０１）。ＳＫＯＶ３／ｍｄｒ１细胞加ｍｄｒ１－ＡＳＯＮ和空白对照细胞形成抗性细胞集落的相对百分数,在泰素浓度     

RNA干扰技术沉默survivin基因逆转卵巢癌细胞株SKOV3/ADM耐药性的研究

目的检测survivin基因在卵巢上皮性癌(卵巢癌)耐药细胞株SKOV3/ADM及其亲本细胞株SKOV3中的表达水平,探讨以survivin基因为靶向的RNA干扰(RNA i)能否有效沉默survivin基因在SKOV3/ADM细胞中的表达,并能否有效逆转SKOV3/ADM细胞对化疗药物的耐药性。方法半定量RT-PCR、免疫荧光法检测survivin mRNA、蛋白在SKOV3/ADM及SKOV3细胞中的表达。以survivin基因为靶向的重组质粒pshRNA-survivin及紫杉醇作用于SKOV3/ADM细胞,将SKOV3/ADM细胞分为4组,即对照组、RNA i组、紫杉醇组、RNA i+紫杉醇组,RT-PCR技术检测各组细胞的survivinmRNA表达水平,吖啶橙/溴乙锭(AO/EB)荧光染色法及末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸标记法(TUNEL)检测各组细胞的凋亡情况。结果survivin mRNA在SKOV3/ADM、SKOV3细胞中的表达水平分别为99.1%、75.3%,SKOV3/ADM、SKOV3细胞的荧光细胞数分别为(59±5)、(42±3)个,两种细胞间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。RNA i后SKOV3/ADM细胞中mRNA的表达水平由99.1%降低至7.9%。AO/EB荧光染色法、TUNEL法检测各组细胞凋亡数,紫杉醇组为(10.2±1.0)、(9.8±0.8)个,RNA i组为(48.5±4.9)、(49.5±4.3)个,RNA i+紫杉醇组为(71.5±6.8)、(68.3±5.7)个,RNA i+紫杉醇组与RNA i组比较,差异有统计学意义(P<0.05),RNA i+紫杉醇组与紫杉醇组比较,差异也有统计学意义(P<0.05)。结论survivin基因在SKOV3/ADM细胞中的表达显著高于SKOV3细胞。以survivin基因为靶向的RNA i可有效抑制SKOV3/ADM细胞中survivin基因的表达,有效增加了SKOV3/ADM细胞对化疗药物紫杉醇的敏感性,显著上调了SKOV3/ADM细胞的凋亡活性。