姜黄素对TK6细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用研究

目的 :　观察姜黄素 (curcumin)对人的类淋巴母细胞 TK6细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用 ,为进一步探讨其抗诱变、抗肿瘤的机制和开发利用提供理论依据。方法 :　姜黄素处理TK6细胞 ,采用 MTT比色分析法、3 H- Td R掺入法和细胞周期测定以及细胞超微结构观察和流式细胞分析。结果 :　 2 0 μmol/L的姜黄素处理细胞 2 4 h,即可产生显著的细胞增殖抑制作用和凋亡诱导作用 ,且有剂量和时间依赖性。姜黄素引起细胞的凋亡主要在细胞周期的 DNA合成期 (S期 ) ,将细胞周期阻滞在静止期和 DNA合成前期 (G0 /G1期 )。结论 :　姜黄素对 TK6细胞具有显著的增殖抑制作用和凋亡诱导作用。     

萝卜硫烷对乳腺癌细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡的影响及作用机制研究

目的:研究萝卜硫烷(sulforaphane,SUL)对不同类型乳腺癌细胞增殖和细胞周期细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:采用MTT法、流式细胞术和Western印迹法,研究不同浓度受试物对F3Ⅱ、MCF-7、MDA-MB-231和ZR-75-1细胞增殖抑制、细胞周期阻滞、F3Ⅱ细胞凋亡和p34cdc2及Cdc25C表达的影响。结果:(1)SUL对所选的四个细胞系均有很强的增殖抑制作用,其中雌激素正响应型(ERP)细胞对SUL的敏感性明显强于雌激素负响应型(ERN)细胞和扩散性较强的F3Ⅱ细胞;(2)SUL对F3Ⅱ细胞和两种ERP细胞均呈现G2/M期阻滞作用,而对ERN细胞周期则无影响;(3)SUL阻滞F3Ⅱ细胞从G2期向M期转化的作用机制是提高Cdc2的磷酸化水平,降低Cdc25C磷酸化酶的表达,从而抑制细胞周期素B1-Cdc2复合物激酶的去磷酸化作用;(4)在实验条件下,SUL不引起F3Ⅱ细胞凋亡。结论:SUL对四个乳腺癌细胞系细胞增殖抑制活性和细胞周期影响存在明显的差异,不引起F3Ⅱ细胞凋亡。对F3Ⅱ细胞周期G2/M阻滞作用的机制是提高Cdc2的磷酸化水平,降低Cdc25C磷酸化酶的表达。     

大豆苷原对体外培养人胃癌细胞增殖和细胞周期的影响

目的:了解二羟异黄酮对胃癌细胞有无促增殖与诱导凋亡作用。方法:以不同浓度的二羟异黄酮处理人胃癌细胞系MGC-803细胞。然后分别用MTT法测定细胞增殖情况、流式细胞仪和琼脂糖凝胶电泳测定细胞周期和细胞凋亡等。结果:MTT 结果显示:二羟异黄酮对胃癌细胞具有促进和抑制增殖的双相作用-在低浓度(0.1-1 μmol/L)时促进细胞生长,在较高浓度(10-100 μmol/L)时对细胞生长则有抑制作用。流式细胞术结果显示:癌细胞群阻滞在G1期,没有明显凋亡峰的出现;凝胶电泳也末检测到明显的DNA阶梯状条带。结论:二羟异黄酮对体外培养的胃癌细胞的生长有双相作用,较高浓度可抑制胃癌细胞的生长并使细胞阻滞在G1期,而无诱导细胞凋亡的作用。     

大蒜素影响子宫颈癌Hela细胞增殖的实验研究

目的探讨大蒜素对宫颈癌Hela细胞增殖的影响。方法不同浓度的大蒜素作用于体外培养的Hela细胞,倒置显微镜下观察Hela细胞的形态学变化,采用MTT法检测大蒜素对Hela细胞增殖抑制能力,流式细胞术分析大蒜素对Hela细胞凋亡的影响。结果 MTT显示大蒜素能抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖,并具有时间-剂量依赖性;流式细胞术测定结果显示50μg/ml浓度大蒜素可明显诱导Hela细胞凋亡,并将细胞周期阻滞在G2/M期。结论大蒜素对人宫颈癌Hela细胞增殖有抑制作用,其抑制作用与诱导Hela细胞凋亡和阻抑细胞周期有关。     

塞来昔布抑制PI3K-Akt信号转导通路及COX-2表达的作用研究

目的:观察塞来昔布降调节COX-2的表达,诱导宫颈癌HeLa细胞的凋亡作用及阻止PI3K-Akt信号转导的可能机制。方法:采用MTT法检测塞来昔布对HeLa细胞的增殖抑制作用,应用流式细胞术检测塞来昔布对HeLa细胞增殖周期和凋亡的影响,并用免疫组化SP法和RT-PCR法检测塞来昔布对细胞PI3K-Akt信号转导通路的影响。结果:塞来昔布抑制HeLa细胞增殖和诱导HeLa细胞的凋亡作用均呈剂量和时间依赖性,经不同浓度的塞来昔布处理24 h后,HeLa细胞周期的G1期、G2/M期细胞比例明显增多,S期细胞比例明显下降,细胞被阻滞于G2/M期。塞来昔布能阻止PI3K-Akt的信号转导,并呈浓度和时间依赖性。结论:塞来昔布在体外能下调COX-2的表达,抑制HeLa细胞的增殖,并诱导其凋亡,其作用机制与阻滞细胞周期于G2/M期及阻止PI3K-Akt信号转导通路有关。     

二十二碳六烯酸联合顺铂对人食管癌耐药细胞周期及凋亡的影响

目的探讨二十二碳六烯酸(DHA)与顺铂(DDP)联用对食管癌细胞Eca109/DDP增殖、周期和凋亡的影响。方法采用递增药物质量浓度持续作用诱导法建立耐DDP的食管癌细胞Eca109/DDP。DHA联合DDP作用于Eca109/DDP细胞,MTT法检测Eca109/DDP细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡。结果递增药物质量浓度持续作用诱导6个月后,细胞可以在含1μg/ml DDP的培养液中正常生长,其对DDP的耐药指数为15.886,所得细胞命名为耐DDP的食管癌细胞Eca109/DDP。单用DHA浓度≤1.560μg/ml时,对Eca109/DDP细胞无明显抑制作用(P0.05),但与DDP 1μg/ml合用能显著促进DDP抑制Eca109/DDP细胞的增殖(P0.05),并促进DDP诱导Eca109/DDP细胞周期改变、细胞凋亡增加。细胞周期表现为G1期细胞明显增多(P0.05),S期细胞、G2期细胞明显减少(P0.05);细胞的凋亡率明显增加(P0.05)。结论 DHA促进DDP抑制Eca109/DDP细胞增殖可能与改变Eca109/DDP细胞周期、增加细胞凋亡有关。     

姜黄素对人肺成纤维细胞凋亡及细胞周期的影响

目的研究姜黄素对人肺成纤维细胞(human lung fibroblasts,HLFs)体外生长、细胞周期及凋亡的影响。方法应用CCK-8、Annexin-V/PI、PI流式细胞分析术、免疫印迹法,检测姜黄素对细胞的增殖、凋亡、细胞周期和Bax蛋白表达的影响。结果姜黄素对HLFs的增殖有抑制作用,可促进HLFs的早期凋亡,对细胞周期可产生G2/M期阻滞,增加HLFs的Bax蛋白的表达。结论姜黄素可抑制HLFs的增殖并能诱导其凋亡,其机制可能与细胞的G2/M期阻滞及凋亡相关蛋白的表达增强有关。     

维生素D类似物EB1089对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨维生素D类似物EB1089对肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法体外培养维生素D3受体(VDR)阳性和阴性的肝癌细胞株HepG2和HCCT细胞,培养时添加100、10和1nmol/LEB1089,分别作用2、4和6d后,用四唑蓝比色实验(MTT)、平板克隆形成实验检测细胞的存活和生长;用反转录PCR(RTPCR)检测VDRmRNA的表达;用流式细胞仪和电子显微镜检测细胞凋亡。结果EB1089对VDRmRNA表达阳性的HepG2细胞的抑制率为175%～721%,对VDRmRNA表达阴性的HCCT细胞没有抑制作用;电镜结果显示EB1089可诱导HepG2细胞凋亡,流式细胞仪结果显示凋亡细胞的百分比为214%,并可阻滞细胞周期于G1期。结论EB1089对人肝癌细胞株HepG2的增殖具有抑制作用,可通过VDR受体抑制人肝癌细胞的增殖,并可诱导HepG2细胞凋亡。     

苯丁酸钠对宫颈癌Hela细胞增殖及p21WAF1/CIP1和CDK7表达的影响

目的:探讨苯丁酸钠(SPB)在体外诱导宫颈癌Hela细胞生长抑制和细胞周期阻滞以及对p21WAF1/CIP1和CDK7基因表达的影响。方法:体外培养Hela细胞,应用MTT法检测苯丁酸钠对Hela细胞增殖的影响,流式细胞仪分析细胞周期的变化,半定量RT-PCR法检测细胞p21WAF1/CIP1和CDK7基因表达水平。结果:苯丁酸钠明显抑制Hela细胞增殖,呈时间-剂量依赖性;苯丁酸钠诱导Hela细胞周期阻滞于G0/G1期,使S期细胞数减少;苯丁酸钠促进抑癌基因p21WAF1/CIP1的表达,对CDK7基因的表达有抑制作用。结论:苯丁酸钠在体外抑制宫颈癌Hela细胞的增殖,使之阻滞于G0/G1期,可能与上调p21WAF1/CIP1基因表达、下调CDK7基因表达有关。     

辐射诱导蛋白ATF3功能研究

目的 阐明辐射损伤中ATF3蛋白诱导表达的生物学功能及其调控机制,为探讨辐射损伤防护的新方法提供依据.方法 HCT116(Tet-off)细胞分为4组,即对照组(细胞未进行任何处理)、诱导组(加入诺考达唑诱导ATF3蛋白表达)、照射组(单纯接受射线照射)、照射+诱导组(细胞加入诺考达唑诱导ATF3蛋白表达后接受射线照射).流式细胞术分析细胞周期变化.Caspase decay分析细胞凋亡.克隆形成率测定细胞增殖.结果 与对照组相比较,诱导组细胞周期出现G1期阻滞.表达ATF3蛋白的细胞内出现Caspase 3和多聚ADP-核糖聚合酶(PARP)裂解,对照组则未出现2种蛋白的裂解.诱导组的细胞克隆形成率(15.09％)低于对照组(21.13％),但高于照射组(2.25％)和照射+诱导组(5.24％).结论 ATF3表达可诱导细胞周期G1阻滞、细胞凋亡和增殖能力下降,且对于受照射的细胞可能有一定的辐射保护作用.     

大蒜素对子宫颈癌Hela细胞增殖的影响

目的:探讨大蒜素对宫颈癌Hela细胞增殖的影响。方法:不同浓度的大蒜素作用于体外培养的Hela细胞,倒置显微镜下观察Hela细胞的形态学变化;采用MTT法检测大蒜素对Hela细胞增殖抑制能力,采用流式细胞术分析大蒜素对Hela细胞凋亡的影响。结果:MTT显示大蒜素能抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖,并具有时间-剂量依赖性;流式细胞术测定结果显示50μg/ml浓度的大蒜素可明显诱导Hela细胞凋亡,并将细胞周期阻滞在G2/M期。结论:大蒜素对人宫颈癌Hela细胞的生长有抑制作用,其抑制作用与诱导Hela细胞凋亡和阻抑细胞周期有关。     

黄绿青霉素对人脐静脉血管内皮细胞的毒性及硒的保护作用

目的观察黄绿青霉素(citreoviridin,CIT)对血管内皮细胞(vascular endothelial cells,VEC)的毒性及硒(selenium,Se)的保护作用。方法体外培养人脐静脉血管内皮细胞(human vascular endothelial cell,HUVEC),以亚硒酸钠(Na_2SeO_2)和黄绿青毒素(CIT)处理,分为:对照;Se(培养基含Se元素0.1mg/L);CIT低剂量(含0.2mg/L CIT);CIT高剂量(含0.4 mg/L CIT);Se+CIT(0.2mg/L Se和0.4mg/L CIT)5组。药物作用12 h后分别用MTT法检测细胞增殖活性,AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞周期。结果 CIT组细胞增殖活性低于对照组,Se+CIT组细胞增殖活性高于CIT组(P0.05);CIT组细胞凋亡率高于对照组,Se+CIT组细胞凋亡率低于CIT组(P0.05);CIT组细胞发生G0/G1期细胞周期阻滞,Se+CIT组G0/G1期细胞周期阻滞不明显。结论 CIT可促进细胞凋亡,通过G0/G1期细胞周期的阻滞作用抑制HUVECs增殖活。     

垂体肿瘤转化基因1对结肠癌SW480细胞增殖的影响及其机制研究

目的 研究垂体肿瘤转化基因 1(Pituitary Tumor Tansforming Gene1,PTTG1)过表达对人结肠癌细胞SW480增殖和周期的影响及其可能机制。方法 采用脂质体转染法将pcDNA3.1(+)-PTTG1及空载pcDNA3.1(+)质粒转染人结肠癌SW480细胞,G418法筛选阳性克隆。Western blot法检测PTTG1和cyclin D、cyclin E、p21的表达。MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期。结果 （1）成功获得PTTG1高表达的SW480细胞pcDNA3.1(+)-PTTG1及对照pcDNA3.1(+)细胞,Western blot结果显示pcDNA3.1(+)-PTTG1细胞PTTG1表达量分别为pcDNA3.1(+)细胞和SW480细胞的3.58倍和3.42倍;（2）过表达PTTG1基因后,SW480细胞周期改变,G0/G1期细胞减少而S期和G2/M期细胞增加;细胞周期调控蛋白cyclin D和cyclin E表达升高,p21表达降低;SW480细胞增殖显著性加快。（3） 过表达PTTG1基因后,SW480细胞中PI3K/AKT信号活化增强,使用PI3K/AKT信号抑制剂LY29400干预后,细胞增殖减弱,周期蛋白cyclin D和cyclin E表达降低,p21表达升高。结论 PTTG1基因过表达可能通过活化PI3K/AKT信号加速SW480细胞从G1期向S期的转化促进细胞增殖,提示PTTG1蛋白可能成为结肠癌治疗的一个潜在靶点。     

三氧化二砷诱导人横纹肌肉瘤RD细胞株凋亡的实验研究

[目的]研究三氧化二砷(As2O3)体外抑制人胚胎型横纹肌肉瘤细胞株RD(RD细胞株)增殖及诱导凋亡的作用. [方法]以不同浓度的As2O3处理RD细胞株,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞的DNA含量及凋亡率. [结果]4～8 μmol/L hs2O3能以时间剂量依赖的方式抑制RD细胞株的增殖,并诱导其凋亡,在流式细胞仪DNA线条图上出现典型的亚二倍体“凋亡峰”,细胞周期阻滞于G0/G1期,S期和G2/M期细胞减少;低浓度As2O3(＜2μmol/L)则有轻微促增殖作用,细胞周期向S期和G2/M期集中,G0/G1期细胞减少. [结论]As2O3浓度≥4μmol/L时,可明显抑制RD细胞株的生长并促进细胞凋亡,其临床应用还需进一步研究.     

番茄红素对前列腺癌细胞PC-3增殖和细胞周期的影响

目的研究番茄红素对体外培养的雄激素非依赖性前列腺癌细胞PC-3的抑制作用及其可能的作用机制。方法采用MTT法和H3-TdR掺入法观察番茄红素对癌细胞增殖的影响,流式细胞仪观察同步化的细胞经番茄红素作用后细胞周期及凋亡的变化,RT-PCR检测cyclin D1、bcl-2、bax的mRNA的表达的变化。结果番茄红素抑制PC-3细胞的增殖和DNA合成、诱导其凋亡、改变细胞周期分布(使G0/G1期细胞增多、而S期和G2/M期细胞减少)。RT-PCR结果显示,cyclin D1和bcl-2的mRNA表达水平下调,而bax的mRNA表达水平上调。上述作用呈剂量效应关系。结论番茄红素可诱导PC-3细胞凋亡、改变细胞周期分布、影响cyclin D1、bcl-2、bax的mRNA的表达,从而抑制肿瘤细胞增殖。     

PI3K/Akt信号通路对胃癌细胞SGC7901细胞化疗效果的影响

目的运用磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂(phosphatidylinositol 3-kinases,PI3-K)LY294002[2-(4-吗啉基)-8-苯基-4氢-1-苯并吡喃-4-酮]作用于胃癌细胞系SGC7901,探讨抑制PI3K/Akt信号转导通路对胃癌细胞化疗敏感性的影响。方法采用MTT比色法,流式细胞术检测5-FU、DDP及ADM单独或联合PI3K抑制剂LY294002对人胃癌细胞SGC7901的抑制率、凋亡率。并分析单独及联合应用LY294002对SGC7901细胞周期的影响。Western-blot检测单独及联合化疗药后P-Akt蛋白在SGC7901细胞中的表达水平。结果单独使用化疗药5-FU、DDP及ADM均可抑制SGC7901细胞增殖、诱导其凋亡。当化疗药与抑制剂联合应用,对细胞的抑制作用明显增强,促凋亡作用增强,与对照组比较(P0.05)。细胞周期同步分析显示,单独用药均可将SGC7901细胞阻滞于G0/G1期。联合使用抑制剂使处于G0/G1期细胞增加。Western blot显示化疗药上调P-Akt蛋白的表达,联合使用抑制剂后SGC7901细胞P-Akt蛋白的表达与未使用抑制剂比较减弱,差异有统计学意义(P0.05)。结论阻断PI3K/Akt信号通路可提高化疗药5-FU、DDP及ADM对胃癌细胞株SGC7901的抑制率,凋亡率并使阻滞于G0/G1期细胞增多;LY294002通过阻断PI3K/Akt信号通路,抑制P-Akt蛋白表达,增强化疗药的敏感性;LY294002阻断PI3K/Akt信号通路对5-FU、DDP、ADM治疗胃癌有一定的协同或增强作用。     

曲古菌素A对胃癌细胞SGC-7901增殖抑制的研究

目的:研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A(TSA)对胃癌细胞SGC-7901增殖活性的抑制作用。方法:采用不同浓度的TSA处理胃癌细胞SGC-7901,MTT法检测药物作用前后的细胞增殖情况。流式细胞仪检测TSA处理前后细胞周期的变化。结果:75 ng/ml TSA在48 h时就出现明显抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖。抑制由12 h至72 h显著增加,细胞周期检测发现75 ng/ml TSA即可导致细胞G2期阻滞,抑制细胞增殖。结论:TSA可抑制体外胃癌细胞SGC-7901的生长,诱导SGC-7901细胞出现G2期阻滞。     

菹草类胡萝卜素对Hela细胞增殖与凋亡的影响

目的研究菹草类胡萝卜素提取物(carotenoids extracts from Potamogeton crispus L.,CEPC)对人宫颈癌Hela细胞株增殖和凋亡的影响。方法采用MTT法、流式细胞术(FCM)、荧光倒置显微镜和激光共聚焦显微镜(LSCM)观察等手段,研究不同浓度受试物对Hela细胞增殖抑制、细胞周期阻滞、细胞形态学变化及胞内Ca2+浓度变化的影响。结果CEPC对Hela细胞增殖有明显的抑制作用;呈现G2/M期阻滞。荧光显微镜和LSCM观察到细胞核浓缩等典型的细胞凋亡形态特征。处理组细胞内Ca2+浓度显著升高。结论CEPC对Hela细胞有生长抑制作用,诱导细胞凋亡是这种作用的主要形式,胞内Ca2+浓度升高可能是细胞凋亡的作用机制之一。     

Wortmannin抑制PI3K途径对白血病细胞周期特异性及BCL-2蛋白表达影响的研究

目的探讨Woltmannin抑制PI3K途径对K562、NB4、HL60细胞周期特异性、BCL-2蛋白表达的影响。探明PI3K途径在K562、NB4、HL60细胞周期、细胞凋亡、BCL-2蛋白表达中的不同作用。方法用PI3K特异抑制剂Wortmannin抑制PI3K途径．AraC诱导细胞凋亡，药物作用214h后，细胞经DNA特异性荧光染色，用流式细胞仪(FCM)检测细胞DNA含量、BCL-2蛋白表达。Multicyele Verson 4．00软件分析细胞DNA含量直方图及细胞周期、BCL-2蛋白表达。观察各细胞系增殖周期、细胞凋亡的变化。结果K562、NB4、HL60细胞经Wortmannin、Ara-C、Wortmannin Ara-C作用24h后细胞出现DNA含量低于G1期的亚二倍体峰(亚G1期细胞)这一凋亡细胞的特征性改变，实验组细胞增殖指数(PI)明显低于对照组，凋亡百分比显著增加。Wortmannin可以通过抑制PI3K通路使K562细胞阻滞于G1期。作用24h后细胞实验组细胞BCL-2蛋白表达较对照组降低，说明Wortmannin可促进K562细胞的凋亡。结论Wortmannin可以通过抑制PI3K通路抑制K562细胞的增殖。并可以通过抑制PBK通路使K562细胞阻滞于GI期。Wortmannin可抑制K562细胞的BCL-2蛋白表达，促进K562细胞的凋亡。Wortmannin属于细胞周期特异性药物。     

FTY720对人乳腺癌MCF-7细胞、喉癌Hep-2细胞增殖的影响

目的:探讨FTY720抑制人乳腺癌MCF-7细胞和喉癌Hep-2细胞增殖作用。方法:将人乳腺癌MCF-7细胞和喉癌Hep-2细胞用不同浓度FTY720作用48 h,MTT法检测细胞活性,流式细胞术检测其对细胞周期及凋亡率的影响。结果:MTT结果显示,FTY720对乳腺癌MCF-7细胞和喉癌Hep-2细胞增殖均有抑制作用,而且对喉癌Hep-2细胞抑制作用的浓度依赖性高于对乳腺癌细胞的作用;流式细胞术检测结果显示,FTY720可将乳腺癌MCF-7细胞阻滞于G1期,将喉癌Hep-2细胞阻滞于G2/M期,并明显促进乳腺癌MCF-7细胞凋亡。结论:一定浓度的FTY720能明显抑制体外培养的乳腺癌和喉癌细胞增殖,调节其细胞周期,诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡。