mTOR抑制剂AZD2014对肝癌细胞的增殖抑制作用及其机制研究

目的：初步探讨mTOR抑制剂AZD2014对肝癌细胞的增殖抑制作用及其机制。方法：先采用CCK-8法检测不同浓度的AZD2014（10、100、500、1 000 nmol/L）对肝癌细胞增殖的作用,再分别采用荧光定量PCR和Western blot法检测肝癌细胞中含植物同源结构和环指域泛素样蛋白1（UHRF1）mRNA和蛋白的表达水平。结果：细胞增殖实验结果显示,10、100、500、1 000 nmol/L的AZD2014均可显著抑制肝癌细胞的增殖能力,抑制程度与其浓度呈正相关（P < 0.05）;荧光定量PCR和Western blot检测结果显示,500和1 000 nmol/L的AZD2014可显著降低肝癌细胞内UHRF1 mRNA及蛋白的表达水平。结论：AZD2014可能通过抑制肝癌细胞内UHRF1的表达水平来抑制肝癌细胞的增殖能力。     

细胞分裂周期7蛋白在肝癌组织的表达及其对肝癌细胞增殖和侵袭的影响

目的 检测细胞分裂周期7(CDC7)蛋白在人肝癌组织的表达,探讨CDC7过表达对肝癌细胞增殖和侵袭的影响。方法 实时定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测CDC7 mRNA在肝癌组织和癌旁组织的表达,检测CDC7 mRNA在肝癌细胞系和正常肝脏细胞中的表达。Western blot检测CDC7蛋白在肝癌组织和癌旁组织中的表达,检测CDC7蛋白在肝癌细胞系和正常肝脏细胞中的表达水平。利用慢病毒载体构建稳定过表达CDC7的肝癌HCCLM3和SMMC 7721细胞株。细胞克隆实验和CCK-8法检测CDC7过表达对肝癌细胞增殖的影响。Transwell实验和划痕实验检测CDC7过表达对肝癌细胞侵袭迁移的影响。结果 与癌旁组织相比,CDC7 mRNA和蛋白在肝癌组织中表达水平显著升高(P＜0.001);与正常肝细胞相比,肝癌细胞系的CDC7 mRNA和蛋白表达水平显著增高(P＜0.001);CCK-8法、细胞克隆实验说明CDC7过表达会明显增强肝癌细胞的增殖能力;划痕实验、Transwell实验说明CDC7过表达会明显提高肝癌细胞的侵袭能力。结论 CDC7蛋白在人肝癌组织高表达,其过表达促进肝癌细胞的增殖和侵袭能力。     

UHRF1通过调控细胞自噬抑制肺腺癌细胞增殖的分子机制研究

目的 探讨泛素样含PHD和环指结构域1(Ubiquitin like with PHD and ring finger domains 1, UHRF1)在肺腺癌(Lung adenocarcinoma)细胞的增殖、自噬中的作用及其潜在机制。方法 通过生物信息学网站(TCGA)检测UHRF1在肺腺癌组织中的表达。qRT-PCR和Western blot检测肺腺癌细胞系(PC-9、A549和H1299)以及人支气管上皮细胞(16HBE)中UHRF1的表达。转染UHRF1-shRNA后, 采用CCK-8、克隆形成以及Ki-67检测肺腺癌A549细胞活性和增殖能力的改变;蛋白免疫印记检测自噬相关LC3-I/II、Beclin-1蛋白以及增殖相关蛋白CDK6、Rb和PCNA蛋白的变化;透射电镜观察敲除UHRF1后A549细胞中对于自噬小体的影响。结果 在肺腺癌患者组织中UHRF1表达明显高于癌旁组织, 而相对于正常的支气管上皮细胞16HBE, 肺腺癌细胞系A549与H1299中UHRF1的mRNA和蛋白水平均明显升高。此外, CCK-8法和克隆形成实验表明沉默UHRF1能够降低肺腺癌细胞系A549的生长效率。Ki-67免疫荧光法检测结果显示敲除UHRF1后A549细胞增殖能力相对于正常对照组明显降低。此外我们发现, 敲除UHRF1导致CKD6和PCNA蛋白水平相对于Control-siRNA组表达升高, 而Rb蛋白表达下调。我们同时还发现, 沉默UHRF1后能够提高LC3-II/LC3-I的比例, 诱导Beclin-1的表达上调。沉默UHRF1促进A549细胞中自噬小体的形成。结论 UHRF1在肺腺癌中高表达, 沉默UHRF1能够发挥抑制增殖的作用。而这种作用可能是通过促进细胞自噬产生的。     

核受体FXR激活对宫颈癌CaSki细胞增殖的抑制效应及其作用机制

目的：探讨激活法尼醇X受体（FXR）对宫颈癌CaSki细胞增殖的抑制效应及其作用机制。方法：用10 μmol/L FXR激动剂GW4064处理CaSki细胞,同时以DMSO处理组细胞为对照。分别于处理24和48 h后,采用荧光定量PCR和Western blot检测CaSki细胞FXR mRNA和蛋白的表达情况,用四甲基噻唑蓝（MTT）法检测激活FXR后CaSki细胞的增殖率,流式细胞技术检测细胞凋亡率,Western blot检测p53蛋白的表达水平。结果：与对照组相比,GW4064作用组CaSki细胞FXR mRNA和蛋白的表达水平升高,细胞增殖率降低,细胞凋亡率升高,同时p53蛋白的表达水平升高（均为P<0.05）。结论：激活FXR可抑制CaSki细胞株增殖并促进细胞凋亡,这可能与上调p53表达有关。     

沉默UHRF1对乳腺癌细胞增殖和转移的影响

目的 探讨UHRF1对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖以及侵袭的影响及其相关机制。方法 采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测沉默UHRF1基因后对乳腺癌MDA-MB-231细胞活力的影响;应用克隆形成实验检测沉默UHRF1后对乳腺癌MDA-MB-231细胞存活的影响;吖啶橙-溴乙锭(AO/EB)检测沉默UHRF1后对乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响;Caspase-3活性试剂盒检测沉默UHRF1后乳腺癌细胞Casapse-3活性的变化;Western blot法检测细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Bad、p-Bad、XIAP、p53、p21^Cip1/Waf1和p16^INK4a的表达;应用Transwell实验研究沉默UHRF1对MDA-MB-231细胞侵袭能力的影响;Wound Healing实验研究沉默UHRF1后对其迁移能力的影响。结果 沉默UHRF1使乳腺癌MDA-MB-231细胞活力降低;克隆形成实验结果显示沉默UHRF1后MDA-MB-231细胞存活能力降低,AO/EB染色显示沉默UHRF1促进MDA-MB-231细胞凋亡。同时Caspase-3活性实验结果显示沉默UHRF1后乳腺癌MDA-MB-231细胞Caspase-3的活性增加;Western blot结果显示,沉默UHRF1后,能够使凋亡蛋白Bad、XIAP和Bax的表达上调,同时抗凋亡蛋白p-Bad,Bcl-2的表达下调,也使p53,p21Cip1/Waf1,p16^INK4a蛋白表达升高;Transwell以及Wound Healing实验证明沉默UHRF1能够抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭和迁移。结论 沉默UHRF1能够抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞活力和存活,并抑制乳腺癌MDA-MB-231的侵袭和迁移。沉默UHRF1通过调控p53,p21Cip1/Waf1,p16^INK4a信号发挥作用。     

HMGB1 siRNA干扰对食管鳞癌细胞放射敏感性的影响

目的： 采用siRNA技术干扰人食管鳞癌细胞中高迁移率族蛋白B1（HMGB1）基因表达，观察经X射线照射后细胞增殖活性、存活能力及细胞凋亡率的变化。方法： 针对HMGB1 mRNA序列，设计合成有效的干扰序列HMGB1 siRNA，并转染食管鳞癌KYSE30细胞，同时设置转染阴性对照序列的阴性对照组以及未进行转染的空白对照组。采用实时荧光定量PCR（qPCR）和Western blot法检测各组细胞HMGB1 mRNA和蛋白的表达；分别用MTS比色、克隆形成实验、流式细胞术和Western blot法检测HMGB1 siRNA干扰对食管鳞癌细胞KYSE30细胞的增殖活力、存活能力、细胞凋亡率及凋亡相关蛋白表达的影响。结果： HMGB1 siRNA干扰后，KYSE30细胞HMGB1 mRNA和蛋白的表达水平明显降低（P均 < 0.01）；MTS数据显示HMGB1 siRNA干扰后经X射线照射显著抑制了食管鳞癌细胞的增殖水平（与空白对照组和阴性对照组比较，P < 0.05）；克隆形成实验结果显示空白对照组、阴性对照组、HMGB1 siRNA组的D₀值分别为2.57、2.54、1.55 Gy；D_q值分别为1.69、1.65、1.30 Gy；SF₂值分别为0.27、0.27、0.13；外推数N值分别为1.93、1.91、2.31；X射线照射后HMGB1 siRNA组肿瘤细胞的凋亡率明显增加，同时bcl-2蛋白表达显著降低，而bax、caspase-3蛋白的表达明显增加（与空白对照组和阴性对照组比较，P < 0.01）。结论： siRNA干扰技术可用来抑制食管鳞癌细胞中HMGB1基因的表达，联合X射线照射降低了肿瘤细胞的增殖水平和存活能力，诱导了细胞凋亡，增加了放射敏感性，该作用可能与调控bcl-2、bax和caspase-3基因表达有关。     

m白术内酯Ⅰ通过TLR4/MyD88通路调控肺癌A549细胞增殖侵袭的研究

目的 探究白术内酯Ⅰ在肺癌进程中的作用及分子机制。方法 用qRT-PCR和免疫组化实验检测肺癌组织和癌旁组织中TLR4及MyD88的mRNA和蛋白的表达;Transwell侵袭实验及MTT实验检测白术内酯Ⅰ(100 μM/L)对A549细胞侵袭、增殖能力的影响;Western blot检测白术内酯Ⅰ对TLR4及MyD88蛋白表达的作用。结果 qRT-PCR及免疫组化结果显示,相对于癌旁组织,TLR4及MyD88的mRNA和蛋白在肺癌组织中高表达(P＜0.05);与对照组相比,白术内酯Ⅰ处理组A549细胞侵袭能力显著下降,增殖活力显著抑制(P＜0.05);Western blot结果显示,白术内酯Ⅰ抑制TLR4及MyD88蛋白表达水平(P＜0.05)。结论 白术内酯Ⅰ通过抑制TLR4/MyD88通路抑制肺癌A549细胞侵袭转移。     

伏立诺他对卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响及机制研究

目的 探讨伏立诺他对卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响及机制研究。方法 以人卵巢癌SKOV3细胞为研究对象,随机分为空白组、伏立诺他高剂量组、中剂量组和低剂量组共4组,采用CCK-8法测定SKOV3细胞增殖情况,Western blot检测SKOV3细胞H3K4ac和H3K27ac蛋白表达情况,Real-time PCR检测SKOV3细胞Bax mRNA、Bcl-2 mRNA、p53 mRNA、CyclinD1 mRNA表达。结果 CCK-8法测定结果显示,与空白组比较,伏立诺他低、中、高剂量组增殖明显降低,差异具有统计学意义(P＜0.05)。RT-PCR结果显示,与空白组比较,伏立诺他低、中、高剂量组SKOV3细胞中Bcl-2 mRNA和CyclinD1mRNA表达明显降低,Bax mRNA和p53 mRNA表达明显升高。Western blot结果显示与空白组比较,伏立诺他低、中、高剂量组SKOV3细胞中H3K4ac和H3K27ac蛋白表达明显增加。结论 伏立诺他抑制SKOV3细胞增殖,促进凋亡,其机制可能与抑制组蛋白去乙酰化酶活性,激活p53凋亡通路有关。     

2,2',4,4'-四溴联苯醚通过核受体介导神经毒性作用机制的初步研究

目的：探讨2,2',4,4'-四溴联苯醚（BDE-47）对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞增殖及对RXRα、TRs、PPARs核受体表达水平的影响,为阐明多溴联苯醚化合物神经毒性作用提供科学依据。方法：采用CCK-8法检测不同浓度BDE-47处理不同时间后的SK-N-SH细胞增殖情况;再以5、10和20 μmol/L BDE-47染毒细胞24 h后,分别采用DCFH-DA荧光法、WST-1法、比色法、qPCR法测定胞内ROS水平、SOD活力、GSH-Px活力及hOGG1 mRNA表达量;采用qPCR及Western blot检测BDE-47对RXRa、TRs、PPARs受体mRNA及蛋白表达水平的影响。结果：BDE-47抑制SK-N-SH细胞增殖,其抑制作用呈明显的时间和剂量效应关系（P < 0.05）,24 h半数抑制浓度（IC₅₀）为75.94 μmol/L;与溶剂对照组相比,10和20 μmol/L BDE-47导致细胞内ROS水平上升、SOD活力下降、GSH-Px活力下降、hOGG1 mRNA水平上升,并可致SK-N-SH细胞氧化损伤（P < 0.05或P < 0.01）;BDE-47可诱导RXRα、TRs及PPARs受体各亚型mRNA及蛋白表达显著上升（P < 0.05或P < 0.01）,并且对各亚型的诱导程度不一。结论：BDE-47抑制人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞的增殖,导致氧化损伤,上调RXRα、TRs、PPARs核受体的表达从而介导神经毒性作用。     

CCNB1基因通过调控PI3K/Akt信号通路对口腔鳞癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的 探讨细胞周期蛋白B1(CCNB1)基因对口腔鳞癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及作用机制。方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测人正常口腔上皮细胞系HOK和人口腔鳞癌细胞系SCC-15、SCC-4、Cal-27中CCNB1基因的表达量,将CCNB1 siRNA(si-CCNB1)和阴性对照(si-NC)转染至SCC-15细胞,同时设置空白对照(Control),qRT-PCR和Western blot检测各组SCC-15细胞中CCNB1的表达,MTT实验、Transwell实验和划痕实验分别检测沉默CCNB1对SCC-15细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。Western blot检测细胞中MMP-2、MMP-9、PI3K、Akt和p-Akt蛋白的表达。结果 CCNB1在口腔鳞癌细胞系中的表达显著高于正常口腔上皮细胞(P＜0.05),si-NC组SCC-15细胞中CCNB1 mRNA和蛋白的表达与Control组无统计学差异(P＞0.05);si-CCNB1组中CCNB1 mRNA和蛋白的表达明显低于si-NC组和Control组(P＜0.05),si-NC组SCC-15细胞增殖、侵袭和迁移能力及MMP-2、MMP-9、PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达与Control组无统计学差异(P＞0.05);si-CCNB1组细胞增殖、侵袭和迁移能力及MMP-2、MMP-9、PI3K、p-Akt蛋白表达均明显低于si-NC组和Control组(P＜0.05),两组间Akt蛋白表达无统计学差异(P＞0.05)。结论 CCNB1在口腔鳞癌细胞系中呈高表达,沉默CCNB1基因能够抑制人口腔鳞癌SCC-15细胞增殖、侵袭和迁移,其作用机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路的激活有关。     

125I粒子联合AZD1152对三阴性乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：研究¹²⁵I粒子联合Aurora激酶抑制剂AZD1152对三阴性乳腺癌(TNBC)细胞MDA-MB-231增殖和凋亡的影响。方法：试验设对照组(常规培养)、¹²⁵I粒子照射组(照射组)、1 μmol/L AZD1152作用MDA-MB-231细胞48 h组(抑制组)、¹²⁵I粒子照射与1 μmol/L AZD1152联合作用MDA-MB-231细胞48 h组(联合组)。采用免疫荧光检测细胞多核形成;四甲基噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖抑制率;CCK-8检测细胞活力;流式细胞术PI单染检测细胞周期;流式细胞术Annexin V/PI双染观察各组细胞凋亡情况;Western blot检测各组细胞中Cyclin B1、组蛋白H3的表达及其磷酸化水平的改变,以及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、PARP表达的变化。结果：免疫荧光检测发现1 μmol/L AZD1152作用MDA-MB-231细胞48 h时可见到多核细胞形成;MTT试验结果显示对照组、照射组、抑制组和联合组的细胞增殖抑制率分别为(0.61±0.32)%、(17.62±1.41)%、(29.67±0.41)%、(53.17±1.26)%;CCK-8检测显示细胞存活率分别为(94.88±0.22)%、(59.21±0.14)%、(42.05±0.17)%、(32.12±0.36)%;细胞周期检测发现G2/M期占比分别为(18.99±0.15)%、(38.05±0.23)%、(49.80±0.32)%、(75.52±0.45)%,与对照组比较差异均具有统计学意义(P<0.05)。照射组、抑制组和联合组的细胞凋亡率分别为(17.48±0.24)%、(29.23±0.02)%、(63.11±0.27)%,均较对照组(0.31±0.03)%升高(P<0.05)。流式细胞术发现抑制组细胞出现多核及多倍体细胞,易形成非整倍体。Western blot检测结果显示联合组较其他3组,抗凋亡蛋白Bcl-2、组蛋白H3的磷酸化和Cyclin B1蛋白表达减少(P<0.05),而促凋亡蛋白Bax和PARP蛋白剪切明显增加(P<0.05)。结论：¹²⁵I粒子对AZD1152有增敏作用,¹²⁵I联合AZD1152可显著抑制MDA-MB-231细胞组蛋白H3磷酸化及Cyclin B1水平,从而抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

下调UHRF1的表达在抑制肝癌进展中的作用

目的 探讨UHRF1的异常表达在肝癌（hepatocellular carcinoma, HCC）进展中的作用机制。方法 采用RT-PCR和Western blot法检测UHRF1在20例HCC标本中的mRNA和蛋白表达水平, Western blot法检测不同转移潜能的肝癌细胞HepG2、SMMC7721、MHCC97L和HCCLM3中的UHRF1 的表达水平;siRNA技术干扰HCCLM3细胞中UHRF1表达后,MTT法检测细胞增殖,Western blot 法检测BAX和BCL-2表达水平的改变,流式细胞术检测HCCLM3细胞周期和细胞凋亡的变化。结 果 UHRF1在肺癌组织中的表达水平较癌旁组织显著上调（P<0.05）,随着肝癌细胞转移潜能升高而UHRF1表达水平也依次升高（P<0.01）;siRNA技术干扰HCCLM3细胞中UHRF1表达后,HCCLM3细胞生长速度明显下降（P＜0.05）,HCCLM3细胞的促凋亡蛋白BAX表达水平明显上升,而抑凋亡蛋白BCL-2表达水平明显下降;UHRF1-siRNA干扰HCCLM3细胞48 h时,细胞周期分布无明显影响（P＞0.05）;但UHRF1表达下调有促凋亡作用,与对照组相比,干扰组的细胞凋亡率显著升高,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 UHRF1基因在肝癌组织中表达上调,下调UHRF1的表达能够抑制肝癌进展,可能是通过诱导肿瘤细胞凋亡来实现的。     

干扰NBS1表达抑制肝癌HepG2细胞增殖并促进凋亡

目的:探讨干扰NBS1基因表达对肝癌细胞HepG2增殖及凋亡的影响。方法:应用Lipofectamine 2000将NBS1特异性小干扰RNA（siNBS1）转染至肝癌细胞HepG2中,以空载脂质体作为对照组。采用RT-PCR及Western blot法检测NBS1基因表达情况,采用CCK-8法检测转染质粒后siNBS1对HepG2细胞增殖能力的影响,采用流式细胞术检测siNBS1对HepG2细胞凋亡的影响。结果:不同浓度siNBS1（10 nmol/L、20 nmol/L、50 nmol/L）均能抑制HepG2细胞中的NBS1基因在mRNA水平上的表达（P＜0.05或P＜0.01）。最高浓度siNBS1（50 nmol/L）能抑制NSB1蛋白产物的表达水平（P＜0.05）。CCK-8实验显示,转染不同浓度siNBS1的HepG2细胞与对照组相比,细胞活力明显减弱（P＜0.05或P＜0.01）,转染48 h后增殖率下降最为显著;流式细胞检测结果显示,细胞凋亡的比率在转染后明显升高（P＜0.05或P＜0.01）,并随浓度增加而更为显著。结论:干扰NBS1基因的表达可以明显抑制HepG2细胞的增殖,并促进癌细胞凋亡。     

细胞外信号调节激酶1/2抑制剂对Burkitt淋巴瘤细胞增殖、凋亡和Bcl-2、Bcl-x1、caspase-3表达的影响

目的:分析细胞外信号调节激酶1/2抑制剂对Burkitt淋巴瘤细胞存活率、细胞凋亡和Bcl-2、Bcl-x1、caspase-3表达的影响。方法:通过不同浓度的细胞外信号调节激酶1/2抑制剂AZD8330对Raji细胞进行处理,通过CCK-8对其细胞存活率进行测定,采用流式细胞术对其细胞凋亡的情况进行检测。通过Western blot法对Bcl-2、Bcl-x1、caspase-3蛋白表达进行测定,且通过RT-PCR法对Bcl-2、Bcl-x1、caspase-3 mRNA的表达进行测定。结果:经0.50、1.00、5.00、50.00、100.00 μmol/L的AZD8330处理1、2、3 d后,随着AZD8330作用时间的增加与浓度的提高,Raji细胞存活率逐渐下降,并且各时间点的细胞存活率均低于对照组（P均＜0.05）。分别经0.50、1.00、5.00、50.00、100.00 μmol/L的AZD8330处理1、2、3 d后,Raji细胞出现凋亡,并且随着AZD8330作用时间的增加与浓度的提高,其凋亡率明显升高,且各时间点的细胞凋亡率均高于对照组（P均＜0.05）。随着处理时间的增加与浓度的提高,Bcl-2、Bcl-x1蛋白表达显著减少,caspase-3蛋白表达明显提高（P均＜0.05）;并且,Bcl-2、Bcl-x1 mRNA表达明显减少,caspase-3 mRNA的表达明显提高（P均＜0.05）。结论:AZD8330可能利用阻滞细胞外信号调节激酶1/2通路相关基因及蛋白的表达对Burkitt淋巴瘤Raji细胞凋亡进行诱导,并对其细胞增殖进行阻滞。     

肉苁蓉苯乙醇总苷对大鼠肝星状细胞TGF-β1/Smad信号通路表达的影响

目的：探讨肉苁蓉苯乙醇总苷（CPhGs）对转化生长因子β1（TGF-β1）介导的大鼠肝星状细胞（HSC-T6）增殖活化作用及对TGF-β1/Smad信号通路表达的影响。方法：试验分为正常对照组、5 ng/mL TGF-β1刺激的HSC-T6模型组、5 ng/mL TGF-β1+不同终浓度（25、50、75和100 μg/mL）CPhGs给药组,另设只加DMEM培养液的空白组。体外培养HSC-T6细胞,通过四甲基偶氮唑盐法（MTT）检测细胞的增殖;LDH比色法测定CPhGs的细胞毒性;采用荧光定量PCR（qPCR）检测Smad2、Smad3和Smad7 mRNA的表达;采用Western blot法检测Smad2、Smad3、p-Smad2、p-Smad3和Smad7蛋白的表达。结果：与正常对照组比较,TGF-β1模型组显著促进了HSC-T6细胞的增殖,而50~100 μg/mL的CPhGs可以抑制TGF-β1诱导的HSC-T6细胞的增殖（P<0.05）,且25~100 μg/mL的CPhGs对HSC-T6无明显细胞毒性作用;25~100 μg/mL CPhGs均可抑制Smad2和Smad3 mRNA和蛋白水平的表达,且明显抑制Smad2和Smad3蛋白的磷酸化水平,促进Smad7 mRNA和蛋白的表达,差异均具有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。结论：CPhGs的抗肝纤维化作用可能与其阻断TGF-β1/Smad通路进而阻断HSC-T6细胞的活化和增殖有关。     

婆罗双树样基因2干扰对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响

目的：研究婆罗双树样基因2（sal-like gene 2,SALL2）干扰对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响。方法：设计针对SALL2基因的3条小干扰RNA（siRNA-1、2、3）,并设载体组及未转染对照组,使用脂质体转染HeLa细胞。采用逆转录RT-PCR和Western blot检测转染后HeLa细胞中SALL2 mRNA和蛋白的表达以筛选沉默效果最好的siRNA片段。将最适siRNA片段转染HeLa细胞后,采用CCK-8检测细胞增殖率;流式细胞术检测细胞周期和凋亡率。结果：对照组HeLa细胞高表达SALL2。载体组和转染siRNA-3组SALL2的mRNA和蛋白表达与对照组相比,差异均无统计学意义（P均>0.05）,而siRNA-1和siRNA-2转染48 h后,HeLa细胞SALL2的mRNA和蛋白表达均降低,差异均有统计学意义（P均<0.05）,其中siRNA-1的沉默效率更好,故后续选择siRNA-1作为干扰组。与对照组相比,转染siRNA-1 48和72 h后细胞的增殖率均升高,差异均有统计学意义（P<0.05）;转染48 h后siRNA-1组处于G0/G1期的细胞比例减少,凋亡率明显降低（P均<0.05）。结论：SALL2基因干扰可明显提高HeLa细胞的增殖率,并降低其凋亡率。提示SALL2基因对宫颈癌HeLa细胞的增殖有抑制作用。     

青藤碱对HPV阳性宫颈癌SiHa细胞增殖和侵袭的影响

目的： 探讨青藤碱对HPV阳性宫颈癌SiHa细胞增殖和侵袭的影响。方法： 体外培养SiHa细胞,在细胞培养液中分别加入0.2、0.4和0.8 mmol/L的青藤碱,阴性对照组细胞未加青藤碱,24和48 h后采用CCK-8法检测细胞活力。细胞培养液加入0.2 mmol/L的青藤碱,24 h后采用免疫荧光法检测Ki67阳性细胞数;Transwell实验检测侵袭细胞数;Western blot检测侵袭相关蛋白MMP-2和MMP-9的蛋白表达水平。结果： 与阴性对照组相比,0.2、0.4和0.8 mmol/L青藤碱作用SiHa细胞24和48 h后,SiHa细胞的增殖率均明显降低（P<0.01）;青藤碱处理组SiHa细胞中Ki67阳性细胞数减少（P<0.01）,发生侵袭的SiHa细胞数减少（P<0.05）,侵袭相关蛋白MMP-2和MMP-9蛋白的表达均降低（P<0.01）。结论： 在体外,青藤碱可以抑制体外培养的HPV阳性宫颈癌SiHa细胞的增殖和侵袭。     

细胞核受体RXRα在2,2',4,4'-四溴二苯醚神经毒性中的作用及其机制

目的：探讨视黄醛X受体（RXRs）为核心的多个核受体在2，2'，4，4'-四溴二苯醚（BDE-47）致神经细胞毒性中的相互作用，揭示受体介导的多溴二苯醚（PBDEs）神经毒性效应的分子机制。方法：构建人神经母细胞瘤细胞SK-N-SH的RXRα基因敲除细胞株及高表达细胞株（分别命名为RXR/KO-SK-N-SH和RXR/OE-SK-N-SH细胞）；CCK-8法分别检测SK-N-SH（野生型）、RXR/KO-SK-N-SH和RXR/OE-SK-N-SH细胞在BDE-47浓度分别为1、5、10、20、50、100、150、200 μmol/L处理12、24、48、72 h时的细胞增殖率；qPCR和Western blot法分别检测上述3种细胞中RXRα、TRα、TRβ、PPARα、PPARγ的mRNA和蛋白表达水平。结果：在染毒时间分别为12、24、48、72 h时，不同浓度BDE-47作用下3种细胞的增殖率比较，差异有统计学意义（P < 0.05）。BDE-47对RXR/KO-SK-N-SH细胞的IC₅₀是野生型和RXR/OE-SK-N-SH细胞的1/2。BDE-47处理3种细胞后，RXRα的mRNA和蛋白表达水平在野生型和RXR/OE-SK-N-SH细胞中显著升高，SK-N-SH细胞和RXR/OE-SK-N-SH细胞中TRα和PPARα的表达升高，此两种受体在RXR/KO-SK-N-SH细胞中表达降低。在本实验所采用的BDE-47处理浓度下，TRβ和PPARγ表达在3种细胞中均无明显变化。结论：RXRα在提高SK-N-SH细胞生存能力中发挥重要作用。RXRα可以介导TRα和PPARα的表达，而BDE-47并未激活或者抑制SK-N-SH细胞TRβ和PPARγ的表达。说明BDE-47对于SK-N-SH细胞的毒性主要是通过激活RXRα，进一步诱导TRα和PPARα的表达而介导的。