AA861 对胶质瘤U251细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨5-脂氧合酶抑制剂AA861对胶质瘤U251细胞增殖及凋亡的影响.方法:用含有不同浓度(25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L)AA861的培养液培养胶质瘤U251细胞,绘制细胞生长曲线;倒置相差显微镜观察细胞形态学变化;MTT法检测细胞抑制率;AO/EB荧光染色测定细胞凋亡率;Caspase-3活性检测试剂盒检测AA861干预后细胞内Caspase-3活性变化.结果:生长曲线及MTT法显示AA861对U251细胞增殖有明显的抑制作用,呈剂量和时间依赖效应;在倒置相差显微镜下,AA861诱导细胞发生凋亡形态学变化;AO/EB荧光染色显示细胞凋亡率在不同时间点及不同浓度下差异有统计学意义(P＜0.05),呈剂量和时间依赖效应;Caspase-3活性在不同时间点及不同浓度下差异有统计学意义(P＜0.05),呈剂量和时间依赖效应.结论:AA861能够抑制U251细胞的增殖,并通过Caspase-3途径诱导细胞凋亡.     

EGFR抑制剂gefitinib对人胶质瘤细胞U251抑制作用的研究

背景与目的:使用小分子靶向药物治疗胶质瘤是神经肿瘤领域的研究热点。本文探讨EGFR抑制剂gefitinib对人胶质瘤细胞U251的抑制作用。方法:用不同浓度gefitinib作用于U251细胞72h后,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测不同浓度gefitinib作用后细胞的生存率;流式细胞术分析不同浓度gefitinib作用U251细胞72h后细胞周期的变化;Western blotting法检测不同浓度gefitinib作用后,U251细胞周期相关蛋白表达量的变化。结果:MTT结果显示与对照相比,不同浓度gefitinib作用U251细胞72h后,细胞增殖抑制率均具有显著性差异(P<0.05),并呈浓度依赖关系,半数抑制浓度(IC50)为18.01μmol/L。细胞周期检测结果显示,随着gefitinib浓度的增加,G0/G1期细胞数逐渐增加,而S+G2/M期细胞的比例明显降低,说明gefitinib阻滞U251细胞于G0/G1期。Western blotting分析结果显示gefitinib对U251细胞的G0/G1期阻滞主要通过下调细胞周期依赖蛋白激酶CDK2、CDK4与细胞周期素cyclin E的表达,同时上调p21的表达,介导周期阻滞来实现。结论:gefitinib可能通过细胞周期的G0/G1期阻滞,体外抑制人胶质瘤细胞的生长,这为gefitinib治疗恶性脑胶质瘤提供了一定的理论基础。但对于gefitinib的研究还需进一步深入,以明确其治疗机制及疗效。     

羟基脲对人脑胶质瘤U251细胞放化疗增敏作用的研究

目的 探讨羟基脲(HU)联合替莫唑胺(TMZ)加放疗(RT)对人脑胶质瘤U251细胞放化疗(CRT)敏感性的影响。方法 体外培养U251细胞,采用CCK8实验检测不同浓度HU、TMZ及不同条件处理后细胞的增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期分布情况;Transwell小室、划痕实验评估细胞侵袭、迁移能力变化;Western blot实验检测凋亡蛋白表达情况;克隆形成实验检测克隆源细胞存活分数。结果 HU浓度≤50μmol/L时不会显著影响U251细胞增殖(P>0.05);低剂量HU联合CRT组较CRT组可抑制细胞增殖(P<0.05)、侵袭(P<0.01)、迁移(12h时 P<0.001,24h时 P<0.01)能力,并促进细胞凋亡(P<0.01)。50μmol/L HU联合RT后可增加细胞放射敏感性;细胞周期S及 G2期显著延长(均 P<0.05);凋亡蛋白Caspase-3及Bax表达水平上升,抗凋亡蛋白Bcl-2水平下降(均 P<0.001)。结论 HU联合CRT较单纯CRT进一步抑制U251细胞增殖、侵袭及迁移能力,促进细胞凋亡及增加放射敏感性,且出现S期及 G2期阻滞,从而增加了U251细胞的CRT敏感性。     

辛伐他汀诱导神经胶质瘤细胞凋亡的实验研究

目的探讨胆固醇合成抑制剂辛伐他汀(SIM)对人神经胶质瘤U251细胞抗增殖和诱导凋亡作用,并探讨其可能的分子机制。方法用不同浓度的SIM干预U251细胞,四甲基偶氮唑盐(MTT)测定细胞增殖,流式细胞分析检测细胞周期和凋亡率、survivin和Bax蛋白表达,Hoechst33258荧光染色法观察细胞形态学改变,半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测survivin和Bax mRNA表达的变化。结果①SIM能有效抑制U251细胞增殖,培养48h抑制率可达93.12%,IC_(50)为(11.33±0.16)μg/ml。②SIM诱导U251细胞凋亡,影响细胞周期进程,细胞阻滞于G_1-S期。SIM诱导U251细胞凋亡过程中随作用时间延长,survivin蛋白表达水平逐渐下降,Bax蛋白表达水平逐渐升高。③经SIM处理后,U251细胞核固缩、边集,核浆比例减小并见有凋亡小体形成。④survivin mRNA表达逐渐降低,Bax mRNA表达逐渐升高。结论SIM对人神经胶质瘤U251细胞有明显的抑制增殖和诱导凋亡作用,survivin基因表达下降、Bax基因表达升高可能为其分子机制之一。     

EZH2基因沉默对人脑胶质瘤U251细胞增殖和凋亡影响的研究

目的:研究RNA干扰技术抑制zeste基因增强子人类同源物2(EZH2)的表达对人胶质瘤U251细胞增殖及凋亡的影响.方法:构建靶向EZH2基因的shRNA质粒并转染至U251细胞中,采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测EZH2 mRNA和蛋白的表达情况,利用四甲基偶氮哇盐(MTT)实验和Annexin V-FITC/PI流式细胞术实验观察转染后U251细胞增殖和凋亡情况.结果:靶向EZH2基因的shRNA质粒成功抑制了U251细胞EZH2基因的表达,mRNA和蛋白表达抑制率分别为56.00％和88.73％;转染shRNA EZH2后,U251细胞的生长受到明显抑制(P＜0.01),在转染96 h后,生长抑制率达35.79％;转染48 h后,U251细胞早、晚期凋亡率分别为(26.59±0.83)％和(38.63±0.80)％,较阴性质粒组和空白对照组均增加,以晚期明显,差异有统计学意义,P＜0.01.结论:EZH2基因的沉默能有效抑制胶质瘤U251细胞的增殖、促进其凋亡,提示EZH2可能成为胶质瘤基因治疗的新靶点.     

miR-192在胶质瘤U251细胞中的表达及对其增殖、迁移及凋亡能力的影响

目的探讨miR-192在胶质瘤U251细胞中的表达及对其增殖、迁移及凋亡等生物学能力的影响。方法采用RT-PCR检测胶质瘤细胞株U251、LN18、U373和正常人脑胶质细胞株中HEB的表达水平。采用脂质体转染法将miR-192类似物(miR-192 mimics)和阴性对照(miR-negtive control,miR-NC)分别转染U251细胞。应用CCK-8法和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力的变化情况。应用Transwell实验检测细胞迁移能力的变化,应用流式细胞术检测细胞凋亡情况的变化。应用生物信息学方法预测miR-192的靶基因。结果miR-192在胶质瘤细胞株U251、LN18和U373中相对表达水平均低于HEB组,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-192 mimics和miR-NC分别转染U251细胞,CCK-8实验显示:miR-192 mimics组在第4、5天时的OD值明显低于miR-NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。平板克隆形成实验显示:miR-192 mimics组细胞克隆形成率为(28.23±0.81)%,明显低于miR-NC组[(41.59±1.21)%],差异有统计学意义(P<0.05)。Transwell实验结果显示,转染miR-192 mimics的穿膜细胞数为(83.20±21.51)个/孔,明显少于miR-NC组[(126.33±24.50)个/孔],差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞术检测显示,miR-192 mimics组和miR-NC组的细胞凋亡率分别为(18.23±1.86)%和(10.43±1.40)%,miR-192 mimics组的细胞凋亡率明显高于miR-NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。生物信息学方法预测SMC5可能是miR-192的靶基因。结论miR-192能够抑制胶质瘤U251细胞的增殖、迁移并促进其凋亡,是胶质瘤的治疗提供潜在靶点。miR-192可能通过靶基因SMC5发挥其对胶质瘤的调控作用。     

BML-210对脑胶质瘤U251细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响

目的 探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂BML-210 对脑胶质瘤U251细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法 采用0、5、10、20 μmol／L BML-210 处理U251细胞,活细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测不同浓度BML-210处理24、48、72和96 h的增殖抑制率,磷酯酰丝氨酸结合蛋白-异硫氢酸荧光素／碘化丙啶双染法（Annexin-FITC／PI）双染法检测不同浓度BML-210处理后的细胞凋亡率,流式细胞仪检测不同浓度BML-210处理48 h后的细胞周期分布情况,免疫印迹检测不同浓度BML-210处理48 h后凋亡相关基因（Bcl-2、Bax和Cleaved caspase-3）蛋白表达。结果 BML-210 可呈剂量和时间依赖的方式抑制U251细胞的增殖（P＜0.05）;除5 μmol／L组的晚期凋亡率外,BML-210处理组的早、晚期凋亡率均高于对照组（P＜0.05）,且BML-210处理组作用48 h后的凋亡率均高于24 h,组间差异均有统计学意义（P＜0.05）;与对照组比较,BML-210作用48 h后U251细胞的Bcl-2水平及S、G2／M期细胞比例降低,Bax和Cleaved caspase-3水平及G0／G1期细胞比例升高,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 BML-210 可抑制脑胶质瘤U251细胞的增殖并诱导其凋亡和细胞周期阻滞,对脑胶质瘤的辅助治疗有一定价值。     

姜黄素对脑胶质瘤的抑制作用及其机制研究

目的:研究姜黄素(curcumin)对脑胶质瘤的治疗作用,揭示姜黄素抗脑胶质瘤作用的分子机制.方法:U251胶质瘤细胞培养和药物处理;药物敏感性试验检测姜黄素抑制胶质瘤细胞体外生长作用;流式细胞仪检测细胞周期;DNA梯度(DNA ladder)凝胶电泳检测细胞凋亡;Western blot分析蛋白表达;利用t检验或one-way ANOVA分析统计学差异.结果:低剂量姜黄素对U251细胞没有明显的生长抑制作用,但高剂量作用下,生长抑制率达35%,与阴性对照相比差异显著(P<0.05);10μmol/L的姜黄素作用24h后细胞中ING4蛋白表达水平显著增加,p21waf/cipl和p53蛋白表达明显上调.结论:本研究发现姜黄素以p53依赖方式诱导脑瘤细胞发生细胞周期阻滞,在此过程中ING4表达上调,提示ING4可能通过增加与p53的结合,上调p21,发挥细胞周期阻滞作用.     

磷脂酰肌醇3激酶抑制剂LY294002对人胶质瘤U251细胞中HIF-1α表达和细胞生长的影响

目的:探讨低氧环境下磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositide3kinase,PI3K)抑制剂LY294002对人胶质瘤U251细胞中PI3K/丝氨酸-苏氨酸激酶(serine-threonine kinase,Akt)信号通路下游缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)mRNA和蛋白的表达以及细胞生长、细胞凋亡、细胞黏附和侵袭能力的影响。方法:应用LY294002作用于低氧环境中的人胶质瘤U251细胞(低氧+LY294002组),以低氧环境中未加LY294002的细胞作为对照(低氧组)。CCK-8试剂盒检测U251细胞生长,FCM检测细胞凋亡百分比,黏附实验检测细胞黏附能力,侵袭实验检测细胞侵袭能力,蛋白质印迹法检测p-Akt蛋白的表达,RT-PCR和蛋白质印迹法检测HIF-1αmRNA及蛋白的表达。结果:LY294002能明显抑制p-Akt蛋白以及HIF-1αmRNA和蛋白的表达,与低氧组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。LY294002能抑制低氧环境中U251细胞的增殖,抑制效果在药物作用后第2～6天时最为明显(P<0.05)。低氧+LY294002组中细胞凋亡百分比明显高于低氧组(P<0.01),而细胞黏附和侵袭能力明显低于低氧组(P<0.01)。结论:LY294002能抑制低氧环境中PI3K/Akt信号通路下游HIF-1αmRNA及蛋白的表达,抑制人胶质瘤U251细胞的生长,促进细胞凋亡,并抑制细胞黏附和侵袭能力。     

Gefitinib抑制人胶质瘤U251细胞生长分子机制研究

目的:研究Gefitinib对人胶质瘤U251细胞的生长抑制作用及相关机制.方法:用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测不同浓度Gefitinib对U251细胞增殖活性的效应.流式细胞术(FCM)分析Gefitinib对U251细胞周期以及凋亡的影响,蛋白质印迹法检测周期、凋亡相关蛋白表达量的变化.罗丹明123/PI双染流式细胞术与吖啶橙(AO)染色荧光显微镜分析凋亡.结果:Gefitinib能显著抑制U251细胞的增殖,并呈剂量依赖关系,半数抑制浓度(IC50)为18.01 μmol/L.通过流式、荧光染色以及蛋白质印迹检测分析发现,随着浓度的增加,Gefitinib能明显阻滞U251细胞于G0/G1期,主要通过降低线粒体膜电位诱导细胞凋亡,0、10、20和40 μmol/L浓度处理后细胞凋亡率分别为1.28％、4.48％、77.97％和90.59％.Gefitinib对U251细胞的周期阻止与诱导凋亡主要是下调细胞周期依赖蛋白激酶CDK2、CDK4和CDK6的表达,同时上调p27Kip1的表达,引起细胞周期阻滞.上调、活化凋亡相关蛋白Bax,下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,导致线粒体膜电位降低,活化Caspase-9,诱导细胞凋亡.结论:Gefitinib在15～60 μmol/L浓度范围内,能明显抑制U251细胞的增殖并能通过周期阻滞诱导其凋亡,其作用呈浓度依赖关系.主要通过下调周期依赖蛋白激酶的表达阻滞U251细胞于G0/G1期,降低线粒体膜电位,活化Caspase途径诱导U251细胞凋亡.     

新型 CDK7抑制剂对人胶质瘤细胞生物学功能的影响

目的：探究新型 CDK7抑制剂 THZ1对人胶质瘤细胞系 U87及 U251增殖、凋亡、侵袭能力的影响及细胞周期的阻滞作用。方法：将 U87及 U251细胞分成对照组及实验组,实验组加入不同浓度的 THZ1处理后,以 CCK －8法及平板克隆形成试验分析细胞增殖;Transwell 侵袭试验观测各组侵袭能力的变化;流式细胞仪检测各组细胞周期分布及凋亡情况;Western blot 实验检测凋亡相关蛋白 Caspase －3的表达量。结果：THZ1抑制 U87及 U251的增殖,根据实验结果用 SPSS 20．0分析出72小时药物 IC50,U87细胞为83．1nmol／L、U251细胞为13．7nmol／L。平板克隆形成试验结果显示低浓度药物即可明显抑制克隆形成。THZ1降低U87细胞的侵袭性。THZ1促进 U251细胞凋亡,Caspase －3表达增加。THZ1阻滞 U87及 U251细胞周期进展,G2期细胞显著增加。结论：THZ1能够抑制胶质瘤细胞 U87及 U251的增殖,促进凋亡,抑制侵袭,并阻滞细胞周期进展。     

Influence of the MACC1 Gene on Sensitivity to Chemotherapy in Human U251 Glioblastoma Cells

Background: This study was conducted to determine the influence of MACC1 expression on chemotherapysensitivity in human U251 glioblastoma cells. Materials and Methods: Expression of the MACC1 gene in 49 casesof human brain glioma was determined by quantitative real-time PCR. Silencing effects of RNA interference onMACC1 was detected by Western-blotting. Flow cytometry methods and methyl thiazolyl tetrazolium assay (MTT)were used to determine the apoptosis and growth inhibitory rates of the U251 cells with MACC1 silencing. beforeand after treatment with cisplatin (DDP). Results: MACC1 mRNA in gliomas was up-regulated remarkably, to158.8% of that in peri-cancerous tissues (P<0.05). The siRNA-MACC1 could inhibit the expression of MACC1protein significantly (p<0.05), associated with an increase in apoptosis rate from 2.57% to 5.39% in U251 cellsand elevation of the growth inhibitory rate from 1.5% to 17.8% (p<0.05 for both). After treatment with DDP atvarious concentrations (1, 3, 5μg/ml), compared with control U251 cells, the apoptosis rate of MACC1-silencedU251 cells rose from 8.41%, 13.2% and 19.5% to 12.8%, 17.8% and 25.8%; the growth inhibitory rate increasedfrom 16.2%, 19.3% and 24.5% to 23.7%, 28.4% and 36.3%. Conclusions: There is a notable relationship betweenover-expression of MACC1 and the characteristics of glioma cells. Silencing of MACC1 was found to enhancethe apoptosis and growth inhibitory rates of U251 glioma cells, and thereby increase their sensitivity to DDPchemotherapy.     

和厚朴酚对组织因子途径抑制物 2诱导神经胶质瘤细胞凋亡的实验研究#br#

目的探讨和厚朴酚对组织因子途径抑制物 2（TFPI 2）表达的影响,以及和厚朴酚和TFPI 2过表达对人胶质瘤U251细胞凋亡的影响。 方法体外培养胶质瘤U87、U251、LN18、LN229、A172细胞系,荧光定量PCR（QPCR）检测不同细胞系中TFPI 2的表达。不同浓度（0、10、20、30、40和50 μmol／L）和厚朴酚干预U251细胞,QPCR和Western blotting检测TFPI 2 mRNA和蛋白的表达。采用腺病毒载体pGSadeno TFPI 2过表达U251细胞内TFPI 2的表达,流式细胞术及caspase 3试剂盒检测细胞凋亡率和caspase 3活性。 结果在选取的5种不同胶质瘤细胞株中,U251和A172细胞内TFPI 2 mRNA明显下降（P＜005）。和厚朴酚呈浓度依赖性增加U251细胞内TFPI 2 mRNA水平;其中50 μmol／L和厚朴酚干预24 h后, TFPI 2 mRNA表达水平升高最明显（P＜005）。腺病毒感染U251细胞后TFPI 2表达水平明显增加（P＜005）。过表达TFPI 2和50 μmol／L和厚朴酚干预均可增加U251细胞凋亡水平和caspase 3的活性（P＜005）。 结论和厚朴酚处理可增加U251细胞内TFPI 2的表达;和厚朴酚联合TFPI 2过表达显著诱导胶质瘤细胞凋亡。     

和厚朴酚对组织因子途径抑制物 2诱导神经胶质瘤细胞凋亡的实验研究#br#

目的探讨和厚朴酚对组织因子途径抑制物 2（TFPI 2）表达的影响,以及和厚朴酚和TFPI 2过表达对人胶质瘤U251细胞凋亡的影响。 方法体外培养胶质瘤U87、U251、LN18、LN229、A172细胞系,荧光定量PCR（QPCR）检测不同细胞系中TFPI 2的表达。不同浓度（0、10、20、30、40和50 μmol／L）和厚朴酚干预U251细胞,QPCR和Western blotting检测TFPI 2 mRNA和蛋白的表达。采用腺病毒载体pGSadeno TFPI 2过表达U251细胞内TFPI 2的表达,流式细胞术及caspase 3试剂盒检测细胞凋亡率和caspase 3活性。 结果在选取的5种不同胶质瘤细胞株中,U251和A172细胞内TFPI 2 mRNA明显下降（P＜005）。和厚朴酚呈浓度依赖性增加U251细胞内TFPI 2 mRNA水平;其中50 μmol／L和厚朴酚干预24 h后, TFPI 2 mRNA表达水平升高最明显（P＜005）。腺病毒感染U251细胞后TFPI 2表达水平明显增加（P＜005）。过表达TFPI 2和50 μmol／L和厚朴酚干预均可增加U251细胞凋亡水平和caspase 3的活性（P＜005）。 结论和厚朴酚处理可增加U251细胞内TFPI 2的表达;和厚朴酚联合TFPI 2过表达显著诱导胶质瘤细胞凋亡。     

萝卜硫素通过p-mTOR/p-S6信号通路增强CD8+记忆细胞前体细胞的分化

目的：检测萝卜硫素（sulforaphane, SFN）对CD8+T细胞分化、表型及胞内因子分泌的影响并探讨其可能的调控机制。方法：在体外培养实验中,按照SFN处理的剂量分为对照(0 mmol/L)组、SFN 10 mmol/L组、SFN 20 mmol/L组。采用流式细胞术检测SFN对CD8+ T细胞分化、表型及胞内因子分泌的影响以及mTOR siRNA 对CD8+T细胞CD127 和LKRG1 表达的影响;采用qRT-PCR检测抗凋亡因子Bcl-2 和Bcl-6 的表达水平,Annexin-V/PI 双染法检测SFN对CD8+ T细胞凋亡的影响,Western blotting检测信号通路蛋白p-mTOR、p-S6 以及内参b-actin 蛋白的表达。结果：SFN促进CD8+记忆细胞前体细胞的形成、显著降低CD8+T细胞PD-1 和Tim-3 的表达水平(P<0.01)。同时,SFN处理后抗凋亡基因Bcl-2 和Bcl-6 的表达显著增加、CD8+ T细胞的凋亡受到显著抑制,p-mTOR和p-S6 蛋白表达水平也显著降低(P<0.05 或P<0.01)。此外,SFN能够增加促炎性细胞因子IL-2、IFN-g、TNF-a的分泌(P<0.05)。mTOR siRNA 能够显著增加CD127 表达及降低LKRG1 表达水平(均P<0.01)。结论：SFN 可能通过抑制pmTOR信号通路促进CD8+记忆细胞前体细胞的形成,获得更多年轻化的T细胞,为临床免疫细胞治疗提供新的思路。     

白花丹醌通过E-cadherin增强替莫唑胺对人脑胶质瘤U251细胞迁移和侵袭的抑制作用

目的 探讨白花丹醌增强替莫唑胺对人脑胶质瘤U251细胞迁移和侵袭的抑制作用及其机制。方法 CCK-8法检测白花丹醌、替莫唑胺、白花丹醌+替莫唑胺组对U251细胞增殖的影响;细胞划痕实验检测对照组（DMSO）、白花丹醌、替莫唑胺和白花丹醌+替莫唑胺组U251细胞48 h的迁移能力;Transwell实验检测白花丹醌增强替莫唑胺对U251细胞侵袭的影响;蛋白质印迹法检测白花丹醌、替莫唑胺和白花丹醌+替莫唑胺组细胞中E-cadherin的相对表达量。结果 CCK-8结果显示白花丹醌（1.25 μmol/L）联合替莫唑胺（200 μmol/L）处理48 h后,U251细胞增殖抑制率为75.69%,明显高于单独应用白花丹醌（P=0.012）或替莫唑胺组（P=0.034）。细胞划痕实验显示白花丹醌联合替莫唑胺可以明显增强替莫唑胺抑制胶质瘤细胞迁移的能力（P=0.023）。Transwell实验结果显示联合用药后U251细胞的侵袭能力明显降低（P<0.05）。联合用药组E-cadherin蛋白表达含量明显高于单独用药组（P<0.05）。结论 白花丹醌联合替莫唑胺可以抑制胶质瘤细胞的迁移和侵袭、增强胶质瘤细胞对替莫唑胺的敏感度,且是通过E-cadherin蛋白表达实现的。