STIP1在脑胶质瘤组织中的表达及对胶质瘤细胞株增殖、凋亡、侵袭的影响

目的:检测磷酸化应激诱导蛋白1（stress-induced phosphoprotein 1，STIP1）在胶质瘤组织和正常脑组织中的表达差异，探讨STIP1对胶质瘤细胞株U87、U251细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响。方法:运用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)、免疫组化及蛋白印迹检测胶质瘤组织和正常脑组织中STIP1的表达；小干扰RNA（STIP1-siRNA）转染U87、U251细胞株后，使用噻唑蓝(MTT)法、流式细胞仪和Transwell小室观察细胞的增殖、凋亡和侵袭能力。结果:STIP1在胶质瘤Ⅳ级组织中的表达明显高于正常脑组织，但在胶质瘤Ⅱ、Ⅲ级中的表达与正常脑组织无明显差异。U87、U251细胞株转染STIP1-siRNA后，细胞增殖和侵袭能力明显受到抑制，而细胞凋亡率明显上升。结论:STIP1在胶质母细胞瘤组织中高表达，下调STIP1可以抑制胶质瘤细胞株U87和U251的增殖，阻滞细胞周期，促进其细胞凋亡，并可抑制其侵袭力。     

NF-κB抑制剂QNZ对人胶质瘤细胞生物学功能的影响

目的:探究NF-κB抑制剂QNZ对人胶质瘤细胞系U251生物学功能的影响。方法:胶质瘤U251细胞中加入QNZ处理,用CCK8法、Transwell实验、流式细胞术和Western blot检测细胞增殖、侵袭、凋亡以及Caspase-3的表达。结果:QNZ处理后绘制出生长曲线,发现胶质瘤细胞增殖受到抑制。QNZ降低U251细胞的侵袭性。不同浓度QNZ处理后,U251细胞凋亡增加,与QNZ浓度有相关性。QNZ处理后细胞周期被阻滞于G2期。结论:QNZ抑制胶质瘤细胞U251的增殖和细胞侵袭力,促进凋亡并阻滞细胞周期进展,为胶质瘤治疗提供新的思路。     

白藜芦醇抑制人脑胶质瘤细胞生长及诱导凋亡比较

 目的 探讨白藜芦醇（Resveratrol，Res）体外抑制U251、U87和SHG-44脑胶质瘤细胞生长及诱导凋亡的不同作用比较，验证Re8确可导致U251细胞凋亡。方法 MTT比色法测量不同剂量的Res作用U251、U87和SHG-44胶质瘤细胞24h后对增殖的影响及不同剂量的Res作用U251、U87和SHG-44细胞6h、24h、48h后的影响。流式细胞仪用Annexin V-FITC和PI双染检测U251、U87和SHG-44细胞凋亡率。HE染色、Hoechst 33342荧光染色、透射电镜（TEM）观察U251细胞形态改变，流式细胞仪测定U251细胞的细胞周期改变。结果 Res明显抑制U251、U87和SHG-44细胞的生长和增殖（P〈0．01）且对U87细胞的抑制作用最强，U251和SHG-44细胞次之；对U251细胞的抑制作用呈浓度及时间依赖性反应；Re8所致的U251、U87和SHG-44胶质瘤细胞凋亡为浓度依赖关系，且对U87细胞的凋亡作用强于U251和SHG-44细胞。U251凋亡细胞的细胞周期主要发生G，期阻滞。结论 Res对U251、U87和SHG-44细胞生长抑制及凋亡作用以U87细胞更明显，对U251细胞的抑制作用呈浓度及时间依赖性反应并引起了其细胞周期改变。     

KIF20A对胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭、凋亡及细胞周期分布的影响

目的:研究KIF20A对胶质瘤U87细胞系增殖、侵袭、迁移、凋亡及细胞周期分布的影响。方法:利用 RNA干扰技术下调胶质瘤细胞系 U87中 KIF20A 的表达。RT-qPCR 和 Western blot 分别检测 KIF20A 在mRNA 和蛋白水平上的表达。CCK-8 实验检测 U87细胞增殖能力的变化，Transwell 实验检测U87细胞迁移及侵袭能力的变化，流式细胞术检测 U87细胞凋亡及细胞周期的变化。结果:RT-qPCR和Western blot 结果显示 siRNA-KIF20A显著下调 KIF20A 的表达，CCK-8和Transwell 实验显示下调 KIF20A 的表达显著抑制了U87细胞的增殖、迁移及侵袭能力，流式细胞术结果显示下调 KIF20A 的表达显著促进了U87细胞的凋亡，诱导细胞周期阻滞在G0/G1期。结论:下调KIF20A的表达抑制胶质母细胞瘤细胞的增殖、迁移及侵袭，促进胶质母细胞瘤细胞的凋亡并诱导细胞周期G0/G1期阻滞。     

p53基因对胶质瘤细胞系U251生长抑制作用的研究

背景与目的：肿瘤抑制基因p53是调节多种与细胞周期、凋亡、DNA修复等有关基因表达的转录因子。p53基因在大约30％的胶质瘤中发生突变，在胶质瘤的发生和发展中起重要作用。本文主要探讨野生型p53基因过表达对脑胶质瘤细胞系U251细胞生长抑制的机制。方法：通过p53腺病毒表达载体pAdCMV-p53及空载体pAdCMV-lacZ分别感染U251细胞系，RT-PCR及Westem blot方法检测转染效率；并通过MTT检测生长抑制率、流式细胞仪检测细胞周期及TUNEL检测分析细胞凋亡等指标观察p53基因对U251细胞生长的影响。结果：MOI为100时，野生型p53基因的过表达可引起U251细胞G0、G1期阻滞、诱导U251细胞凋亡以及引起U251细胞生长抑制。结论：p53基因可以通过细胞周期G0、G1期阻滞及诱导细胞凋亡抑制胶质瘤细胞系U251的生长。     

Gefitinib抑制人胶质瘤U251细胞生长分子机制研究

目的:研究Gefitinib对人胶质瘤U251细胞的生长抑制作用及相关机制.方法:用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测不同浓度Gefitinib对U251细胞增殖活性的效应.流式细胞术(FCM)分析Gefitinib对U251细胞周期以及凋亡的影响,蛋白质印迹法检测周期、凋亡相关蛋白表达量的变化.罗丹明123/PI双染流式细胞术与吖啶橙(AO)染色荧光显微镜分析凋亡.结果:Gefitinib能显著抑制U251细胞的增殖,并呈剂量依赖关系,半数抑制浓度(IC50)为18.01 μmol/L.通过流式、荧光染色以及蛋白质印迹检测分析发现,随着浓度的增加,Gefitinib能明显阻滞U251细胞于G0/G1期,主要通过降低线粒体膜电位诱导细胞凋亡,0、10、20和40 μmol/L浓度处理后细胞凋亡率分别为1.28％、4.48％、77.97％和90.59％.Gefitinib对U251细胞的周期阻止与诱导凋亡主要是下调细胞周期依赖蛋白激酶CDK2、CDK4和CDK6的表达,同时上调p27Kip1的表达,引起细胞周期阻滞.上调、活化凋亡相关蛋白Bax,下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,导致线粒体膜电位降低,活化Caspase-9,诱导细胞凋亡.结论:Gefitinib在15～60 μmol/L浓度范围内,能明显抑制U251细胞的增殖并能通过周期阻滞诱导其凋亡,其作用呈浓度依赖关系.主要通过下调周期依赖蛋白激酶的表达阻滞U251细胞于G0/G1期,降低线粒体膜电位,活化Caspase途径诱导U251细胞凋亡.     

CDK7抑制剂THZ1对乳腺癌细胞增殖与凋亡的作用及其机制北大核心CSCD

目的探讨细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶7(CDK7)特异性抑制剂THZ1对人乳腺癌细胞系MCF7、Sk Br3及Hs578T增殖及凋亡的作用及其分子机制。方法采用MTT、流式细胞术、Western blot等方法检测细胞活力、细胞周期和凋亡的变化情况。结果 500 nmol/L THZ1处理细胞,显微镜观察细胞数明显减少;MTT实验表明THZ1呈剂量及时间依赖性抑制细胞的增殖;细胞饥饿培养24 h以同步化在G1/S期,THZ1继续处理24 h,流式细胞术检测G2/M期细胞数增多。THZ1引起细胞G2/M期阻滞;THZ1呈剂量及时间依赖性诱导细胞早期凋亡与晚期凋亡;Western blot结果表明,THZ1可导致Cleaved-PARP上调,Bcl-2的显著下调和p65、GSK3蛋白磷酸化水平的明显上调。结论 THZ1能抑制MCF7、Sk Br3及Hs578T细胞增殖,诱导其细胞周期阻滞及细胞早、晚期凋亡,可作为乳腺癌治疗潜在的候选药物。     

RNA干扰介导EphB4基因表达下调对胶质瘤细胞系U251生长的影响

目的：探讨靶向EphB4基因的小干扰RNA（small interference RNA，siRNA）对胶质瘤细胞EphB4 mRNA表达及细胞生长的影响。方法：体外化学合成针对人EphB4出基因的小干扰RNA并转染恶性胶质瘤U251细胞系后，RT-PCR法检测EphB4 mRNA表达的变化，CCK-8检测法观察RNA干扰对肿瘤细胞增殖活性的影响，FCM检测细胞周期变化，划痕实验观察细胞的迁移能力，采用Transwell小室穿膜细胞的数量来反应细胞的侵袭能力。结果：U251细胞转染siRNA-EphB4 100nmol／L后，EphB4 mRNA的表达水平下降了75．0％，细胞增殖抑制表现为剂量依赖性，FCM检测与阴性对照相比，细胞周期不同程度阻滞于亚G。期；并且细胞的迁移能力与对照组比较有所下降，Transwell小室穿膜细胞与对照组比较明显减少。结论：siRNA—EphB4能够明显靶向并抑制U251细胞中EphB4基因的表达，而EphB4基因表达下调可使U251细胞增殖受到影响，细胞周期出现凋亡峰。转染siRNA-EphB4后U251细胞的迁移和侵袭能力受到不同程度的抑制。提示抑制EphB4基因表达有可能成为胶质瘤治疗的新方法。     

羟基脲对人脑胶质瘤U251细胞放化疗增敏作用的研究

目的 探讨羟基脲(HU)联合替莫唑胺(TMZ)加放疗(RT)对人脑胶质瘤U251细胞放化疗(CRT)敏感性的影响。方法 体外培养U251细胞,采用CCK8实验检测不同浓度HU、TMZ及不同条件处理后细胞的增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期分布情况;Transwell小室、划痕实验评估细胞侵袭、迁移能力变化;Western blot实验检测凋亡蛋白表达情况;克隆形成实验检测克隆源细胞存活分数。结果 HU浓度≤50μmol/L时不会显著影响U251细胞增殖(P>0.05);低剂量HU联合CRT组较CRT组可抑制细胞增殖(P<0.05)、侵袭(P<0.01)、迁移(12h时 P<0.001,24h时 P<0.01)能力,并促进细胞凋亡(P<0.01)。50μmol/L HU联合RT后可增加细胞放射敏感性;细胞周期S及 G2期显著延长(均 P<0.05);凋亡蛋白Caspase-3及Bax表达水平上升,抗凋亡蛋白Bcl-2水平下降(均 P<0.001)。结论 HU联合CRT较单纯CRT进一步抑制U251细胞增殖、侵袭及迁移能力,促进细胞凋亡及增加放射敏感性,且出现S期及 G2期阻滞,从而增加了U251细胞的CRT敏感性。     

miR-205-5p/E2F1信号抑制经典Wnt/β蛋白通路调控脑胶质瘤细胞放射敏感性

目的 探索miR-205-5p/E2F1信号轴在脑胶质瘤U251、U87细胞放射耐受中的调控机制。方法 利用X射线逐步递增递间歇诱导方法照射U251、U87细胞,建立放射耐受的U251/TR、U87/TR细胞。对两种细胞进行形态学、细胞运动、侵袭及增殖能力分析。通过荧光素酶基因检测系统及点突变技术分析E2F1基因对U251/TR、U87/TR细胞的调控机制。结果 放射耐受的U251/TR、U87/TR细胞分别比251、U87细胞的增殖活力增强,运动、侵袭能力增强,X射线照射下细胞凋亡下降。miR-205-5p mimics转染能够下调U251/TR细胞E2F1因子表达,抑制细胞增殖、侵袭及运动,增加放射敏感性。miR-205-5p mimics转染协同E2F1下调是通过抑制细胞Wnt/β-catenin信号通路活性发挥抑制肿瘤作用,并降低细胞耐受。结论 逐步递增递间歇诱导方法能较好地建立U251/TR、U87/TR细胞。miR-205-5p/E2F1信号轴通过经典Wnt/β-catenin信号通路发挥抑癌作用,可以作为提高胶质瘤放射敏感性的治疗靶点。     

Knockdown of HMGB1 improves apoptosis and suppresses proliferation and invasion of glioma cells

Background

The purposes of this study were to explore the effects of high mobility group protein box 1 (HMGB1) gene on the growth, proliferation, apoptosis, invasion, and metastasis of glioma cells, with an attempt to provide potential therapeutic targets for the treatment of glioma.

Methods

The expressions of HMGB1 in glioma cells (U251, U-87MG and LN-18) and one control cell line (SVG p12) were detected by real time PCR and Western blotting, respectively. Then, the effects of HMGB1 on the biological behaviors of glioma cells were detected: the expression of HMGB1 in human glioma cell lines U251 and U-87MG were suppressed using RNAi technique, then the influences of HMGB1 on the viability, cycle, apoptosis, and invasion abilities of U251 and U-87MG cells were analyzed using in a Transwell invasion chamber. Also, the effects of HMGB1 on the expressions of cyclin D1, Bax, Bcl-2, and MMP 9 were detected.

Results

As shown by real-time PCR and Western blotting, the expression of HMGB1 significantly increased in glioma cells (U251, U-87MG, and LN-18) in comparison with the control cell line (SVG p12); the vitality, proliferation and invasive capabilities of U251 and U-87MG cells in the HMGB1 siRNA-transfected group were significantly lower than those in the blank control group and negative control (NC) siRNA group (P<0.05) but showed no significant difference between the blank control group and NC siRNA group. The percentage of apoptotic U251 and U-87MG cells was significantly higher in the HMGB1 siRNA-transfected group than in the blank control group and NC siRNA group (P<0.05) but was similar between the latter two groups. The HMGB1 siRNA-transfected group had significantly lower expression levels of Cyclin D1, Bcl-2, and MMP-9 protein in U251 and U-87MG cells and significantly higher expression of Bax protein than in the blank control group and NC siRNA group (P<0.05); the expression profiles of cyclin D1, Bax, Bcl-2, and MMP 9 showed no significant change in both blank control group and NC siRNA group.

Conclusions

HMGB1 gene may promote the proliferation and migration of glioma cells and suppress its effects of apoptosis. Inhibition of the expression of HMGB1 gene can suppress the proliferation and migration of glioma cells and promote their apoptosis. Our observations provided a new target for intervention and treatment of glioma.     

Overexpression of SASH1 related to the decreased invasion ability of human glioma U251 cells

The purpose of this study was to investigate the impact of SAM- and SH3-domain containing 1 (SASH1) on the biological behavior of glioma cells, including its effects on cellular growth, proliferation, apoptosis, invasion, and metastasis, and thereby to provide an experimental basis for future therapeutic treatments. A pcDNA3.1-SASH1 eukaryotic expression vector was constructed and transfected into the U251 human glioma cell line. Using the tetrazolium-based colorimetric (MTT) assay, flow cytometry analyses, transwell invasion chamber experiments, and other methods, we examined the impact of SASH1 on the biological behaviors of U251 cells, including effects on viability, cell cycle, apoptosis, and invasion. Furthermore, the effect of SASH1 on the expression of cyclin D1, caspase-3, matrix metalloproteinase (MMP)-2, MMP-9, and other proteins was observed. Compared to the empty vector and blank control groups, the pcDNA3.1-SASH1 group of U251 cells exhibited significantly reduced cell viability, proliferation, and invasion (p?<?0.05), although there was no difference between the empty vector and blank control groups. The pcDNA3.1-SASH1 group demonstrated a significantly higher apoptotic index than did the empty vector and blank control groups (p?<?0.05), and the percentage of apoptotic cells was similar between the empty vector and blank control groups. In addition, the pcDNA3.1-SASH1 group expressed significantly lower protein levels of cyclin D1 and MMP-2/9 compared to the control and empty vector groups (p?<?0.05) and significantly higher protein levels of caspase-3 than the other two groups (p?<?0.05). Cyclin D1, caspase-3, and MMP-2/9 expression was unchanged between the empty vector and blank control groups. SASH1 gene expression might be related to the inhibition of the growth, proliferation, and invasion of U251 cells and the promotion of U251 cells apoptosis.     

Galectin-3调控Wnt信号通路对脑胶质瘤细胞凋亡的影响

目的:半乳糖凝集素-3（Galectin-3）调控Wnt信号通路对人脑胶质瘤细胞凋亡的影响。方法:RT-PCR及Western blot检测人脑胶质瘤组织中Galectin-3的mRNA和蛋白表达;Western blot检测人脑胶质瘤U251、U87、SHG-44细胞中Galectin-3的蛋白表达;将Galectin-3的特异性siRNA(Galectin-siRNA)转染人脑胶质瘤U87细胞,Western blot、流式细胞术分别检测转染48 h后Galectin-3、Wnt5a、β-catenin和Cleaved caspase3蛋白表达及细胞凋亡率。结果:Galectin-3在人脑胶质瘤组织mRNA和蛋白表达均显著高于瘤旁组织（P＜0.01）;U251、U87、SHG-44细胞中Galectin-3蛋白表达从高到低为U87>U251>SHG-44,选择U87细胞作为后续研究;Galectin-3-siRNA1的Galectin-3蛋白表达最低,选择作为后续研究;NC-siRNA组细胞凋亡率、Cleaved caspase3、Wnt5a、β-catenin蛋白表达与对照组差异不显著（P＞0.05）,与对照组比较,Galectin-3-siRNA组细胞凋亡率明显升高,Cleaved caspase3蛋白表达明显升高,Wnt5a和β-catenin蛋白表达明显降低（P＜0.01）。结论:沉默Galectin-3表达可诱导人脑胶质瘤细胞凋亡,机制可能与Wnt信号通路的下调有关。     

CHKA基因沉默对胶质瘤细胞生物学行为的影响及其机制

背景与目的：胶质瘤是颅内常见的原发性恶性肿瘤之一,但发病机制不明,胆碱激酶A（choline kinase A,CHKA）与胶质瘤的恶性程度呈正相关,但具体作用途径尚不清楚。探讨下调CHKA基因的表达对胶质瘤细胞系U87和U251增殖、凋亡和迁移的影响及其作用机制。方法：使用慢病毒感染胶质瘤细胞系U87和U251,同时设置阴性对照组（shNC组）和空白对照组（control组）。为研究磷脂酰肌醇3-激酶（phosphoinositide 3-kinase,PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B,AKT）信号转导通路与CHKA的相互作用,另设DMSO组和LY294002组。采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR）检测CHKA基因mRNA的表达水平,采用细胞计数试剂盒-8（cell counting kit-8,CCK-8）法检测细胞增殖能力,采用流式细胞术检测细胞周期和凋亡,采用transwell实验检测细胞侵袭能力,采用划痕实验检测细胞迁移能力,采用蛋白质印迹法（Western blot）检测胶质瘤细胞中CHKA、PI3K、p-PI3K、AKT和p-AKT蛋白的水平。结果：Western blot结果显示,与control组和shNC组相比,shCHKA组胶质瘤细胞中p-PI3K、p-AKT和CHKA蛋白水平同步降低（P＜0.05）,PI3K、AKT蛋白水平无明显改变。在使用通路抑制剂后CHKA的表达量在control组和shNC组之间差异无统计学意义（P＞0.05）。与此同时,shCHKA组胶质瘤细胞的侵袭、迁移能力均弱于control组和shNC组（P＜0.05）,细胞凋亡率明显增加,细胞周期主要停滞于G ₂ 期,细胞增殖明显降低（P＜0.05）。结论：CHKA基因可能是通过调控PI3K/AKT信号转导通路,从而影响胶质瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭等生物学行为,且CHKA对PI3K/AKT信号转导通路的调控是单向的,PI3K/AKT信号转导通路中蛋白水平的降低对CHKA的表达无反馈作用。     

紫杉醇联合紫草素对U87脑胶质瘤细胞的作用及机制初探

目的:探讨紫杉醇联合紫草素通过协同作用杀伤人脑胶质瘤的作用。方法:将不同浓度的紫杉醇与紫草素单药及两种药物半量联合作用于胶质瘤细胞后，用CCK-8法检测细胞增殖抑制率，用划痕实验和Transwell法检测细胞生物学行为（迁移与侵袭）的影响，流式细胞技术检测细胞周期及凋亡率，Western-blot测定细胞外调节蛋白激酶（ERK）的蛋白表达。结果:紫杉醇与紫草素对胶质瘤细胞株U87细胞增殖具有抑制作用，且呈时间和剂量依赖性，并且发挥协同作用。紫杉醇与紫草素单独以及联合应用抑制U87细胞迁移与侵袭。两种药物联合应用促进U87细胞凋亡，紫草素组G1期的RNA含量增多，紫杉醇组及联合应用组的G2期RNA含量显著增高。Western-blot结果显示两者联合应用时，p-ERK蛋白表达降低。结论:与紫杉醇或紫草素单用组相比，两者半量联用通过协同作用能显著抑制U87胶质瘤细胞增殖、迁移、侵袭能力，促进细胞凋亡，阻滞细胞周期。紫杉醇与紫草素的协同效应机制与二者联合应用抑制p-ERK蛋白表达相关。