探讨鸦胆子素D对骨肉瘤细胞增殖、凋亡与自噬的作用

目的探讨鸦胆子素D对骨肉瘤细胞(143B HOS)增殖,骨肉瘤细胞凋亡与自噬的作用。方法用CCK8实验观察鸦胆子素D对143B HOS增殖的影响;用平板克隆实验观察鸦胆子素D对143B HOS细胞集落形成的影响;用流式细胞仪检测鸦胆子素D对143B HOS周期阻滞以及诱导凋亡的作用情况;用Western Blot检测143B HOS基础凋亡与自噬以及经鸦胆子素D诱导之后的凋亡与自噬情况;用荧光显微镜检测143B细胞基础LC3荧光鼬合蛋白表达以及经鸦胆子素D诱导之后的LC3荧光鼬合蛋白表达情况。结果(1)CCK8实验显示鸦胆子素D作用后143B HOS细胞的存活率下降,同时,也减少了143B HOS细胞克隆数的形成;(2)流式细胞仪检测细胞周期显示鸦胆子素D使143B HOS的G0/G1期细胞比例增高;(3)流式细胞仪检测细胞凋亡实验显示,鸦胆子素D使143B HOS的细胞凋亡比例增加;Western Blot检测143B HOS细胞Cleaved PARP的表达,结果显示,鸦胆子素D诱导Cleaved PARP表达增加;(4)Western Blot检测143B HOS细胞LC3B的表达,结果显示,鸦胆子素D诱导LC3B-II的表达增加;荧光显微镜检测143B细胞的LC3荧光鼬合蛋白实验,结果显示,鸦胆子素D诱导143B细胞绿色荧光斑点生成增多。结论 (1)鸦胆子素D抑制骨肉瘤细胞增殖;(2)鸦胆子素D诱导骨肉瘤细胞的凋亡;(3)鸦胆子素D诱导骨肉瘤细胞自噬。     

三氧化二砷影响人骨肉瘤细胞自噬现象的实验研究

目的：探讨三氧化二砷（AS2O3）对人骨肉瘤细胞（HOS,MG63）自噬现象的影响。方法用MTT法观察AS2O3对HOS、MG63细胞活力的作用;用透射电镜、免疫荧光染色、Westernblot检测HOS、MG63细胞基础自噬以及AS2O3诱导细胞自噬的情况。结果透射电镜、免疫荧光染色、Westernblot结果显示MG63基础自噬水平明显高于HOS（P＜0.01）;AS2O3抑制MG63细胞活力的IC50值15.42μmol/L明显大于AS2O3抑制HOS细胞的活力的IC50值1.067μmol/L,多耐药株MG63较HOS对AS2O3耐药;检测LC3-II及PARP蛋白的表达水平发现,随着HOS自噬水平的增加,HOS的凋亡逐渐增加,而AS2O3通过促进MG63的保护性自噬延缓了凋亡的发生。结论 AS2O3可引起骨肉瘤细胞自噬,对不同的骨肉瘤细胞自噬的影响各不相同。对于化疗耐药的骨肉瘤细胞MG63,AS2O3诱导的自噬是保护性自噬,自噬延缓了凋亡的发生;而对于化疗敏感的HOS细胞,AS2O3诱导的自噬促进了凋亡的发生。     

ECRG4增强鼻咽癌细胞对顺铂敏感性的初步研究

目的：研究 ECRG4在鼻咽癌细胞对顺铂反应性中的影响。方法：以不同浓度的顺铂分别处理ECRG4稳定转染的 CNE1细胞和对照细胞,MTT 实验检测 ECRG4高表达对鼻咽癌细胞对化疗敏感性的影响。流式细胞术、免疫荧光和 Western Blot 检测 ECRG4高表达对顺铂处理后的鼻咽癌细胞的细胞凋亡和细胞自噬的影响。用抑制细胞自噬的药物预先处理鼻咽癌细胞,观察该药物对 ECRG4高表达增强的鼻咽癌细胞化疗敏感性的影响。结果：和对照细胞相比,ECRG4的高表达显著增强鼻咽癌细胞对顺铂的敏感性。流式细胞术分析和细胞凋亡相关蛋白的 Western Blot 分析显示 ECRG4高表达对顺铂诱导的鼻咽癌细胞的细胞凋亡没有显著影响。免疫荧光和 Western Blot 分析显示 ECRG4的高表达上调自噬微管相关轻链蛋白3（LC3）的含量。同时抑制细胞自噬的药物可以降低 ECRG4高表达对 CNE1细胞对顺铂敏感性的促进作用。结论：ECRG4高表达促进鼻咽癌细胞对顺铂的敏感性,并且该作用是通过诱导细胞自噬的途径实现的。ECRG4有可能用于鼻咽癌个体化治疗方案的分子标记。     

盐酸川芎嗪联合顺铂对小鼠Lewis肺癌细胞黏附能力的影响

摘 要：［目的］ 探讨盐酸川芎嗪联合顺铂对小鼠Lewis肺癌细胞侵袭黏附能力的影响及其作用机制。［方法］ 小鼠Lewis肺癌细胞体外培养,细胞黏附侵袭实验检测细胞侵袭能力的改变,Western Blot检测各组细胞Twist、E-cadherin、N-cadherin蛋白表达的变化。［结果］ 经DDP与TMP干预36h后,与对照组相比,用药组细胞的侵袭能力呈剂量依赖性下降,且DDP联合TMP组与单独使用DDP组相比,抑制细胞侵袭的能力更为显著（P＜0.05,P＜0.01）。细胞黏附实验显示,与对照组（23.76±1.64）相比,单独应用顺铂（47.40±0.85）可显著性增高细胞黏附抑制率（P＜0.01）,而单独应用TMP需药物浓度达到2000μg/ml时才可显著性增高黏附抑制率（P＜0.01）,两药联合组黏附抑制率均高于单独使用DDP组,尤以高剂量组抑制率最为显著（P＜0.01）。与单独用药相比,DDP+TMP可降低Twist、N-cadherin蛋白,并上调E-cadherin蛋白的表达（P<0.01）。［结论］ 盐酸川芎嗪联合顺铂能抑制小鼠Lewis肺癌细胞的侵袭和转移,其机制可能与直接抑制肿瘤细胞侵袭,抑制相关基因蛋白Twist及N-cadherin,促进黏附分子E-cadherin蛋白表达有关。     

下调Beclin1 抑制卵巢癌A2780/DDP细胞对顺铂的耐药性

目的：探究敲减Beclin1 表达对卵巢癌细胞A2780 对顺铂耐药的影响及其相关机制。方法：以Western blotting 及qPCR 检测卵巢癌细胞株A2780 及耐药细胞株A2780/DDP 中Beclin1 的表达情况；A2780/DDP 细胞转染Beclin1 siRNA 后，用MTT法检测细胞对顺铂敏感性的变化，克隆形成实验检测各组细胞的克隆形成情况，流式细胞术检测各组细胞的凋亡，MDC荧光染色检测细胞的自噬情况，Western blotting 检测自噬相关蛋白、溶酶体相关膜蛋白Lamp-2 以及组织蛋白酶Cathepsin B的表达情况。结果：顺铂耐药细胞株A2780/DDP 中Beclin1 mRNA及蛋白的表达水平均明显高于A2780 细胞株（均P<0.05），在A2780细胞中加入顺铂刺激后Beclin1 蛋白的表达水平显著升高（P<0.05）。敲减Beclin1 表达可促进顺铂诱导的A2780/DDP 细胞的凋亡（P<0.05）、抑制细胞自噬的发生（P<0.05）、减少细胞克隆形成（P<0.05）和增加细胞对顺铂的敏感性（P<0.05）；Western blotting结果显示，敲减Beclin1 可上调A2780/DDP 细胞中cleaved-caspase 3 和Cathepsin B的蛋白水平，下调Atg3、Atg7、LC3Ⅱ/Ⅰ、Lamp-2的表达水平（均P<0.05）。结论：敲减Beclin1 表达可提高A2780/DDP细胞对顺铂的敏感性，其机制可能与调节自噬相关蛋白表达抑制细胞保护性自噬和影响溶酶体功能，从而促进顺铂诱导耐药细胞凋亡有关。     

氯喹促进顺铂诱导胃癌SGC7901细胞凋亡及其机制

  目的  研究自噬对顺铂（cisplatin,DDP）诱导的胃癌SGC7901细胞凋亡的影响,并初步探讨其可能机制。  方法  DDP和（或）氯喹处理胃癌SGC7901细胞,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,MDC染色后荧光显微镜观察自噬囊泡,West. ern Blot检测自噬和凋亡相关蛋白。  结果  5 mg/L的顺铂作用于胃癌SGC7901细胞24 h,细胞凋亡率为21.07%±2.12%,同时观测到自噬囊泡增多和LC3-Ⅱ蛋白表达升高;氯喹特异性抑制自噬活性后,提高了顺铂诱导的细胞凋亡率（30.16%±3.54%,P < 0.05）;检测到凋亡相关蛋白Caspase-3和P53表达增加,Bcl-2蛋白表达下降。  结论  自噬在顺铂诱导胃癌SGC7901细胞凋亡的过程中起保护作用,氯喹抑制自噬后,可能通过激活P53蛋白及灭活Bcl-2蛋白的表达来促进细胞凋亡,联合应用顺铂和氯喹有望成为胃癌治疗的新策略。      

单药顺铂与顺铂联合吉西他滨同步放化疗治疗中晚期宫颈癌的预后分析

摘 要：［目的］ 探讨中晚期宫颈鳞状细胞癌单药顺铂与顺铂联合吉西他滨同步放化疗的近期疗效、不良反应及生存率之间的差异。 ［方法］ 回顾分析121例宫颈鳞状细胞癌,FIGO分期为ⅡB~ⅢB期,卡氏评分≥70分。顺铂组（63例）接受外照射加锎252中子后装治疗及顺铂同步化疗;顺铂+吉西他滨组（58例）接受同样放疗及顺铂联合吉西他滨同步化疗。比较两组患者的近期疗效、不良反应及生存率。［结果］ 顺铂组近期有效（CR+PR）率为90.48%,顺铂+吉西他滨组近期有效率为91.38%,差异无统计学意义(P>0.05);顺铂+吉西他滨组中患者不良反应中骨髓抑制、肝功能损害与顺铂组相比,差异有统计学意义(P<0.05),其余不良反应无统计学差异;放射性肠炎和膀胱炎的发生率两组无差异;两组生存率差异无统计学意义(P>0.05)。 ［结论］ 在中晚期宫颈鳞状细胞癌的临床治疗中,对患者实施放射治疗的同时选择顺铂或顺铂联合吉西他滨的近期疗效和生存率之间无差异,联合用药增加患者的不良反应,还需探索更优的联合化疗方案。     

马钱子碱抑制非小细胞肺癌A549细胞生长并增强顺铂敏感性

摘 要：［目的］ 评估马钱子碱对非小细胞肺癌A549细胞的增殖、侵袭和迁移的影响,并探讨其增强化疗敏感性。［方法］ 采用NSCLC细胞系A549为研究对象,分别采用CCK-8法、集落形成实验和细胞侵袭、迁移实验检测马钱子碱对A549细胞活力、侵袭和迁移的影响;应用Western blot检测马钱子碱对PTEN、Akt和p-Akt蛋白表达影响。［结果］ 马钱子碱或顺铂单独有效抑制细胞生长、细胞集落的发育以及细胞的侵袭和迁移（P<0.05）,并且马钱子碱和DDP联合处理对细胞的抑制作用强于单独的化合物（P<0.05）。Western blot分析结果显示,在A549细胞中,马钱子碱（20μg/ml）处理增加PTEN蛋白的表达（P<0.05）减少了p-Akt蛋白表达（P<0.05）,并且hsa-miR-21 minic可部分抑制马钱子碱对PTEN蛋白表达的促进作用。［结论］ 马钱子碱可抑制肺癌的进展,增强抗癌药物顺铂对肺癌细胞的作用。     

自噬在视网膜母细胞瘤Y79细胞顺铂耐药中的作用及其机制

目的 研究自噬在视网膜母细胞瘤Y79细胞顺铂耐药中的作用及其机制。方法 CCK-8法检测细胞IC50;将Y79细胞随机分为对照组（Control）、顺铂组（Cis）和顺铂联合应用自噬阻断剂3-甲基腺嘌呤组（Cis+3-MA）,Western blot法、细胞自噬染色检测试剂盒（MDC法）和透射电子显微镜观察细胞自噬情况;CCK-8法检测顺铂对细胞的抑制率变化,Annexin V/PI双染流式法检测细胞凋亡变化,q-PCR检测相关耐药基因转录水平,Fluo-4 AM钙离子荧光探针染色检测细胞内钙离子变化,Western blot法检测CaMKK2、p-AMPK、mTORC1、LC3Ⅱ的表达。结果 视网膜母细胞瘤Y79细胞在顺铂的诱导下发生自噬,加入自噬阻断剂3-MA后细胞自噬水平下调。与顺铂组相比,Cis+3-MA组顺铂抑制率增加,凋亡率增加,相关耐药基因转录水平下调。细胞加入顺铂后,细胞内钙离子水平增加,CaMKK2、p-AMPK、LC3Ⅱ表达上调,mTORC1表达下调。结论 顺铂诱导肿瘤细胞产生的自噬对视网膜母细胞瘤细胞Y79耐药起保护作用,抑制自噬可以改善肿瘤细胞对顺铂的耐药性。顺铂可能是通过Ca2+激活CaMKK2/AMPK/mTORC1通路诱导Y79细胞自噬。     

miRNA-95在骨肉瘤组织中的表达及其对MG-63细胞增殖和侵袭的影响

目的：研究miRNA-95在骨肉瘤组织和细胞株中的表达情况及其对骨肉瘤MG-63细胞增殖、凋亡、细胞周期和侵袭 能力的影响。方法：以实时荧光定量PCR检测15例骨肉瘤组织及其癌旁组织（标本收集自2015年1月至2018年1月青岛市海 慈医疗集团外科手术的病例）和骨肉瘤细胞株（MG-63、 U2OS、143B和HOS）与正常人成骨细胞株hFOB1.19中的miRNA-95表 达。利用Lipofectamine 2000将miRNA-95 mimics和miRNA-95 inhibitors分别转染至人骨肉瘤MG-63细胞株中，并设置miRNANC对照组，CCK-8法检测各组细胞增殖活力变化，流式细胞术检测各组细胞周期和凋亡变化，Transwell方法检测各组细胞侵袭 能力变化，双荧光素酶活性实验检测并验证miRNA-95在MG-63细胞中的靶向基因。结果：miRNA-95在人骨肉瘤组织中的表 达水平显著高于癌旁组织（P<0.01）， 在MG-63、 U2OS、143B和HOS细胞中的表达水平显著高于hFOB1.19，且在MG-63细胞中表 达水平最高（P<0.01）。与miRNA-NC对照组相比，miRNA-95 mimics组中MG-63细胞的增殖活力显著上升、细胞凋亡率显著下 降而侵袭率显著上升（均P<0.01）、 而miRNA-95 inhibitors组中MG-63细胞增殖活力显著下降、细胞周期被阻滞、细胞凋亡率显著 上升而侵袭率显著下降（均P<0.01）；miRNA-95在骨肉瘤MG-63细胞中靶向上皮膜蛋白-1（epithelial membrane protein-1，EMP-1） 基因发挥作用。结论：miRNA-95在人骨肉瘤组织和细胞中均呈高表达，抑制骨肉瘤MG-63细胞中miRNA-95表达能够促进细 胞凋亡进而抑制细胞增殖、细胞周期及侵袭能力，该作用可能通过靶向EMP-1基因而发挥。     

食管平滑肌瘤10例临床治疗体会

我院１９７５年６月～１９９０年７月共收治食管平滑肌瘤１０例，占同期食管肿瘤总数的０．１９２％（１０／１０９２）。位于食管上段２例，中段５例，下段３例。Ｘ线食管钡餐造影是诊断本病的主要方法。行食管粘膜外肿瘤摘除９例，食管部分切除１例，效果良好。本文就其诊断与手术治疗进行了讨论。     

仙人掌原液毒性的初步研究

背景与目的： 研究仙人掌原液的毒性。 材料与方法： 小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。 结果： 仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g/kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论： 在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

胰头癌手术切除可能性的术前评价

目的通过总结胰头癌病人的临床表现和影象学检查结果来评价手术切除的可能性。方法总结32例胰头癌病人的临床表现和CT、磁共振（MRI）检查结果,判断肿瘤是否已发生邻近浸润或远处转移,以此来评价其手术切除的可能性。结果在22例作CT检查的病例中,判断正确的为17例,准确率为77．3%。作MR检查9例,全部判断正确,准确率为100%。结论某些特殊的临床表现和CT、MR检查对判断肿瘤是否发生邻近浸润或转移有较大价值,为术前评价手术切除的可能性提供依据。     

Assessment of the degree of carcinogenicity of small doses of nitrites

Chronic experiments on CBA and C57B1 mice and acute experiments on CBA mice established: (a) carcinogenic effect of sodium nitrite given continuously with drinking water (0.1; 1.0 and 10.0 maximum allowable concentration) in combination with morpholine fed with bread, and (b) endogenous synthesis of nitrosomorpholine as a result of simultaneous intragastric administration of same doses of sodium nitrite and morpholine. Also, nitrosomorpholine and N-nitrosodimethylamine synthesis was observed in vitro following addition of low-dose sodium nitrite, morpholine and amidopyrine to human gastric juice. Carcinogenic hazard associated with low-dose nitrite consumption in humans is discussed.     

仙人掌原毒性的初步研究

背景与目的:研究仙人掌原液的毒性。材料与方法:小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。结果:仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g／kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论:在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

胆囊癌29例分析

目的探索胆囊癌的防治方法。方法分析29例胆囊癌病人临床资料、治疗方法及结果。结果术前诊断明确者21例，剖腹探查发现已属晚期，9例为Ⅳ期行根治术，12例为Ⅴ期未行根治术，均于术后1年内死亡。术前怀疑胆囊癌者5例，剖腹探查冰冻切片证实为Ⅴ期及Ⅳ期者各1例，Ⅴ期未行根治术，Ⅳ期行根治术，均于术后1年内死亡；Ⅲ期者3例，行胆囊癌根治术分别于术后10月、13月、17月死亡。2例术中冰冻切片发现的Ⅱ期胆囊癌，行胆囊癌根治术，分别于术后23月、26月死亡。1例意外胆囊癌属Ⅰ期胆囊癌，术后5年半死亡。结论要减少胆囊癌危害，重在及时治疗胆囊结石。     

中晚期贲门癌148例的外科治疗

目的　总结贲门癌手术治疗影响生存率的因素 ,提供今后工作参考。方法　对 14 8例经手术治疗的贲门癌患者进行术后并发症、绝对生存率的X2 检验。结果　本组切除率为 94.5 9% ,近半胃切除占 72 .14 % ,1、3、5年生存率分别为 67.9%、45 %和 2 4.3 %。病期、外侵程度和淋巴结转移等因素对 5年生存率有显著影响 (P <0 .0 1)。术后并发症以吻合口瘘及肺癌并发症为多见 ,其发生率为 3 .6% ,手术死亡率 1.4%。结论　提高生存率的关键在于早期诊断 ,根治手术和术后积极综合治疗。