索拉非尼联合奥沙利铂对人肝癌ＢＥＬ-７４０２细胞抑制作用的实验研究

目的　探讨索拉非尼联合奥沙利铂对人肝癌ＢＥＬ-７４０２细胞的抑制作用。方法　选取人肝癌细胞株ＢＥＬ-７４０２,用奥沙利铂和索拉非尼单药或联合（含不同给药顺序）作用于细胞,观察最佳抑制效果。ＭＴＴ法检测奥沙利铂和索拉非尼分别对肝癌ＢＥＬ-７４０２细胞的抑制作用并计算半数抑制浓度（ＩＣ_５０）;电镜下观察细胞形态和超微结构的改变;流式细胞仪检测细胞周期分布及细胞凋亡的变化。结果　奥沙利铂单药及联合索拉非尼组ＢＥＬ-７４０２细胞出现Ｓ期、Ｇ２／Ｍ期阻滞,索拉非尼单药组仅出现Ｓ期阻滞。先用奥沙利铂联合组的ＢＥＬ-７４０２细胞凋亡率最高,为（４０.９４±４.６２）％,其次为先用索拉非尼联合组的凋亡率（３０.０２±４.１５）％,联合组的ＢＥＬ-７４０２细胞凋亡率均高于索拉非尼单药组（Ｐ＜０.０５）。结论　人肝癌ＢＥＬ-７４０２细胞体外对索拉非尼和奥沙利铂均高度敏感,两药联合应用对肝癌细胞有协同抑制作用,且先用奥沙利铂联合给药的效果更好。     

人参皂苷Rg3抗人肝癌细胞株侵袭和转移的实验研究

目的:探讨人参皂苷Rg3抗人肝癌细胞侵袭和转移的作用及其相关机制。方法:选择人类肝癌细胞株SMMC-7721细胞和建株人脐静脉内皮细胞株ECV304作为研究对象,通过细胞抑制实验(MTT法)、细胞粘附试验和免疫组化方法系统地观察人参皂苷Rg3体外对SMMC-7721细胞及ECV304细胞生长的抑制作用、SMMC-7721细胞与纤维粘连蛋白(FN)粘附以及表达nm23、CD44、VEGF基因蛋白的影响。结果:人参皂苷Rg3能够显著地抑制肝癌细胞株SMMC-7721细胞及内皮细胞株ECV304的生长,抑制SMMC-7721细胞与FN粘附及CD44、VEGF的表达,而增强nm23基因的表达。结论:人参皂苷Rg3具有抗人肝癌细胞侵袭和转移的作用,机制可能与其能够抑制肝癌细胞侵袭活力、调节与肝癌细胞侵袭与转移密切相关的基因表达和抗肿瘤血管形成有关。     

IFN-γ对白血病细胞株FBL-3细胞生物学行为的影响

目的探讨IFN-γ对白血病细胞增殖、细胞周期、凋亡及侵袭等生物学行为的影响。方法用不同剂量的IFN-γ处理小鼠白血病细胞株FBL-3,MTT比色法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测瘤细胞周期分布和凋亡率;根据瘤细胞穿过Matrigel胶的能力,检测瘤细胞体外侵袭力,以未处理组作为对照。结果（1）小剂量IFN-γ（5 ng/ml）对白血病（FBL-3）细胞增殖没有明显作用（P＞0.05）,50~200 ng/ml IFN-γ对白血病细胞株FBL-3细胞作用48小时,存活率均可达到80%左右;但是大剂量IFN-γ（500 ng/ml）则明显抑制细胞的增殖(P＜0.05),存活率不足50%;（2）FBL-3细胞经IFN-γ处理后,G0/G1期细胞明显增多,G₂/M期细胞相对减少,提示细胞被阻滞在G0/G1期;（3）IFN-γ在促白血病细胞的凋亡和抑制其体外侵袭能力上存在明显剂量依赖性(P＜0.05)。结论IFN-γ通过剂量依赖性方式抑制白血病细胞的增殖、促凋亡、降低细胞的侵袭能力,具有抗白血病作用。     

人参皂苷Rg3、索拉非尼和奥沙利铂不同联合方式抗裸鼠肝癌移植瘤血管生成的作用研究

目的 观察人参皂苷Rg3、索拉非尼、奥沙利铂单药及联合对裸鼠人肝癌细胞移植瘤血管生成的作用并探讨其可能机制。 方法 以裸鼠人肝癌转移模型LCI-D20为观察对象,将60只荷瘤裸鼠随机分成8组,分别为人参皂苷Rg3组（A组）、奥沙利铂组（B组）、索拉非尼组（C组）、人参皂苷Rg3+索拉非尼组（D组）、人参皂苷Rg3+奥沙利铂组（E组）、奥沙利铂+索拉非尼组（F组）、人参皂苷Rg3+奥沙利铂+索拉非尼组（G组）和生理盐水对照组（H组）。肿瘤接种第11 d后开始给药,人参皂苷Rg3 5 mg／kg（1天1次）、奥沙利铂5 mg／kg（2天1次）,均用腹腔注射,索拉非尼30 mg／kg（1天1次）灌胃。给药14 d后处死裸鼠,剥离瘤体,检测各组瘤组织中微血管密度（MVD）,免疫组化染色和Western blotting检测各组瘤组织中血管内皮生长因子（VEGF）、缺氧诱导因子（HIF）-1α和VEGF受体（VEGFR）-2的表达。 结果 与H组比较,其余各组MVD均较低（P＜0.01）,VEGF蛋白阳性表达率均较低（P＜0.05）,HIF-1α蛋白阳性表达率均下降,但差异无统计学意义（P＞0.05）;A组、D组、E组的VEGFR-2蛋白阳性表达率显著低于H组（P＜0.05）。与H组比较,仅A组、B组、C组、D组、E组能显著下调瘤组织中VEGF、HIF-1α和VEGFR-2蛋白的表达（P＜0.05）。 结论 人参皂苷Rg3具有一定的抗血管生成作用,其机制可能与下调VEGF、HIF-1α、VEGFR-2及MVD的表达有关。人参皂苷Rg3分别与索拉非尼、奥沙利铂联合可以增强抗血管生成作用,但三药联合时抗血管生成作用反而减弱,提示可能存在其他抗肿瘤机制,值得进一步研究。     

白藜芦醇通过下调PRMT5表达抑制肝胆管癌SMMC-7721细胞的增殖、侵袭和细胞周期

目的：探究白藜芦醇（Res）通过调控PRMT5表达对肝胆管癌SMMC-7721细胞增殖、侵袭、细胞周期的影响及其机制。方法：常规培养正常肝细胞LO2和SMMC-7721细胞,用0、20、40、80μmol/L的Res进行处理,用qPCR法、MTT法、Transwell实验、流式细胞术和WB法分别检测Res处理后PRMT5 mRNA在LO2和SMMC-7721细胞中的表达,Res对SMMC-7721细胞增殖能力、侵袭能力、细胞周期和凋亡,以及PRMT5、cyclin D1和cyclin E1蛋白表达的影响。结果：PRMT5在SMMC-7721细胞中呈高表达（P<0.01）;20、40、80μmol/L Res均能明显抑制PRMT5 mRNA和蛋白在SMMC-7721细胞中的表达（均P<0.01）,抑制SMMC-7721细胞的增殖能力（P<0.01）和侵袭能力（P<0.05）,阻滞SMMC-7721细胞周期于G0/G1期并促进其凋亡（P<0.01）,明显抑制SMMC-7721细胞中周期蛋白cyclin D1、cyclin E1蛋白的表达（P<0.01）。...     

表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂ZD1839与奥沙利铂联合对人肺癌A549细胞的作用

背景与目的:ZD1839是一种表皮生长因子受体酪氨酸激酶的小分子抑制剂,是目前肺癌分子靶向治疗中较为成熟的药物,因其单药临床有效率低,如何与化疗联合提高抗癌效应受到关注.本实验通过研究ZD1839联合奥沙利铂的不同给药方案对人肺腺癌细胞A549的杀伤作用,探讨两药联合的最佳模式.方法:以药物联合效应测定方法,评价ZD1839和奥沙利铂不同给药顺序对A549细胞的抑制作用,以流式细胞仪测定不同联合方案对A549细胞周期分布及凋亡率的影响.观察ZD1839、奥沙利铂不同给药方案作用时,裸鼠A549细胞移植瘤生长情况,测定肿瘤生长抑制率.结果:先奥沙利铂后ZD1839的序贯给药方案表现出明显的协同作用,药物联合指数为0.51±0.01;而先ZD1839后给予奥沙利铂时,药物联合指数为1.56±0.03,两药间为拮抗作用.先奥沙利铂后ZD1839组G2/M期细胞比例与其他组相比明显增加,达到37.9%(P＜0.05),细胞凋亡率达到22.3%.体内实验表明,先奥沙利铂后ZD1839组抑瘤率最高,达到58.9%;而先奥沙利铂 ZD1839 24 h后ZD1839 48 h组的抑瘤率为52.4%,ZD1839后奥沙利铂组的抑瘤率为30.6%.结论:先奥沙利铂后ZD1839序贯给药对A549细胞增殖的抑制作用更强.     

多西他赛与吉非替尼不同时序应用对人肺腺癌细胞的作用

目的 探讨多西他赛与吉非替尼不同时序应用对人肺腺癌细胞A549和PC-9的生长影响及其细胞学机制。方法 qPCR-HRM法检测人肺腺癌细胞EGFR和K Ras基因突变,MTT法检测细胞增殖, Western blotting检测细胞信号蛋白及磷酸化表达,FCM法检测细胞周期变化。结果 人肺腺癌A549细胞为EGFR基因野生型,PC-9细胞为EGFR第19外显子突变型。多西他赛和吉非替尼单药或联合用药均能抑制A549和PC-9细胞生长,呈浓度依赖性。多西他赛对A549和PC-9细胞生长的半数抑制浓度（IC₅₀）分别为5.24×10^-7和2.13×10^-8mol／L,吉非替尼分别为1.28×10^-5和4.58×10^-8mol／L。在IC₅₀浓度时,多西他赛序贯吉非替尼对A549和PC-9细胞的生长抑制率分别为60.00%和57.45%,均较单药组明显增高（P＜0.05）;而同时用药只对PC-9细胞有增效作用,抑制率为53.46％,较单药组明显增高（P＜0.05）。多西他赛表现为增强A549、PC-9细胞EGFR和ERK磷酸化,吉非替尼表现为抑制,两药均抑制PC-9细胞IGF-1R磷酸化。多西他赛序贯应用吉非替尼显著抑制EGFR和ERK磷酸化,两药同时应用对抑制PC-9细胞的IGF-1R磷酸化具有增强作用。多西他赛将A549及PC-9细胞阻滞在G₂期,吉非替尼将PC-9细胞明显阻滞在G₁期。结论 多西他赛序贯吉非替尼能够抑制EGFR野生型和突变型的A549及PC-9细胞生长,且呈增效作用,可能与影响细胞EGFR和ERK磷酸化有关;两药同时应用仅对PC-9细胞具有增效作用,可能与IGF-1R磷酸化抑制有关;不同时序应用的效果均可能与细胞周期相关。     

重组人血管内皮抑素与紫杉醇联合诱导人食管癌细胞Eca-109凋亡的实验研究

目的 探讨重组人血管内皮抑素（恩度）与紫杉醇联合作用对人食管癌细胞Eca-109增殖和凋亡的影响。方法 MTT法检测恩度与紫杉醇联合用药48h后对Eca-109细胞增殖的抑制作用;倒置显微镜下观察恩度、紫杉醇单药与联合作用于人食管癌Eca-109细胞48h后细胞形态学的改变;Annexin V/PI双染流式细胞术检测恩度、紫杉醇不同用药组作用48h后的细胞凋亡率;RT-PCR法检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax、p21、p53 mRNA的表达情况。结果恩度、紫杉醇作用于Eca-109细胞48h后的半数抑制浓度（IC₅₀）分别为276.6627μg/ml和3.8789μg/ml。恩度单药组、紫杉醇单药组、恩度+紫杉醇组、恩度→紫杉醇组、紫杉醇→恩度组作用Eca-109细胞48h后的抑制率分别为（33.62±2.30）%、（49.14±1.45）％、（56.29±0.71）％、（41.88±1.23）％和（51.48±0.98）％;与阴性对照组比较,恩度、紫杉醇各加药组对Eca-109细胞均有明显的抑制作用（P＜0.01）;恩度+紫杉醇组的抑制率高于其他各组（P＜0.05）。光镜下恩度、紫杉醇作用48h后Eca-109细胞具有典型的凋亡形态学改变,恩度单药组、紫杉醇单药组、恩度+紫杉醇组、恩度→紫杉醇组、紫杉醇→恩度组的总凋亡率分别为（8.78±0.19）％、（13.82±0.15）％、（18.88±0.29）％、（11.37±0.24）％和（14.88±0.34）％;恩度、紫杉醇各加药组的总凋亡率均高于阴性对照组（P＜0.05）;恩度+紫杉醇组的总凋亡率明显高于其他各组（P＜0.01）。与阴性对照组比较,恩度单药组、紫杉醇单药组、两药序贯组的Bcl-2 mRNA表达均明显降低;恩度与紫杉醇联合用药组的Bax mRNA表达均降低;各用药组的p21 mRNA表达均降低;恩度与紫杉醇序贯用药组的p53表达降低。结论 恩度与紫杉醇联合可协同诱导人食管癌细胞的凋亡,其作用机制可能与下调凋亡抑制基因的表达有关。     

人参皂甙Rg3在小鼠肝癌淋巴结转移模型中诱导细胞凋亡的作用

目的:观察人参皂甙Rg3对小鼠肝癌淋巴结转移模型中肿瘤细胞凋亡的诱导作用,探讨人参皂甙Rg3抗肿瘤淋巴结转移的机制.方法:建立小鼠肝癌淋巴结转移模型;光镜和透射电镜下观察各组(Rg3预防组、Rg3治疗组、Rg3与顺铂联合治疗组、顺铂治疗组及对照组)中原发瘤及转移瘤组织的形态学结构改变,并通过流式细胞仪分析肿瘤细胞的凋亡.结果:Rg3预防组及治疗组电镜下(5份样品)可见较多细胞凋亡小体的形成(5/5,4/5);顺铂治疗组的形态改变以细胞破坏为主,凋亡的细胞较少;联合治疗组细胞的凋亡和坏死程度相当.流式细胞学检测分析结果为:Rg3预防组、治疗组及联合治疗组均见细胞凋亡的特征峰(5/5),而顺铂治疗组为1/5,对照组未见凋亡峰(0/5).结论:人参皂甙Rg3抗肿瘤细胞淋巴结转移的作用与诱导细胞凋亡有关.     

索拉非尼、奥沙利铂单药及不同联合方案对人肝癌细胞HepG2的抑制作用

【摘 要】目的 探讨索拉非尼、奥沙利铂单药和两药联合应用对人肝癌细胞株HepG2增殖、迁移和侵袭的影响。方法 选择人肝癌细胞株HepG2并分为6组处理：奥沙利铂（0.5 μg／ml）组（O）、索拉非尼（2.0 μmol／L）组（S）、同时联合用药（奥沙利铂 0.5 μg／ml,索拉非尼2.0 μmol／L）组（O+S）、奥沙利铂（0.5 μg／ml）序贯索拉非尼（2.0 μmol／L）组（OS）、索拉非尼（2.0 μmol／L）序贯奥沙利铂（0.5 μg／ml）组（SO）和加入100 μl普通培养液的阴性对照组（C）;分别采用MTT法、流式细胞术、免疫荧光技术、迁移与侵袭实验,观察奥沙利铂、索拉非尼单药和两药联合应用对HepG2细胞增殖、侵袭与转移的作用。结果 MTT法显示,48 h后用药组对HepG2细胞增殖均有显著的抑制作用,O+S组的细胞抑制率最高,为（72.13±0.99）％,均明显高于O组、S组和SO组（P＜0.01）,但与OS组的差异无统计学意义（P＞0.05）;流式细胞术及荧光显微镜观察显示,O+S组处理HepG2细胞48 h的凋亡率最高,达65.33％,但与OS组的差异无统计学意义（P＞0.05）;细胞迁移实验表明,O+S组的细胞迁移抑制率为（71.67±6.66）％,均明显高于O组、S组和SO组（P＜0.01）,但与OS组的差异无统计学意义（P＞0.05）;O+S组和OS组均表现为两药协同作用（P＜0.01）,SO组则表现为两药相加作用（P＜0.05）。细胞侵袭实验表明,O+S组的细胞侵袭抑制率为（76.00±5.57）％,明显高于O组、S组（P＜0.01）;O+S组与OS组均表现为两药协同作用。结论 同时联用奥沙利铂和索拉非尼或序贯应用两药较其各自单药对人肝癌HepG2细胞的增殖、迁移、侵袭抑制作用更强,其中先用奥沙利铂序贯索拉非尼与同时联用奥沙利铂和索拉非尼的协同增效作用相似,均优于先用索拉非尼序贯奥沙利铂。     

奥沙利铂对人肝癌细胞的放射增敏作用

目的：研究奥沙利铂（Ｌ-ＯＨＰ）对人肝癌ＳＭＭＣ-７７２１细胞的放射增敏作用。方法：实验分为单纯用药组及放疗＋药物组，采用ＭＴＴ法观察Ｌ-ＯＨＰ不同药物浓度与不同外放射剂量２４、４８、７２ｈ对人肝癌细胞ＳＭＭＣ-７７２１的抑制作用。计算细胞抑制率和增敏比，应用统计软件ＳＰＳＳ１１.５处理数据，运用方差分析和多元相关方法分析各因素对人肝癌细胞ＳＭＭＣ-７７２１的抑制作用以及各因素之间的交互作用。结果：生长抑制率与放疗剂量、Ｌ-ＯＨＰ浓度呈正相关，而时间因素与生长抑制率无相关性（Ｐ＞０.０５）。结论：在采用Ｌ-ＯＨＰ对肝癌进行放射增敏时，时间因素可忽略不计。当Ｌ ＯＨＰ浓度大于０.６２５ｍｇ／Ｌ，将可获得放疗增敏的效果。     

鸦胆子油对肝癌细胞SMMC-7721增殖的抑制作用

目的：探讨鸦胆子油抑制肝癌细胞生长的机制。方法：人肝癌细胞SMMC-7721培养于含10%胎牛血清、100 U·ml^-1青霉素、链霉素的RPMI1640培养液中。以不同浓度的鸦胆子油乳加入培养液,作用一定的时间,进行MTT比色实验,检测生长抑制率及分析细胞周期。结果：MTT比色法测定显示鸦胆子油抑制肝癌细胞的生长,随着浓度增加和作用时间的延长,抑制作用呈现逐渐增加的趋势。细胞周期分析提示：G0-G1期比例逐渐增加,而S期比例逐渐减少,1μg·ml^-1组中各时间点及2μg.ml-1组中各时间点均有显著差异（P〈0.01）。G2-M期细胞比例减少,但差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：鸦胆子油抑制体外培养的人肝癌细胞的增殖,机制可能是将肝癌细胞阻滞于G0-G1期。     

人参皂苷Rg3对人胰腺癌细胞Pim-3及Bad凋亡蛋白表达的影响

背景与目的：人参皂苷Rg3是一种抗肿瘤中药单体,有研究表明人参皂苷Rg3对肝癌、肺癌、结肠癌、胰腺癌等肿瘤细胞的浸润具有明显抑制作用。本实验目的是研究人参皂苷Rg3对人胰腺癌细胞株PANC-1中原癌基因Pim-3及磷酸化Bad蛋白pBad（Ser112）、Bad（Serl36）表达的影响。方法：用浓度为0、10、20、40和80μmol／L的人参皂苷Rg3处理PANC-1细胞24h后,用四甲基偶氮唑盐（MTF）法检测人参皂苷Rg3对PANC-1细胞增殖的抑制作用;用倒置显微镜和流式细胞术观察人参皂苷Rg3对PANC-1细胞凋亡的诱导作用;用Western blot法检测经不同浓度人参皂苷Rg3处理后的PANC-1细胞中pim-3、Bad、pBad（Ser112）和pBad（Ser136）的表达;定向克隆Pim-3的发夹状寡核苷酸（shorthairpinRNA,shRNA）到真核表达载体形成重组质粒pSilencer3．1-HINeo—Pim-3shRNA．将重组质粒通过脂质体介导转染PANC-1细胞,采用AnnexinV／PI流式细胞分析法检测转染后PANC-1细胞的凋亡．用Westernblot法检测转染后PANC-1细胞的pim-3及pBad（Serl12）的表达。结果：10、20、40和80btmol／L的人参皂苷Rg3对PANC-1细胞增殖的抑制率分别为20．2％、33．4％、52．8％、65．3％;经10～80μmol／L的人参皂苷Rg3处理后PANC-1细胞呈现明显的凋亡形态学改变,80μmol／L人参皂苷Rg3处理PANC-1细胞24h后,与正常对照组细胞凋亡率（3．3±2．1）％比较,处理组细胞凋亡率（12．2±1．3）％增加（P〈0．05）;人参皂苷Rg3处理PANC-1细胞24h后,Bad总蛋白表达没有明显变化。pim-3和pBad（Ser112）的表达均随人参皂苷Rg3浓度的增加而逐渐减弱。PANC-1细胞中pBad（Ser136）不表达;Pim-3shRNA转染PANC-1细胞后．与正常对照组比较,转染组早期凋亡率和总凋亡率均增加[（11．5±3．7）％VS．（5．8±2．2）％,P〈0．01;（20．8±2．6）％VS．（13．0±4．1）％,P〈O．05],转染组pim-3及pBad（S     

三氧化二砷对人肝癌SMMC-7721细胞侵袭转移能力的影响

目的：探讨三氧化二砷（As2O3）对人肝癌SMMC-7721细胞黏附、侵袭、转移能力的影响以及其机制。方法：采用MTT法观察人肝癌SMMC-7721细胞经As2O3作用前后对基底膜黏附能力的影响;Transwell膜侵袭系统观察SMMC-7721细胞经As2O3作用前后游走与穿透基底膜能力的改变。免疫细胞化学方法检测人肝癌细胞经As2O3作用前后CD44V6表达的改变。结果：As2O3能显著抑制人肝癌SMMC-7721细胞与m arigel的黏附、抑制细胞游走与穿透基底膜的作用（P〈0.05）,能抑制人肝癌细胞CD44v6的表达（P〈0.05）。结论：As2O3具有抑制人肝癌细胞的侵袭、转移能力,其抑制作用可能与CD44v6的表达下调有关。     

顺铂对肝癌细胞株SMMC-7721中SATB1表达的影响

目的:探讨肝癌细胞株SMMC-7721加入顺铂后细胞形态及特异AT序列结合蛋白1(special AT-rich sequence-bindingprotein 1,SATB1)表达的变化。方法:SMMC-7721细胞株中加入不同浓度(0、2.5、5和10μg/ml)顺铂培养24 h后,在倒置显微镜下观察细胞形态变化,半定量逆转录RT-PCR法检测SATB1 mRNA的表达,Western blot检测SATB1蛋白的表达。结果:SMMC-7721细胞与不同浓度顺铂共培养24 h后,倒置显微镜下可见细胞形态明显改变,细胞数减少,损伤、死亡的细胞增多。SATB1mRNA及蛋白的表达均随着顺铂浓度的增加而减少,其中5和10μg/ml顺铂组与对照组间的差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:顺铂可抑制SMMC-7721细胞增殖及SATB1的表达,从而达到抑制肝癌细胞生长的目的。     

阿霉素联合TRAIL对人肝癌细胞增殖与TRAIL受体表达的影响

目的 探讨阿霉素联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）对肝癌细胞HepG2和SMMC-7721增殖及TRAIL受体表达的影响。方法 采用MTT法分别检测阿霉素、TRAIL及低浓度阿霉素联合TRAIL处理HepG2和SMMC-7721细胞的生长抑制率;RT-PCR和Western blotting分别检测阿霉素作用前后HepG2和SMMC-7721细胞TRAIL受体DR4、DR5的mRNA和蛋白表达水平。结果 3种浓度阿霉素（0.86、8.6、86μmol／L）作用24h后,对HepG2和SMMC-7721细胞的生长抑制率分别为（8.84±0.44）％和（8.67±1.22）％、（24.12±1.11）％和（25.39±2.26）％、（64.55±4.05）％和（66.2±3.74）％,呈浓度依赖性,不同浓度组之间差异均有统计学意义（P＜0.05）。4种浓度TRAIL（10、100、500、1000ng／ml）作用24h后,对HepG2和SMMC 7721细胞的生长抑制率分别为（5.83±0.25）％和（5.66±0.56）％、（9.60±1.38）％和（8.96±1.13）％、（11.87±1.43）％和（12.11±1.84）％、（15.12±3.84）％和（16.16±1.41）％,其他3种浓度分别与10ng／ml TRAIL比较,差异均有统计学意义（P＜0.01）。低浓度阿霉素联合TRAIL作用于HepG2和SMMC-7721细胞,低浓度阿霉素能够增加HepG2和SMMC-7721细胞对TRAIL治疗的敏感性,并且随着时间的延长和TRAIL浓度的增加,细胞抑制率逐渐增加,呈时间 效应和剂量 效应关系;无论在mRNA还是蛋白水平,阿霉素处理后HepG2细胞死亡受体DR4、DR5的表达水平较未处理组显著增加;在SMMC-7721细胞,阿霉素处理后,DR5的表达水平显著增加,而DR4的表达水平与阿霉素未处理组相似。结论 低浓度阿霉素能够增加肝癌细胞对TRAIL治疗的敏感性,其机制可能是阿霉素增加死亡受体特别是DR5的表达水平,从而诱导细胞凋亡增加,TRAIL在肝癌治疗方面存在潜在的临床应用价值。     

shRNA靶向沉默Eag 1钾通道对骨肉瘤细胞增殖、细胞周期及cyclin D1／E表达的影响

目的 探讨短发夹RNA（shRNA）靶向沉默Ether-go-go 1（Eag1）钾通道对骨肉瘤MG-63细胞增殖、细胞周期及cyclin D1／E表达的影响。 方法 使用成功构建的Ad5-Eag1-shRNA表达载体转染MG-63细胞（抑制组）,同时设转染无义序列（Ad5-Control-shRNA）的空转染组及不进行任何处理的对照组。采用逆转录聚合酶链式反应和Western blotting检测Ad5-Eag1-shRNA转染骨肉瘤MG-63细胞后的Eag1 mRNA和蛋白水平,分别采用CCK-8法和克隆形成实验检测各组的细胞增殖情况,流式细胞仪和Western blotting分别检测各组的细胞周期变化和细胞周期蛋白（cyclin D1和cyclin E）的蛋白水平。建立裸鼠骨肉瘤异种移植模型并测量各组裸鼠肿瘤体积的变化情况。结果 抑制组的Eag1 mRNA和蛋白水平均低于空转染组和对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）;与其余两组相比,抑制组的细胞增殖、克隆形成数、S期细胞比例及细胞周期蛋白水平均降低,而G0／G1期细胞比例升高,以上差异均有统计学意义（P＜0.05）。抑制组裸鼠的瘤体积小于空转染组和对照组（P＜0.05）。结论 通过shRNA抑制Eag1基因表达可抑制MG-63细胞的增殖并诱导G0／G1期阻滞,可能与调控cyclin D1／E通路有关,有望成为骨肉瘤治疗和诊断的新靶点。     

人参皂苷Rg3与顺铂对荷卵巢癌裸鼠免疫功能及肿瘤相关蛋白的影响

[目的]观察人参皂苷Rg3联合顺铂对荷高转移人卵巢癌细胞系HO．8910PM转移瘤裸鼠白细胞介素．2（IL-2）、干扰素-γ（INF-γ）及nm23、血管内皮生长因子（VEGF）及增殖细胞核抗原（PCNA）的影响。[方法]移植瘤裸鼠随机分成6组腹腔给药：荷瘤空白对照组fA组）;不同Rg3浓度药物组：2．5mg／kg（B组）、5mg／kg（C组）和lOmg／kg（D组）;Rg3和顺铂联用组（E组）以及顺铂阳性对照组（F组）。分别测定各组裸鼠转移瘤体积变化、IL-2、INF-γ、nm23、VEGF及PCNA的变化情况。[结果]与A组比较,E组（P〈0．05）和F组（P〈0．01）小鼠血清中IL-2、INF-γ含量均能显著降低;B（P〈0．05）、C、D和E（P〈0．01）组小鼠移植瘤组织nm23的表达均增强。Rg3给药后,小鼠移植瘤组织VEGF、PCNA表达均呈下降趋势。[结论]人参皂苷Rg3和顺铂联用具有协同抗肿瘤及减毒的作用。Rg3可能通过增强mm23的表达．使VEGF及PCNA表达呈下降趋势等多途径产生抗肿瘤作用。