曲妥珠单抗对HER-2胞外域水平不同的肿瘤细胞系的影响

目的探讨曲妥珠单抗(trastuzumab)对细胞膜p185人表皮生长因子受体2(HER-2)强阳性表达,以及HER-2胞外域(ECD)水平不同的肿瘤细胞系SKBR3和SKOV3细胞的生长、克隆形成及细胞内HER-2蛋白水平的影响。方法SKBR3和SKOV3细胞经曲妥珠单抗处理后,统计细胞数目及克隆形成率。双抗夹心ELISA法检测细胞培养上清中HER-2 ECD水平,Western blot检测细胞HER-2蛋白水平。结果高HER-2 ECD水平的SKBR3细胞生长及克隆形成率明显被曲妥珠单抗抑制,在相对分子质量为90 000和40 000左右分别有1条未知磷酸化蛋白明显降低或基本消失,而细胞生长及克隆形成率未受影响的SKOV3细胞中此蛋白无明显变化。SKBR3和SKOV3细胞中p185 HER-2蛋白、磷酸化-p185蛋白、磷酸化-p95蛋白水平并未见明显降低。曲妥珠单抗不仅与SKOV3细胞培养上清中的HER-2 ECD反应,也与p68/ECDⅢa蛋白反应。经曲妥珠单抗处理后,SKBR3细胞HER-2 ECD水平明显降低,但将曲妥珠单抗处理前、后的细胞数目调整到基本一致时,HER-2 ECD水平未发生明显变化。结论曲妥珠单抗抑制肿瘤细胞生长可能与阻止相对分子质量为90 000和40 000左右的未知磷酸化蛋白表达有关;p68/ECDⅢa蛋白也可能存在曲妥珠单抗识别位点;HER-2 ECD水平降低可能与SKBR3细胞数目减少有关。     

Trastuzumab联合丁酸钠对人乳腺癌细胞株SKBR3细胞增殖和p27Kip1表达的影响

目的:观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACIs)丁酸钠(NaB)及曲妥珠单抗Trastuzumab对人乳腺癌细胞株SKBR3细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡的影响,探讨NaB及Trastuzumab调控乳腺癌细胞增殖的分子机制.方法:乳腺癌SKBR3细胞经NaB、Trastuzumab单独或联合作用后,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪分析细胞周期分布及细胞凋亡,Western Blot方法检测p27Kip1的表达.结果:NaB单独用药显著抑制SKBR3细胞增殖,促进细胞G0/G1期阻滞,增加细胞凋亡和p27Kip1蛋白的表达,P<0.05;20 μg/mL Trastuzumab单独用药,对细胞有增殖抑制和细胞周期阻滞作用(P<0.05),但对细胞凋亡及p27Kip1蛋白表达无明显影响,P>0.05.Trastuzumab可协助NaB 增加对SKBR3的抗肿瘤作用及p27Kip1蛋白表达,P<0.05.结论:Trastuzumab联合NaB抑制乳腺癌细胞的增殖,促进细胞周期阻滞及细胞凋亡的发生,以上过程可能是通过增加p27Kip1的蛋白表达来实现.     

阿司匹林联合曲妥珠单抗对HER-2阳性乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响#br# #br#

目的 探讨阿司匹林联合曲妥珠单抗对表皮生长因子受体2（HER 2）阳性乳腺癌SKBR 3细胞增殖和凋亡的影响。方法 将SKBR 3细胞分为对照组、阿司匹林组（5 mmol／L）、曲妥珠单抗组（30 μg／ml）和联合组（5 mmol／L 阿司匹林+30 μg／ml 曲妥珠单抗）,采用MTT法、流式细胞术分别观察不同药物处理对SKBR-3细胞增殖和凋亡的影响。结果 阿司匹林组SKBR 3细胞增殖率为（79.6±2.61）％,曲妥珠单抗组为（48.2±3.35）％,联合组为（21.5±1.66）％,组间差异有统计学意义（P＜0.05）。阿司匹林、曲妥珠单抗联合作用指数（CI）为1.0,属于叠加作用。阿司匹林组SKBR 3细胞凋亡率为（273±347）％,曲妥珠单抗组为（35.3±2.80）％,联合组为（56.2±3.95）％,组间差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 阿司匹林联合曲妥珠单抗能有效抑制HER-2阳性乳腺癌细胞的增殖,两药联合有可能成为HER 2阳性乳腺癌的临床治疗新模式。     

Trastuzumab联合丁酸钠对人乳腺癌细胞株SKBR3细胞增殖和p27~（Kip1）表达的影响

目的：观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂（HDACIs）丁酸钠（NaB）及曲妥珠单抗Trastuzumab对人乳腺癌细胞株SKBR3细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡的影响,探讨NaB及Trastuzumab调控乳腺癌细胞增殖的分子机制。方法：乳腺癌SKBR3细胞经NaB、Trastuzumab单独或联合作用后,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪分析细胞周期分布及细胞凋亡,Western Blot方法检测p27Kip1的表达。结果：NaB单独用药显著抑制SKBR3细胞增殖,促进细胞G0/G1期阻滞,增加细胞凋亡和p27Kip1蛋白的表达,P〈0.05;20μg/mL Trastuzumab单独用药,对细胞有增殖抑制和细胞周期阻滞作用（P〈0.05）,但对细胞凋亡及p27Kip1蛋白表达无明显影响,P〉0.05。Trastuzumab可协助NaB增加对SKBR3的抗肿瘤作用及p27Kip1蛋白表达,P〈0.05。结论：Trastuzumab联合NaB抑制乳腺癌细胞的增殖,促进细胞周期阻滞及细胞凋亡的发生,以上过程可能是通过增加p27Kip1的蛋白表达来实现。     

抑制Src酪氨酸激酶对非小细胞肺癌细胞外信号调节激酶影响的研究

目的:探讨抑制Src酪氨酸激酶活化对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞外信号调节激酶的影响及其作用。方法:采用NSCLC细胞株进行细胞培养,分别给予不同浓度的Src酪氨酸激酶抑制剂。蛋白质印迹检测NSCLC细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)磷酸化以及抑制Src酪氨酸激酶活化对NSCLC细胞ERK1/2磷酸化的影响。MTT法检测抑制Src酪氨酸激酶活化对NSCLC细胞体外增殖的影响。软琼脂糖集落形成实验检测抑制Src酪氨酸激酶对NSCLC细胞克隆形成的影响。结果:选用的NSCLC细胞都存在ERK1/2磷酸化。抑制Src酪氨酸激酶对PC-9和A549细胞ERK1/2磷酸化呈现浓度依赖性抑制作用,亚微摩尔水平Src酪氨酸激酶抑制剂几乎完全抑制PC-9和A549细胞ERK1/2磷酸化。Src酪氨酸激酶抑制剂对PC-9和A549细胞体外增殖表现出明显的浓度依赖性抑制作用(F=5.072,P=0.004;F=4.368,P=0.008)。0.1、0.3和1.0μmol/L的Src酪氨酸激酶抑制剂对PC-9和A549细胞增殖的抑制率分别为14.7%、47.1%、61.3%和19.8%、24.2%、30.6%。而其余3种NSCLC细胞ERK1/2磷酸化以及体外增殖对Src酪氨酸激酶抑制剂反应不敏感。Src酪氨酸激酶抑制剂明显抑制PC-9和A549细胞的克隆形成(t=11.746,P<0.001;t=5.237,P<0.001)。结论:抑制Src酪氨酸激酶能够抑制PC-9和A549细胞ERK1/2磷酸化,从而抑制PC-9和A549细胞体外增殖。     

NONO基因沉默对乳腺癌细胞生物学特性影响研究

目的 无POU域八聚体结合蛋白(non-POU domain containing octamer-binding protein,NONO)是一种参与多种核内事件的多功能核蛋白,NONO与某些肿瘤的发生密切相关.本研究旨在探讨NONO基因沉默对乳腺癌细胞(SKBR3)增殖、迁移和侵袭生物学特性的影响.方法 用含有靶向人NONO基因shRNA的慢病毒感染SKBR3细胞,并用嘌呤霉素进行筛选,通过蛋白质印迹法检测SKBR3细胞中NONO蛋白表达,建立稳定的NONO基因沉默的SKBR3细胞系;采用CCK-8法和平板克隆实验检测NONO基因沉默对SKBR3细胞增殖的影响;通过体外Transwell迁移和侵袭实验检测NONO基因沉默对SKBR3细胞迁移和侵袭能力的影响.结果 蛋白质印迹法实验结果显示,SKBR3、NONO基因沉默的SKBR3(SKBR3-NONO-si)和阴性对照SKBR3(SKBR3-NC)组细胞NONO蛋白表达相对灰度值分别为0.716 7±0.225、0.103±0.045和0.727±0.127,差异有统计学意义,F=16.699,P=0.004,表明成功地建立了稳定的NONO基因沉默的SKBR3细胞系.CCK-8实验结果显示,细胞接种后7d,SKBR3、SKBR3-NONO-si和SKBR3-NC细胞CCK-8吸光度值分别为1.717±0.233、0.566±0.158和1.110±0.187,差异有统计学意义,F=78.469,P＜0.001;平板克隆形成实验结果显示,细胞培养14 d后,SKBR3、SKBR3-NONO-si和SKBR3-NC组形成的克隆数分别为64.667±14.84、21.167±7.414和53.667±11.587,差异有统计学意义,F=16.333,P＜0.001;以上结果均说明,NONO基因沉默抑制SKBR3细胞增殖能力.Transwell迁移实验结果显示,细胞接种后20 h,SKBR3、SKBR3NONO-si和SKBR3-NC组迁移细胞数分别为62.333±7.767、44.667±7.637和85.333±11.930,差异有统计学意义,F=14.338,P=0.005;侵袭实验结果显示,细胞接种后40 h,SKBR3、SKBR3-NONO-si和SKBR3-NC组侵袭细胞数分别为27.667±7.024、24.666±3.512和81.000±5.568,差异有统计学意义,F=97.558,P＜0.001;与SKBR3-NC细胞相比,NONO基因沉默的SKBR3-NONO-si细胞迁移和侵袭能力均明显降低.结论 NONO基因沉默抑制SKBR3细胞增殖、迁移和侵袭,提示NONO可能是促进乳腺癌细胞增殖、转移和侵袭一个新的重要调控蛋白.     

As2O3与STI571单用及联用对K562细胞bcr-abl磷酸化的影响

目的 研究As2O3单用及联用ST1571对K562细胞bcr-abl蛋白酪氨酸磷酸化的影响。探讨其抗白血病的分子机制,为As2O3和ST1571联合应用治疗CML提供理论依据。方法 采用细胞增生实验检测细胞生长;采用Annexin-V／PI双染实验、DNA的PI染色及DNA电泳等方法检测细胞凋亡：运用免疫沉淀和Western blot检测K562细胞bcr-abl蛋白酪氨酸磷酸化水平。结果 As2O3和ST1571明显抑制K562细胞生长。并检测出凋亡细胞群。DNA电泳出现“梯”状条带;bcr-Abl蛋白酪氨酸磷酸化水平出现时间剂量依赖性下调。结论 As2O3和ST1571能诱导K562细胞凋亡和抑制其增生．两药联用具有协同作用．机制似与下调K562细胞bcr-abl蛋白酪氨酸磷酸化有关。     

HER-2 RNA干扰对乳腺癌细胞及其种植肿瘤化疗敏感性的影响

目的: 观察RNA干扰（RNAi）下调HER2受体后乳腺癌细胞及其移植肿瘤对化疗药物表柔比星（epirubicin,EPI）敏感性的变化。方法: 构建能够表达HER2 siRNA 的质粒载体HER2shRNApU6,转染HER2 阳性的乳腺癌细胞SKBR3, RTPCR 与Western blotting 检测SKBR3细胞HER2 mRNA 与蛋白的表达。受转染细胞与不同浓度的化疗药物表柔比星共培养,MTT法检测细胞增殖活性及药物IC50;构建裸鼠乳腺癌模型,观察经HER2shRNApU6治疗后,肿瘤对化疗的敏感性。结果: SKBR3 细胞转染HER2shRNApU6后,HER2 mRNA及蛋白表达出现明显下调,细胞增殖活性出现明显下降（P<0.05）,治疗组肿瘤细胞对表柔比星的化疗敏感性IC50为0.25 μg/μl,而阴性对照及空白对照分别为3.46 μg/μl和3.69 μg/μl。裸鼠移植肿瘤模型中,治疗组肿瘤重量明显低于空白对照和阴性对照\[（2.17±0.58） vs (3.13±0.38)、（3.21±0.89）g\]。结论: 〗HER2的RNA干扰显著抑制乳腺癌SKBR3细胞mRNA和蛋白表达,从而明显提高肿瘤细胞及其种植瘤对表柔比星的敏感性。     

P185erbB2单抗可变区基因克隆及人鼠嵌合抗体真核高效表达载体构建

P185是erbB_2(HER2/neu)基因编码的具酪氨酸激酶活性的跨膜糖蛋白,在多种上皮细胞来源的恶性肿瘤中过表达,且与肿瘤的耐药、转移、复发有关.应用P185单抗进行肿瘤的诊断和判断预后已得到广泛应用,美国FDA已批准一株人化抗体应用于临床治疗erbB_2高表达的乳腺癌,但国内尚无人化抗体应用于临床治疗.为获得具有临床治疗价值的人化抗体,消除HAMA反应,本文从自制的10株抗P185胞外区的单抗中选出抑制erbB_2高表达的肿瘤细胞增殖活性最高的一株(C25)进行人化改造.C25单抗在体外对SKBR3细胞增殖的仰制率可达60.63%,属于小鼠IgG1亚类、к轻链.根据C25的IgG亚类选用Winter等设计的引物,以BT-PCR方法从杂交瘤细胞株中扩增轻、重链可变区基因.分别克隆     

抗EGFR单抗联合EGFR酪氨酸激酶抑制剂对人肺腺癌细胞凋亡的影响及其机制

目的:目前抗表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)的小分子酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼(gefitinib)和抗EGFR单克隆抗体西妥昔单抗(cetuximab)在肺癌的临床应用中颇为广泛.鉴于这两种药物均针对EGFR分子靶点,因此本研究旨在就上述两种药物联合用药对人肺腺癌细胞凋亡的影响及其分子机制进行探讨.方法:吉非替尼和西妥昔单抗单独或联合用药作用于人肺腺癌细胞株A549和SPC-A-1后,用碘化丙啶标记,采用流式细胞术观察细胞凋亡情况,活细胞计数试剂盒测定各组细胞增殖抑制情况,Western印迹法检测两种药物对EGFR下游信号通路蛋白[磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated Akt, p-Akt)、磷酸化EGFR(phosphorylated EGFR,p-EGFR)和磷酸化丝裂原激活蛋白激酶(phosphorylated mitogen-activated protein kinase, p-MAPK)]在蛋白水平表达的影响.结果:吉非替尼或西妥昔单抗单独作用后,A549和SPC-A-1细胞均明显凋亡,同时细胞增殖受到不同程度的抑制.Western印迹法检测p-Akt、p-EGFR和p-MAPK蛋白表达量均较不用药对照组下降.吉非替尼和西妥昔单抗联合作用后,肺腺癌细胞的凋亡、增殖以及在EGFR分子层次表现出较单一用药更为显著的作用.结论:吉非替尼和西妥昔单抗两种药物之间具有良好的协同作用,联合用药可能在临床治疗非小细胞肺癌中具有较大的应用潜力.     

PHA,抗CD3单抗,IL—2诱导脾细胞增殖及其抗肿瘤效应的实验研究

本文应用PHA、抗CD_3单抗、IL-2体外诱导正常人脾细胞增殖,并探讨了在不同条件的诱导下脾细胞体外增殖能力和抗肿瘤效应,以及细胞表面标志的表达特征.结果显示,抗CD_3单抗、PHA不仅可增强IL-2诱导脾细胞的增殖作用,且两者合用有协同增强效应.PHA、抗CD_3单抗还可增强体外扩增细胞CD_4和Tas受体的表达.LAK细胞抗肿瘤活性测定结果提示,PHA有直接和间接增强LAK细胞抗肿瘤效应的作用,抗CD_3单抗则可通过增加细胞增殖作用,间接地增强LAK细胞的抗肿瘤活性.     

lncRNA HOTAIR通过miR-519d-3p/CCND1 分子轴促进乳腺癌SKBR3细胞的恶性生物学行为

目的：探究lncRNA HOTAIR/miR-519d-3p/CCND1 分子轴对乳腺癌细胞增殖和转移的影响及其可能机制。方法：收集2017 年3 月至2019 年2 月南昌市第三医院乳腺外科手术切除的乳腺癌患者的乳腺癌组织及配对癌旁组织各50 例，qPCR检测癌及癌旁组织中HOTAIR 的表达水平，乳腺正常上皮细胞及乳腺癌细胞系中HOTAIR 和miR-519d-3p 的表达水平。将乳腺癌SKBR3 细胞分为NC 组、si-HOTAIR 组、miR-519d-3p mimics 组，miR-519d-3p mimics+pcHOTAIR 组、miR-519d-3p mimics+pcCCND1 组和si-HOTAIR+pcCCND1 组，CCK-8 法检测各组SKBR3 细胞增殖能力、Transwell 检测细胞侵袭和迁移能力、Western blotting 检测SKBR3 细胞中E-cadherin、N-cadherin、Vimentin 以及CCND1 表达水平。双荧光素酶报告基因检测HOTAIR 和miR-519d-3p 以及miR-519d-3p 和CCND1 的靶向关系。结果：HOTAIR在癌组织以及乳腺癌细胞系中呈高表达，且在SKBR3 细胞系中表达最高。敲降HOTAIR可显著抑制SKBR3 细胞增殖、侵袭和迁移，并显著增加E-cadherin 的表达水平、降低N-cadherin 和Vimentin的表达水平（均P<0.05）。双荧光素酶报告基因检测显示，HOTAIR 靶向下调miR-519d-3p 的表达，miR-519d-3p 靶向下调CCND1 的表达。敲降HOTAIR可增强miR-519d-3p 对CCND1 的下调作用，抑制SKBR3 细胞EMT、增殖、侵袭和迁移能力（均P<0.05）。结论：敲降HOTAIR可抑制SKBR3 细胞增殖和转移，其机制是通过调控miR-519d-3p/CCND1 分子轴实现的。     

Heregulin通过Her2激活SKBR3细胞内IKK／NF－κB信号通路

目的：初探Her2激动剂Heregulin（HRG）对人乳腺癌SKBR3细胞内IKK／NF－κB信号通路的激活机制。方法：Western blotting法检测 HRG对 SKBR3细胞中 PI3K／Akt／IKK信号通路的影响。以 TNF －α／RIP1／IKK这条经典信号通路为对照,引入各通路中关键蛋白（PI3K、RIP1及IKK）的抑制剂,对比各抑制剂对两条通路的影响。实时无标记细胞分析技术监测HRG对SKBR3细胞增殖的促进作用及IKK抑制剂TPCA1对HRG的拮抗作用。结果：HRG与TNF－α均能激活IKK引起 NF－κB入核,RIP1的抑制剂Necrostatin－1能阻断由TNF－α引起的IKK活化,但不能阻断由HRG引起的IKK活化,表明HRG并非通过传统的途径激活IKK。PI3K抑制剂LY294002能阻断由HRG引起的IKK激活,PI3K是Her2信号通路的关键蛋白之一,因此推测HRG是经由PI3K／Akt信号通路,完成对IKK／NF－κB通路的激活。细胞生长曲线反映,HRG能促进SKBR3细胞的增殖,TPCA1对HRG具有拮抗作用,对数期细胞经100nmol／L的TPCA1处理后,细胞增殖受到抑制,数量迅速下降。结论：HRG可以通过Her2／PI3K／Akt途径激活SKBR3细胞内IKK／NF－κB信号通路。     

携带PTEN基因重组腺病毒对群司珠单抗耐药乳腺癌细胞的逆转作用

摘 要 目的: 研究重组腺病毒介导的野生型PTEN基因转染对群司珠单抗(traxtuzumab)耐药性乳腺癌细胞的逆转作用。方法: 构建携带野生型PTEN基因的重组腺病毒AdPTEN，感染群司珠单抗耐药性乳腺癌细胞株BT474， MTT比色法和FCM检测AdPTEN感染对群司珠单抗作用下BT474细胞增殖和凋亡的影响； DNA片段化实验分析BT474凋亡与感染时间的关系； Western blotting法检测AdPTEN感染对BT474细胞中丝氨酸/苏氨酸激酶（Akt）磷酸化水平的影响。建立荷乳腺癌裸鼠模型，观察AdPTEN联合群司珠单抗治疗对乳腺癌移植瘤生长的影响，检测移植瘤细胞中PTEN蛋白的表达、细胞凋亡、超微结构的改变。结果: 成功构建重组腺病毒AdPTEN，其滴度为4.2×10 11T CID50/ml。PCR、RT-PCR和Western blotting法证实PTEN基因可被转导入BT474细胞内并稳定高效表达。AdPTEN联合群司珠单抗处理对BT474细胞增殖的抑制非常显著地强于单用群司珠单抗治疗（P<0.01）；细胞出现明显凋亡，凋亡率为（20.7±5.83）%，并且出现G1期阻滞和S期明显减少,与AdLacZ组和对照组相比差异均有统计学意义(P<0.01）；感染组细胞DNA出现典型的梯形条带, 以感染后24~36 h最为明显； AdPTEN感染明显下调BT474细胞内Akt的磷酸化水平。AdPTEN和群司珠单抗联合治疗可强烈抑制裸鼠移植瘤生长，疗效明显强于群司珠单抗治疗组(P<0.01）；AdPTEN治疗后，移植瘤细胞中PTEN表达明显，TUNEL和电镜检测均证实乳腺癌移植瘤细胞的凋亡。结论: AdPTEN治疗可抑制BT474细胞Akt 的磷酸化，阻断PI3K/Akt信号通路的持续活化，恢复耐药细胞对群司珠单抗的敏感性，引起细胞凋亡。     

莪术醇对乳腺癌细胞增殖凋亡及JAK2/STAT3信号通路的影响

摘 要：［目的］ 探讨莪术醇对乳腺癌细胞增殖凋亡及JAK2/STAT3信号通路的影响。［方法］ 以不同浓度（0、12.5、25、50、100μg/ml）莪术醇作用于乳腺癌MCF-7细胞，MTT法检测MCF-7细胞增殖抑制率，流式细胞术观察细胞周期凋亡分布，Hoechst33258染色法观察细胞凋亡形态学变化，逆转录聚合酶链反应法检测细胞酪氨酸激酶2（JAK2）、 信号转导子和转录激活子3（STAT3）信使核糖核酸相对表达量，蛋白印迹法检测细胞磷酸化JAK2( P-JAK2)、磷酸化STAT3(P-STAT3)蛋白相对表达量。［结果］ 莪术醇对MCF-7细胞增殖具有明显抑制作用，且抑制率随药物作用时间及作用浓度的增加而上升。随着莪术醇作用浓度的增加，细胞凋亡率也有所上升［（4.27%±0.82%）、(4.54%±1.21%)、(19.32%±1.87%)、(29.58%±2.92%)、(33.74%±3.91%)、(42.94%±2.81%)］。细胞周期结果显示，莪术醇可将细胞周期阻滞在G0/G1期，从而抑制细胞增殖。Western blot结果显示，莪术醇可抑制JAK2、STAT3磷酸化的表达，而RT-PCR结果显示，莪术醇作用细胞后，JAK2、STAT3 mRNA表达受到明显抑制。［结论］ 莪术醇作用于乳腺癌MCF-7细胞G0/G1期，从而抑制细胞增殖，诱导细胞凋亡，其机制可能是通过JAK2/STAT3信号通路来实现。     

酪氨酸激酶抑制剂tyrphostin AG1478对乳腺癌细胞作用的机制探讨

目的:探讨表皮生长因子受体(epithelial growth factor receptor,EGFR)的小分子酪氨酸激酶抑制剂tyrphostin AG1478对乳腺癌细胞的作用机制.方法:以乳腺癌细胞MCF-7(EGFR-/+)和MDA-MB-468(EGFR+++)为研究对象,采用MTT及克隆形成实验检测AG1478对乳腺癌MCF-7和MDA-MB-468细胞增殖和生长效应的影响;Western 印迹法测定EGFR、Akt和丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)的表达及活化水平;进一步应用FCM检测AG1478对MDA-MB-468细胞早期凋亡的影响.结果:AG1478 可抑制MDA-MB-468细胞的增殖和生长(P＜0.05),对MCF-7细胞增殖则无明显的抑制效应(P＞0.05);同时,MDA-MB-468细胞经AG1478处理后,细胞中磷酸化Akt(p-Akt)和磷酸化MAPK(p-MAPK)的表达水平明显降低(P＜0.05);FCM检测结果表明,AG1478可增加MDA-MB-468细胞的早期凋亡水平(P＜0.05).结论:AG1478可下调PI3K/Akt及Ras/Raf/MAPK信号通路,从而抑制乳腺癌MDA-MB-468细胞增殖及生长,并促进细胞凋亡;但其对MCF-7细胞无明显作用.     

西妥昔单抗体外协同增加顺铂对人鼻咽癌细胞株的抗肿瘤作用

[目的]研究西妥昔单抗(Cetuximab,C225)联合顺铂(Cisplatin,DDP)对人鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制.[方法]采用人鼻咽癌HNE1和CNE2细胞株,RT-qPCR检测表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)mRNA的差异性表达.实验分为对照组、西妥昔单抗组、顺铂组、两药联合组,采用CCK-8法、平板克隆形成实验检测细胞增殖能力,并评价药物的协同效应.流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况.Western Blot检测AKT、p-AKT以及凋亡相关蛋白Bax、caspase-3、cleaved caspase-3的表达水平.[结果]药物持续作用48h后,两株细胞中两药联合组与单药组相比,均不同程度地提高对细胞的抑制率.在HNE1和CNE2细胞株中,两药协同指数分别为0.6和0.9.HNE1和CNE2细胞中EGFR mRNA分别呈现相对高表达和相对低表达状态.流式细胞术结果显示:HNE1细胞中,联合组的凋亡细胞比率显著性高于单药组,另外,两药联合作用更有效地下调了HNE1中凋亡蛋白Bax、caspase-3、cleaved caspase-3的表达,同时下调了EGFR/AKT信号通路关键蛋白AKT磷酸化表达.[结论]西妥昔单抗可能通过抑制顺铂介导的EGFR/AKT通路的磷酸化活化,产生协同抑制HNE1细胞增殖效应.两药联合在HNE1和CNE2细胞中的差异性效应为鼻咽癌的临床个体化治疗研究提供依据.     

索拉非尼联合伊匹单抗对肝癌抑制作用的实验研究

目的探讨索拉非尼联合伊匹单抗对肝癌的抑制作用。方法设置索拉非尼组、伊匹单抗组及联合组,分别加入不同浓度的索拉非尼(5、10、15、20μmol/L)、伊匹单抗(5、10、15、20μmol/L)及两药联合(10μmol/L索拉非尼+10μmol/L伊匹单抗)处理肝癌HepG2细胞。采用CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Transwell法检测细胞侵袭能力,蛋白质印迹(Western blot)法检测Raf-1、磷酸化丝裂原活化蛋白激酶1(p-MEK1)、磷酸化细胞外信号调节激酶1(p-ERK1)蛋白表达量。结果不同浓度索拉非尼、伊匹单抗处理HepG2细胞,随着浓度增加,细胞吸光度值及增殖率均下降,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。10μmol/L索拉非尼组、10μmol/L伊匹单抗组以及联合组的细胞增殖率分别为(49.83±0.4)%、(45.53±0.8)%、(33.57±0.9)%,分别低于对照组的100%,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。与对照组、10μmol/L索拉非尼组、10μmol/L伊匹单抗组比较,联合组细胞侵袭数目均明显减少,凋亡率均明显提高,Raf-1、p-MEK1、p-ERK1蛋白表达量均明显下调,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。结论索拉非尼及伊匹单抗均能显著抑制肝癌HepG2细胞增殖与侵袭,与抑制Raf-1/MEK1/ERK1信号通路有关,且联合给药优于单药。     

蛋白酪氨酸磷酸酶1B与血液系统肿瘤关系研究进展

酪氨酸磷酸化是一种重要的调节细胞进程和维持稳态的翻译后修饰,酪氨酸磷酸化的异常改变常与疾病发生如代谢障碍、肿瘤和心血管疾病等密切相关.蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP)是在细胞增殖和信号转导过程中调节蛋白酪氨酸残基磷酸化水平的酶家族.目前研究发现人类共有1 12种PTP,其中蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)是该家族中研究最热、最清楚的成员之一.近年来,PTP1B作为一种积极参与肿瘤发生的酶,引起了广泛关注.现就PTP1B与血液系统肿瘤关系的研究进展进行综述.     

大黄酸对肿瘤细胞EGFR和HER-2靶点的作用及其作用机制

一目的研究传统中药大黄中葸醌类化合物之一大黄酸对乳腺癌细胞表皮生长因子受体家族EGFR和HER-2靶点的作用及其作用机制。方法通过WesternBlot检测乳腺癌MCF-7、SKBR-3、MDA-MB-231、和MCF-7／ADR细胞中EGFR和HER-2的蛋白表达水平。用MTT方法检测大黄酸对乳腺癌细胞的增殖抑制作用。用RT-PCR方法检测大黄酸对EGFR和HER-2转录水平的影响。通过Western Blot方法研究大黄酸对乳腺癌细胞HER-2、P-HER-2、EGFR、P-EGFR蛋白表达的影响并研究相关的作用机制。结果MCF-7、SKBR-3、MDA-MB-231、和MCF-7／ADR 4株乳腺癌细胞系均显示EGFR高表达。关于HER-2,仅见SKBR-3细胞高表达;而MDA-MB-231和MCF-7／ADR细胞显示中等程度表达,MCF-7细胞低表达。大黄酸对乳腺癌MCF-7、SKBR-3、MDA-MB-231、和MCF-7／ADR细胞增殖抑制的IC50分别为28μg／ml、24μg／ml、24μg／ml和〉100μg／ml。Western Blot研究结果表明大黄酸对HER-2、P-HER-2和P-EGFR蛋白表达有抑制作用,并且随着剂量的增加抑制作用增强,但对EGFR蛋白表达没有明显抑制作用。RT-PCR研究发现大黄酸抑制HER-2的mRNA的水平,从转录水平上发挥对HER-2蛋白表达的抑制作用。进一步研究表明大黄酸通过抑制表皮生长因子家族EGFR和HER-2的酪氨酸激酶磷酸化,进而抑制RAS-RAF-MEK-ERK信号通路,抑制肿瘤细胞增殖,而对NF-κB和AKT诱导的细胞凋亡通路没有明显作用。结论传统中药大黄中的葸醌类化合物大黄酸能够抑制表皮生长因子家族EGFR和HER-2酪氨酸激酶的磷酸化,从而抑制了MAPK信号通路的磷酸化,达到抑制肿瘤细胞增殖的作用。同时大黄酸可以从转录水平抑制HER-2的蛋白表达。