microRNA-10a对胃癌细胞系BGC823迁移和侵袭能力的影响

目的：研究人微小RNA-10a（microRNA-10a,miR-10a）对胃癌细胞系BGC823迁移和侵袭能力的影响。方法：利用Transwell小室对胃癌细胞系BGC823进行侵袭筛选,获得高侵袭能力的BGC823-P3亚系;通过miRNA芯片差异分析发现miR-10a在高侵袭能力BGC823-P3细胞的表达显著高于BGC823细胞。通过化学方法合成成熟型的人miR-10a,以脂质体包裹合成的miR-10a（25、50、100、150nmol/L）转染BGC823细胞,并设空白转染、无关序列转染对照组;Real-timePCR分别检测以上各组细胞miR-10a的表达。采用细胞计数试剂盒-8（Cell Counting Kit-8,CCK-8）检测miR-10a对细胞增殖的影响,流式分析检测miR-10a对细胞凋亡的影响,Transwell小室检测miR-10a对细胞的迁移和侵袭能力的影响。结果：化学合成的成熟型miR-10a转染后,BGC823细胞miR-10a表达的提高以100nmol/LmiR-10a转染组最佳,较无关序列转染组提高了2.06倍。miR-10a（100nmol/L）的转染对胃癌细胞系BGC823的增殖和凋亡无明显影响,但对BGC823的迁移和侵袭能力有明显的促进作用,促进率分别为（88.34±0.61）%和（56.02±3.13）%。结论：转染成熟型人miR-10a能使胃癌细胞系BGC823中miR-10a的表达提高,并能显著促进胃癌细胞系BGC823的迁移和侵袭。     

自身抗体与肿瘤

肿瘤患者体内可以检测到针对肿瘤抗原的自身抗体,其产生是多种复杂机制共同作用的结果。其中,肿瘤自身抗原诱导机体产生肿瘤自身抗体是重要机制之一。目前研究发现肿瘤自身抗体与肿瘤的发生发展密切相关。肿瘤自身抗体检测有着重要的临床意义。     

癌细胞和人血管内皮粘附与器官特异转移相关

目的：检测5种不同类型的人肿瘤细胞系与4种不同采源的人微血管内皮的粘附，并探讨粘附作用与肿瘤器官特异性转移的相关性。方法：人微血管内皮培养形成完全汇合的静止内皮单层后，与Calcein AM标记人肿瘤细胞系进行粘附测定。结果：8种食管癌细胞系中，有6种与人肺内皮的粘附显著强于与肝窭内皮的粘附；7种食管癌细胞系与人正常食管厦食管癌内皮的粘附均强于与人正常肺内皮和肝窭内皮的粘附．这与食管癌临床上肺转移多于肝转移，但相对于远处转移，更倾向于食管内侵袭播散性转移的特征一致。4种结肠癌细胞系与人肝窦内皮粘附均显著强于与人肺内皮和食管正常内皮．与临床上结肠癌主要发生肝转移的特征一致。肝癌、胃癌、肺癌细胞系与内皮的粘附也与临床上转移特征一致。结论：不同组织类型肿瘤细胞与器官采源不同的人内皮细胞的粘附能力具有明显的组织特异性和选择性，且这种粘附特性与临床上肿瘤的组织特异性转移密切相关。阻断这种粘附作用有可能治疗肿瘤转移。     

卵巢上皮性癌相关抗原cDNA表达文库的构建

目的:构建人卵巢上皮性癌cDNA表达文库.方法:提取卵巢上皮性癌患者腹腔积液肿瘤细胞mRNA,反转录合成双链 cDNA,末端补平后连接EcoRI接头,末端磷酸化,XhoI消化,将双末端黏性化的双链cDNA经过凝胶层析柱,收集大于500 bp的cDNA片段,加工后与Uni-ZAP XR Vector连接,经过体外包装,感染宿主菌XL1-blue MRF′,构建cDNA文库,检测文库容量和质量.结果:cDNA表达文库原始库容为1.82×106,扩增后文库的库容为7.5×109,重组效率约为90%,插入片段大小主要集中在1.0～2.0 kb.结论:成功构建了一个卵巢上皮性癌cDNA表达文库,为下一步筛选、鉴定卵巢上皮性癌相关抗原奠定了基础.     

灰阶超声造影与肾细胞癌的血管相关性研究

目的 分析肾细胞癌灰阶超声(谐波)造影增强参数与肿瘤微血管密度、病理组织分级及临床分期的相关性.方法 前瞻性地对47例肾细胞癌进行灰阶超声造影扫描.并对该47例肾细胞癌的组织切片采用免疫组化染色方法进行微血管染色及计数,分析肾细胞癌微血管密度与肿瘤强化程度及病理组织分级、临床分期的相关性.结果 肾细胞癌47例的微血管密度[3.0～58.7条/400倍视野,平均(40.9±12.6)条/400倍视野]与肾细胞癌的强化程度[2.28～29.36 dB,平均(14.94±6.14 dB)呈极显著相关(r=0.782,P＜0.0001),肾细胞癌的微血管密度与病理组织分级(G1=20例、G2=16例、G3=11例)显著相关(r=0.319,P=0.029),微血管密度与肿瘤临床分期r=0.148,,P=0.32,未见二者有显著相关.结论 肾细胞癌灰阶超声造影其强化程度与微血管密度 (MVD) 极显著相关,可作为反映肿瘤MVD的参考参数.     

肝窦内皮细胞与结肠癌细胞相互作用促进肝转移的影响

目的:探讨结肠癌细胞和肝窦内皮细胞共培养对结肠癌细胞功能以及肝转移能力的影响,为结肠癌肝转移机制的研究提供一种基本实验材料.方法:体外将人肝窦内皮细胞和结肠癌细胞进行共培养21轮,采用Transwell法、明胶酶谱分析、CCK-8法、集落形成实验检测共培养后结肠癌细胞SW1116P21体外侵袭、增殖、克隆形成能力;采用皮下成瘤实验以及实验性肝转移实验检测SW1116P21皮下成瘤以及肝转移的影响;Western blot的方法检测相关分子的改变.结果:共培养后的结肠癌细胞SW1116P21的细胞间界限明显.侵袭检测发现,SW1116P21细胞的侵袭能力较SW1116亲本细胞提高了2倍;明胶酶谱分析检测发现,SW1116P21分泌MMP-2/9的能力显著高于亲本细胞.皮下成瘤实验发现,SW1116P21皮下成瘤能力显著增强.实验性肝转移发现,SW1116P21肝转移能力显著高于SW1116细胞.Western blot检测发现SW1116P21细胞表达E-cadherin显著下调,vimentin表达上调.结论:结肠癌细胞和肝窦内皮细胞相互作用可促进瘤细胞侵袭、增殖、克隆形成以及体内细胞生长,更易发生肝转移,这种影响是与内皮细胞相互作用后结肠癌细胞发生EMT有关.     

ALCAM在食管癌中的表达及其功能研究

[目的]研究ALCAM基因在食管癌及其淋巴结转移灶中的表达,以及ALCAM在淋巴细胞内皮黏附、跨淋巴内皮迁移中的作用。[方法]免疫组织化学法检测ALCAM基因在食管癌中的表达;应用Lipofectin2000将ALCAM-si-RNA转染到人食管癌细胞株KYSE30、EC9706;采用RT-PCR方法检测敲降效率;通过体外与淋巴内皮细胞黏附实验、跨淋巴内皮迁移实验研究ALCAM基因对食管癌与淋巴内皮细胞黏附、跨内皮的影响。[结果]ALCAM在食管癌组织以及淋巴结转移灶中的表达显著高于正常食管组织。ALCAM-siRNA能显著敲降EC9706中ALCAM的表达。淋巴内皮黏附实验结果显示,敲降ALCAM的食管癌细胞EC9706与LyEC黏附的细胞数为195±16,而亲本细胞的黏附细胞数为563±67,其与LyEC黏附的能力显著下降。跨淋巴内皮实验结果显示敲降ALCAM的EC9706细胞跨过LyEC数量为36±17,与亲本细胞跨过内皮的细胞数(73±16)相比,敲降ALCAM的食管癌细胞的跨内皮能力显著下降。[结论]ALCAM促进食管癌细胞与淋巴细胞内皮黏附以及跨内皮迁移,可能与食管癌的淋巴结转移相关,阻断这种黏附作用有可能治疗食管癌的淋巴结转移。     

胃癌SP表型细胞侵袭转移相关性研究

目的：观察人胃癌SNU5肿瘤细胞系及其高侵袭细胞亚系中是否含有SP细胞,并验证该表型细胞与侵袭转移的关系。方法：采用Transwell小室,体外筛选出高侵袭细胞;经Hoechst33342染色,应用流式检测并分选出SP表型以及非SP表型细胞;应用无血清培养方法检测SNU5亲本细胞、SP表型以及非SP表型细胞在无血清培养中的成球能力。将分选出的SP表型以及非SP表型细胞进行侵袭实验、划痕迁移实验。裸鼠皮下接种,检测SP表型以及非SP表型细胞的自发性肺转移能力。基因芯片的方法分析SP表型以及非SP表型细胞的基因表达谱差异。结果：经过三轮筛选建立了稳定的高侵袭亚细胞群SNU5-P3。SP分选检测发现,SNU5-P3的SP细胞比例为1.6%;无血清培养发现,SNU5-P3-SP细胞成球数为104±19,显著强于SNU5以及SNU5-P3-non-SP细胞。侵袭实验检测发现,SNU5-P3-SP细胞的侵袭能力比SNU5、SNU5-P3-non-SP细胞增强近2.5倍。划痕迁移检测发现,SNU5为-P3-SP运动能力显著增强,划痕24h愈合。体内移植瘤转移实验发现SNU5-P3-SP细胞自发性肺转移率为100%,SNU5为50%,而SNU5-P3-non-SP仅有16.7%。基因芯片分析,获得733个差异基因,其中上调基因450个,36%的基因与侵袭转移有关。结论：胃癌SP表型细胞具有干细胞的特征,在胃癌侵袭、转移中起到关键作用。     

抑制食管癌与肺血管内皮黏附的功能性抗体的制备

目的〖HT5"SS〗： 制备抑制食管癌细胞与肺血管内皮黏附的功能性单克隆抗体,为研究食管癌转移的靶向治疗剂打下基础。〖HT5W〗方法〖HT5"SS〗： 以人食管癌新鲜组织分离的肿瘤细胞免疫BALB/c小鼠,将免疫小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合后,采用活细胞荧光、ELISA、免疫组化、肿瘤细胞内皮细胞黏附实验、Weastern bloting等方法筛选并鉴定抑制肿瘤细胞黏附的功能性单克隆抗体。〖HT5W〗结果〖HT5"SS〗： 共融合获得了1 134株杂交瘤克隆,在能与食管癌细胞膜反应的486株     

单克隆抗体16 D3抑制肺癌的功能研究

目的分析抗肺癌单克隆抗体16 D3靶抗原蛋白在人肺癌细胞及组织中的表达,鉴定16 D3对肺癌的体内外抑制功能,为肺癌靶向治疗提供候选抗体药物。方法采用免疫组化分析16 D3靶蛋白在人肺癌组织中的表达;采用细胞免疫荧光检测单克隆抗体16 D3识别的抗原在肺癌细胞中的表达及亚细胞定位;共接种移植瘤模型评估16D3对肺癌生长的抑制作用,Transwell法和CCK-8法检测单抗16D3对人肺癌细胞迁移、侵袭和增殖能力的影响;采用流式细胞术检测16 D3靶蛋白分别在亲本和sphere培养的人肺癌细胞中的表达。结果单克隆抗体16 D3的靶蛋白在7种人肺癌细胞的胞内及胞膜上均有表达,在76.9％人肺癌患者组织中特异上调表达。该单抗在体内能较显著地抑制人肺腺癌GLC-82的生长,抑制率为58.23％（ P＜0.05）。在体外对该细胞的增殖、迁移和侵袭具有一定的抑制作用,抑制率分别为26.91％、24.23％和23.67％。该单抗的靶蛋白膜表达阳性细胞比例经sphere培养后显著上升。结论单抗16D3靶抗原在人肺癌中特异表达,并可被sphere培养富集。单抗16D3在体外具有多种抑制功能,在体内能显著抑制人肺腺癌生长,可能是一个肺癌靶向治疗的潜在新药。