MicroRNA-134在骨肉瘤中的表达及生物学作用研究

目的检测微小RNA-134(microRNA-134)在骨肉瘤的表达,并探究其在骨肉瘤细胞的生物学作用。方法收集40例骨肉瘤及癌旁正常骨组织标本,利用荧光定量PCR(Quantitative RT-PCR)检测microRNA-134的表达情况。进一步分析microRNA-134在骨肉瘤细胞系(HOS和Saos-2)及正常成骨细胞系(NHOst)的表达,进而通过转染microRNA-134 mimics至HOS和Saos-2细胞,并应用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法、细胞划痕以及凋亡试验探究其对骨肉瘤细胞的生物学作用。结果 MicroRNA-134在骨肉瘤组织标本中的表达量明显低于配对的癌旁组织(P0.01),同样microRNA-134在HOS和Saos-2细胞系中的表达亦低于NHOst细胞系(P0.05)。细胞生物学功能实验发现,过表达microRNA-134可显著抑制HOS和Saos-2细胞的增殖及迁移能力,并增加凋亡蛋白Bcl-2相关X蛋白(BAX)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(CASPASE-3)表达。结论 MicroRNA-134在骨肉瘤组织及细胞系中明显低表达,并具有抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移及增加凋亡的功能,高度提示其作为抑癌因子参与骨肉瘤的发生和发展过程。     

miR-181a-5p通过HOXB4抑制骨肉瘤细胞HOS增殖和迁移

目的: 研究miR-181a-5p对HOS骨肉瘤细胞增殖、周期和迁移的影响及其机制。方法: 采用实时定量PCR检测hFOB1.19成骨细胞和HOS、U2OS、MG63骨肉瘤细胞系中miR-181a-5p及HOXB4的表达情况。利用Lipofectamine 2000将miR-181a-5p mimics和miR-181a-5p inhibitor分别转染至人骨肉瘤HOS细胞中(分别为过表达组和抑制剂组),并设置miR 阴性对照组;CCK-8法检测各组细胞的增殖能力变化,流式细胞术检测各组细胞的细胞周期变化,划痕愈合实验以及Transwell迁移实验检测各组细胞的迁移能力变化。Targetscan网站预测miR-181a-5p的靶向基因,并通过双荧光素酶报告基因系统及Western blot验证靶向关系。结果: 与成骨细胞hFOB1.19相比,miR-181a-5p在骨肉瘤细胞HOS、U2OS和MG63中低表达(P<0.05),而HOXB4在骨肉瘤中高表达(P<0.05)。与阴性对照组相比,过表达miR-181a-5p抑制骨肉瘤HOS细胞的增殖和迁移能力,并且处于细胞周期S期的细胞减少(P<0.05)。敲低miR-181a-5p促进骨肉瘤HOS细胞的增殖和迁移能力,并且处于S期细胞增加(P<0.05)。生物信息学预测及双荧光素酶报告基因系统验证HOXB4为miR-181a-5p的下游靶基因(P<0.05)。Western blot显示,过表达miR-181a-5p的HOS细胞中,HOXB4蛋白表达低于阳性对照组(P<0.05),而敲低miR-181a-5p的HOS细胞中HOXB4蛋白表达高于对照组(P<0.05)。结论: miR-181a-5p在骨肉瘤细胞中低表达,过表达miR-181a-5p能够抑制骨肉瘤细胞HOS增殖、周期和迁移能力,该作用可能通过靶向HOXB4发挥作用。     

基质金属蛋白酶-11在骨肉瘤中的表达及生物学功能研究

目的检测基质金属蛋白酶-11(matrix met alloproteinase-11,MMP-11)在骨肉瘤组织及癌旁组织中的表达特征,并观察敲低其表达对骨肉瘤细胞生物学行为的影响。方法采用荧光定量PCR(Quantitative RT-PCR)和免疫组化染色技术检测40例骨肉瘤及癌旁组织中MMP-11的表达特征。体外试验采用骨肉瘤细胞系(HOS和Saos-2)转染MMP-11siRNA(试验组)和siRNA control(阴性对照组),48h后收集细胞,提取RNA和蛋白质,通过荧光定量PCR和蛋白质印迹观察两组细胞中MMP-11的表达变化;同时采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT)、细胞划痕试验以及流式细胞术探究敲低MMP-11表达对骨肉瘤细胞增殖、迁移及凋亡的影响。结果骨肉瘤组织中MMP-11mRNA的表达量较癌旁组织明显升高,癌旁组织中MMP-11mRNA的表达量为(1.0±0.22),则其在骨肉瘤组织中相对表达量为(3.94±0.79)(P0.05)。免疫组化染色技术亦显示MMP-11蛋白在骨肉瘤组织的阳性率显著高于癌旁组织(P0.05)。骨肉瘤细胞中转染MMP-11siRNA可显著降低细胞内源性MMP-11表达水平(P0.05)。敲低MMP-11的表达可显著抑制HOS和Saos-2细胞的增殖及迁移能力,并增加细胞凋亡(P0.05)。结论 MMP-11在骨肉瘤中呈现高表达状态,敲低其表达可抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移并增加细胞凋亡,提示MMP-11在骨肉瘤的发生和发展过程发挥促癌作用。     

miR-92a-3p靶向EZH2对IL-1β诱导软骨细胞合成基质降解酶的影响

目的研究miR-92a-3p靶向zeste基因增强子同源物2(EZH2)对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的软骨细胞合成基质降解酶的影响。方法分离培养人软骨细胞,分成Normal、IL-1β(IL-1β处理)、miR-NC+IL-1β(mimics control转染后IL-1β处理)、miR-92a-3p+IL-1β(miR-92a-3p mimics转染后IL-1β处理)组,RT-PCR方法测定miR-92a-3p表达变化,Western blot检测MMP-13、MMP-1、COLⅡ蛋白表达。靶基因预测软件发现EZH2可能为miR-92a-3p的靶基因,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。将p CDNA3.1-EZH2和miR-92a-3p mimics共同转染到软骨细胞中,检测MMP-13、MMP-1、COLⅡ蛋白表达情况。结果与Normal比较,IL-1β组细胞中miR-92a-3p表达减少,MMP-13、MMP-1表达增多,COLⅡ表达减少(P0.05)。与miR-NC+IL-1β比较,miR-92a-3p+IL-1β组细胞中miR-92a-3p表达增多,MMP-13、MMP-1表达减少,COLⅡ表达增多(P0.05)。miR-92a-3p靶向负调控EZH2表达。p CDNA3.1-EZH2可以逆转miR-92a-3p mimics对IL-1β条件下软骨细胞中MMP-13、MMP-1、COLⅡ蛋白表达影响。结论 miR-92a-3p靶向下调EZH2抑制IL-1β诱导的软骨细胞合成基质降解酶。     

异丙酚通过调控miR-506对骨肉瘤细胞增殖、迁移侵袭及凋亡的影响

目的:研究异丙酚是否通过调控微小RNA(miRNA/miR)-506影响骨肉瘤细胞增殖、迁移侵袭及凋亡。方法:骨肉瘤HOS细胞分为NC组(未处理)、Pro-L组(1 μg/mL异丙酚)、Pro-M组(5 μg/mL异丙酚)、Pro-H组(10 μg/mL异丙酚)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-506组(转染miR-506 mimic)、Pro+anti-miR-NC组(转染antimiR-NC+10 μg/mL异丙酚)、Pro+anti-miR-506组(转染miR-506 inhibitor+10 μg/mL异丙酚)。应用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法测定细胞增殖,免疫印迹实验(Western blotting)评估细胞周期蛋白(Cyclin)D1、p21、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达,Transwell实验检测迁移侵袭,流式细胞术分析细胞凋亡,荧光定量PCR测定miR-506表达。结果:与NC组比较,Pro-L、Pro-M、Pro-H组HOS细胞的抑制率、p21、Bax蛋白水平、凋亡率和miR-506表达水平逐渐增加,CyclinD1、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白水平、迁移细胞数和侵袭细胞数逐渐减少,且呈浓度依赖性,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-506组HOS细胞的抑制率、凋亡率、p21、Bax蛋白水平比miR-NC组升高,迁移细胞数、侵袭细胞数、CyclinD1、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白水平比miR-NC组降低,差异有统计学意义(P<0.05)。Pro+anti-miR-506组较Pro+anti-miR-NC组降低HOS细胞中miR-506表达水平、抑制率、凋亡率、p21、Bax蛋白水平,提高迁移细胞数、侵袭细胞数、CyclinD1、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白水平,差异有统计学意义(P<0.05)。结论: 1、5、10 μg/mL异丙酚上调miR-506的表达,抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移侵袭,并且促进其凋亡。     

沉默LncRNA TUG1对骨肉瘤细胞放射敏感性影响

[目的]探讨沉默LncRNA TUG1对骨肉瘤细胞放射敏感性的影响。[方法]采用qRT-PCR检测人成骨细胞hFOB1.19、骨肉瘤细胞HOS、放射抵抗的骨肉瘤细胞HOS-R中TUG1与miR-328-3p的表达量;采用不同方式检测沉默TUG1与miR-328-3p过表达对HOS-R细胞放射敏感性的影响;TUG1的靶基因miR-328-3p;沉默TUG1对HOS-R细胞中miR-328-3p表达量的影响;HOS-R细胞凋亡率;抑制miR-328-3p联合沉默TUG1对HOS-R细胞放射敏感性及细胞凋亡率的影响。[结果]与hFOB 1.19细胞相比,TUG1在HOS与HOS-R细胞中表达量较高(P0.05),miR-328-3p的表达量显著较低(P0.05),且在HOS-R细胞中显著低于HOS细胞(P0.05);沉默TUG1或过表达miR-328-3p显著降低HOS-R细胞存活分数(P0.05);并增加细胞放射敏感性;TUG1可吸附miR-328-3p并调节其表达水平;抑制miR-328-3p联合沉默TUG1可逆转沉默TUG1对HOS-R细胞放射敏感性的增强作用。[结论]本研究表明LncRNA TUG1可通过靶向调控miR-328-3p的表达促进骨肉瘤细胞凋亡,并抑制其存活,从而增加骨肉瘤细胞的放射敏感性。     

miR-542-3p对骨肉瘤细胞侵袭能力的影响以及靶基因预测

【】目的 明确miR-542-3p抑制骨肉瘤细胞系HOS以及SAOS2细胞侵袭能力,建立生物信息学miR-542-3p靶基因调控网络,并探讨其潜在作用靶点。方法 使用miR-542-3p mimics 转染HOS以及SAOS2细胞,进行Transwell小室细胞侵袭能力测定。利用基因表达共享数据库GEO联合GEO2R平台,获取并分析miRNA-542-3p与miR-neg转染的U2OS细胞的基因表达谱数据及差异表达基因,进而使用miRNA预测数据库及Cytoscape软件,预测并建立miR-542-3p靶基因调控网络。qPCR验证mir-542-3p转染HOS以及SAOS2细胞后,部分预测目标靶基因的mRNA表达水平变化。结果 mir-542-3p 转染组骨肉瘤细胞的侵袭能力较对照组明显降低(P<0.05)。数据库差异基因分析表明,miRNA-542-3p与miR-neg转染的U2OS细胞的表达差异基因共417个,其中185个基因表达下调。实时定量PCR结果显示,Targetsacn以及MiRanda数据库预测靶基因中,miR-542-3p转染细胞组的ILK, TBPL1和ETS1表达水平显著低于对照组(P<0.05)。结论 miR-542-3p通过下调ILK, TBPL1以及ETS1显著抑制骨肉瘤细胞的侵袭能力。     

人骨髓核分化抗原对人骨肉瘤Saos-2细胞凋亡和增殖的影响

[目的]探讨人骨髓核分化抗原(MNDA)对人骨肉瘤Saos-2细胞增殖及凋亡的影响.[方法]逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法定量测定Saos-2细胞中MNDA的mRNA表达差异.将MNDA基因转染Saos-2细胞,应用MTT法测定转染后的肿瘤细胞增殖,流式细胞仪定量检测细胞凋亡程度,没有转染质粒的和转染空质粒的做为对照组.[结果] MNDA的mRNA在骨肉瘤Saos-2细胞中表达明显降低.转染MNDA后人骨肉瘤Saos-2细胞的凋亡程度高于对照组,增殖率低于对照组.[结论]转染MNDA可诱导人骨肉瘤Saos-2细胞发生凋亡,抑制骨肉瘤细胞的增殖率.     

LncRNA FGD5-AS1靶向miR-103a-3p对IL-1β诱导的关节软骨细胞凋亡的机制研究

目的探讨LncRNA FGD5-AS1靶向miR-103a-3p对IL-1β诱导的关节软骨细胞损伤及细胞凋亡的影响与分子机制。方法体外培养大鼠关节软骨细胞,分为NC组、IL-1β组(IL-1β浓度为10 ng/m L)。采用qRT-PCR检测细胞中FGD5-AS1、miR-103a-3p的表达水平。分别将pc DNA-FGD5-AS1、miR-103a-3p mimics转染至软骨细胞,随后使用IL-1β处理48 h。采用ELISA检测IL-6、TNF-α、IL-8水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验验证FGD5-AS1与miR-103a-3p的靶向关系; Western blot检测Bax、Cyt C、Cleaved Caspase-3、p-NF-κB p65、p-IκBα蛋白表达量。结果与NC组相比,IL-1β组软骨细胞中FGD5-AS1的表达水平显著降低(P0.05),miR-103a-3p、Bax、Cyt C、Cleaved Caspase-3的表达水平显著升高(P0.05),IL-6、TNF-α、IL-8水平显著升高(P0.05),细胞凋亡率显著升高(P0.05); FGD5-AS1过表达后可明显降低IL-6、TNF-α、IL-8、p-NF-κB p65、p-IκBα水平(P0.05),降低细胞凋亡率(P0.05),抑制Bax、Cyt C、Cleaved Caspase-3表达(P0.05);双荧光素酶报告实验证实FGD5-AS1靶向结合miR-103a-3p并可负向调控miR-103a-3p的表达(P0.05); miR-103a-3p过表达可明显逆转FGD5-AS1过表达对细胞凋亡及炎症反应的抑制作用(P0.05)。结论 LncRNA FGD5-AS1可通过靶向负调控miR-103a-3p的表达从而抑制IL-1β诱导的关节软骨细胞炎症反应及细胞凋亡,其作用机制可能通过抑制NF-κB信号通路激活有关。     

微小RNA-19a-3p通过调控转录因子ETS样蛋白3对乳腺癌细胞阿霉素耐药的影响

目的探讨微小RNA(miR)-19a-3p在乳腺癌细胞阿霉素耐药中的作用及其机制。方法以人乳腺癌细胞MDA-MB-231为研究对象, 根据转染物的不同, 将细胞分为对照组、miR-NC组(转染miR-19a-3p mimics阴性对照miR-NC)、miR-19a-3p mimics组(转染miR-19a-3p mimics)和miR-19a-3p mimics+si-转录因子ETS样蛋白3(ELK3)组[共转染miR-19a-3p mimics和ELK3小干扰RNA(siRNA)]。实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞中miR-19a-3p的表达, RT-qPCR和蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中ELK3的mRNA和蛋白表达, Western blot法检测细胞中P-糖蛋白(P-gp, ABCB1)的表达, 分别用不同浓度的阿霉素(0、5、10、25、50 nmol/L)处理各组细胞, 细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖能力, 评价各组细胞对阿霉素的药物敏感性。多组间均数比较采用单因素方差分析, 组间两两比较采用LSD-t法。结果 miR-1...     

山药多糖通过miR-98-5p/TGFβR1分子轴调控肝癌细胞凋亡的机制研究

目的探究山药多糖(CYPS)通过miR-98-5p/TGFβR1分子轴调控肝癌(HCC)细胞凋亡的分子机制。方法qPCR检测miR-98-5p在不同HCC细胞系中的表达情况,使用不同浓度的CYPS处理Huh-7细胞,CCK-8检测细胞增殖活力,Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting检测TGFβR1和细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-8、Bcl-2、Bax的表达,双荧光素酶报告基因系统验证miR-98-5p与TGFβR1的靶向关系。结果与人正常肝细胞HL-7702相比,miR-98-5p在HCC细胞系中表达升高(均P<0.05),且在Huh-7细胞中的表达高于其他HCC细胞(P<0.05);CYPS处理可明显抑制Huh-7细胞的增殖活力并诱导细胞凋亡(均P<0.05),且10-3 kg/L CYPS对细胞增殖活力的抑制作用比其他浓度明显。双荧光素酶报告基因实验证实,miR-98-5p靶向调控TGFβ1。与10-3 kg/L CYPS组相比,miR-98-5p mimics可下调10-3 kg/L CYPS对细胞增殖活力(P<0.05)的抑制作用和对细胞凋亡(P<0.01)的促进作用,CYPS+miR-98-5p mimics+pcDNA-TGFβR1组中细胞增殖活力与CYPS+miR-98-5p mimics组相比明显降低(P<0.05),细胞凋亡水平明显升高(P<0.01)。结论CYPS可下调miR-98-5p,促进TGFβR1的表达,抑制Huh-7细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

microRNA125a-3p对滋养层细胞功能的调控作用及机制

目的 观察microRNA125a-3p(miR-125a-3p)在滋养层细胞中的表达,探讨其对滋养层细胞增殖、侵袭和凋亡的调控及机制。方法 荧光实时定量PCR检测人滋养层细胞系HTR-8/SVneo、绒癌细胞系JAR和JEG-3中miR-125a-3p的表达情况。以HTR-8/SVneo和JEG-3细胞为实验对象,分为3组：空白对照组(CK组),未做任何处理;阴性对照组(NC组),转染NC-inhibitor;实验组(inhibitor组),转染miR-125a-3p inhibitor。以Transwell、流式细胞仪、CCK8法分别检测细胞的侵袭、凋亡及增殖能力。Western blot检测Fyn蛋白表达情况及ERK1/2、STAT3磷酸化水平。荧光实时定量PCR检测Fyn mRNA水平,免疫共沉淀法检测Fyn活性水平。结果 miR-125a-3p mRNA表达水平在HTR-8/SVneo、JAR和JEG-3细胞中依次降低,两两比较均有统计学差异(P<0.01)。抑制HTR-8/SVneo和JEG-3中miR-125a-3p后,细胞的凋亡水平明显降低,侵袭和增殖能力均明显升...     

miR-518a-5p靶向HDAC2调控甲状腺鳞癌细胞SW579凋亡的实验研究

目的:探讨miR-518a-5p调控甲状腺鳞癌细胞SW579凋亡的潜在机制.方法:通过实时荧光定量PCR分析33例癌组织和癌旁组织中miR-518a-5p的表达水平.使用miR-518a-5p mimics和miR-518a-5p inhibitor甲状腺鳞癌细胞SW579中过表达或敲低miR-518a-5p,检测细胞...     

丹参酮ⅡA通过下调KLF-4抑制骨肉瘤细胞增殖迁移

目的研究丹参酮ⅡA(TanⅡA)是否可以抑制骨肉瘤细胞株MG-63及其机制。方法用不同浓度的TanⅡA干预骨肉瘤细胞,Western blot检测各组中细胞增殖相关蛋白(p21、PCNA、ki-67)和细胞迁移相关蛋白(COL1A1、COL1A5、MMP-2、MMP-9)及KLF-4的表达情况;MTT法测细胞增殖情况、划痕试验观察细胞迁移情况;转染过表达KLF-4或空白对照质粒至离体培养的骨肉瘤细胞中,再用TanⅡA干预,检测骨肉瘤细胞表型转化情况。结果相比于对照组,TanⅡA组中骨肉瘤细胞增殖能力降低(P0.01),迁移减少(P0.01),p21表达增多(P0.05),PCNA、ki-67、COL1A1、COL1A5、MMP-2、MMP-9、KLF-4表达减少(P0.01)。转染KLF-4过表达质粒后,相比于对照组,转染KLF-4过表达质粒可以增加骨肉瘤细胞的增殖和迁移(P0.05),逆转TanⅡA对骨肉瘤细胞增殖迁移的抑制作用。结论 TanⅡA通过下调KLF-4抑制骨肉瘤细胞的增殖和迁移。     

lncRNA MEG3靶向调节miR-27a-3p抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的实验研究

目的:探究lncRNA MEG3对胃癌(GC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制。方法:qRT-PCR检测人正常胃上皮细胞GES-1和GC细胞(BGC823、MGC803、SGC7901、AGS、MKN28、MKN451)中MEG3及miR-27a-3p表达差异;将AGS细胞分为对照组、GV144组、GV144-MEG3组、GV144-MEG3+miR-27a-3p NC组、GV144-MEG3+miR-27a-3p mimics组;比较各组AGS细胞中MEG3及miR-27a-3p表达情况;检测细胞增殖、迁移和侵袭能力,Western blot检测ki-67、MMP-2、MMP-9蛋白表达,双荧光素酶报告实验验证MEG3与miR-27a-3p的靶向关系。结果:与GES-1细胞相比,GC细胞中MEG3水平降低,miR-27a-3p水平升高(P<0.05);与对照组相比,GV144-MEG3组MEG3水平升高,miR-27a-3p、ki-67、MMP-2、MMP-9水平及增殖、迁移和侵袭能力降低(P<0.05);上调miR-27a-3p表达可减弱MEG3过表达对AGS细胞恶性行为的抑制作用。miR-27a-3p是MEG3的靶基因。结论:过表达MEG3可能通过靶向下调miRNA-27a-3p表达抑制AGS细胞增殖、迁移及侵袭。     

MicroRNA-133a-5p调控c-met表达对胆管癌细胞迁移和侵袭的影响

目的:探讨MicroRNA-133(miR-133)在胆管癌细胞系中的表达,研究miR-133基因表达在胆管癌细胞迁移和侵袭过程中的作用。方法:利用实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术测定分析miR-133及其不同成熟体(miR-133b、miR-133a-3p、miR-133a-5p)在胆管癌QBC939细胞系中的表达。将胆管癌QBC939细胞系经转染后分为三组:自然生长组(空白对照组),细胞转染无关序列组(阴性对照组)以及细胞转染Anti-miR-133a-5p组(干扰组),利用RT-PCR检测各组胆管癌QBC939细胞系中miR-133a-5p、c-met的表达。然后利用Transwell小室法分别检测分析干扰miR-133a-5p基因表达对胆管癌QBC939细胞系迁移和侵袭能力的影响。结果:RT-PCR检测miR-133不同成熟体miR-133b(0.74±0.07)、miR-133a-3p(0.99±0.12)、miR-133a-5p(1.00±0.06)中的表达,其中miR-133a-5p在胆管癌QBC939细胞系中表达量最高(P0.05)。RT-PCR实验证实干扰组QBC939细胞系中miR-133a-5p(0.70±0.08)表达显著低于对照组(1.43±0.34);干扰组QBC939细胞系中c-met(0.09±0.02)表达也显著低于对照组(1.01±0.07),差异有统计学意义(P0.01)。Transwell小室实验证实干扰组中胆管癌QBC939细胞系迁移(69.5±8.3)和侵袭(19.3±3.3)能力明显低于对照组,差异均有统计学意义(P0.01)。结论:MicroRNA-133a-5p的低表达可以明显减弱c-met的表达,同时可以抑制胆管癌QBC939细胞系的迁移和侵袭能力,miR-133a-5p有可能成为胆管癌基因表达调控的新靶点。     

miR-542-3p对骨肉瘤细胞侵袭能力的影响及其靶基因预测

目的 明确miR-542-3p对骨肉瘤细胞系HOS和SAOS2细胞侵袭能力的影响,通过生物信息学建立miR-542-3p靶基因调控网络,并探讨其潜在作用靶点。方法 使用miR-542-3p mimics转染HOS和SAOS2细胞,同时设立正常组（未转染）及阴性对照组（转染miR-neg mimics）,Transwell小室试验检测转染后细胞的侵袭能力。通过美国国立生物信息中心（NCBI）基因表达共享数据库（GEO）联合GEO2R平台,获取并分析miRNA-542-3p与miR-neg转染的U2OS细胞的基因表达谱数据及其差异表达基因,进而使用miRNA预测数据库及Cytoscape软件,预测并建立miR-542-3p靶基因调控网络。实时荧光定量PCR验证miR-542-3p转染HOS和SAOS2细胞后,部分预测目标靶基因的mRNA表达水平变化。结果 miR-542-3p干预组HOS和SAOS2细胞的侵袭能力较正常组和阴性对照组明显降低（P均＜0.05）。数据库差异基因分析表明,miR-542-3p与miR-neg转染的U2OS细胞的表达差异基因共有417个,其中185个基因表达下调。miRNA预测数据库预测的266个靶基因中,有14个与差异基因分析中得到的表达下调基因重合。实时荧光定量PCR分析得出,ILK、TBPL1、ETS1这3个预测靶基因在miR-542-3p干预组中的表达水平显著低于阴性对照组,差异均有统计学意义（P均＜0.05）。结论 miR-542-3p通过下调ILK、TBPL1、ETS1显著抑制骨肉瘤细胞的侵袭能力。     

红花提取物对高糖处理的小鼠足细胞损伤的影响

目的:探讨红花提取物对高糖处理的小鼠足细胞增殖、凋亡和炎症因子分泌的影响及分子机制。方法:将小鼠足细胞MPC5分为对照(NC)组、高糖(HG)组、不同浓度红花提取物组、红花提取物+HG组、miR-NC+HG组、miR-516a-5p+HG组、anti-miR-NC+HG组、anti-miR-516a-5p+HG组、红花提取物+miR-NC+HG组、红花提取物+miR-516a-5p+HG组。MTT检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;RT-qPCR检测miR-516a-5p表达水平;ELISA检测白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。结果:红花提取物处理后,高糖处理的小鼠足细胞中细胞活性升高,细胞凋亡率降低,IL-1β、IL-6、TNF-α水平降低,miR-516a-5p表达水平降低(P0.05)。过表达miR-516a-5p促进高糖处理的小鼠足细胞炎症因子表达和细胞凋亡,抑制细胞增殖;抑制miR-516a-5p表达与其作用相反。miR-516a-5p过表达可以逆转红花提取物对高糖处理的MPC5细胞增殖、凋亡,炎症因子表达的影响。结论:红花提取物可能通过下调miR-516a-5p表达抑制高糖处理的小鼠足细胞炎症因子表达和细胞凋亡,促进细胞增殖。     

反义miR-30a-5p对人脑胶质瘤细胞U251生长的抑制作用

目的 观察敲低microRNA(miR)-30a-5p表达对人脑胶质瘤U251细胞生物学特征的影响.方法 用脂质体介导转染寡聚核苷酸抑制物(miR-30a-5p inhibitor)于人脑胶质瘤U251细胞.采用实时聚合酶链反应(real-time PCR)检测转染后U251细胞的miR-30a-5p表达水平以鉴定抑制效果;噻唑蓝(MTT)比色法评价miR-30a-5p inhibitor抑制U251细胞生长的作用;Transwell实验检测细胞侵袭能力变化;流式细胞术检测细胞周期变化;Annexin V法检测细胞早期凋亡.结果 real-time PCR检测结果 显示转染miR-30a-5p inhibitor后,肿瘤细胞miR-30a-5p表达下降,细胞增殖活性降低,细胞侵袭能力明显受到抑制,细胞周期阻滞在G0/G1期及早期凋亡增加.结论 miR-30a-5p可能是癌微RNA(oncomiR)之一,有望成为人脑胶质瘤基因治疗的候选靶点.

Abstract：

Objective To investigate the effect of knock-down of miR-30a-5p on the biological characteristics of U251 glioblastoma cells. Methods miR-30a-5p inhibitor, mediated by Lipofectamine 2000, was transfected to U251 cells for knocking down miR-30a-5p. Real-time polymerase chain reaction (PCR) was conducted to detect the expression of miR-30a-5p in transfected cells. The cell proliferation rate was detected by methyl thiazol tetrazolium (MTT) assay, and cell cycle kinetics was examined by flow cytometry. The cell invasive ability was evaluated by Transwell assay and apoptosis detected by Annexin V assay. Results The expression of miR-30a-5p in the miR-30a-5p inhibitor group was significantly down-regulated. The cell proliferation activity and invasive ability were reduced. Cells were arrested in G0/G1 phase, and apoptosis was induced in cells transfected with miR-30a-5p inhibitor as compared to those of the cells transfected with scramble siRNA and control cells, so suppression of miR-30a-5p expression rendered the glioma cells harboring less aggressive phenotype. Conclusion miR-30a-5p is one of oncomiRs. It may be a candidate target miRNA for gene therapy of gliomas.