MiR-214表达载体的构建及其对肝癌细胞Hep3 B增殖的影响

目的构建pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR-214表达载体,并检测其对肝癌Hep3B细胞增殖的影响。方法以人的基因组DNA为模板,利用PCR扩增miR-214前体序列,构建pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR-214表达载体,序列比对及实时定量PCR验证miR-214表达载体是否构建成功,MTT实验检测miR-214对肝癌Hep3B细胞增殖的影响。结果序列比对及实时定量PCR验证miR-214表达载体构建成功。将成功构建的miR-214表达载体导入肝癌细胞Hep3B,发现其对细胞增殖具有抑制作用。结论本研究成功构建miR-214表达载体并证明miR-214可能参与肝癌发展的过程。     

脊髓损伤后脂质蓄积对损伤灶自发荧光强度的影响

目的 :研究小鼠脊髓损伤后损伤灶的脂质蓄积与自发荧光强度之间的关系,探索硫酸铜能否消除脊髓损伤灶的自发荧光。方法:选取鼠龄8~12周,体重18~24 g的野生型小鼠36只,随机分为正常对照组(4只)与脊髓损伤组(32只)。脊髓损伤组于损伤后1、2、4、8周分别随机抽取8只处死,以损伤灶为中心取脊髓组织标本行冰冻切片(正常对照组取相同节段的脊髓,标本放入4%多聚甲醛溶液进行后固定),在荧光显微镜的绿色通道下观察自发荧光,进行油红O染色显示损伤灶的脂质蓄积,并分析自发荧光强度与脂质蓄积量的相关性。配制硫酸铜缓冲液处理切片以消除自发荧光,并优化硫酸铜浓度与作用时间。结果:正常脊髓组织切片未发现明显自发荧光或脂质染色,而脊髓损伤后在损伤灶出现自发荧光,并且强度随损伤后时间延长而增强。油红O染色显示损伤灶的脂质同样随伤后时间延长而蓄积,并且增长趋势与自发荧光的增强趋势呈正相关。应用硫酸铜缓冲液后,自发荧光强度显著降低,优化硫酸铜浓度与作用时间后效果更好。结论:脊髓损伤后损伤灶脂质蓄积可能在决定自发荧光的强度上起重要作用,自发荧光强度可以作为评估脂质过氧化损害的简便指标;优化的硫酸铜法能够显著消除脊髓损伤后损伤灶的自发荧光,有利于免疫荧光染色技术在脊髓损伤研究中的应用。     

Hsa-miR-106a在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的分析hsa-miR-106a在胃癌组织中相对于正常组织的表达及其与病理分级及临床分期的关系。方法从石蜡组织包埋的19例胃癌及19例正常组织中提取总RNA,应用Real—timePCR方法检测miR-106a的表达情况,并分析其与胃癌病理分级及临床分期的关系。结果miR-106a在胃癌组织中有14例高表达,5例低表达,在胃癌组织中的表达明显高于正常组织（P〈0．01）,其表达与胃癌的病理分级、临床分期密切相关。结论miR-106a可能参与了胃癌的发生、发展过程。     

间充质干细胞迁移治疗脊髓损伤的研究进展

脊髓损伤（spinal cord injury,SCI）通常会导致严重的神经功能障碍。间充质干细胞（mesenchymal stem cell,MSC）是治疗SCI最有前途的干细胞类型之一。MSC移植后的低迁移效率、低存活率和低分化率严重限制了MSC移植在临床上的应用。此外,大量研究显示不论是静脉注射还是脊髓内注射,很少有细胞发生定向迁移和整合。近年研究显示,MSC的定向迁移受细胞因子、基因转录表达和组织工程影响。本文从细胞因子、基因表达调控及组织工程3个方面对MSC迁移的作用进行总结,同时归纳近年通过促进MSC迁移治疗SCI策略的研究进展,为进一步提高治疗SCI的效果、实现精准医疗提供思路。     

微小RNA-195通过靶向BIRC5调控肝癌Hep3B细胞凋亡实验研究

目的:探讨微小RNA-195(miR-195)对肝癌Hep3B细胞凋亡的影响,并探索其下游靶基因。方法:采用MTT实验、流式细胞仪检测miR-195对肝癌Hep3B细胞增殖及凋亡的影响。构建双荧光素酶报告基因质粒,采用双荧光素酶报告基因实验验证靶标分子。采用RNA干扰技术检测沉默BIRC5对肝癌Hep3B细胞增殖及凋亡的影响。结果:与miR-ctrl组相比,miR-195过表达可抑制肝癌Hep3B细胞增殖,促进其凋亡。双荧光素酶报告基因实验表明,miR-195可靶向作用BIRC5,沉默BIRC5可抑制肝癌Hep3B细胞增殖,促进其凋亡。结论:miR-195可通过靶向调控BIRC5抑制肝癌Hep3B细胞增殖,促进其凋亡。BIRC5可能是肝癌靶向治疗的重要靶标。     

miR-181a-5p通过HOXB4抑制骨肉瘤细胞HOS增殖和迁移

目的: 研究miR-181a-5p对HOS骨肉瘤细胞增殖、周期和迁移的影响及其机制。方法: 采用实时定量PCR检测hFOB1.19成骨细胞和HOS、U2OS、MG63骨肉瘤细胞系中miR-181a-5p及HOXB4的表达情况。利用Lipofectamine 2000将miR-181a-5p mimics和miR-181a-5p inhibitor分别转染至人骨肉瘤HOS细胞中(分别为过表达组和抑制剂组),并设置miR 阴性对照组;CCK-8法检测各组细胞的增殖能力变化,流式细胞术检测各组细胞的细胞周期变化,划痕愈合实验以及Transwell迁移实验检测各组细胞的迁移能力变化。Targetscan网站预测miR-181a-5p的靶向基因,并通过双荧光素酶报告基因系统及Western blot验证靶向关系。结果: 与成骨细胞hFOB1.19相比,miR-181a-5p在骨肉瘤细胞HOS、U2OS和MG63中低表达(P<0.05),而HOXB4在骨肉瘤中高表达(P<0.05)。与阴性对照组相比,过表达miR-181a-5p抑制骨肉瘤HOS细胞的增殖和迁移能力,并且处于细胞周期S期的细胞减少(P<0.05)。敲低miR-181a-5p促进骨肉瘤HOS细胞的增殖和迁移能力,并且处于S期细胞增加(P<0.05)。生物信息学预测及双荧光素酶报告基因系统验证HOXB4为miR-181a-5p的下游靶基因(P<0.05)。Western blot显示,过表达miR-181a-5p的HOS细胞中,HOXB4蛋白表达低于阳性对照组(P<0.05),而敲低miR-181a-5p的HOS细胞中HOXB4蛋白表达高于对照组(P<0.05)。结论: miR-181a-5p在骨肉瘤细胞中低表达,过表达miR-181a-5p能够抑制骨肉瘤细胞HOS增殖、周期和迁移能力,该作用可能通过靶向HOXB4发挥作用。     

HERG基因G572R突变体表达载体的构建及其稳定转染细胞系的建立

目的构建HERG基因G572R突变体表达载体并建立其稳定转染HEK293 的细胞系。方法应用重叠延伸PCR构建
HERG-G572R突变体表达载体,经G418筛选稳定转染细胞系,通过Real-Time PCR,Western blot及测序鉴定稳定转染细胞系。
结果经序列比对,证明HEK-HERG-G572R突变体表达载体构建成功,Real-Time PCR,Western blot 及测序证明稳定转染细胞
系构建成功。结论该方法可成功构建的HKE-HERG-G572R细胞株,为药物个体化治疗提供工具。