细胞角蛋白19在口腔鳞状细胞癌中的表达及意义

目的:研究细胞角蛋白19 (cytokeratin 19,CK19)在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)中的表达,探讨两者之间的相关性.方法:收集正常口腔黏膜、单纯上皮增生、上皮异常增生和OSCC患者活检标本49例,采用免疫组织化学、蛋白质印迹比较各组织中CK19的表达;收集未接受过放疗和化疗的OSCC患者16例及健康人群17例的血清,采用ELISA方法检测血清中CK19的可溶性片段CYFRA21-1的水平.采用SPSS17.0软件包进行数据处理.结果:CK19表达于有上皮异常增生的复层鳞状上皮基底上层和OSCC尤其是低分化鳞癌的癌细胞中,随上皮异常增生程度加重,CK19表达的阳性率、表达强度显著增加.OSCC患者血清CYFKA21-1含量显著高于健康对照组(P＜0.01).结论:CK19表达增加是口腔黏膜癌变过程中的早期事件,其异常表达可作为早期诊断OSCC的辅助指标之一.     

大鼠舌黏膜癌变中黏着斑激酶的转录表达及其与细胞凋亡的关系研究

目的观察舌黏膜癌变过程中黏着斑激酶（FAK）的mRNA表达变化及其与细胞凋亡的关系,初步探讨其与舌黏膜癌变的关系。方法用4-亚基硝氧喹啉（4NQO）诱导大鼠舌黏膜癌变．分别获取正常、异常增生（轻、中、重度）口腔黏膜和口腔鳞癌组织。采用半定量反转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测各样本FAK的mRNA水平,用TUNEL法检测细胞凋亡水平。结果大鼠舌黏膜癌变过程中,与正常口腔黏膜相比,FAK的mRNA水平在轻、中、重度异常增生口腔黏膜中无显著变化,然而在鳞癌组织中明显增高,与其他各组问相比差异有统计学意义（P〈0．05）：在黏膜癌变过程中FAK的mRNA水平与细胞凋亡呈负相关（r=-0．581,P〈0．05）。结论FAK参与了舌黏膜癌变过程,可能成为一个新的治疗靶点。     

口腔黏膜癌变过程中丝氨酸/苏氨酸激酶15的表达及意义

目的了解丝氨酸/苏氨酸激酶15（STK15）在口腔黏膜癌变过程中的表达变化,探讨P53/STK15转激活-非依赖通路在口腔鳞癌（OSCC）发生发展中的作用及意义。方法正常口腔黏膜8例,上皮异常增生患者27例,OSCC患者43例, 石蜡包埋组织,采用免疫组化SABC法了解STK15及P53蛋白表达情况,分析二者的相关性及其临床病理学意义。结果STK15在正常口腔黏膜无表达,在上皮异常增生及OSCC中阳性率分别为40.74%（11/27） 和67.44%（29/43）,各组间差异均有统计学意义（P<0.05）;口腔鳞癌中STK15阳性率在P53阳性组高于P53阴性组,在OSCC有淋巴结转移组高于无淋巴结转移组,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论STK15过表达是口腔黏膜癌变过程的早期事件,口腔鳞癌STK15过表达可能与p53突变有关并与OSCC淋巴结转移密切相关,P53/STK15转激活-非依赖通路在OSCC发生发展中可能起重要作用。     

Prx1调控PINK1/Parkin介导的线粒体自噬在实验性口腔黏膜癌变中的作用

目的检测口腔黏膜癌变过程中线粒体自噬相关蛋白PINK1、Parkin表达变化及抗氧化蛋白Prx1对其调控作用,探讨Prx1在口腔黏膜癌变中的作用机制。方法利用4NQO化学诱导Prx1^+/+和Prx1+/-小鼠舌黏膜癌变模型,采用免疫组织化学染色及Q-PCR方法,检测PINK1、Parkin在小鼠舌正常黏膜、白斑、白斑伴上皮异常增生、鳞癌组织中的表达。结果在Prx1^+/+小鼠舌癌变模型中,PINK1、Parkin蛋白及mRNA表达在舌白斑及白斑伴上皮异常增生组织中显著高于正常黏膜及舌癌组织;与Prx1^+/+小鼠各组相比,Prx1敲除导致小鼠舌白斑、白斑伴上皮异常增生及舌癌中PINK1蛋白及mRNA表达明显降低;小鼠舌白斑及舌癌组织中Parkin mRNA表达显著升高。结论线粒体自噬参与了口腔黏膜癌变过程;Prx1可能通过调控PINK1/Parkin介导的线粒体自噬在其中发挥重要作用。     

共济失调毛细血管扩张综合征突变基因与口腔黏膜癌变的相关研究

目的研究共济失调毛细血管扩张综合征突变基因（ATM）在口腔黏膜癌变过程中的作用。方法选取上皮单纯增生,轻、中、重度上皮异常增生,口腔黏膜鳞状细胞癌及正常口腔黏膜标本共61例,采用免疫组织化学SP法和聚合酶链反应方法,观察口腔黏膜癌变过程中ATM蛋白表达与基因杂合性缺失情况以及其与临床病理特征的关系。结果上皮异常增生组平均染色强度高于正常对照组,差别有统计学意义（P<0.05）。在口腔鳞癌中,22例（68.8%）ATM蛋白表达正常或升高,10例（31.3%）ATM蛋白表达降低或缺失;经统计学分析,ATM蛋白表达正常或升高组与ATM蛋白表达降低或缺失组两组分别在病理分级与淋巴结转移两方面的差异有统计学意义（P<0.05）;PCR结果表明,上皮异常增生中未发现异常改变,而口腔鳞状细胞癌中,3例（9.38%）发生杂合性缺失,2例（6.25%）发生微卫星不稳定,发生杂合性缺失的3例病例ATM蛋白表达均缺失。结论ATM在上皮异常增生中表达升高可能有利于消除基因组不稳定,阻止癌变发生;而ATM基因失活可能是促使口腔鳞癌恶性演进的基因改变之一。     

口腔黏膜癌变过程中中心体的扩增及其意义

目的　了解口腔黏膜癌变过程中中心体的状况,探讨中心体的异常在口腔鳞状细胞癌(OSCC)发生发展中的作用及其在口腔黏膜癌变过程中的意义。方法　选取正常口腔黏膜(12例)、轻度上皮异常增生(2例)、中度上皮异常增生(8例)、重度上皮异常增生(12例),口腔高分化鳞癌(10例)、中分化鳞癌(15例)、低分化鳞癌(7例)的石蜡包埋组织,采用间接免疫荧光双重染色(γ-微管蛋白单克隆抗体及细胞角蛋白多克隆抗体)显示上皮细胞中的中心体,分析其在口腔黏膜癌变过程中的变化趋势及在各组间的差异。结果　正常口腔黏膜上皮表现为大小数目正常的中心体,但在72·73%(16/22)的上皮异常增生及84·38%(27/32)OSCC组织中观察到部分上皮或肿瘤细胞中出现异常中心体,表现为中心体直径的增加或数目的增多。具有异常中心体的细胞数目随上皮异常增生程度的增加及肿瘤分化程度的降低而增加,二者存在明显的正相关关系(P<0·01)。结论　中心体的扩增是口腔黏膜癌变过程中的早期事件并与口腔癌发生发展进程有关,口腔黏膜癌变过程中的细胞形态学改变与中心体扩增之间可能存在直接机制上的联系。从调控中心体循环入手治疗口腔癌前病损及OSCC,有可能成为口腔癌预防和治疗的新途径。     

细胞角蛋白19mRNA在口腔鳞状细胞癌中表达的研究

目的探讨口腔鳞状细胞癌（OSCC）患者癌组织中细胞角蛋白（CK）19 mRNA的变化和其发生的可能机制以及CK19 mRNA检测的临床应用价值。方法收集未接受过放疗和化疗的20例OSCC患者的手术标本（包括癌组织20块、癌旁组织20块和颈清扫的淋巴结43枚）,采用荧光定量聚合酶链式反应（FQ-PCR）法检测组织内CK19 mRNA的表达,比较CK19 mRNA在上述组织中的相对表达量。结果CK19 mRNA在OSCC癌组织内表达比其在正常口腔黏膜内表达高1.85倍,比其在癌旁组织内表达高1.66倍。9例患者颈清扫淋巴结内CK19 mRNA表达阳性,阳性率为45%（9/20）,而9例患者的22枚淋巴结中CK19 mRNA表达阳性率是81.8%（18/22）,占20例患者43枚淋巴结的41.9%（18/43）。淋巴结CK19 mRNA阳性患者的癌组织与癌旁组织和正常口腔黏膜的表达量比CK19 mRNA阴性患者低。结论CK19 mRNA在OSCC癌组织中的表达高于其在癌旁组织和正常口腔黏膜内的表达,可能是由于癌组织中CK19的合成明显增加所致。淋巴结中CK19 mRNA的表达可以作为检测OSCC淋巴结微转移的指标之一,运用FQPCR法检测淋巴结中CK19 mRNA的表达来检测OSCC的淋巴结微转移比普通病理法检测更灵敏。     

E-钙黏素mRNA在大鼠舌黏膜癌变过程中的表达研究

目的:研究上皮型黏附分子E-钙粘素mRNA在大鼠舌黏膜癌变过程中的表达及其意义。方法:采用4NQO饮水法诱导大鼠舌鳞状细胞癌发生,实时荧光定量PCR技术检测组织标本中E-钙粘素mRNA的表达情况。结果:在大鼠舌鳞状细胞癌发生过程中E-钙粘素mRNA表达降低;上皮单纯增生组、轻度上皮异常增生组、中度和重度上皮异常增生组、鳞状细胞癌组4组标本中E-钙粘素 mRNA的表达量分别是上皮正常组标本中的0.453541倍、0.207062倍、0.190954倍、0.180987倍,且鳞状细胞癌组与上皮正常组间的差异具有统计学意义。结论:在大鼠舌黏膜癌变过程中E-钙粘素mRNA表达随着病理分级的增加呈逐渐降低的趋势。E-钙粘素mRNA表达变化是大鼠舌黏膜癌变过程中的早期事件。     

小分子锌指蛋白1在4-硝基喹啉-N-氧化物诱导SD大鼠颊黏膜癌变中的表达研究

目的 研究口腔黏膜癌变中小分子锌指蛋白1（LMO1）在基因转录和蛋白水平的表达变化。方法 取本课题组前期4-硝基喹啉-N-氧化物（4NQO）饮水法构建鳞癌动物模型的49例样本进行苏木精-伊红（HE）染色,依据上皮异常增生程度确定实验组病理分级并确定实验分组;免疫组织化学染色定性确定LMO1的表达部位;实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）和Western blot检测5组样本中LMO1 mRNA和蛋白的表达。结果 HE染色确定对照组7例,轻度组6例,中度组11例,重度组9例,OSCC组16例。免疫组织化学染色检测可见,LMO1主要表达于细胞质,对照组、轻度组、中度组、重度组和OSCC组的阳性表达率分别为14.3%、33.3%、81.8%、88.9%、93.8%。RT-qPCR检测可见,对照组LMO1 mRNA的表达量最低,OSCC组最高,对照组与轻度组间mRNA表达差异无统计学意义（P>0.05）,其余各组组间两两比较,mRNA的表达差异均有统计学意义（P<0.05）。Western blot检测可见,随着上皮异常增生程度的加重,LMO1的蛋白表达量逐渐上升,在OSCC组中表达最高。结论 口腔黏膜癌变进程中,LMO1 mRNA和蛋白异常表达,且mRNA和蛋白表达量随上皮异常增生程度的加重而增加。     

单层上皮细胞角蛋白在口腔粘膜癌变过程中的表达

目的：探讨单层上皮细胞角蛋白ＣＫ１８和ＣＫ１９作为口腔癌前病变标志的可能性。方法：用ＬＳＡＢ免疫组化染色方法检测ＣＫ１８和ＣＫ１９在福尔马林固定,石蜡包埋的口腔正常粘膜,上皮单纯增生,轻度上皮导演增生,中度上皮异常增生,重度上皮异常增生和口腔鳞癌组织中的分布和表达强度,光镜观察染色切片,结果用秩和检验分析。     

Homeobox C5 expression is associated with the progression of 4-nitroquinoline 1-oxide-induced rat tongue carcinogenesis

J Oral Pathol Med (2012) 41 : 470–476 Background: Aberrant expression of homeobox genes (HOX), normally required for the differentiation of a particular tissue, has been reported in several types of cancer, but poorly addressed in oral squamous cell carcinoma (OSCC). The present study investigated the expression of HOXC5 in OSCC and identified molecular biomarker whose expression is associated with the multistep oral carcinogenesis. Methods: The expression of HOXC5, proliferation cell nuclear antigen (PCNA), and Bcl‐2 was examined by RT‐PCR and Western blot analysis and confirmed by immunohistochemistry and transferase‐mediated dUTP nick end‐labeling (TUNEL) assay in a 4‐nitroquinoline 1‐oxide (4NQO)‐induced rat tongue carcinogenesis model. Results: Homeobox genes C5 was overexpressed in SCC tissues, but not in normal tissues by RT‐PCR and Western blot analysis. Along with the progress of multistep carcinogenesis, the levels of HOXC5 expression of mRNA and protein significantly increased during the dysplasia (moderate to severe dysplasia) when compared with normal and hyperplasia. The levels of PCNA and Bcl‐2 were sequentially increased from hyperplasia to dysplasia and SCC. By immunohistochemistry, HOXC5 expression was significantly increased in dysplasia, whereas PCNA expression was gradually increased during tongue carcinogenesis. TUNEL‐positive cells were increased until dysplasia, but reduced in SCC. Conclusions: These results indicate that overexpression of HOXC5 is correlated with oral carcinogenesis and strongly contributed to the development of OSCC. HOXC5 may be a useful biomarker and has an emerging therapeutic target of OSCC.     

细胞角蛋白CK19在口腔粘膜癌变过程中的变化

目的：探讨口腔粘膜癌变过程中CK19的变化。方法：收集正常口腔粘膜、上皮单纯增生、上皮异常增生和口腔鳞癌活检标本共53例，用免疫组化、电泳和Western杂交方法研究上皮中CK19的表达。结果：CK19表达于有上皮异常增生的复层鳞状上层和口腔鳞癌尤其是低分化鳞癌的癌细胞中。随病变程度加重，CK19表达的阳性率，表达强度和占细胞角蛋白构成比显著增加。结论：CK19表达于粘膜上皮的基底上层可作为口腔癌前病变的辅助标志，CK19表达增加是 口腔粘膜病变过程中的早期事件。     

RB1CC1在人和小鼠口腔癌发生发展中表达的比较研究

目的:比较视网膜母细胞瘤RB1-诱导卷曲蛋白1(RB1CC1)在人和小鼠正常口腔黏膜、上皮异常增生组织及口腔鳞状细胞癌中的表达,并探讨其在口腔癌发生发展过程中的作用。方法:采用免疫组化和RT-PCR检测人及小鼠在正常口腔黏膜、上皮异常增生、高分化鳞癌原发灶组织中RB1CC1蛋白及基因的表达情况。结果:RB1CC1蛋白在人上皮异常增生组、高分化鳞癌组的阳性表达高于正常组(P<0.05);RB1CC1蛋白在鼠正常组、异常增生组、高分化鳞癌组阳性表达逐渐增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。人RB1CC1 mRNA的表达量在异常增生组与高分化鳞癌组无明显差异,正常口腔黏膜组均高于异常增生组与高分化鳞癌组(P＜0.05);小鼠RB1CC1 mRNA的表达量在正常口腔黏膜组与异常增生组、高分化鳞癌组差别无统计学意义。结论:RB1CC1表达在人和小鼠相似, RB1CC1可能参与了口腔鳞癌的早期癌变过程。     

大鼠舌癌变过程中生存素、Bcl-2和p53蛋白的表达

目的 探讨生存素(survivin)蛋白在大鼠舌癌变过程中的表达及其与Bcl-2、p53蛋白表达的相关性.方法 0.002%4-硝基喹啉-1-氧化物(4一nitro-quinoline 1-oxide,4NQO)饮水喂养SD大鼠9～36周建立大鼠舌癌变模型,用免疫组化二步法检测60例大鼠舌癌变过程中生存素、Bcl-2及p53蛋白的表达.结果 36例止常组织中生存素蛋白表达仅1例,而11例异常增生组织中其表达为6例,11例口腔癌组织中其表达为10例.生存素蛋白在正常舌黏膜、异常增生黏膜及舌癌中的阳性表达差异有统计学意义(P<0.001),异常增生及口腔癌组织中生存素蛋白表达显著高于正常黏膜中的表达(P<0.01).在17例生存素蛋白表达阳性的大鼠舌组织中,Bcl-2蛋白阳性表达12例,p53蛋白阳性表达8例;生存素蛋白表达与Bcl-2、053蛋白表达呈正相关(P<0.01).结论 生存素蛋白的表达增高和口腔鳞状上皮的异常增生、癌变有关,提示生存素可能参与了口腔癌的发生、发展;生存素、Bcl-2及p53蛋白的表达可能在口腔癌的发生、发展中起协调作用.     

4-硝基喹啉-1-氧化物诱导大鼠舌癌过程中Notch1的表达特点

目的：研究 Notch1在大鼠舌癌模型发生发展过程中的表达变化。方法：将40只 SD 大鼠随机分为对照组（A 组10只）和实验组（B、C、D组各10只）,使用质量百分比浓度为0．004％的4-硝基喹啉-1-氧化物（4-nitroquinoline-1-oxide,4NQO）饮用水喂养实验组 SD大鼠,用蒸馏水喂养对照组 SD大鼠。B、C、D组分别于8、16、24周取大鼠舌体组织;A 组在8、16、24周同时各取3只、3只、4只作为正常对照。行常规组织学观察,并使用免疫组织化学法检测 Notch1在病变不同阶段的舌粘膜内的表达。结果：4NQO可以有效诱导大鼠舌黏膜鳞状细胞癌的发生。在不同的给药时间点,可以诱导大鼠舌黏膜产生不同程度的癌前病变。Notch1在正常舌黏膜、癌前病变、舌鳞癌中的表达逐渐增高（P＜0．01）。随着异常增生程度的增加,阳性表达部位逐渐由基底层向表层扩展,且 Notch1的膜型表达逐渐增多。结论：Notch1的高表达及其在细胞膜上的集中表达可能与舌癌的发生、发展过程相关。     

大鼠舌癌变过程中MMP-2及MMP-9基因表达的变化

目的　通过观察基质金属蛋白酶 (MMP)在大鼠舌癌变过程中的不同表达 ,分析MMP在口腔鳞癌 (OSCC)及其癌变过程中的表达规律 ,探讨其与肿瘤发生、发展的关系。方法　用原位杂交方法检测 80例 4NQO饮水诱发大鼠舌癌变各期组织MMP 2和MMP 9基因表达。结果　正常粘膜、轻中度异常增生、原位癌、鳞癌的MMP 2mRNA阳性率分别为 8 3% ,2 2 6 % ,35 7% ,73 9% ;MMP 9mRNA阳性率分别为 8 3% ,19 4 % ,35 7% ,82 6 %。结论　MMP 2、MMP 9基因上调表达与口腔粘膜基底膜破坏密切相关 ,是口腔癌浸润生长的重要分子机制。     

Fas、bcl-2在金黄地鼠颊囊癌变过程中的表达

目的:研究凋亡相关蛋白Fas、bcl-2在口腔黏膜癌变过程中的表达规律。方法:建立金黄地鼠颊囊癌变模型,采用免疫组化法检测地鼠颊囊癌变过程中凋亡相关蛋白Fas、bcl-2的表达。采用非参数检验进行统计学分析。结果:在阴性对照组黏膜,除基底细胞外,Fas多呈极强阳性表达;随上皮异常增生程度加重,Fas表达下调,主要定位于细胞的胞膜和胞质。癌变后Fas表达更低,且表达部位主要位于癌细胞胞质内,与阴性对照组黏膜相比,差异有显著性(χ2=45.576,P<0.05)。bcl-2在阴性对照组黏膜多不表达,随上皮异常增生程度加重表达上调,重度异常增生时达最高峰,鳞癌组表达降低,与异常增生组显著差异,而与阴性对照组相比,差异有显著性(χ2=19.433,P<0.05)。结论:Fas通过表达的下调及表达部位的改变,参与口腔黏膜异常增殖细胞逃逸机体的免疫监视功能及细胞毒性淋巴细胞的攻击;bcl-2通过表达上调,发挥其抑制凋亡的功能,使细胞凋亡减少,细胞的存活期延长;两者可能具有协同作用,导致增殖细胞凋亡减少,细胞增殖与凋亡失衡,导致地鼠颊囊癌的形成。