β-七叶皂甙钠对脊髓继发性损伤的保护作用

目的:观察β-七叶皂甙钠(SodiumAescinate,SA)对脊髓继发性损伤的保护作用。方法:参考Nystr?m方法建立大鼠脊髓压迫伤模型(T8～9),将动物随机数字表法分为假手术组、模型组、SA组、甲泼尼龙(MP)组。应用免疫组化和图像定量分析法观察脊髓损伤后天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(caspase)-3蛋白的表达,测定不同药物组超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛含量的变化。术后1,2周联合行为学评分(CBS)观察实验动物神经功能恢复情况。结果:假手术组有少量散在caspase-3蛋白的表达,脊髓损伤模型组cas-pase-3蛋白阳性细胞增多,SA组和MP组阳性细胞数均低于模型组,两治疗组间比较无显著性差异。SA组脊髓组织丙二醛含量明显低于各时相点模型组,SOD活性显著增高,与MP组比无显著性差异。CBS评分SA组明显增加。结论:SA可以下调caspase-3蛋白的表达,抑制细胞凋亡,缓解脊髓损伤后的脂质过氧化,从而起到脊髓保护作用。     

银杏叶提取物对实验性脊髓损伤的保护作用

目的：探讨银杏叶提取物(extract of leave ginkgo biloba，EGb)对脊髓继发性损伤的保护作用，并与甲基强地松龙(methylprednisolone，MP)进行对照。方法：实验于2004—06／08在武汉大学人民医院实验动物中心完成。SD大鼠54只，以改良Allen氏法制备脊髓挫伤模型，随机分为3组。测定不同药物处理后12，24h脊髓组织线粒体超氧化物歧化酶(supemxide dismutase，SOD)活性和丙二醛浓度以及微循环指标改变，光镜观察用药后1周EGb对病理学改变的影响。结果：EGb处理后脊髓组织丙二醛浓度明显低于各时相点对照组，SOD活性显著升高(P&;lt;0．05)，与MP治疗组无明显差异(P&;gt;0．05)。微循环指标也有所改善。病理检查发现EGb治疗组空泡变性范围减小，炎症反应较轻。结论：EGb可以缓解脂质过氧化反应，防止微血栓形成，具有脊髓保护作用。     

延龄草苷对脊髓损伤大鼠核因子E2相关因子2/抗氧化反应元件信号通路的影响

目的探索延龄草苷对大鼠脊髓损伤后核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)通路及氧化应激反应的影响。方法雄性Sprague-Dawley大鼠108只,随机分为假手术组、模型组和延龄草苷组,每组36只,每组再分为1d、3 d和7 d三个亚组,每个亚组12只。模型组和延龄草苷组采用改良Allen重物打击法制备髓损伤模型,假手术组不损伤脊髓。延龄草苷组每天给予延龄草苷200 mg/kg灌胃,假手术组和模型组每天给予等量生理盐水,每天2次。术后1 d、3 d、7 d进行BBB评分;术后7 d,取损伤部位脊髓组织进行尼氏染色,观察形态学变化;ELISA检测脊髓内氧化应激因子丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)的变化;术后1 d、3 d、7 d,Western blotting分析检测脊髓组织内Nrf2、Kelch样ECH关联蛋白1 (Keap1)、血红素加氧酶-1(HO-1)和NAD(P)H醌氧化还原酶-1(NQO1)的表达情况。结果与模型组相比,延龄草苷组BBB评分提高(P 0.05);脊髓结构较完整,神经元形态较正常,尼氏小体数量增多;脊髓组织内SOD活性提高(P 0.05),MDA含量降低(P 0.05);脊髓内抗氧化相关蛋白Nrf2、Keap1、HO-1和NQO1的表达均升高(P 0.05)。结论延龄草苷对大鼠脊髓损伤有保护作用,可能通过抑制组织内氧化应激反应改善运动功能。     

甲基强的松龙对大鼠脊髓损伤后星形胶质细胞的影响

目的 观察大鼠脊髓损伤后甲基强的松龙(MP)对星形胶质细胞(AS)增殖和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响.方法 雄性SPF级10周龄大鼠48只,制成脊髓右侧半横断损伤模型,分为MP组和对照组,每组24只.术后每4 d进行1次行为学(BBB)评分.MP组通过尾静脉注射MP溶液,对照组同时注射等量生理盐水,两组大鼠分别在3 d、7 d、14 d、28 d处死,应用免疫组化技术观察GFAP的表达,并做灰度值测定和GFAP阳性细胞计数.结果 与对照组相比,MP组在损伤后21 d内行为学方面无显著性差异,在25 d后MP组优于对照组.脊髓损伤后3 d和7 d,MP组活性化AS数目明显少于对照组,14 d后无显著性差异;3 d、7 d、21 d时,MP组胶质性瘢痕中GFAP表达量均明显低于对照组,28 d时两组无显著性差异.结论 急性脊髓损伤后大剂量MP冲击疗法能减少AS活化的数目,减少胶质性瘢痕的形成,并能促进后肢功能的恢复.     

针刺对慢性脊髓损伤大鼠神经递质和营养因子表达的影响

目的 探讨针刺治疗慢性脊髓损伤的机理。方法 建立后路渐进性脊髓压迫大鼠模型,然后手术减压,进行电针治疗,观察联合行为评分(CBS)及胆碱乙酰转移酶(ChAT)、脑源性神经营养因子(BDNF)及其受体TrkB的免疫组化检测结果。结果 初次术后90 d,电针组大鼠CBS评分优于减压组( P <0.05),ChAT免疫组化染色阳性细胞数多于减压组 ( P <0.05),神经元和胶质细胞增强的BDNF和TrkB表达得到恢复。结论 电针治疗可能通过影响 BDNF及其受体的表达,促进 ChAT表达和增强其活性而对大鼠慢性脊髓损伤起治疗作用。     

蜂胶总黄酮对大鼠缺血再灌注后大脑皮质神经细胞凋亡和caspase-3与bcl-2及bax表达的影响

目的 观察蜂胶总黄酮对局灶性脑缺血大鼠大脑神经细胞凋亡及bel-2、bax、easpase-3表达的影响,探讨蜂胶总黄酮对脑缺血再灌注损伤的保护作用机制.方法 36只大鼠随机分为假手术组、模型组、蜂胶总黄酮组,每组再随机分成缺血再灌注后1 d和3 d组,首先制备大鼠大脑中动脉缺血模型,TUNEL法观察神经细胞凋亡率,应用免疫组化方法 观察大鼠大脑皮质各组bcl-2、bax、easpase-3表达阳性细胞数.结果 与模型组相比,蜂胶总黄酮组神经细胞凋亡指数降低(P<0.01),bel-2表达阳性细胞数升高(P<0.01),bax、easpase-3表达阳性细胞数均降低(P<0.05).结论 蜂胶总黄酮能促进大鼠缺血再灌注后大脑皮质bcl-2表达增强,减弱bax与easpase-3表达,从而能有效减少脑缺血/再灌注损伤引起的神经细胞凋亡,因此具有一定的神经保护作用.     

2-甲氧基雌二醇对脊髓损伤大鼠运动功能及神经细胞凋亡的影响

摘要 目的：探讨2-甲氧基雌二醇(2ME2)对脊髓损伤(SCI)大鼠运动功能及细胞凋亡的影响。 方法：将成年雄性SD大鼠72只随机分为假手术组(n=24)、脊髓损伤组(n=24)、2ME2治疗组(n=24)。采用改良的 Allen法制作脊髓损伤模型,造模成功后1、3、7、14、21、28d应用BBB运动评分系统对各组大鼠运动功能进行评估,造模成功后连续7天对2ME2治疗组大鼠腹腔注射2ME2(24mg/kg),第7天应用免疫荧光技术检测各组大鼠caspase-3表达,应用TUNEL染色进行凋亡细胞计数。 结果：脊髓损伤组及2ME2治疗组损伤后随时间延长BBB评分升高,其中2ME2治疗组损伤后第14、21、28天BBB评分显著高于脊髓损伤组,差异具有显著性意义（P<0.05）。与假手术组（4.583±2.234）比较,脊髓损伤组（33.417±4.274）及2ME2治疗组（22.250±4.048）免疫荧光染色caspase-3蛋白表达阳性细胞数显著增加,2ME2治疗组caspase-3蛋白表达阳性细胞数较脊髓损伤组显著减少,差异具有显著性意义（P<0.05）。与假手术组（12.25±2.67）相比,脊髓损伤组（49.17±4.75）及2ME2治疗组（38.67±4.44）凋亡细胞数显著增多, 2ME2治疗组凋亡细胞数较脊髓损伤组显著减低,差异具有显著性意义（P<0.05）。 结论：2ME2改善脊髓损伤大鼠模型脊髓损后的运动功能,具有神经保护作用;2ME2降低脊髓损伤大鼠模型脊髓损后caspase-3蛋白表达,抑制神经细胞凋亡。     

脊髓损伤后白细胞介素-1β、caspase-3的表达和细胞凋亡的相关性

目的研究大鼠脊髓损伤后白细胞介素-1β（IL-1β）、easpase-3表达和细胞凋亡的规律及三者之间的关系。方法成年SD大鼠随机分为假手术组和损伤组，于伤后1h、8h、24h、72h处死，用免疫组化染色检测IL-1β、caspase-3阳性细胞。TUNEL法标记凋亡细胞。结果假手术组仅表达少量IL-1β和caspase-3阳性细胞；损伤组两者均在8h表达最多，24h减少，72h减少至略多于假手术组水平。TUNEL标记阳性细胞的时间分布特点与IL-1β和caspase-3相似；IL-1β、caspase-3阳性细胞率和细胞凋亡指数三者间存在正相关（P〈0．01）。结论大鼠脊髓损伤后，IL-1β和caspase-3表达增强，凋亡细胞大量出现，三者间存在正相关。     

芝麻素通过抑制氧化应激以及抗凋亡作用 保护大鼠脊髓损伤

目的:探索芝麻素(SES)对大鼠脊髓损伤后神经功能的影响,及其对氧化应激反应及神经凋亡的相关作用。方法:Allen法制备脊髓损伤动物模型,SD大鼠60只,随机分为假手术组、模型组、SES低浓度(10 mg/kg)组、SES中浓度(20 mg/kg)组、SES高浓度(40 mg/kg)组,每组12只。术后第3、7天进行下肢运动功能评分,1周后处死,干湿法测定脊髓组织含水量;Elisa法检测氧化应激因子丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、过氧化氢酶(CAT),Western blot检测凋亡蛋白Bax、Bcl-2表达;免疫组织化学染色观察Caspase-3表达。结果:SES能显著降低脊髓损伤大鼠下肢运动功能评分以及脊髓组织水肿,并呈剂量依赖趋势(P均0.05);Elisa结果显示SES逆转MDA、CAT、SOD及GSH活性的表达,并呈剂量依赖趋势(P均0.05);Western-blot结果显示SES能显著抑制Bax表达,提高Bcl-2蛋白表达,并呈剂量依赖趋势(P均0.05);免疫组织化学染色显示,SES能显著抑制Caspase-3表达,并呈剂量依赖趋势(P0.05)。结论:SES可通过减轻脊髓损伤的水肿、抑制氧化应激以及抗细胞凋亡从而对脊髓损伤发挥神经保护作用。     

银杏叶提取物对实验性脊髓损伤的保护作用

目的:探讨银杏叶提取物(extractofleaveginkgobiloba,EGb)对脊髓继发性损伤的保护作用,并与甲基强地松龙(methylprednisolone,MP)进行对照。方法:实验于2004-06/08在武汉大学人民医院实验动物中心完成。SD大鼠54只,以改良Allen氏法制备脊髓挫伤模型,随机分为3组。测定不同药物处理后12,24h脊髓组织线粒体超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)活性和丙二醛浓度以及微循环指标改变,光镜观察用药后1周EGb对病理学改变的影响。结果:EGb处理后脊髓组织丙二醛浓度明显低于各时相点对照组,SOD活性显著升高(P<0.05),与MP治疗组无明显差异(P>0.05)。微循环指标也有所改善。病理检查发现EGb治疗组空泡变性范围减小,炎症反应较轻。结论:EGb可以缓解脂质过氧化反应,防止微血栓形成,具有脊髓保护作用。     

高压氧对大鼠脊髓损伤后蛋白激酶R样内质网激酶表达和运动功能的影响

目的观察高压氧对脊髓损伤大鼠行为学、组织形态学以及蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)表达的影响,探讨高压氧治疗脊髓损伤大鼠的作用机制。方法将36只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为正常组(n=9)、假手术组(n=9)、模型组(n=9)和高压氧组(n=9)。正常组不做任何处理;假手术组仅行椎板切除,不予脊髓打击;其余两组采用改良Allen法建立大鼠脊髓损伤模型,高压氧组于术后6 h开始,给予纯氧治疗连续7 d,每天1次。各组于术前(0 h)及术后6h、3 d、7 d进行BBB运动功能评分。术后7 d处死大鼠,提取各组损伤区脊髓1.5 cm,采用HE染色法观察损伤脊髓区域组织形态结构的变化;采用Western blotting检测脊髓组织中PERK蛋白表达量。结果正常组和假手术组均无神经功能损伤症状;术后3 d和7 d,模型组BBB评分低于假手术组(P 0.05);术后7 d,高压氧组BBB评分高于模型组(P 0.05)。正常组和假手术组均未见明显的结构异常;模型组损伤脊髓区域可见胞体肿胀,细胞结构模糊,间隙增大,胞核固缩溶解等病理结构;与模型组相比,高压氧治疗组组织损伤情况明显好转。术后7 d,模型组PERK表达明显高于假手术组(P 0.01),高压氧组低于模型组(P 0.05)。结论高压氧可以降低受损脊髓PERK蛋白的表达,促进大鼠后肢运动功能恢复。     

阿魏酸对阻断兔主动脉血流所致脊髓神经元凋亡的影响

目的探讨阿魏酸对阻断家兔主动脉血流所致脊髓神经元凋亡的影响及其可能的作用机制。方法将24只家兔按随机数字表法分为假手术组、缺血／再灌注（I／R）损伤组和阿魏酸组。采用阻断腹主动脉血流40min、再灌注7d制备脊髓I／R损伤模型；阿魏酸组于阻断腹主动脉前15min一次性静脉注射阿魏酸50mg／kg；假手术组仅松套腹主动脉，不阻断血流。分别测定腹主动脉阻断前10min（C-10）、开放前即刻（C40）及开放后60min（R60）和处死前即刻（R7d）血清丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）水平；检测脊髓凋亡神经元以及Bax和Bcl-2蛋白的表达；观察术后动物后肢神经功能评分。结果①I／R损伤组MDA含量明显高于C-10值及假手术组相应时间点值（P〈0．05或P〈0．01），SOD活性变化与MDA变化相反；阿魏酸组MDA含量明显高于C-10值（P〈0．05），但显著低于I／R损伤组相应时间点值（P〈0．05或P〈0．01），较假手术组比较差异无显著性，SOD活性变化与MDA变化亦相反。②I／R损伤组Bax蛋白表达明显高于假手术组（P〈0．05），Bcl-2蛋白表达则明显低于假手术组（P〈0．01）；阿魏酸组Bax蛋白表达明显低于I／R损伤组，但显著高于假手术组（P〈0．01和P〈0.05），Bcl一2蛋白表达明显高于I／R损伤组及假手术组（P均〈0.01）。③I／R损伤组脊髓神经元凋亡指数明显高于假手术组（P〈0．01）；阿魏酸组明显低于I／R损伤组，但高于假手术组（P〈0．01和P〈0．05）。④阿魏酸组瘫痪发生率明显低于I／R损伤组，其后肢神经功能评分明显高于I／R损伤组（P均〈0．01）。结论阿魏酸能显著抑制阻断家兔主动脉所致脊髓神经元凋亡的发生，其机制可能与其通过抗氧化反应进而抑制Bax蛋白、增强Bcl-2蛋白的表汰有关．     

原花青素对大鼠脊髓损伤后神经胶质酸性蛋白和脑源性神经营养因子表达的影响

目的观察原花青素对脊髓损伤后大鼠胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、脑源性神经营养因子(BDNF)表达变化的影响。方法48只健康成年Sprague-Dawley大鼠分为原花青素组(A组)和对照组(B组)。采用Allen法复制大鼠T9急性脊髓损伤模型,于术后1 d、3 d和7 d对各组大鼠行后肢运动功能BBB评分和斜板试验;测定血清丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD);以及免疫组织化学染色检测脊髓GFAP和BDNP的表达。结果术后3 d、7 d,A组大鼠BBB评分和斜板试验成绩均优于B组(P0.05)。术后1d、3 d及7 d,A组大鼠血清SOD活性和MDA含量优于B组(P0.05)。术后各时间点,A组GFAP表达均明显低于B组(P0.01);A组BDNF表达均显著高于B组(P0.001)。结论原花青素可有效抑制脂质过氧化反应,抑制脊髓损伤后大鼠脊髓组织GFAP的表达,促进内源性BDNF的合成,从而促进脊髓损伤大鼠功能恢复。     

虾青素对大鼠脊髓损伤后炎症反应的影响

目的:研究虾青素对大鼠脊髓损伤后炎症反应的影响。方法:采用改良Allen法制作脊髓损伤模型, 90只健康成年SD大鼠,随机分为虾青素组、对照组和假手术组。分光光度法检测脊髓损伤后脊髓组织的髓过氧化物酶(MPO)的活性,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测肿瘤坏死因子(TNF)-α、白介素(IL)-6、白介素(IL)-1β的含量,免疫组化染色检测脊髓组织MPO、TNF-α、IL-1β、IL-6的蛋白表达。干湿重法检测脊髓组织的含水量,透射电镜观察脊髓损伤后超微结构的改变并行超微结构评分,BBB评分评估脊髓损伤后的运动功能。结果:(1)对照组在脊髓损伤后脊髓组织中髓过氧化物酶(MPO)的活性和TNF-α、IL-6、IL-1β的含量显著高于假手术组(P0.05);虾青素组脊髓组织中上述指标较对照组显著降低(P0.05),但仍显著高于假手术组(P0.05)。(2)对照组脊髓组织中MPO、TNF-α、IL-6、IL-1β的蛋白表达显著高于假手术组(P0.05);虾青素组脊髓组织中上述指标较对照组显著降低(P0.05),但仍显著高于假手术组(P0.05)。(3)对照组脊髓组织含水量显著高于假手术组(P0.05);虾青素组脊髓组织含水量显著低于对照组(P0.05),但仍高于假手术组。(4)对照组的超微结构评分显著高于假手术组(P0.05);虾青素组的超微结构评分显著低于对照组(P0.05),但仍高于假手术组。(5)对照组大鼠BBB评分显著低于假手术组(P0.05),虾青素组大鼠BBB评分显著高于对照组(P0.05),但仍显著低于假手术组。结论:虾青素能够明显降低脊髓损伤后升高的MPO的活性和TNF-α、IL-6、IL-1β的含量,降低脊髓组织中过高的MPO、TNF-α、IL-6、IL-1β的蛋白表达,明显减轻脊髓损伤后的炎症反应,减轻脊髓水肿,明显减轻脊髓损伤后的组织病理学改变,改善了脊髓损伤大鼠的运动功能,有效地保护脊髓组织,具有明显的神经保护作用。     

甲强龙对环扎法所致大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡的相关性研究

目的探讨甲强龙(MP)对大鼠脊髓损伤(SCI)后神经细胞凋亡的影响,以及相关分子机制研究。方法 45只SD大鼠随机分为3组,对照组(n=15),模型组(n=15)和实验组(n=15)。实验组于术后给与甲强龙尾静脉注射(30 mg/kg),模型组为SCI模型,对照组只切开椎板,不损伤脊髓。分别于7 d、14 d和21 d进行下肢功能评分(BBB评分);21 d后取出损伤脊髓,利用Western blot法检测Bax和Bcl-2蛋白表达;免疫组织化学染色及TUNEL染色检测Caspase-3阳性细胞数和神经细胞凋亡水平。结果各时间点BBB评分,模型组显著低于对照组,而实验组明显高于模型组(P0.05);Western blot法显示,甲强龙显著抑制Bax,提高Bcl-2表达(P0.05);组织学观察显示,甲强龙显著抑制Caspase-3表达,以及下调TUNEL阳性细胞数(P0.05)。结论甲强龙可通过抑制大鼠脊髓损伤Bax和Caspase-3表达,提高Bcl-2表达,从而抑制神经细胞的凋亡。     

督脉电针上调脊髓损伤早期大鼠Bcl-2 mRNA及蛋白的表达

背景：针灸对脊髓损伤后期神经功能的恢复具有明显的促进作用已得到客观证实，本课题组以往的实验已证实电针可抑制脊髓损伤早期细胞凋亡，但电针抑制细胞凋亡的机制尚不清楚。目的：通过原位杂交及免疫组织化学方法观察电针对凋亡抑制基因Bcl-2 mRNA及蛋白表达的影响，探讨电针干预脊髓损伤早期细胞调亡可能的机制。设计：开放性动物实验。单位：解放军第二军医大学解剖学教研室，上海市针灸经络研究中心。材料：成年雄性SD大鼠，清洁级，鼠龄两三个月。Bcl-2原位杂交检测试剂盒（武汉博士德生物科技有限公司）；Bcl-2抗体（1：200，Santa Cruz Biotechnology公司）。方法：实验于2004—07／2005—12在解放军第二军医大学解剖学教研室完成。实验大鼠随机分为模型组、电针治疗组、甲基强的松龙组及假手术组。采用改良的Allen’s垂击法致大鼠T10脊髓损伤，损伤后即刻进行督脉电针治疗，应用原位杂交和免疫组织化学方法结合图象定量分析法进行评估。主要观察指标：①脊髓损伤早期Bcl-2 mRNA和蛋白的表达。②电针对Bcl-2 mRNA和蛋白表达的影响结果：实验过程中如遇动物死亡，及时补充，最终42只大鼠进入结果分析。①假手术组有中等量的Bcl-2 mRNA及蛋白表达。模型组在脊髓损伤后6hBcl-2 mRNA表达有增高趋势，Bcl-2蛋白表达未见明显变化；伤后24hBcl-2 mRNA表达增高，Bcl-2蛋白表达也相应增高。电针组Bcl-2 mRNA及蛋白表达均高于模型组（P〈0．05），与甲基强的松龙组相比无显著性差异。②电针及甲基强的松龙治疗6h组，Bcl-2 mRNA阳性细胞数增加，灰度值降低，与假手术组和模型组相比差异有显著性和非常显著性意义（P〈0．05-0．01）。电针24h治疗组，Bcl-2 mRNA阳性细胞数显著增高，灰度值降低，与假手术组及模型组相比差异均具有显著性和非常显著性意义俨〈0．05-0．01）。⑧电针24h治疗组，Bcl-2免疫阳性细胞明显增加，灰度值降低，与假手术组和模型组相比，差异具有显著性和非常显著性意义俨〈0．05-0．01）。结论：电针可上调Bcl-2 mRNA及蛋白的表达，进而对脊髓损伤早期细胞调亡具有部分抑制作用。     

脊髓损伤后炎症性细胞因子表达的变化及甲基强的松龙的影响

目的 观察大鼠脊髓损伤(SCI)后,甲基强的松龙(MP)对炎症性细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α) mRNA表达及运动功能恢复的影响。方法 采用改良 Allen氏法建立大鼠脊髓(T9、T10)中度损伤模型,56只SD大鼠随机分为假手术组(n=4)、SCI组(n=24)、生理盐水组(n=14)和 MP组(n=14),分别于损伤后 1 h、4 h、12 h、24 h、72 h和7 d取材,利用半定量RT PCR方法观察损伤段脊髓组织中上述 3 种细胞因子 mRNA表达的变化规律;于 SCI后30 min经尾静脉给予MP(30 mg/kg),利用半定量RT-PCR方法检测 SCI后 4 h时 MP对各炎症性细胞因子 mRNA表达的影响;利用BBB评分检测MP对大鼠SCI后运动功能恢复的影响。结果 假手术组动物脊髓组织中炎症性细胞因子mRNA仅有微弱表达。SCI后1h,各炎症性细胞因子mRNA表达明显升高,其中 IL-1β,IL-6表达于损伤后 12 h达峰值,TNF-α于损伤后 4 h达峰值,至损伤后72 h仍高于假手术组( P <0.05)。SCI后4 h时,MP组大鼠 IL-1β和TNF-αmRNA的表达明显受到抑制,但MP并未对运动功能的恢复产生有益的影响。结论 MP可明显抑制SCI后的炎症反应。     

大鼠急性脊髓损伤后早期血红素氧合酶-1的表达

目的：研究大鼠急性脊髓损伤后血红素氧合酶-1(HO-1)在脊髓表达的变化。方法：参考Nystroem方法建立大鼠脊髓压迫伤模型(T8-9)，对损伤后早期不同时间点应用免疫组化、病理学及图像分析检测HO-1蛋白的表达。应用化学比色法检测不同时间点脊髓中HO活性的变化。结果：正常脊髓组织内存在少量HO-1蛋白的表达，脊髓损伤后4hHO-1表达增强，16h达高峰，之后渐减弱。与正常组、假手术组相比损伤各组HO活性明显增高(P&;lt;0．05)。结论：脊髓压迫损伤后HO-1表达迅速增强，提示HO-1参与了脊髓继发损伤的病理生理过程，其表达可能具有保护作用。     

督脉电针上调脊髓损伤早期大鼠Bcl-2 mRNA及蛋白的表达

背景:针灸对脊髓损伤后期神经功能的恢复具有明显的促进作用已得到客观证实,本课题组以往的实验已证实电针可抑制脊髓损伤早期细胞凋亡,但电针抑制细胞凋亡的机制尚不清楚。目的:通过原位杂交及免疫组织化学方法观察电针对凋亡抑制基因Bcl-2mRNA及蛋白表达的影响,探讨电针干预脊髓损伤早期细胞调亡可能的机制。设计:开放性动物实验。单位:解放军第二军医大学解剖学教研室,上海市针灸经络研究中心。材料:成年雄性SD大鼠,清洁级,鼠龄两三个月。Bcl-2原位杂交检测试剂盒(武汉博士德生物科技有限公司);Bcl-2抗体(1∶200,SantaCruzBiotechnology公司)。方法:实验于2004-07/2005-12在解放军第二军医大学解剖学教研室完成。实验大鼠随机分为模型组、电针治疗组、甲基强的松龙组及假手术组。采用改良的Allen’s垂击法致大鼠T10脊髓损伤,损伤后即刻进行督脉电针治疗,应用原位杂交和免疫组织化学方法结合图象定量分析法进行评估。主要观察指标:①脊髓损伤早期Bcl-2mRNA和蛋白的表达。②电针对Bcl-2mRNA和蛋白表达的影响结果:实验过程中如遇动物死亡,及时补充,最终42只大鼠进入结果分析。①假手术组有中等量的Bcl-2mRNA及蛋白表达。模型组在脊髓损伤后6hBcl-2mRNA表达有增高趋势,Bcl-2蛋白表达未见明显变化;伤后24hBcl-2mRNA表达增高,Bcl-2蛋白表达也相应增高。电针组Bcl-2mRNA及蛋白表达均高于模型组(P<0.05),与甲基强的松龙组相比无显著性差异。②电针及甲基强的松龙治疗6h组,Bcl-2mRNA阳性细胞数增加,灰度值降低,与假手术组和模型组相比差异有显著性和非常显著性意义(P<0.05～0.01)。电针24h治疗组,Bcl-2mRNA阳性细胞数显著增高,灰度值降低,与假手术组及模型组相比差异均具有显著性和非常显著性意义(P<0.05～0.01)。③电针24h治疗组,Bcl-2免疫阳性细胞明显增加,灰度值降低,与假手术组和模型组相比,差异具有显著性和非常显著性意义(P<0.05～0.01)。结论:电针可上调Bcl-2mRNA及蛋白的表达,进而对脊髓损伤早期细胞调亡具有部分抑制作用。     

大鼠脊髓损伤后肾上腺髓质素的表达及重组人红细胞生成素的干预作用

目的：观察肾上腺髓质素在大鼠脊髓损伤组织中的表达，并分析重组人红细胞生成素的干预作用。 方法：实验于2005-06／10在协和医院骨科中心实验室完成。选择70d健康SD大鼠54只，随机数字法分为假手术组、脊髓损伤模型组、重组人红细胞生成素组3组。采用Allen’s WD法-自制圆柱状金属棒沿细玻璃导管垂直自由落下，制成大鼠急性脊髓损伤动物模型，金属棒重量8．5g，高度5cm，损伤能量8．5&;#215;5（g&;#183;cm）。重组人红细胞生成素组损伤后1，3，5，7，9d分别给予600U／kg重组人红细胞生成素尾静脉注射。脊髓损伤模型组损伤后相同时间点给予等量的生理盐水。假手术组只切除椎板暴露脊髓。损伤动物模型以摆尾反射，双下肢对称性抽搐为成功标志。分别在术后3，6和11d采用改良Tarlov评分并改良Rivlin与Tator斜板法评分进行运动功能评定，每个时间点6只。苏木精-伊红染色观察脊髓损伤情况。免疫组化染色观察肾上腺髓质素的表达。 结果：54只大鼠均进入结果分析。①各组大鼠脊髓损伤情况：假手术组各时间点取材无明显异常。脊髓损伤模型组伤后3d，灰质内出现大量红细胞，神经元细胞肿胀呈圆形，大量核固缩、核碎裂，灰白质交界消失，灰质内空洞形成；伤后6d，红细胞融合成团，灰白质交界较清楚，残存神经元明显减少，轻微肿胀，仍见少量中性粒细胞，11d灰白质交界清楚，残存神经元形态基本正常。重组人红细胞生成素组各时间点病理变化明显轻于脊髓损伤模型组。②肾上腺髓质素的表达：肾上腺髓质素表达主要位于神经元中，假手术组各时间点肾上腺髓质素低表达，各时间点灰度值差异无显著性意义；脊髓损伤模型组、重组人红细胞生成素组神经元数量较假手术组减少，肾上腺髓质素表达增强，重组人红细胞生成素组最强。伤后6，lld均恢复到正常表达。脊髓损伤模型组、重组人红细胞生成素组3d的灰度值均高于假手术组，重组人红细胞生成素组灰度值高于脊髓损伤模型组，差异均有非常显著性意义（P〈0．01）。⑨改良Tarlov评分结果：脊髓损伤模型组及重组人红细胞生成素组3，6，11d的改良Tarlov评分均显著低于假手术组相同时间点评分（P〈0．01）；重组人红细胞生成素组3，6，11d改良Tarlov评分均高于脊髓损伤模型组相同时间点的评分（P〈0．05）。④改良Rivlin与Tator法评分结果：脊髓损伤模型组、重组人红细胞生成素组3，6，11d改良Rivlin与Tator法评分均显著低于假手术组相同时间点评分，差异有非常显著性意义（P〈0．01）；重组人红细胞生成素组3，6，11d改良Rivlin与Tator法评分均高于脊髓损伤模型组相同时间点的评分，差异有非常显著性意义（P〈0．01） 结论：急性脊髓损伤后肾上腺髓质素表达代偿性增高，肾上腺髓质素参与了脊髓损伤的发生发展过程并在其中起着抗氧化作用，重组人红细胞生成素能够减轻脊髓的继发性损伤，其治疗作用的机制之一可能是通过促进肾上腺髓质素表达增高而实现的。