超声破坏靶向VEGFR2微泡治疗皮下结肠癌移植瘤的实验研究

目的 探讨靶向VEGFR2微泡结合超声辐照治疗结肠癌的效果.方法 将17只VEFGR2高表达的结肠癌皮下种植瘤Balb/C裸鼠模型分为三组:A组5只,为对照组,仅接受超声造影检查和假照;B组6只,空白脂质微泡结合超声辐照;C组6只,载靶向VEGFR2单抗的脂质微泡结合超声辐照,所有模型均用红色荧光蛋白标记.空化治疗前和空化后1周分别行超声造影和荧光摄片检查,测量肿块大小、荧光面积、荧光强度及血管密度,并进行比较.结果 治疗前裸鼠肿瘤长径、荧光面积、荧光强度及血管密度在各组间比较差异无统计学意义(P＞0.05);A组假照后肿瘤长径、荧光面积、荧光强度及血管密度均比假照前增加,差异有统计学意义(P＜0.05);B组辐照后荧光强度及血管密度均较空化前减小,差异有统计学意义(P＜0.05),而肿瘤长径和荧光面积差异不显著(P＞0.05);C组辐照后肿瘤长径、荧光面积、荧光强度及血管密度与辐照前比较均明显减小,差异有统计学意义(P＜0.01);治疗后A、B、C三组各参数两两比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 靶向VEGFR2脂质微泡能增强超声空化对结肠癌的治疗效果.     

超声辐照携带miR-520c-3p和miR-132微泡对体外培养人肝癌细胞Huh7的影响

目的:观察超声辐照携带miR-520c-3p和miR-132微泡对体外培养人肝癌细胞Huh7的影响。方法:以超声辐照携带miR-520c-3p和miR-132微泡转染体外培养人肝癌Huh7细胞株。实验分5组:对照组(A组),miR-520c-3p mimics negative control+miR-132 mimics negative control+微泡造影剂+超声辐照(B组),miR-520c-3p mimics+微泡造影剂+超声辐照(C组),miR-132 mimic+微泡造影剂+超声辐照(D组),miR-520c-3p mimics+miR-132 mimics+微泡造影剂+超声辐照(E组)。超声辐照条件:机械指数0.4,辐照参数2.0 W/cm2,连续辐照30 s,间隔60 s,共5次。采用实时荧光定量PCR检测miR-520c-3p,miR-132,磷脂酰肌醇蛋白多糖-3(GPC3)和转录辅助因子YAP m RNA表达,采用Western印迹检测GPC3和YAP蛋白表达,采用噻唑蓝比色法检测细胞增殖活性,采用流式细胞术检测细胞凋亡。结果:与A组、B组比较,C组、E组miR-520c-3p相对表达量升高(P0.05),而D组无明显改变(P0.05);D组、E组miR-132相对表达量升高(P0.05),而C组无明显改变(P0.05)。与A组、B组比较,C组、E组GPC3蛋白相对表达量降低(P0.05),而其m RNA相对表达量无明显改变(P0.05)。C组、D组、E组YAP蛋白以及其m RNA相对表达量均降低(P0.05)。与A组、B组比较,C组、D组、E组细胞增殖率降低(P0.05),且E组降低最明显(P0.05);C组、D组、E组细胞凋亡率增加(P0.05),且E组凋亡最明显(P0.05)。结论:超声辐照携带miR-520c-3p和miR-132微泡能显著抑制人肝癌Huh7细胞株增殖,并促进其凋亡,其机制可能与调节GPC3和YAP的表达有关。     

超声辐照载血管内皮细胞生长因子抑制剂脂质微泡对皮下结肠癌移植瘤治疗效果的研究

目的 评价超声辐照载血管内皮细胞生长因子抑制剂(vascular endothelial growth factor inhibitor,VEGFI)脂质微泡对结肠癌的治疗效果.方法 将稳定表达绿色荧光蛋白的结肠癌细胞系接种于Balb/c裸鼠皮下,建立结肠癌移植瘤模型.将48只皮下种植结肠癌移植瘤的Balb/c裸鼠随机分为4组:A组(12只),空白对照组,不接受超声造影及辐照;B组(12只),接受裸脂质微泡超声造影及假照;C组(12只),裸脂质微泡超声造影及超声辐照;D组(12只),载VFGFI脂质微泡及超声辐照.辐照前和3次辐照后第1d、第3d、第7d、第11d、第16d分别对各组裸鼠测量体质量和荧光摄片,测量肿瘤大小,计算肿瘤体积,绘制肿瘤体积生长曲线及裸鼠体质量生长曲线.16d后处死裸鼠,切除并分离肿瘤组织,测量各组肿瘤质量.结果 辐照前各组裸鼠体质量和肿瘤体积差异无统计学意义(P＞0.05);随访期间,A组与B组肿瘤体积持续增大,两组间比较差异无统计学意义(P＞0.05);辐照后第7d,C组及D组肿瘤体积均小于A组,差异有统计学意义(P＜0.01),C组与D组之间比较差异无统计学意义(P＞0.05);第7d后C组肿瘤体积变化不明显,到第16d肿瘤体积仍然小于A组,差异有统计学意义(P＜0.01),而D组肿瘤体积进一步缩小,与C组比较差异有统计学意义(P＜0.05).切除肿瘤组织,D组肿瘤质量低于C组(P＜0.05),C组低于A组(P＜0.05),而A、B组之间肿瘤质量差异无统计学意义(P＞0.05).观察期间各组裸鼠体质量差异无统计学意义(P＞0.05).结论 载VEGFI微泡联合超声辐照可以增强对结肠癌的治疗效果.     

超声微泡造影剂介导EGFP对兔视网膜的转染效率

目的 探讨在不同能量超声和一定剂量微泡作用下,超声微泡造影剂介导下增强型绿色荧光蛋白(EGFP)质粒对兔视网膜转染的效率、安全性以及可行性.方法 将30只新西兰大白兔随机分为6组:质粒组(A组)、质粒+微泡组(B组)、质粒+超声照射组①(C组)、质粒+超声照射组②(D组)、质粒+微泡+超声照射组①(E组)、质粒+微泡+超声照射组②(F组).将1 ml pEGFP-C1质粒与1 ml SonoVue微泡造影剂混合,由耳缘静脉注入,分别用0.5、1.0 W/cm2超声波辐照眼球.转染7天后行视网膜光镜及透射电镜检查,观察质粒、微泡及超声照射对视网膜有无损害,并在荧光显微镜下观察pEGFP-C1质粒表达情况.结果 光镜及透射电镜结果显示质粒、微泡及超声照射对视网膜无损害.A～D组均可见少量绿色荧光表达(P均＞0.05),E、F组的荧光表达较强,明显高于其他4组(P均＜0.05),E、F组荧光强度差异无统计学意义(P均＞0.05).结论 在一定能量的超声照射下,超声微泡造影剂能够提高携带EGFP质粒在兔视网膜的转染效率.     

超声靶向微泡破坏技术介导基因JNK1在小鼠肝癌细胞株中表达及对细胞迁移和侵袭作用的研究

目的探讨应用超声靶向微泡破坏(UTMD)技术介导小鼠肝癌细胞株Hca-P JNK1基因的表达以及肝癌细胞迁移和侵袭。方法构建并鉴定pCDNA3.1-JNK1载体。将小鼠肝癌细胞株Hca-P分组如下:A组(空白对照组),B组(质粒组),C组(脂质体+质粒组),D组(超声微泡+质粒+超声辐照组),E组(脂质体+超声微泡+质粒+超声辐照组)。采用倒置荧光显微镜观察各组细胞的转染率,荧光定量PCR和Western Blot法检测JNK1的基因和蛋白质表达水平,以CCK-8法检测5组细胞的细胞活性,应用Transwell实验检测各组细胞的体外迁移和侵袭能力。结果成功构建了pCDNA3.1-JNK1载体。各组转染率比较:E组均大于B、C、D组(P均0.05),C、D组转染率均高于B组(P均0.05),C、D组之间差异无统计学意义(P0.05)。E组JNK1 mRNA和蛋白表达水平均高于其他各组(P均0.05);E组细胞活性、迁移和侵袭能力均高于其他各组(P均0.05)结论 UTMD技术结合脂质体转染法可以提高pCDNA3.1-JNK1载体转染小鼠肝癌细胞株Hca-P的效率,加大基因JNK1表达的上调幅度,增强细胞活性、迁移和侵袭能力。     

共聚物P85联合超声微泡介导基因转染的体外实验研究

目的 探讨共聚物P85与黏附增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluoresent protein,EGFP)质粒的微泡造影剂(microbubble,MB)结合后联合一定强度的超声(ultrasound,US)辐照,是否增强人肝癌细胞(HepG2)的质粒转染及表达.方法 以人肝癌细胞(HepG2)为研究对象,质粒DNA是可表达绿色荧光蛋白的pEGFP,添加微泡造影剂或共聚物P85后进行脉冲多普勒超声辐照(频率1 MHz,声强1 W/cm2,工作周期20%,时间20 s).24 h后台盼蓝染色评价细胞存活率,荧光显微镜和流式细胞仪评价细胞的基因转染率.结果 有超声辐照组的pEGFP转染率明显高于无超声辐照组(P＜0.01),有超声辐照组中pEGFP+30%MB+P85+US组转染效率(22.14±3.06)%优于单独使用微泡组(11.34±2.2)%或P85组(9.72±1.21)%(P＜0.01).结论 微泡造影剂与共聚物P85结合同时给予超声辐照可增强基因转染效率,在基因治疗上有待于进一步关注和研究.     

超声靶向辐照微泡促进2型糖尿病肾病大鼠模型建立的研究

目的探讨超声靶向辐照微泡促进SD大鼠2型糖尿病肾病模型建立的可行性。方法 180~200g雄性SD大鼠50只随机分为5组,正常组(A组)、单纯超声微泡辐照组(B组)、高脂高糖+低剂量链脲佐菌素(STZ)组(C组)、高脂高糖+低剂量STZ+超声微泡组(D组)、高脂高糖+低剂量STZ+超声微泡辐照组(E组)各10只。C、D、E组成功建立2型糖尿病模型后,每周测量各组空腹血糖值(FBG),检测尿微量白蛋白(mAlb),计算尿蛋白排泄率(UAER)。当UAER30mg/d时,记录出现该变化的时间,检测血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)及血谷丙转氨酶(ALT),光镜观察肾小球病理变化,免疫组化检测CD31的表达。结果 E组出现UAER30mg/d的时间较C、D组明显缩短(P0.05)。C、D、E组FBG、24hUAER、BUN、SCr值高于A、B组(P0.05);五组间ALT比较无显著性差异(P0.05)。C、D、E组大鼠均出现肾小球系膜细胞及基质增生,肾小球腔缩小,B组病理改变较三组轻;免疫组化B、C、D、E组CD31呈阳性表达,而A组呈阴性表达(P0.05)。结论超声微泡靶向辐照能够明显缩短2型糖尿病肾病大鼠成模时间。     

超声辐照联合微泡造影剂介导人血管生成素-1基因体外转染293T细胞的研究

目的 探讨超声辐照联合微泡造影剂的基因转染系统介导人血管生成素-1(hAng-1)基因转染人胚肾293T细胞的转染效率.方法 将六孔板中的293T细胞悬液分为4组:A组,超声+质粒组,每孔加入10 μg目的 基因质粒;B组,超声+微泡+质粒组,每孔加入微泡和质粒混合液,终浓度分别为质粒10 μg/孔,微泡200 μl/孔;C组,脂质体+质粒组,每孔加入4 μl脂质体和5 μg质粒;D组,对照组,每孔仅加入10 μg目的 基因质粒.A组和B组均接受超声辐照,照射条件为连续波,声强1.5 W/cm2,作用时间为30 s.转染后48 h用荧光显微镜和流式细胞仪分别定性、定量观察基因的转染效率.结果 48 h后,荧光显微镜下观察到转染成功的细胞胞浆内发出绿色荧光,流式细胞仪检测A组、B组、C组、D组的基因转染效率分别为(3.5±0.4)%、(20.8±1.2)%、(18.0±0.9)%和(0.2±0.1)%.结论 超声本身即有促进基因转染的作用,超声辐照联合微泡造影剂后则增强了这种作用,明显增加了基因的转染效率.     

低频低功率超声联合微泡对DU145细胞及PC3细胞早期凋亡的影响

目的比较低频低功率超声联合微泡造影剂对人前列腺癌DU145细胞与PC3细胞早期凋亡率的不同影响。方法使用低频低功率超声连续波辐照人前列腺癌DU145细胞和PC3细胞悬液60 s,实验中两种细胞系各分为4组:空白对照组(A组)、单纯微泡组(B组)、单纯超声组(C组)和超声联合微泡组(D组),辐照后细胞继续培养24 h,流式细胞仪检测细胞早期凋亡情况,透射电镜观察细胞形态改变。结果两种细胞D组的早期细胞凋亡率明显高于其余各组(P﹤0.01),C组亦均高于A组(P﹤0.05),A、B组之间差异无统计学意义;两种细胞经相同处理后,C、D组PC3细胞的早期细胞凋亡率均高于DU145细胞(P﹤0.01)。透射电镜下两种细胞D组可见癌细胞体积变小变圆,空泡增多,有明显的凋亡小体形成,PC3细胞内还可见大量的自噬体出现。结论低频低功率超声联合微泡造影剂能明显诱导人前列腺癌细胞的早期凋亡,且对PC3细胞早期细胞凋亡作用强于DU145细胞。     

超声联合SonoVue微泡介导NET-1siRNA转染人肝癌细胞

目的探讨超声联合微泡造影剂介导NET-1siRNA在人肝癌细胞中的转染效果。方法将培养的HepG2细胞分为5组:A组为空白对照;B组培养瓶中仅加入NET-1siRNA;C组为加入脂质体及NET-1siRNA;D组为加入造影剂及NET-1siRNA并给予超声辐照;E组为加入脂质体、造影剂、NET-1siRNA,并给予超声辐照。之后以荧光显微镜检测NET-1siRNA转染率,RT-PCR法检测各组细胞NET-1 mRNA的基因表达,Western-Blotting法检测各组细胞NET-1表达情况,MTT检测HepG2细胞生长情况。结果与C组、D组相比,E组NET-1siRNA转染率明显提高(P<0.05);D组和E组细胞内NET-1mRNA及NET-1蛋白的表达抑制率均高于其他各组(P均<0.01),而转染后24～72hHepG2细胞增殖受到明显抑制。结论超声联合微泡造影剂能有效促进NET-1siRNA在肝癌细胞中的表达,并抑制肝癌细胞的增殖。     

血管紧张素Ⅱ诱导A549细胞趋化因子的分泌

目的 通过研究人重组血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对人肺腺癌A549细胞核转录因子-κB(NF-κB)和趋化因子白细胞介素-8(IL-8)的影响,探讨机械通气肺损伤的致病机制.方法 人肺腺癌A549细胞株以2.0×105/mL接种在12孔细胞培养板内,随机(随机数字法)将细胞分为4组(n=24):(A)对照组不加药物;(B)AngⅡ1 h组培养液中加入终浓度为1×10-6mmol/L的AngⅡ刺激1 h;(C)AngⅡ2 h组培养液中加入终浓度为1×10-6 mmol/L的AngⅡ刺激2 h;(D)AngⅡ4 h组培养液中加入终浓度为1×10-6 mmol/L的AngⅡ刺激4 h.收集细胞培养上清液,用ELISA法测定IL-8含量;提取细胞总RNA,采用逆转录PCR技术检测Ⅱ-8 mRNA的表达水平;提取细胞核蛋白,用凝胶电泳迁移率法检测NF-κB的活性,Western Blot法检测NF-κB p65亚基的水平.采用方差分析检验总体差异,组间两两比较使用q检验.结果 ELISA法测得AngⅡ1 h组细胞培养上清液中IL-8含量(135.35±28.93)pg/mL较对照组(29.59±8.36)pg/mL显著增高(P＜0.01);AngⅡ2 h组IL-8含量(357.12±57.21)pg/mL较AngⅡ1 h组显著增高(P＜0.01);AngⅡ4 h组IL-8含量(1732.13±261.73)pg/mL较AngⅡ2 h组显著增高(P＜0.01),4组总体差异具有统计学意义(F=58.41,P＜0.05).PCR检测AngⅡ1 h组IL-8 mRNA的表达(Au·mm)水平(0.49±0.08)较对照组(0.13±0.03)显著增高(P＜0.01);AngⅡ2 h组IL-8 mRNA的表达(Au·mm)水平(0.71±0.10)较AngⅡ1 h组显著增高(P＜0.01);AngⅡ4 h组IL-8 mRNA的表达(Au·mm)水平(0.88±0.11)较AngⅡ2 h组显著增高(P＜0.05),4组总体差异具有统计学意义(F=19.08,P＜0.05).凝胶电泳迁移率法测得AngⅡ1 h组NF-κB的活性(Au·mm)(139.76±11.72)较对照组(70.37±6.57)显著增高(P＜0.01);AngⅡ2 h组NF-κcB的活性(Au·mm)(198.90±18.95)较AngⅡ1 h组显著增高(P＜0.05);AngⅡ4 h组NF-κB的活性(388.73±26.27)(Au·m)较AngⅡ2 h组显著增高(P＜0.01),4组总体差异具有统计学意义(F=23.15,P＜0.05).Western blot法检测AngⅡ1 h组NF-κB p65的水平(Au·mm)(73.97±5.34)较对照组(33.05±6.23)显著增高(P＜0.01);Ang Ⅱ2 h组NF-κB p65的水平(Au·m)(168.72±8.40)较AngⅡ1 h组显著增高(P＜0.01);AngⅡ4 h组NF-κB p65的水平(254.63±12.26)较AngⅡ2 h组显著增高(P＜0.01),4组总体差异有统计学意义(F=16.33,P＜0.05).结论 AngⅡ可通过激活人肺腺癌A549细胞的NF-κB系统,显著上调趋化因子IL-8的表达,引起中性粒细胞的浸润和活化,造成急性肺损伤,其作用呈时间依赖性,这可能是机械通气肺损伤的致病机制之一.     

S100B在大鼠心力衰竭模型中的表达

目的 研究钙离子结合蛋白S100B在心力衰竭大鼠心肌细胞中的表达变化.方法 清洁级雄性Sprague-Dawley大鼠,体重(220-240)g,由浙江大学医学院实验动物中心提供.通过缩窄腹主动脉建立心力衰竭大鼠模型,术后第二周仍存活的20只大鼠随机分为手术组(10只)和卡维地洛组(10只),在术后第2周各以生理盐水和卡维地洛灌胃,共4周.假手术组(10只)仅分离腹主动脉不束扎.术后第6周,应用MEDLAB-U/4CS生物信号采集系统测定血流动力学.麻醉处死后,取左室心肌检测S100B蛋白表达,RT-PCR法测定S100BmRNA水平.计基资料以均数±标准差(-x±s)表示,多组间比较应用单因素方差分析法进行分析,两两问比较应用Student-Newman-Keulsa法进行检验.P＜0.05认为差异具有统计学意义.结果 与假手术组比,手术组左心室舒张末压(LVEDP)升高[(24.8±5.2)mmHg vs.(2.1±0.7)mmHg],左心室内压最大收缩和舒张速率(±dp/dtmax)下降[(1543.6±277.9)mmng/s vs.(2640.4±481.3)mmHg/s和(-1352.5±202.3)mmHg/s vs.(-1873.2±412.3)mmHg/s],差异有统计学意义(P＜0.01,P＜0.01和P＜0.05).卡维地洛组的LVEDP(12.7±1.1)mmHg,介于手术组和假手术组之间,差异有统计学意义(P＜0.01);±dp/dtmax为(2372.3±92.6)mmHg/s和(-1786.4±62.6)mmHg/s,明显高于手术组,差异有统计学意义(P＜0.01).假手术组心肌没有S100B阳性细胞和S100BmRNA表达;手术组心肌有大量胞浆棕黄色的S100B阳性细胞和S100BmRNA表达;卡维地洛组S100B阳性细胞数明显减少而且S100BmRNA水平低,差异有统计学意义(P＜0.01).S100BmRNA表达量与LVEDP、+dp/dtmax、-dp/dtmax相关,相关系数r=0.847、-0.853、-0.689,P均＜0.01.结论 S100B在衰竭心肌细胞中表达明显增多,与心功能呈负相关;在心力衰竭中起负调控作用.     

2型糖尿病患者糖化血红蛋白与脉搏波传导速度及内皮依赖性血管舒张功能的关系研究

目的 探讨2型糖尿病患者不同糖化血红蛋白(HbA1c)水平与踝臂动脉脉搏波传导速度(baPWV)及内皮依赖性血管舒张功能(FMD)的关系.方法 对338例2型糖尿病患者按HbA1c水平分为正常组(A组,HbA1c≤6.0％,74例),正常高值组(B组,6.0％＜HbA1c≤6.5％,102例)和升高组162例(C组,HbA1c ＞6.5％),测量BaPWV及FMD作为反映大动脉硬度及血管舒张功能的指标.结果 与A组比较,B、C组BaPWV明显增高[(1734±343)cm/s与(1537±313)cm/s;1853±364)cm/s与(1537±313)cm/s;P均＜0.001),与B组比较,C组BaPWV明显升高[(1853±364)cm/s与(1734±343)cm/s;P=0.006).与A组比较,B、C组FMD明显减低[(4.20±3.13)％与(5.29±3.92)％;(4.09±2.79)％与(5.29±3.92)％;P均＜0.01)].直线相关分析显示,BaPWV与HbA1c水平呈正相关(r=0.53,P＜0.01),与FMD水平呈负相关(r=-0.25,P＜0.01).Logistic回归分析显示,HbA1c(OR 32.19,95％ CI 11.26 ～53.12;P ＜0.001)与年龄(OR 14.21,95％ CI 11.43～17.00;P ＜0.001)、收缩压(OR7.36,95％CI 6.12 ～8.59;P ＜0.001)和胆固醇(OR 40.31,95％ CI 9.97～70.64;P=0.009)为影响BaPWV的独立危险因素.结论 2型糖尿病患者BaPWV与HbA1c水平密切相关,将HbA1c控制在理想水平是降低大动脉硬化的手段之一.     

缺血性脑血管病患者血浆卵磷脂-胆固醇酰基转移酶活性与其脂质代谢

背景脂质代谢异常是缺血性脑血管病的危险因素之一.很多研究提出其与体内卵磷脂-胆固醇酰基转移酶活性变化有关.目的观察缺血性脑血管病患者血浆卵磷脂-胆固醇酰基转移酶活性与红细胞膜脂质成分含量变化的关系.设计病例对照(实验组对照,标准对照).单位一所大学医学院附属医院的检验科、急诊室及神经内科.对象2002-03/2003-12青岛大学医学院附属医院急诊神经门诊就诊及住院的脑血管病患者105例,均符合第二届全国脑血管病会议的诊断标准,选择脑动脉硬化患者42例和脑梗死63例构成两个患者组,其中男67例,女38例.同期选择在本院健康查体者65例构成对照组,男36例,女29例.方法采集参与者空腹血8 mL,采用酶学方法检测血浆卵磷脂-胆固醇酰基转移酶活性和血清高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白A1和载脂蛋白B水平,采用邻苯二甲醛-醋酸硫酸方法测定红细胞膜胆固醇含量,采用化学定量法测定红细胞膜磷脂含量.主要观察指标患者组与对照组卵磷脂-胆固醇酰基转移酶活性变化及红细胞膜脂质成分含量的变化.结果按意向分析处理,105例患者组和65例对照组全部进入结果分析.①卵磷脂-胆固醇酰基转移酶活性脑动脉硬化组和脑梗死组活性变化均明显低于对照组[(2.14±0.72)kat/L,(2.06±0.80)kat/L,(2.61±0.74)kat/L,P＜0.01].②高密度脂蛋白胆固醇与载脂蛋白A1水平脑动脉梗化组与脑梗死组明显低于对照组[(11.32±0.33)mmol/L,(1.37±0.33)g/L,(1.28±0.33)mmol/L,(1.27±0.31)g/L,(1.60±0.43)mmol/L,(1.60±0.43)g/L,(t=2.72～5.01,P＜0.01)].③低密度脂蛋白胆固醇及红细胞胆固醇含量脑动脉硬化组与脑梗死组明显高于对照组[(2.94±0.82)mmol/L,(0.63±0.05)mmol/g,(3.02±0.79)mmol/L,(0.60±0.07)mmol/g,(2.56±0.58)mmol/L,(0.57±0.05)mmol/g,(P＜0.01)].并且卵磷脂-胆固醇酰基转移酶活性分别与高密度脂蛋白胆固醇及载脂蛋白A1呈正相关(r=0.247,P＜0.05;r=0.303,P＜0.01),而与低密度脂蛋白胆固醇和红细胞膜胆固醇呈负相关(r=-0.212,P＜0.05;r=-0.346,P＜0.01).结论缺血性脑血管病患者血浆卵磷脂-胆固醇酰基转移酶活性下降,且并非继发于脑梗死发生后,其活性变化与高密度脂蛋白胆固醇及载脂蛋白A1呈正相关,与低密度脂蛋白胆固醇及红细胞膜胆固醇呈负相关性.     

气管插管病人3种胃管置入方法的临床效果比较

目的 探讨气管插管病人3种不同胃管置入方法 的临床效果.方法将 ICU 261例气管插管病人随机分为常规插管组(A组)、导丝导引组(B组)和牵拉气管组(C组)各87例.观察并比较一次插管成功率,置管时间,插管前后心率(HR)、经皮血氧饱和度(SpO2)及插管过程中恶心、呕吐、呛咳及鼻咽黏膜出血等不良反应发生率.结果一次插管成功率比较,B组为83.91%,高于A组的70.11%;C组为98.85%,高于A组、B组,差异均有统计学意义(P＜0.05).置管时间、操作总时间比较,C组较A组、B组缩短(均P＜0.01),B组较A组延长(P＜0.01).置管后HR、SpO2与各自置管前相比,C组无明显变化,A组、B组均明显降低(均P＜0.01).置管过程中恶心、呕吐、呛咳及鼻咽黏膜出血发生率,C组均低于A组、B组(P＜0.05).结论 对气管插管病人在镇静状态下牵拉气管的同时置入胃管,准确性高、不良反应少.     

S1PR3激动剂KRX-725促进细菌清除影响脓毒症小鼠预后

目的 通过合成特异性S1PR3激动剂KRX-725,探讨S1PR3参与细菌清除的功能及其分子机制.方法 20只健康清洁级雄性C57BL/6小鼠以随机数字法分为S1PR3特异性激动剂KRX-725治疗组和对照组.采用大肠杆菌(3×106)腹腔注射诱导脓毒症模型,治疗组小鼠于模型后立即腹腔注射KRX-725(10 mg/kg),对照组给予等体积的溶剂,比较两组小鼠48 h生存率(n=12).模型后24 h检测腹腔及血液细菌负荷(n=5),并取肺组织进行苏木精-伊红染色(HE染色)评估KRX-725治疗组及对照组的肺脏病理损伤程度(n=3).体外采用大肠杆菌刺激腹腔巨噬细胞(细胞∶细菌=1∶10),分别加入KRX-725及其对照溶剂,采用CM-H2 DCFDA探针标记细胞内活性氧,酶标仪检测检测不同时间点巨噬细胞活性氧水平.庆大霉素保护实验观察KRX-725对巨噬细胞的清除细菌能力的影响.生存率分析采用Log-rank test,组间数据比较采用独立样本t检验分析,P＜0.05为差异有统计学意义.结果 KRX-725治疗组脓毒症小鼠48 h生存率较对照组显著提高(P＜0.05).脓毒症模型后24 h,KRX-725治疗组较对照组血液及腹腔灌洗液中的细菌负荷显著降低(血液:t=3.17,P＜0.05;腹腔灌洗液:t=4.07,P＜0.01),同时KRX-725可显著降低脓毒症模型肺组织损伤程度(肺损伤评分:KRX-725组1.4 ±0.25,对照组2.4 ±0.25)(t=2.89,P＜0.05).体外实验,KRX-725治疗组较对照组可迅速上调大肠杆菌刺激后20 min及30 min细胞内活性氧的水平(20 min荧光强度:KRX-725组522.9±38.76,对照组385.9±15.90,P＜0.05;30min荧光强度:KRX-725组519.7 ±25.02,对照组384.5±15.28,P＜0.01).庆大霉素保护实验发现,KRX-725可显著降低细菌吞噬后3 h及6h巨噬细胞内存活的大肠杆菌的数量(3 h:KRX-725组286.5±98.35,对照组710.8 ±--107.8,P＜0.05;6 h:KRX-725组72.5±6.45,对照组205.8±66.76,P＜0.01).结论 体内应用KRX-725可改善脓毒症小鼠生存率,降低血液及腹腔细菌负荷,减轻肺脏损伤,从而改善脓毒症预后.体外KRX-725通过上调巨噬细胞活性氧的水平,提高巨噬细胞对清除细菌的能力.     

急性高黏滞血症模型大鼠血液流变学指标及红细胞生理特性对大蒜素干预的反应

背景:血栓性疾病多伴有血液流变性异常,大蒜素对其血液流变性及红细胞流变性等生理特性是否能产生相应影响?目的:观察大蒜素对急性高黏滞血症大鼠血液流变学指标及红细胞生理特性的影响。设计:单纯随机对照动物实验。单位:中国农业大学食品与营养工程学院。材料:选用50只Wistar大鼠,雌雄各半,体质量(200±20)g,鼠龄三四个月,购自北京海淀通利实验动物养殖中心。大蒜素注射液产自上海禾丰制药有限公司(大蒜素浓度15g/L,批号20051001)。主要仪器:NXE-1型锥板式黏度仪(成都仪器厂产品),DXC-300型核孔膜红细胞变形能力测定仪(上海医科大学仪器厂产品),650-60荧光偏振仪(日本日立公司)。微量高速离心机(航空航天部华兴航空机轮公司产品)。方法:实验于2006-02/04在中国农业大学食品与营养工程学院生物工程实验室完成。随机摸球法将大鼠分成5组:对照组、模型组、大蒜素低剂量组、大蒜素中剂量组、大蒜素高剂量组,每组10只。除对照组,其余组别每只大鼠灌胃自来水5mL/d,连续7d,第7天皮下注射浓度为0.1%的肾上腺素0.8mL/kg,注射2h后,浸入冰水中5min,间隔4h注射第2次,制作急性高黏滞大鼠模型。造模后2d,对照组及模型组分别开始给予腹腔注射生理盐水2mL/(kg·d),大蒜素高、中、低剂量组分别给予大蒜素5,10,20mg/(kg·d),1次/d,连续用药7d。通过黏度法测定全血黏度、血浆黏度、红细胞压积及红细胞聚集指数;核孔膜滤过法测定红细胞滤过指数;荧光偏振法测定红细胞膜流动性(红细胞膜荧光偏振度);进行红细胞渗透脆性试验(红细胞渗透脆性试验中开始溶血及完全溶血时的NaCl溶液浓度),比较各组间不同指标的差异。主要观察指标:①大蒜素对红细胞聚集性的影响(全血黏度、血浆黏度、红细胞压积、红细胞聚集指数);②大蒜素对红细胞变形性的影响(滤过指数);③大蒜素对红细胞渗透脆性的影响(试验中开始溶血及完全溶血时的NaCl溶液浓度)。④大蒜素对红细胞膜流动性影响(红细胞膜荧光偏振度)。结果:纳入大鼠50只,其中8只大鼠采血量不足或死亡,其余42只均进入结果分析。①大蒜素对红细胞聚集性的影响:与模型组比较,大蒜素高、中、低剂量组对血瘀症大鼠全血高切黏度分别降低14.43%、9.71%、4.15%(P<0.05￣0.01),全血低切黏度分别降低15.89%、14.27%、6.86%(P<0.01),血浆黏度分别降低11.33%(P<0.05)、9.78%(P<0.05)、3.49%(P>0.05),且上述作用呈现一定的量效关系。大蒜素高剂量组可明显降低红细胞压积(P<0.05),降低程度为6.47%。②大蒜素对红细胞变形性的影响:模型组大鼠滤过指数高于对照组(0.228±0.025,0.175±0.043,P<0.05),大蒜素高剂量组滤过指数为0.176±0.034,低于模型组(P<0.05)。③大蒜素对红细胞渗透脆性的影响:模型组开始溶血及完全溶血时的NaCl溶液浓度较对照组稍高,大蒜素各剂量组对红细胞渗透脆性的增大有改善作用,但均无统计学意义。④大蒜素对红细胞膜流动性影响:模型组红细胞膜荧光偏振度明显增高,表明膜流动性降低,大蒜素各剂量组对红细胞膜流动性的降低均有改善作用,但无统计学意义。结论:大蒜素可提高红细胞变形性和降低血液黏度,改善血液流变性,而用于血瘀症的防治。     

恒定磁场对缺血再灌注脑组织的保护作用

背景:磁疗历史悠久,可用于治疗多种疾病,研究恒磁场对缺血性脑血管病的保护作用能为非药物、无创伤治疗提供新的临床治疗依据,开辟物理因子治疗新途径。目的:观察恒磁场治疗对缺血再灌注损伤大鼠宏观水平的血液流变学、亚细胞水平的红细胞膜流动性、分子水平的抗氧化酶活性以及一氧化氮和一氧化氮合成酶活性的影响。设计:完全随机设计。单位:哈尔滨医科大学生物物理教研室。材料:实验于2002-05/11在哈尔滨医科大学生物物理实验室进行,取40只健康Wistar大鼠适应性喂养1周后随机分成3组,假手术组(n=10)、模型组(n=15只)、磁疗组(n=15只)。方法:①模型组、磁疗组线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,假手术组线栓不阻塞动脉血流。②磁疗组脑缺血后立即将其头颈部置于40mT的恒磁场中30min,1次/d,假手术组和模型组不作暴磁处理。3组大鼠手术7d后麻醉状态下眼球取血、断头取脑。主要观察指标:①观察三组大鼠血液流变学变化。②各组大鼠红细胞膜流动性指标变化。③各组大鼠血清谷胱甘肽过氧化物酶及铜蓝蛋白含量变化。④各组大鼠脑组织丙二醛、一氧化氮、一氧化氮合成酶活性等指标的变化。结果:30只大鼠进入结果分析。①血液流变学指标:模型组全血高切、低切黏度、纤维蛋白原和红细胞压积显著高于假手术组(P<0.01),磁疗组上述指标显著低于模型组(P<0.01)。②红细胞膜流动性指标:模型组荧光偏振度、平均微黏度、各向异性显著高于假手术组(P<0.01),磁疗组上述指标低于模型组(P<0.05)。③模型组大鼠血清谷胱甘肽过氧化物酶及铜蓝蛋白含量显著低于假手术组(P<0.05),磁疗组高于模型组(P<0.01),并略高于假手术组。④模型组大鼠脑组织铜锌超氧化物歧化酶、丙二醛、一氧化氮、一氧化氮合成酶活性均显著高于假手术组(P<0.05或0.01),抗氧化酶活性显著低于假手术组(P<0.01);经过磁场治疗后,磁疗组大鼠各指标均较模型组好转(P<0.05,0.01)。结论:恒定磁场能显著改善大鼠的血液流变学特性,提高红细胞膜流动性及机体的抗氧化酶活力,降低丙二醛、一氧化氮、一氧化氮合成酶含量,提高了机体的抗氧化能力,从而有效地阻止了自由基、一氧化氮对神经组织的损伤,阻断了脑缺血的病理生理过程,对脑缺血再灌注损伤起到一定的保护作用。     

极低频电磁场致职业暴露人群神经行为损伤的研究

目的研究极低频电磁场对高强度暴露职业人群的神经行为损害,为预防职业病发生及进行相应的职业健康风险评估提供依据。方法2016年对新疆维吾尔自治区2家火力发电厂进行职业卫生学调查,对7种工作区域或岗位进行电磁场强度检测,对88名暴露工人和57名非暴露工人进行职业健康检查、问卷调查和神经行为测试。结果工作场所电场强度为0.001 ~ 10.363 kV/m,磁场强度为0.042 ~ 143.000 μT。 暴露组5项测试指标得分显著低于对照组,包括紧张–焦虑（50.9±10.8与54.3±7.6,P＜0.05）、有力–好动（47.9±9.8与51.8±9.9,P＜0.05）、困惑–迷茫（49.9±11.0与53.4±7.7,P＜0.05）、数字译码（48.3±10.0与52.7±9.6,P＜0.05）、数字跨度（47.5±9.7与53.8±9.4,P＜0.05）得分。 利用多元线性回归模型校正性别、吸烟、饮酒、年龄混杂因素影响后暴露组在紧张–焦虑、困惑–迷茫、数字译码、数字跨度项的得分依旧明显低于对照组。 将性别、吸烟、饮酒进行分层分析发现男性对于极低频电磁场更为敏感、吸烟和极低频电磁场对于引起短时记忆力减退具有协同作用、≤30岁人群对极低频电磁场较敏感。结论在火力发电厂电场强度最高10.363 kV/m,磁场强度最高143.000 μT的条件下,职业暴露于极低频电磁场环境下会引起神经系统发生改变,尤其表现为短时记忆能力下降,同时吸烟可能会对极低频电磁场致短时记忆力损伤产生协同作用。     

羟乙基淀粉对兔缺血-再灌注心肌的保护作用

目的 观察羟乙基淀粉(HES130/0.4)对兔心肌缺血一再灌注损伤的白细胞介素-8(IL-8)、内皮素-1(ET-1)和髓过氧化物酶(MPO)活性的影响,探讨其可能的保护机制.方法 36只大白兔随机分为乳酸林格氏液组(A组,n=12);白蛋白组(B组,n:12);羟乙基淀粉组(C组,n=12).A,B,C三组再灌注前15 min分别静脉注入6 mL/kg乳酸林格氏液、5%人体白蛋白或6%羟乙基淀粉,于缺血前(I_0)、缺血30 min(I_1)、再灌注60 min(R_1)、180 min(R_2)四个时点采血,检测血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸磷酸激酶(CPK)、白细胞介素-8(IL-8)和内皮素-1(ET-1)的浓度.再灌注180 min处死大白兔测定心肌水含量、心肌梗死面积及髓过氧化物酶(MPO)活性.组间比较采用单因素方差分析(SNK-q检验),采用SPSS 12.0统计软件处理,以P＜0.05为差异有统计学意义.结果 三组血清LDH,CPK,IL-8和ET-1随再灌注时间延长而逐渐升高,在R2时点,C组增高的程度明显低于A组[(181±17)U/L vs.(334±39)U/L;(1927±205)U/L v8.(2987±326)U/L;(5.03±1.16)ng/L vs.(6.96±1.21)ng/L;(380.9±78.4)ng/L vs.(667.2±82.1)ng/L,P＜0.05]和B组[(181±17)u/Lvs.(320±38)U/L;(1927±205)U/L vs.(2218±290)U/L;(5.03±1.16)ng/L vs.(5.90±1.03)ng/L;(380.9±78.4)ng/L vs.(615.6±80.2)ng/L,P＜0.05];C组缺血区MPO活性(0.20±0.09)ng/L明显低于A组(0.48±0.15)ng/L和B组(0.37±0.12)ng/L(P＜0.05);C组的心肌含水量(76±8.23)%和心肌梗死面积(11.53±1.02)%分别显著低于A组[(86±5.66)%,(26.48±2.33)%]和B组[(82±6.42)%,(19.76±4.32)%](P＜0.05).结论 羟乙基淀粉对通过抑制IL-8及ET-1的生成和释放,降低缺血区MPO活性和毛细血管通透性,对缺血-再灌注损伤的心肌具有保护作用.