超声辐照携带miR-520c-3p和miR-132微泡对体外培养人肝癌细胞Huh7的影响

目的:观察超声辐照携带miR-520c-3p和miR-132微泡对体外培养人肝癌细胞Huh7的影响。方法:以超声辐照携带miR-520c-3p和miR-132微泡转染体外培养人肝癌Huh7细胞株。实验分5组:对照组(A组),miR-520c-3p mimics negative control+miR-132 mimics negative control+微泡造影剂+超声辐照(B组),miR-520c-3p mimics+微泡造影剂+超声辐照(C组),miR-132 mimic+微泡造影剂+超声辐照(D组),miR-520c-3p mimics+miR-132 mimics+微泡造影剂+超声辐照(E组)。超声辐照条件:机械指数0.4,辐照参数2.0 W/cm2,连续辐照30 s,间隔60 s,共5次。采用实时荧光定量PCR检测miR-520c-3p,miR-132,磷脂酰肌醇蛋白多糖-3(GPC3)和转录辅助因子YAP m RNA表达,采用Western印迹检测GPC3和YAP蛋白表达,采用噻唑蓝比色法检测细胞增殖活性,采用流式细胞术检测细胞凋亡。结果:与A组、B组比较,C组、E组miR-520c-3p相对表达量升高(P0.05),而D组无明显改变(P0.05);D组、E组miR-132相对表达量升高(P0.05),而C组无明显改变(P0.05)。与A组、B组比较,C组、E组GPC3蛋白相对表达量降低(P0.05),而其m RNA相对表达量无明显改变(P0.05)。C组、D组、E组YAP蛋白以及其m RNA相对表达量均降低(P0.05)。与A组、B组比较,C组、D组、E组细胞增殖率降低(P0.05),且E组降低最明显(P0.05);C组、D组、E组细胞凋亡率增加(P0.05),且E组凋亡最明显(P0.05)。结论:超声辐照携带miR-520c-3p和miR-132微泡能显著抑制人肝癌Huh7细胞株增殖,并促进其凋亡,其机制可能与调节GPC3和YAP的表达有关。     

超声靶向微泡爆破技术对糖尿病肾病大鼠模型FBG、mAlb和UAER的影响

目的探讨超声靶向微泡爆破技术对糖尿病肾病大鼠造模时间及肾功能的影响。方法取32只SD雄性大鼠,随机分为对照组(正常大鼠)、A组(给予链脲佐菌素建立糖尿病肾病大鼠模型)、B组(给予链脲佐菌素+超声微泡技术建立糖尿病肾病大鼠模型)、C组(给予链脲佐菌素+超声靶向微泡爆破技术建立糖尿病肾病大鼠模型),每组各8只。比较各组造模时间、尿蛋白排泄率(UAER)、空腹血糖(FBG)、血肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平的差异。取各组大鼠肾脏组织,行苏木精-伊红染色,在光学显微镜下观察大鼠肾小球病理形态学改变。结果 A、B、C组均成功建立糖尿病肾病大鼠模型,造模期间无大鼠死亡的情况发生。相比A、B组,C组造模时间明显减少(P 0. 01); A、B组造模时间比较,并无显著差异(P 0. 05)。相比对照组,A、B、C组UAER、FBG、SCr及BUN水平均明显升高(P 0. 01);而各组ALT水平的比较,并无显著差异(P 0. 05)。经病理染色结果可知,对照组大鼠肾脏组织未见异常病理改变,而A、B、C组大鼠均出现一系列不同程度的糖尿病肾病的病理改变。结论采用超声靶向微泡爆破技术制备糖尿病肾病大鼠模型可明显减少造模时间,具有良好的可行性和安全性。     

超声靶向微泡破坏技术介导基因JNK1在小鼠肝癌细胞株中表达及对细胞迁移和侵袭作用的研究

目的探讨应用超声靶向微泡破坏(UTMD)技术介导小鼠肝癌细胞株Hca-P JNK1基因的表达以及肝癌细胞迁移和侵袭。方法构建并鉴定pCDNA3.1-JNK1载体。将小鼠肝癌细胞株Hca-P分组如下:A组(空白对照组),B组(质粒组),C组(脂质体+质粒组),D组(超声微泡+质粒+超声辐照组),E组(脂质体+超声微泡+质粒+超声辐照组)。采用倒置荧光显微镜观察各组细胞的转染率,荧光定量PCR和Western Blot法检测JNK1的基因和蛋白质表达水平,以CCK-8法检测5组细胞的细胞活性,应用Transwell实验检测各组细胞的体外迁移和侵袭能力。结果成功构建了pCDNA3.1-JNK1载体。各组转染率比较:E组均大于B、C、D组(P均0.05),C、D组转染率均高于B组(P均0.05),C、D组之间差异无统计学意义(P0.05)。E组JNK1 mRNA和蛋白表达水平均高于其他各组(P均0.05);E组细胞活性、迁移和侵袭能力均高于其他各组(P均0.05)结论 UTMD技术结合脂质体转染法可以提高pCDNA3.1-JNK1载体转染小鼠肝癌细胞株Hca-P的效率,加大基因JNK1表达的上调幅度,增强细胞活性、迁移和侵袭能力。     

超声微泡造影剂介导EGFP对兔视网膜的转染效率

目的 探讨在不同能量超声和一定剂量微泡作用下,超声微泡造影剂介导下增强型绿色荧光蛋白(EGFP)质粒对兔视网膜转染的效率、安全性以及可行性.方法 将30只新西兰大白兔随机分为6组:质粒组(A组)、质粒+微泡组(B组)、质粒+超声照射组①(C组)、质粒+超声照射组②(D组)、质粒+微泡+超声照射组①(E组)、质粒+微泡+超声照射组②(F组).将1 ml pEGFP-C1质粒与1 ml SonoVue微泡造影剂混合,由耳缘静脉注入,分别用0.5、1.0 W/cm2超声波辐照眼球.转染7天后行视网膜光镜及透射电镜检查,观察质粒、微泡及超声照射对视网膜有无损害,并在荧光显微镜下观察pEGFP-C1质粒表达情况.结果 光镜及透射电镜结果显示质粒、微泡及超声照射对视网膜无损害.A～D组均可见少量绿色荧光表达(P均＞0.05),E、F组的荧光表达较强,明显高于其他4组(P均＜0.05),E、F组荧光强度差异无统计学意义(P均＞0.05).结论 在一定能量的超声照射下,超声微泡造影剂能够提高携带EGFP质粒在兔视网膜的转染效率.     

链脲佐菌素诱导C57BL/6小鼠糖尿病瘙痒模型的建立

[目的]探讨链脲佐菌素(streptozotocin , STZ)诱导C57BL/6小鼠糖尿病瘙痒模型的最佳剂量.[方法]24只雄性8周C57BL/6野生型小鼠,体重20～28 g,随机分为四组: A组(对照组)单次腹腔注射等剂量柠檬酸钠溶液 10 mL/kg,pH=4.5;B组STZ单次大剂量腹腔注射STZ 160 mg/kg;C组STZ腹腔注射40 mg/kg,连续注射5 d,每次给药时间间隔24 h;D组STZ两次中剂量注射,腹腔注射STZ 85 mg/kg+65 mg/kg,两次间隔时间24 h.从给药前4周开始,A组正常饮食,B、C、D组高脂饮食喂养至实验结束.注射STZ前1 d、注射STZ后1、2、3、4周测定动物的空腹血糖(FBG)、体重,采用录像记录30 min搔抓次数.[结果]与A组相比,B、C、D组造模后血糖升高并在不同时间点达到糖尿病标准(>200 mg/dL)(P<0.05),B组体重较A、C、D组下降(P<0.05),D组在STZ注射后第2、3周搔抓次数较A、B、C增多(P<0.05).[结论]腹腔分两次、间隔24 h注射STZ 85 mg/kg+65 mg/kg并配合高脂饮食是建立糖尿病并发瘙痒小鼠模型的合适方法.     

超声辐照载血管内皮细胞生长因子抑制剂脂质微泡对皮下结肠癌移植瘤治疗效果的研究

目的 评价超声辐照载血管内皮细胞生长因子抑制剂(vascular endothelial growth factor inhibitor,VEGFI)脂质微泡对结肠癌的治疗效果.方法 将稳定表达绿色荧光蛋白的结肠癌细胞系接种于Balb/c裸鼠皮下,建立结肠癌移植瘤模型.将48只皮下种植结肠癌移植瘤的Balb/c裸鼠随机分为4组:A组(12只),空白对照组,不接受超声造影及辐照;B组(12只),接受裸脂质微泡超声造影及假照;C组(12只),裸脂质微泡超声造影及超声辐照;D组(12只),载VFGFI脂质微泡及超声辐照.辐照前和3次辐照后第1d、第3d、第7d、第11d、第16d分别对各组裸鼠测量体质量和荧光摄片,测量肿瘤大小,计算肿瘤体积,绘制肿瘤体积生长曲线及裸鼠体质量生长曲线.16d后处死裸鼠,切除并分离肿瘤组织,测量各组肿瘤质量.结果 辐照前各组裸鼠体质量和肿瘤体积差异无统计学意义(P＞0.05);随访期间,A组与B组肿瘤体积持续增大,两组间比较差异无统计学意义(P＞0.05);辐照后第7d,C组及D组肿瘤体积均小于A组,差异有统计学意义(P＜0.01),C组与D组之间比较差异无统计学意义(P＞0.05);第7d后C组肿瘤体积变化不明显,到第16d肿瘤体积仍然小于A组,差异有统计学意义(P＜0.01),而D组肿瘤体积进一步缩小,与C组比较差异有统计学意义(P＜0.05).切除肿瘤组织,D组肿瘤质量低于C组(P＜0.05),C组低于A组(P＜0.05),而A、B组之间肿瘤质量差异无统计学意义(P＞0.05).观察期间各组裸鼠体质量差异无统计学意义(P＞0.05).结论 载VEGFI微泡联合超声辐照可以增强对结肠癌的治疗效果.     

微泡浓度对于超声辐照诱导生物效应的影响

目的 探讨全氟显微泡浓度对于超声辐照诱导体外培养的正常肝细胞"声致孔隙"效应、凋亡和坏死的影响.方法 应用超声辐照含不同量微泡的HL-7702细胞悬液.实验设空白对照组(无造影剂,无辐照)、超声辐照组(无造影剂,超声辐照)及不同微泡浓度组[微泡数/细胞数(B/C)值为1～200,辐照10 min].辐照后观察大分子荧光物质进入细胞情况以检测"声致孔隙"效应,检测细胞活力及凋亡.结果 与空白对照组及超声辐照组比较,B/C为5～200组荧光染色阳性率明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05).与空白对照组及超声辐照组比较.分别为B/C 50、100及200组的细胞死亡率明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05);超声辐照组与空白对照组比较,各项结果差异无统计学意义(P＞0.05).结论 一定浓度下诊断超声辐照国产造影剂全氟显可诱导正常肝细胞发生"声致孔隙"效应及细胞死亡.应用于诊断目的 时,B/C值尽可能在10以下;应用于基因转染时则选择B/C值50较为适宜,必要时可达100.     

超声微泡造影剂促腺病毒介导MDR1基因转染兔骨髓单个核细胞的作用机制及安全性研究

目的 探讨超声微泡造影剂促进以腺病毒为载体介导的多药耐药基因1(MDR1)体外转染兔骨髓单个核细胞的作用机制和安全性.方法 根据是否加入超声微泡造影剂和进行超声辐照将分选的兔骨髓单个核细胞分为常规培养组(A)、腺病毒转染组(B)、腺病毒转染+超声辐照组(C)、腺病毒微泡造影剂转染组(D)和腺病毒微泡造影剂转染+超声辐照组(E).不同实验因素处理后,采用流式细胞仪检测各组细胞外源性MDR1基因的转染率,同时观测转染后不同时间各组细胞体外扩增情况;台盼蓝拒染法计数各组细胞的存活率;分别用扫描电镜和透射电镜观察超声辐照后细胞超微结构的改变.结果 流式细胞仪检测各组细胞MDR1基因的转染率分别为0.39%土0.11%、5.03%±0.35%、4.93%±0.38%、5.25%±0.80%,19.93%±1.51%,E组明显高于其余4组(P＜0.05);试验各组细胞在转染后不同时期体外增殖情况差异无统计学意义(P＞0.05),各组细胞存活率差异亦无统计学意义(P＞0.05);一定强度的超声辐照后,骨髓单个核细胞胞膜出现一过性的小孔,细胞器发生可逆性肿胀改变.结论 超声微泡造影剂可使兔骨髓单个核细胞通透性暂时性提高,促进腺病毒载体介导的MDR1基因转染;同时不会对细胞的增殖能力、存活率及超微结构造成严重的不可逆损害,证明其是一种安全可行的基因转移新方法.     

脂联素对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞表达VEGF及PEDF的影响

目的观察脂联素对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞表达血管内皮生长因子(VEGF)、色素上皮衍生因子(PEDF)的影响,探讨脂联素对糖尿病肾病的保护作用机制。方法体外培养大鼠肾小球系膜细胞,随机分为7组:常糖组、高糖A组、B组(培养液葡萄糖浓度分别为5.6 mmol/L、15 mmol/L、30 mmol/L,其中以高糖B组作为脂联素干预的对照组);脂联素A、B、C、D组(各组培养液葡萄糖浓度均为30 mmol/L+脂联素,脂联素浓度依次分别为2.5μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml),作用24 h,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR法)测定各组细胞VEGF mRNA、PEDFmRNA表达水平;ELISA法测定各组上清液中VEGF、PEDF蛋白的含量。结果与常糖组相比,高糖各组大鼠肾小球系膜细胞VEGF mRNA及其蛋白表达升高(P﹤0.05),PEDF mRNA及PEDF蛋白表达降低(P﹤0.05);与高糖B组相比,脂联素各组大鼠肾小球系膜细胞VEGF mRNA及其蛋白表达降低(P﹤0.05),PEDF mRNA及PEDF蛋白表达升高(P﹤0.01)。结论高糖可上调大鼠肾系膜细胞VEGF表达,抑制PEDF的表达;脂联素可抑制高糖环境下系膜细胞对VEGF的表达并提高其对PEDF的表达。     

超声造影评价载血管内皮细胞生长因子抑制剂微泡结合超声辐照对裸鼠皮下结肠癌移植瘤治疗效果的初步研究

目的 应用超声造影评价超声介导的载血管内皮细胞生长因子抑制剂(vascular endothelial growth factor inhibitor,VEGFI)微泡对实验裸鼠结肠癌的治疗效果.方法 18只皮下种植结肠癌肿瘤的Balb/c裸鼠模型随机分为三组:A组(6只)为对照组,接受裸脂质微泡超声造影检查及假照;B组(6只),裸脂质微泡超声造影检查及超声辐照;C组(6只),载VEGFI脂质微泡及超声辐照.辐照前、辐照后1d、辐照后1周分别进行实时超声造影检查,存储图像进行声学定量脱机分析,获取峰值强度(PI)、局部血容量(RBV)、局部血流量(RBF)等造影参数并加以比较.结果 辐照前三组PI、RBV、RBF差异无统计学意义(P＞0.05);A组假照后1 dPI、RBV、RBF高于假照前,但差异无统计学意义(P＞0.05),1周后PI、RBV、RBF明显高于假照前,差异有统计学意义(P＜0.05);B组辐照后1 dPI、RBF、RBV较辐照前减小,差异有统计学意义(P＜0.05),而1周后PI、RBF、RBV又上升,与辐照前比较差异无统计学意义(P＞0.05);C组辐照后1d、辐照后1周PI、RBV、RBF均较辐照前减小,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 载VEGFI微泡联合超声辐照可以增强对实验裸鼠结肠癌的治疗效果.     

超声辐照和SonoVue微泡在介导hAng-1基因体外转染时的作用和量效关系探讨

目的 探讨超声辐照和SonoVue微泡分别使用和联用在介导hAng-1基因体外转染过程中的作用以及辐照强度和微泡浓度对转染效率和细胞活性的影响.方法 实验分四组A组:单纯超声辐照+质粒组;B组:微泡+质粒组;C组:超声辐照+微泡+质粒组和空白对照组D组. C组内转染参数分别设置为超声照射强度0.5、1.0 、1.5和2.0 W/cm~2,微泡浓度5%、10%、20%、30%和40%.将连接有eGFP-C_3-hAng-1质粒的SonoVue微泡对293T细胞进行转染,48 h后检测各组基因转染效率和细胞存活率. 结果转染48 h后C组转染效率最高,荧光阳性细胞数最多,强度最大;A组转染效率很低,见少量荧光表达;B、D组无明显基因转染发生.随着超声照射强度和微泡浓度的增加,基因转染效率会逐步升高,具有统计学意义.微泡浓度大于20%、超声照射强度超过1.5 W/cm~2后基因转染效率不再升高甚至降低,细胞死亡率显著增高(P<0.01).结论 SonoVue微泡介导外源基因转染必须联合超声辐照才能获得较好的转染效率.对于hAng-1基因和SonoVue微泡,选择声强1.5 W/cm~2,微泡浓度20%是相对最佳转染条件.     

超声介导微泡空化效应对鼠肺微血管内皮细胞膜流动性及细胞骨架的影响

目的 探讨超声介导微泡空化效应对鼠肺微血管内皮细胞膜流动性及细胞骨架的影响.方法 6孔板培养鼠肺微血管内皮细胞,每孔加入20μg质粒EGFP及10%微泡后行超声辐照,辐照方式为连续波,探头频率2 MHz,分别以不同照射时间分组:A组30 s,B组60 s,C组90 8,D组120 s,E组180 s(机械指数均为1.0);对B组再以不同机械指数分组:B1组0.75,B2组1.0,133组1.3,134组1.5,135组1.8(照射时间均为60 s).以激光共聚焦显微镜观察细胞膜荧光恢复评价细胞膜流动性,以免疫荧光法观察细胞微管蛋白、微丝蛋白荧光强度变化.结果 胞膜流动性荧光恢复指数分别为:A组0.173±0.013,B组0.250±0.037,C组0.364±0.022,D组0.381±0.019,E组0.395±0.009(B～E组与A组比较,均P＜0.01);B1组0.171±0.017,B2组0.255±0.026.B3组0.378±0.007,B4组0.382±0.009、B5组0.397±0.008(B2～B5组与B1组比较,均P＜0.01).微管蛋白荧光强度分别为:A组159.15±4.79,B组188.23±6.20,C组205.80±4.48,D组208.99±8.34,E组213.70±5.09(B～E组与A组比较,均P＜0.01),B1组176.84±3.10,B2组187.57±14.52,B3组206.41±11.66,B4组220.12±13.39,B5组221.16±12.78(B2～B5组与B1组比较,均P＜0.01);C、D、E组间两两比较及B3、B4、B5组间两两比较差异均无统计学意义(P＞0.05).不同辐照时间及MI时,微丝蛋白荧光强度差异无统计学意义.结论 超声介导微泡空化在一定能量模式下可引起细胞膜流动性及微管蛋白荧光改变,此效应可能是超声及微泡促基因转染机制之一.     

载紫杉醇脂质体微泡联合低频超声干预低龄兔血管结构重建的可行性研究

目的 探讨载紫杉醇脂质体微泡(paclitaxel-carrying liposome microbubbles,PLM)联合低频超声干预低龄兔髂动脉血管结构重建的可行性.方法 低龄新西兰大白兔单侧髂动脉狭窄模型25只,随机平均分为5组,A组:PLM联合低频超声治疗;B组:空白微泡联合低频超声治疗;C组:紫杉醇药物联合低频超声治疗;D组:低频超声辐照治疗;E组:空白对照组.建模后3周进行干预,4周取损伤处血管,HE染色计算血管管腔面积、内膜面积及中膜面积,免疫组化分析血管壁平滑肌细胞的增殖情况.结果 各干预组髂动脉狭窄模型的管腔面积均大于E组(P<0.05),内、中膜面积均小于E组(P<0.05),A组管腔面积最大,内、中膜面积最小(P=0.000),B、C、D组之间没有明显差异(P＞0.05).干预后各组内膜／中膜面积比值均减小(P＜0.05),以A组减小最为显著(P=O.000).免疫组化显示各干预组幼兔髂动脉内膜层均出现α-平滑肌肌动蛋白(α-SM actin)阳性反应的棕黄色颗粒,E组最多,A组表达最少(P＜0.05).结论 载紫杉醇脂质体微泡联合低频超声可用于干预低龄兔髂动脉血管狭窄,减轻损伤内-中膜的病理性增生.     

低频超声辐照微泡造影剂增强米托蒽醌对乳腺癌细胞的毒性作用

目的 观察超声辐照微泡造影剂对米托蒽醌杀伤人乳腺癌细胞MCF-7作用的影响,并探讨其作用机制.方法 以MTT法检测米托蒽醌对MCF-7细胞的细胞毒作用,计算其24 h的IC_(50)值.将对数生长期的人乳腺癌细胞MCF-7分为单纯米托蒽醌组(D组)、超声+米托蒽醌组(U+D组)、超声+微泡+米托蒽醌组(U+M+D组)、空白对照组(C组).以MTT法检测各组细胞活性, 高效液相色谱法测定用药各组细胞内米托蒽醌的含量,采用透射电镜观察MCF-7 细胞形态学特征.结果 米托蒽醌对MCF-7细胞的IC_(50)值为2.87μg /ml.各组细胞经处理后培养24 h,细胞活性率C组＞D组＞U+D组＞U+M+D组,各组间差异有统计学意义(P<0.05).高效液相色谱法测定用药各组细胞内米托蒽醌的含量为U+M+D组＞U+D组＞D组,差异有统计学意义(P<0.05).透射电镜可观察到MCF-7 细胞凋亡的典型形态学改变.结论 低频超声辐照可促进化疗药物进入肿瘤细胞内,增强化疗药物对肿瘤细胞的杀伤作用,而低频超声辐照微泡可进一步增强该效应.     

微泡造影剂联合超声介导KDR启动子-胸苷激酶基因靶向血管治疗小鼠肝癌

目的评估微泡造影剂SonoVue联合超声辐照介导KDR启动子-单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(HSV-TK)系统(KDR-TK)结合更昔洛韦(GCV)靶向血管治疗小鼠肝癌的有效性。方法建立小鼠(C57BL/6J)肝癌皮下移植瘤模型40只,随机分为4组,分别经尾静脉团注磷酸缓冲盐溶液(PBS)、KDR-TK、KDR-TK、KDR-TK+SonoVue,后两组分别给予1MHz、2W/cm2、5min的超声辐照,24h后治疗组分别腹腔注射GCV0.1ml(100mg·kg-1·d-1),连续10d,检测肿瘤大小,计算抑瘤率,28d后处死小鼠行肿瘤微血管密度及组织病理学检查。结果抑瘤率在PBS组(A组)、KDR-TK/GCV组(B组)、KDR-TK+超声/GCV组(C组)、KDR-TK+超声+SonoVue/GCV组(D组)分别为0%、3.6%±2.7%、21.4%±2.9%和40.7%±4.5%(D组与B组,P<0.01;D组与C组,P<0.05;C组与B组,P<0.05);肿瘤微血管密度分别为48.8±5.1、44.2±6.4、27.4±3.2和12.3±1.4(B组与A组,P>0.05;C组与A组,P<0.05;D组与A组,P<0.01;D组与C组,P<0.05);HE染色C组、D组坏死病变明显。结论微泡造影剂增强超声辐照介导的KDR-TK基因靶向破坏小鼠肝癌微血管的效应,为肝癌的基因治疗提供一种可行、有效的方法。     

诊断超声联合微泡对大鼠移植瘤血管通透性影响的实验研究

目的 研究诊断超声联合微泡对大鼠移植瘤血管通透性的影响.方法 将48只已建立Walker-256皮下移植瘤模型的SD大鼠随机分为4组:空白对照(A)组、单纯微泡剂(B)组、单纯超声(C)组和超声联合微泡(D)组.以伊文思蓝(Evens blue,EB)为指示剂,选择频率为1.75 MHz、机械指数为1.4的诊断超声持续照射肿瘤区5 min,经大鼠尾静脉注射/不注射微泡造影剂.使用分光光度计和标准曲线法测量大鼠肿瘤组织内EB含量变化,激光共聚焦显微镜观察EB外溢情况.结果 超声联合微泡可增加肿瘤组织微血管通透性.D组瘤内EB含量较A、B、C组明显增加(P＜0.05),血管周围EB外溢明显.A、B、C组EB含量比较差异无统计学意义(P＞0.05),血管周围均未见明显EB渗出.结论 在一定条件下,诊断超声联合微泡可明显提高辐照肿瘤组织血管通透性,这对临床肿瘤化疗患者具有潜在的应用意义.     

超声靶向破坏微泡技术介导shRNA抑制小鼠肝癌细胞株JNK1基因表达

目的 探讨应用超声靶向破坏微泡（UTMD）技术介导shRNA抑制小鼠肝癌细胞株JNK1基因表达的能力。方法 构建并筛选shRNA最佳表达载体。体外培养肝癌细胞Hca-F,共分为5组：A组为空白对照组;B组为shRNA质粒组;C组为脂质体组;D组为超声微泡+超声辐照组;E组为脂质体+超声微泡+超声辐照组。应用倒置荧光显微镜观察转染率;荧光定量PCR检测JNK1的mRNA水平;Western-Blot检测JNK1的蛋白质表达。结果 获得了shRNA干扰效果最好的表达载体。各组转染率比较：E组均大于B、C、D组（P均<0.05）;C、D组之间差异无统计学意义（P>0.05）。荧光定量PCR和Western-Blot检测各组JNK1mRNA和蛋白表达比较：E组的JNK1mRNA和蛋白表达水平均最低（P均<0.05）。结论 脂质体转染法与UTMD技术结合可以提高小鼠肝癌细胞株JNK1 shRNA的转染效率,并能够增强基因表达的抑制效果。     

超声破坏靶向VEGFR2微泡治疗皮下结肠癌移植瘤的实验研究

目的 探讨靶向VEGFR2微泡结合超声辐照治疗结肠癌的效果.方法 将17只VEFGR2高表达的结肠癌皮下种植瘤Balb/C裸鼠模型分为三组:A组5只,为对照组,仅接受超声造影检查和假照;B组6只,空白脂质微泡结合超声辐照;C组6只,载靶向VEGFR2单抗的脂质微泡结合超声辐照,所有模型均用红色荧光蛋白标记.空化治疗前和空化后1周分别行超声造影和荧光摄片检查,测量肿块大小、荧光面积、荧光强度及血管密度,并进行比较.结果 治疗前裸鼠肿瘤长径、荧光面积、荧光强度及血管密度在各组间比较差异无统计学意义(P＞0.05);A组假照后肿瘤长径、荧光面积、荧光强度及血管密度均比假照前增加,差异有统计学意义(P＜0.05);B组辐照后荧光强度及血管密度均较空化前减小,差异有统计学意义(P＜0.05),而肿瘤长径和荧光面积差异不显著(P＞0.05);C组辐照后肿瘤长径、荧光面积、荧光强度及血管密度与辐照前比较均明显减小,差异有统计学意义(P＜0.01);治疗后A、B、C三组各参数两两比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 靶向VEGFR2脂质微泡能增强超声空化对结肠癌的治疗效果.     

载自杀基因的靶向微泡联合超声辐照抑制视网膜母细胞瘤的实验研究

目的探讨载自杀基因的靶向微泡联合超声辐照对视网膜母细胞瘤(RB)的抑制作用。方法制备携带单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶(HSV1-tk)质粒和血管内皮细胞生长因子受体2抗体的靶向微泡,分为空白对照组、细胞+质粒组、细胞+质粒+Sono Vue组、细胞+靶向微泡组、细胞+质粒+超声辐照组、细胞+质粒+Sono Vue+超声辐照组及细胞+靶向微泡+超声辐照组进行实验。荧光显微镜观察各组基因转染情况,流式细胞仪检测转染率,加入丙氧鸟苷(GCV)后检测细胞的抑制率。结果细胞+靶向微泡+超声辐照组的转染率为(24.78±1.04)%,高于细胞+质粒+Sono Vue+超声辐照组(14.31±0.69)%,差异有统计学意义(P0.05)。随着GCV浓度的增加和培养时间的延长,各组抑制率逐渐升高。当GCV浓度为100 mg/L,培养96 h后,细胞+靶向微泡+超声辐照组对RB细胞的抑制率达(92.91±1.71)%。结论加入GCV后,携带HSV1-tk基因的靶向微泡联合超声能有效地抑制RB细胞。     

低频低功率超声联合微泡对DU145细胞及PC3细胞早期凋亡的影响

目的比较低频低功率超声联合微泡造影剂对人前列腺癌DU145细胞与PC3细胞早期凋亡率的不同影响。方法使用低频低功率超声连续波辐照人前列腺癌DU145细胞和PC3细胞悬液60 s,实验中两种细胞系各分为4组:空白对照组(A组)、单纯微泡组(B组)、单纯超声组(C组)和超声联合微泡组(D组),辐照后细胞继续培养24 h,流式细胞仪检测细胞早期凋亡情况,透射电镜观察细胞形态改变。结果两种细胞D组的早期细胞凋亡率明显高于其余各组(P﹤0.01),C组亦均高于A组(P﹤0.05),A、B组之间差异无统计学意义;两种细胞经相同处理后,C、D组PC3细胞的早期细胞凋亡率均高于DU145细胞(P﹤0.01)。透射电镜下两种细胞D组可见癌细胞体积变小变圆,空泡增多,有明显的凋亡小体形成,PC3细胞内还可见大量的自噬体出现。结论低频低功率超声联合微泡造影剂能明显诱导人前列腺癌细胞的早期凋亡,且对PC3细胞早期细胞凋亡作用强于DU145细胞。