人红细胞冻干保护剂配方及浓度的优化

本研究探讨不同红细胞冻干保护剂配方及浓度的变化对红细胞冻干-复水后回收率的影响。应用一系列不同浓度的聚乙烯吡咯烷酮（PVP）、海藻糖及不同渗透性保护剂组成的红细胞冻干保护剂保护冻干红细胞并检测冻干红细胞复冰后红细胞及血红蛋白的回收率．结果显示：荷载海藻糖的红细胞在添加不同浓度保护剂保护下各组的红细胞损失率差异具有显著性（P〈0．05或P〈0．01），其中以有PVP360的保护液组中的细胞损失最大（0．24％），含有PVP40且胞外海藻糖浓度为150mmol／L时，红细胞的损失最小（0．02％）．海藻糖浓度为150mmol／L与海藻糖浓度为50mmol／L的保护剂组之间存在统计学差异（P〈0．01）。冻干红细胞在添加不同PVP40浓度的冻干保护剂作用再水化后红细胞和血红蛋白回收率也不相同。15％PVP40＋150mmol／L海藻糖＋2％BSA在红细胞冻干中的保护效果最好，红细胞和血红蛋白回收率分别为（61．29±4．93）％，（62．49±5．91）％，与其它各组间存在显著差异（P〈0．01）。含有甘油的冻干保护液对红细胞冻干过程中的保护效果最好，红细胞和血红蛋白回收率分别为（65．97±4．52）％和（67．24±5．94）％，与其它渗透性保护剂组相比存在显著性差异（P〈0．01）。结论：红细胞冻干保护剂为0．8mol／L甘油＋15％PVP40＋150mmol／L海藻糖＋2％BSA是最佳保护剂浓度配方。     

细胞内外海藻糖对红细胞冰冻干燥保存的影响

目的研究细胞内海藻糖对红细胞冻干保存后血红蛋白回收率及ATP水平影响。在一定条件下负载红细胞,细胞内海藻糖浓度保持恒定,研究细胞外不同浓度的海藻糖对红细胞冰冻干燥保存的影响。方法将浓缩红细胞在37℃,浓度为800 mmol的海藻糖溶液中孵育7 h,制成海藻糖负载的浓缩红细胞,对照组为PBS负载浓缩红细胞,行冻干保存,测定Hb回收率及细胞内ATP水平。将PBS液、浓度为50 mmol、200 mmol、400 mmol的海藻糖溶液与海藻糖负载浓缩红细胞按1∶1比例混匀,行冻干保存及再水化,用氰化血红蛋白试剂盒测定Hb溶血率,计算Hb回收率。结果经海藻糖负载的红细胞冻干保存,Hb回收率(44.46±5.15)%,细胞内ATP水平(1.91±0.33)μmol/gHb,对照组Hb回收率(7.71±2.71)%,细胞内ATP水平(0.88±0.25)μmol/gHb。2组相比较,P0.05,差异有统计学意义。细胞外PBS液组Hb回收率为(10.36±0.97)%,50 mmol海藻糖组,Hb回收率为(33.57±2.89)%,200 mmol海藻糖组,Hb回收率为(38.64±0.54)%,400 mmol海藻糖组,Hb回收率为(18.10±1.9)%。对照组PBS液组与50 mmol组、200 mmol组、40 0mmol组分别比较,差异有统计学意义。400 mmol组与200 mmol组、5 0 mmol组分别比较,差异有统计学意义(P0.01)。200 mmol组与50 mmol组相比较,差异无统计学意义。结论细胞内的海藻糖大大提高冻干红细胞Hb回收率且可保持冻干红细胞正常ATP水平。细胞外的海藻糖对红细胞冻干保存有保护作用,随着细胞外液中海藻糖浓度增加,冻干红细胞Hb回收率减少。     

人红细胞负载海藻糖后冻干保存过程的初步研究

目的 探讨红细胞冻干长期保存的有效方法，并评价复水后红细胞各项理化指标的变化。方法 设对照组（常规条件下保存的红细胞）和实验组（负载海藻糖冻干-复水后红细胞），在37℃条件下，红细胞负载海藻糖7h后，采用主要成分为含15％聚乙烯吡咯烷酮（PVP）和150mmol／L海藻糖的缓冲液作为保护液，在设定的降温程序下进行红细胞的冻干保存。冻干后置37℃的再水化液快速水化，检测各项理化指标。结果 红细胞冻干再水化后红细胞和血红蛋白回收率均在80％以上，且各项理化指标与常规保存的对照红细胞间差异无显著性（P〉O．05）。结论 红细胞在37℃孵育7h的条件下负载每藻糖后进行冻干，复水后能保持细胞的理化稳定性和结构形态的完整性，为进一步研究长期冻干保存红细胞奠定了基础。     

甘油浓度对红细胞冻干保存效果的影响

目的探讨甘油浓度浓度对红细胞冷冻干燥保存的回收率、溶血率及残余水含量的关系。方法以甘油浓度分别为3%、6%、9%、12%、15%、18%、21%(w/v)的冻干保护剂处理红细胞,冻干,用显微镜观察细胞形态、血细胞计数仪检测细胞数、分光光度计测定游离血红蛋白量,分析细胞复水后红细胞计数、溶血情况。用热重法测定冻干红细胞水分含量,分析不同保护剂组红细胞的水分含量变化情况。结果复水后红细胞形态正常,甘油浓度为9%、12%、15%时,红细胞回收率分别为(77.08±9.41)%、(84.37±3.42)%、(80.21±9.20)%,红细胞溶血率分别为(19.82±2.23)%、(17.66±1.17)%、(15.86±2.23)%,相应的冻干红细胞残余水分含量为(19.43±1.36)%、(22.89±1.57)%、(26.17±1.09)%。结论保护剂中甘油浓度影响红细胞冻干保存的效果;甘油浓度为(9-15)%时对冻干保存的红细胞损伤较小;冻干红细胞残余水分含量随保护剂中甘油浓度的增高而增高。     

海藻糖、蔗糖、葡萄糖负载红细胞对冻干红细胞影响的比较

目的探讨细胞内的海藻糖、蔗糖、葡萄糖对冻干红细胞的影响。方法以海藻糖、蔗糖、葡萄糖、PBS作负载液,将红细胞置各负载液中孵育37℃、7h,然后冻干红细胞。再水化后测定血红蛋白回收率及红细胞内ATP含量,评价海藻糖、蔗糖、葡萄糖对冻干红细胞的影响。结果冻干后血红蛋白回收率:负载海藻糖、蔗糖及葡萄糖的红细胞明显高于PBS负载红细胞(P<0.001),海藻糖与蔗糖负载明显优于葡萄糖负载(P<0.001),海藻糖与蔗糖负载的红细胞无明显差异(P>0.05)。冻干后细胞内ATP含量:葡萄糖负载红细胞明显高于海藻糖及蔗糖负载红细胞(P<0.001),负载海藻糖高于负载蔗糖(P<0.05)。可认为负载海藻糖、蔗糖及葡萄糖的红细胞冻干后,细胞内的ATP水平葡萄糖组最高,海藻糖组其次,蔗糖组最低。结论细胞内的海藻糖、蔗糖、葡萄糖对冻干红细胞均有保护作用,综合血红蛋白回收率及红细胞内ATP含量,海藻糖较蔗糖及葡萄糖保护作用更好。     

海藻糖水替代机制对冻干红细胞保护作用的探讨

目的探讨海藻糖对冻干红细胞复水回收率和残余水含量的影响及其对红细胞膜的保护机制。方法将红细胞分别与100、200、400、600、800、1 000 mmol/L海藻糖负载溶液孵育,共6组,并设置对照组,用海藻糖检测试剂盒特异性检测红细胞中海藻糖加载量;用冷冻干燥机对红细胞做冷冻干燥,Karl-Fisher滴定法结合卡式炉法测定冻干红细胞中残余水含量;细胞计数仪检测复水后红细胞数目。结果随着负载海藻糖溶液浓度的上升,冻干红细胞复水回收率先平稳后上升,当负载溶液浓度达到800 mmol/L时回收率最高;残余水含量先保持不变,然后下降,当负载溶液浓度达到800和1 000 mmol/L时,残余水含量(%)3.47±0.21和2.43±0.18。此外,冻干红细胞组与冻干血影细胞组残余水相同。结论初步证实了海藻糖通过水替代作用保护红细胞膜。     

冻干血小板再水化后稳定性的实验研究

目的 探讨冻干血小板再水化后的稳定性变化。方法 使用血细胞计数仪测定冻干血小板再水化后细胞计数回收率，以及在室温条件下随放置时间的不同，胞内外海藻糖浓度变化的趋势。结果 冻干血小板再水化后，细胞计数回收率在8h内保持稳定。胞外海藻糖浓度为30mM和1％人血清白蛋白混合物，可使冻干血小板回收率显著提高（P〈0．01）。结论 负载海藻糖的冻干血小板再水化后8h内仍保持较好的稳定性，海藻糖可使冻干再水化血小板的稳定性显著提高。     

海藻糖负载对人红细胞冷冻干燥保存影响的实验研究

目的初步探讨红细胞冻干长期保存的有效方法,并比较冻干前海藻糖的负载与否对红细胞冻干保存效果的影响。方法实验设实验组(负载海藻糖冻干-复水后红细胞):37℃,红细胞负载海藻糖7h后,采用主要成分为含有15%聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和150mmol/L,海藻糖的缓冲液作为保护液,在设定的降温程序下冻干保存红细胞;对照组:未负载海藻糖冻干-复水后红细胞。冻干结束后用37℃的再水化液快速水化,检测2组的各项理化指标。结果实验组红细胞冻干再水化后RBC和Hb回收率要高于对照组(P<0.05);ATP酶和葡萄糖-6-磷酸脱氢镁(G-6-PD)活性水平显著差异有统计学意义(P<0.05))。结论胞内海藻糖对红细胞冻干具有明显的保护作用,红细胞在37℃孵育7h的条件负载海藻糖后冻干-复水后能保持细胞的理化稳定性。     

海藻糖负载红细胞及其冻干保存研究

为了研究海藻糖负载红细胞方法的可行性及红细胞内海藻糖对冻干红细胞的影响,利用红细胞膜在37℃时细胞膜上部分脂质由固态变为液态、流动性增大和膜通透性增加的性质,将红细胞置于高浓度海藻糖负载液中孵育7小时,并以磷酸缓冲盐溶液中孵育的红细胞作为对照,对红细胞的海藻糖负载率、形态学、渗透脆性、变形性、ATP含量及2,3-DPG含量进行评价。结果表明:负载后红细胞内海藻糖含量为36.56±7.95mmol/L,实验组红细胞溶血率为(15.663±3.848)%,对照组红细胞溶血率为(5.03±1.85)%,差异显著(P<0.05);实验组红细胞变形指数是0.0289±0.00738,对照组红细胞变形指数是0.1200±0.0121,差异显著(P<0.05);负载后实验组红细胞内ATP含量为2.67±0.54μmol/gHb,对照组红细胞内ATP含量为5.22±1.10μmol/gHb(P>0.05),实验组红细胞渗透脆性降低,明显低于对照组。尽管负载组的红细胞大小不一,形态各异,但在透射电镜下绝大多数红细胞膜完整,胞内血红蛋白密度均匀,而对照组有近一半的细胞膜不完整并有漏孔,胞内血红蛋白密度变浅。实验组与对照组中2,3-DPG含量均为零。实验组红细胞冻干再水化后,血红蛋白回收率46.44±4.14%,对照组血红蛋白回收率8.33±2.34%,差异显著(P<0.001)。结论:海藻糖负载的红细胞功能符合输注标准,负载方法可行,负载入细胞内的海藻糖能够保持细胞膜的完整性,大大提高了冻干红细胞的回收率,为红细胞的冷冻干燥成功迈出了第一步。     

人红细胞冻干前负载海藻糖最佳化研究

为更好的实现海藻糖在红细胞冻干保存中的保护作用,关键是克服质膜对海藻糖的非渗透性,使胞质内海藻糖达到有效浓度。本研究的目的是通过对人红细胞负载海藻糖的规律性研究,筛选出海藻糖负载的最佳负载条件并评价海藻糖负载对红细胞各项理化指标的影响。在不同孵育温度(4、22和37℃)、孵育时间(0、2、4、6、8、10小时)、不同负载缓冲液浓度(0、200、400、600、800、1000mmol/L)条件下检测新鲜红细胞对海藻糖的成功负载量及红细胞各项理化指标;在固定负载条件下,对新鲜红细胞和4℃保存72小时红细胞海藻糖负载、游离血红蛋白(FHb)、血红蛋白(Hb)和红细胞平均体积(MCV)进行了比较。结果表明:红细胞对海藻糖的负载与孵育温度、时间及负载缓冲液海藻糖浓度密切相关。随着温度的升高、时间的延长和负载缓冲液海藻糖浓度的增加,红细胞对海藻糖的摄取量也随之增加。在海藻糖负载最佳条件下,新鲜红细胞和4℃保存72小时红细胞的胞内海藻糖浓度、FHb浓度分别为65.505±6.314mmol/L、66.2±5.002mmol/L和6.567±2.568g/L、16.168±3.922g/L。结论:红细胞负载海藻糖的最佳条件是采用新鲜红细胞,在37℃条件下、海藻糖浓度为800mmol/L的负载缓冲液中孵育8小时,这一条件可使胞内海藻糖达到有效浓度,并保持红细胞细胞理化性质稳定和膜完整性。     

海藻糖负载对人红细胞膜的影响

本研究通过对海藻糖负载后红细胞膜各项理化指标检测,评价海藻糖对红细胞膜的保护作用。以海藻糖负载红细胞为实验组,未负载海藻糖红细胞为对照组,在不同渗透压的NaCl溶液中,检测2组红细胞膜渗透脆性变化,流式细胞术和红细胞变形仪分别检测2组红细胞膜的完整性和变形性。结果显示:对照组红细胞在渗透压为160 mOsm的NaCl溶液中溶血率为50%,而实验组红细胞出现50%溶血率的NaCl溶液渗透压为121.4 mOsm。流式细胞术检测结果显示,红细胞负载海藻糖后,细胞膜结合的AnnexinⅤ-FITC量很少,并且通过300 mOsm磷酸盐缓冲液的洗涤,破损细胞能被有效清除。负载后红细胞变形能力有所下降,2组之间存在显著差异(P<0.01)。结论:红细胞摄取海藻糖后能够在高渗环境中保持细胞膜稳定性和结构完整性。     

皮肤保护剂在失禁患者中的应用效果及相关因素分析

目的 探讨皮肤保护剂在失禁患者中的应用效果,并分析IAD发生的危险因素和保护因素,为临床提供有效的防范依据.方法 将2013年5月至2014年1月入住南通市某三级甲等医院4个监护病区（神经外科ICU、神经内科ICU、急诊ICU、综合ICU）的174例高危失禁患者随机分成3组（A组造口护肤粉,B组鞣酸软膏,C组皮肤保护膜）,予以皮肤保护剂预防性地干预,比较IAD的发生率、发生时间,并对可能引起IAD的相关因素进行多因素Logistic回归分析.结果 发生IAD者32例占18.4％.A组、B组和C组IAD发生率依次为30.4％、10.3％和15.0％,B组lAD的发生率最低,其次为C组和A组,经比较,3组间差异有统计学意义.经两两比较发现,A组与B组之间、A组与C组之间,IAD发生率的差异有统计学意义,B组与C组之间差异无统计学意义.IAD平均发生时间为（7.00±3.91）d,3组患者IAD发生时间比较差异无统计学意义.多因素Logistic回归分析显示,大便性状和失禁频率是高危失禁患者发生IAD的危险因素,使用预防效果较好的皮肤保护剂是其发生的保护因素.结论 在失禁护理过程中,应尽早给予清洁肛周皮肤并使用预防效果较好的皮肤保护剂.     

无创双水平正压通气(BiPAP)联合应用冻干重组人脑利钠肽抢救呼吸重症疾病的临床意义

目的讨联用无创双水平正压通气(Bi PAP)与冻干重组人脑利钠肽(rh BNP)抢救呼吸重症疾病的临床应用价值。方法按就诊顺序编号将收治的54例呼吸重症疾病患者分为对照组和观察组各27例。对照组给予Bi PAP辅助呼吸,改善患者呼吸情况,同时给予常规治疗。观察组在对照组基础上加用rh BNP治疗,比较两组治疗后的动脉血氧分压、CO2分压、血p H值、意识恢复时间及脱机成功率和住院死亡率。结果观察组动脉血氧分压、CO2分压、血p H值均得到有效改善,观察组意识恢复时间为(3.2±0.7)d,对照组为(5.3±1.2)d,组间比较,差异具有统计学意义(P0.05)。观察组脱机时间短于对照组,住院病死率低于对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。结论联用无创双水平正压通气(Bi PAP)与rh BNP是抢救呼吸重症疾病患者的有效方案,可改善临床症状,抢救成功率较高,值得临床借鉴和推广。     

老年髋部骨折术后血容量改变与谵妄的相关分析

目的探讨谵妄与老年髋部骨折患者术后血容量改变的相关性,为治疗和预防提供参考。方法连续性观察150例接受手术治疗的老年髋部骨折患者。谵妄的评估采用CAM（confusionassessmentmethod）量表。收集其术前、术中及术后的数据,用Logistic回归分析血容量改变与谵妄的相关性。结果59例患者（男28例,女31例）术后出现了谵妄,发生率为39．3％（59／150）。谵妄组平均年龄（77．71±6．63）岁,高于无谵妄组患者（73．79±5．42）岁,两组比较差异有统计学意义（t=-3．958,P〈0．001）。谵妄组患者术前及术后第7天平均血红蛋白浓度、红细胞比容均低于未出现谵妄组[术前分别为（117．80±16．59）、（123．92±14．61）g／L,t=2．378,P=0．019;0．355±0．154、0．372±0．210,t=2．291,P=0．023;术后第7天（98．15±11．51）、（102．33±9．88）g／L,t=2．369,P=0．019;0．296±0．040、0．306±0．030,t=-3．958,P〈0．001]。两组间在性别、骨折类型、手术方式、手术时间、失血量及术后1、3d血红蛋白浓度间差异无统计学意义（P均〉0．05）。经Logistic回归分析,患者的年龄、教育程度及术后第7天血红蛋白含量在是否出现谵妄两组间差异有统计学意义（OR分别为3．28、1．097、0．389,P均〈0．05）。结论高龄髋部骨折患者发生谵妄是一个多因素结果,高龄、术后持续低血红蛋白浓度、受教育程度低患者的谵妄发生概率高。     

髋臼卵圆窝参照法在THR中髋臼假体旋转中心的疗效分析

目的采用卵圆窝参照法实施初次全髋关节置换术(THR),探讨髋臼假体旋转中心变化的影响因素及临床疗效。方法回顾性分析我科2009年11月至2013年4月治疗的93例全髋关节置换患者,测量手术后双髋关节X线片髋关节旋转中心、外展角、前倾角,比较手术后髋臼假体旋转中心与解剖旋转中心符合率,对患者的Harris评分进行统计学分析。结果全部病例随访6⁴8个月,平均27.5个月。所有病例X线片提示,假体位置良好,无髋臼及股骨假体松动,无需要翻修病例。Harris评分由术前平均(41.45±9.74)分,增加到(91.36±3.65)分,优78例(83.87%),良8例(8.60%),可7例(7.52%),优良率92.47%。手术前后Harris评分结果比较t=3.284,P<0.05,差异有统计学意义。髋臼假体旋转中心O2恢复至解剖旋转中心O1者67例,符合率72.04%。未恢复者26例,未符合率27.96%。髋关节旋转中心(COR)恢复组与未恢复组外展角比较,差异有统计学意义(44.68°±5.35°vs.48.37°±4.65°,t=2.830 1,P<0.05),COR恢复组与未恢复组前倾角比较,差异没有统计学意义(17.36°±6.65°vs.16.51°±7.25°,t=0.539 4,P>0.05)。COR恢复组与未恢复组术前Harris评分比较,差异没有统计学意义(41.45±7.38 vs.38.85±6.65,t=1.565 7,P>0.05),COR恢复组与未恢复组术后Harris评分比较,差异有统计学意义(92.45±3.35 vs.81.65±5.39,t=11.641 7,P<0.05)。结论髋臼假体旋转中心应遵循解剖重建的原则,临床关键在于确定髋臼旋转中心的位置,达到理想的臼杯外展40°,需内置、上移髋臼旋转中心。通过优化髋臼假体的倾斜角和覆盖,达到稳定关节,减少磨损,改善功能,取得良好的临床远期疗效。     

人红细胞冻干后复水条件的初步研究

本研究旨在探讨不同复水条件对冻干红细胞回收率的影响，为冻干红细胞复水条件的优化提供实验依据。在一系列不同条件下，包括复水溶液、复水温度、复水阶段红细胞胞体积变化速率（即蒸汽预复水）等，对冻干红细胞进行复水，检测红细胞复水后回收率并检测冻干红细胞复水后各项理化功能的改变。结果显示：在复水液配方中以PBS为基液配制的10％（w／v）PVP40溶液效果较好。在复水温度方面，低于37℃时红细胞回收率随着温度的升高而增加，42℃比37℃略差，37℃下复水效果最好。在加入复水液之前将样品放置在37℃的饱和蒸汽环境中预复水能提高红细胞回收率并使细胞体积和体积分布宽度更接近于新鲜细胞数值。复水后红细胞理化性质的检测显示，红细胞的变形性较常规保存的红细胞有所下降，但胞内ATP酶、G-6-PD酶、SOD和2，3-DPG的活性降低较少，酶活性回收率大于红细胞回收率。结论：人红细胞冻干后最佳的复水条件是：冻干红细胞在37℃的饱和蒸汽环境中预复水，复水液为PBS＋10％PVP40，复水温度为37℃，但对冻干复水过程中的细胞膜的保护还需进行更深入的研究。     

番禺区0～6岁儿童血红蛋白与血铅水平相关性研究

目的 探讨番禺区0～6岁儿童血红蛋白（Hb）与血铅的相关性.方法 选择1 407例健康儿童,采用雅培CD1800三分类血球仪及原子吸收分光光度计检测其RBC、Hb、血细胞比容（HCT）.根据是否存在铅中毒,将上述儿童分为铅中毒组、非铅中毒组.结果 铅中毒组与非铅中毒组儿童RBC、HCT的差异无统计学意义（P〉0.05）,而两组儿童Hb间的差异有统计学意义（P〈0.05）.不同年龄儿童Hb浓度与血铅浓度呈正相关（r=-0.061,P〈0.05）.结论 番禺区0～6岁儿童Hb与血铅水平存在相关性,铅中毒儿童比正常儿童更容易诱发贫血症状.     

腹腔镜胆囊切除术与小切口开腹胆囊切除术的比较

目的比较腹腔镜胆囊切除术及小切口开腹胆囊切除术的临床应用效果,为更合理地选择手术方案提供参考依据。方法选择天津市武清区人民医院2011年1月至2012年12月收治的97例胆囊疾病患者,50例进行腹腔镜胆囊切除术治疗患者作为A组,47例进行小切口开腹胆囊切除术治疗患者作为B组,比较两组手术方案的应用效果及安全性。结果 A组术中出血量为(62.8±5.4)ml,明显少于B组的(73.1±6.0)ml;A组肠功能恢复时间、下床活动时间及住院时间分别为(16.4±3.7)h、(20.5±5.1)h、(5.2±1.0)d,均明显短于B组的(18.5±4.0)h、(22.9±4.8)h、(6.7±1.4)d,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05);A组患者在术后12、48 h血清中的炎症因子白细胞介素-6、C-反应蛋白水平均明显低于B组,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05);A组并发症发生率为6.0%,B组为8.5%,组间比较差异无统计学意义(P>0.05);A组用为(9105±230)元,明显高于B组的(8920±197)元,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论腹腔镜胆囊切除术及小切口开腹胆囊切除术的临床应用效果均满意,前者创伤小、患者机体应激反应小、康复快,后者治疗费用低,应根据患者的病情及经济能力选择合理的治疗方案。