甘油含量对冷冻干燥保存红细胞的作用

目的分析甘油含量对冷冻干燥保存红细胞的作用。方法应用不同浓度甘油（5%、10%、20%、30%和40%）作为红细胞冷冻干燥保存的保护剂,研究冷冻干燥红细胞复水后红细胞形态以及复水后完整红细胞回收情况。结果甘油预处理的红细胞冷冻干燥后复水红细胞结构完整、形态正常,尤以40%甘油最佳,复水后红细胞回收率最高。结论研究为使用甘油作红细胞冻干保存的保护剂提供了初步的理论依据。     

冻干红细胞残余水的测定及其分布研究

目的建立并比较冻干红细胞残余水含量测定方法,探讨冻干红细胞残余水的分布情况。方法一次性冻干等量(500μL)的含保护剂(主要成分12%甘油)的红细胞、无保护剂的红细胞,含保护剂(同前)的血影细胞、无保护剂的血影细胞及保护剂,用热重分析法及Karl-Fisher滴定法结合卡式炉法测定其残余水含量,同时用含水量固定的标准品(水分含量4.9%-5.2%)做检验,每组样品重复测量6次;分析各组之间的差异,比较冻干血影细胞及冻干红细胞残余水含量。结果热重分析法测定残余水含量(%):冻干红细胞、无保护剂冻干红细胞、冻干血影细胞、无保护剂冻干血影细胞、单纯冻干保护剂、标准品分别为19.01±2.18、4.60±0.78、18.95±1.89、4.87±1.01、16.12±1.04、5.28±0.16;冻干保护剂及含保护剂冻干红细胞的热重(TG)曲线走势接近,无保护剂冻干红细胞与前二者曲线走势差异明显;Karl-Fisher法测定残余水含量(%):冻干红细胞、无保护剂冻干红细胞、冻干血影细胞、无保护剂冻干血影细胞、单纯冻干保护剂、标准品分别为3.21±0.23、1.22±0.09、3.16±0.26、1.25±0.07、2.63±0.41、5.14±0.13。结论热重分析法测定含保护剂的冻干品残余水含量时的结果偏高,Karl-Fisher滴定法结合卡式炉法能够准确反映冻干红细胞的残余水含量;初步判断冻干红细胞残余水主要分布于细胞膜。     

人红细胞冻干保护剂配方及浓度的优化

本研究探讨不同红细胞冻干保护剂配方及浓度的变化对红细胞冻干-复水后回收率的影响。应用一系列不同浓度的聚乙烯吡咯烷酮（PVP）、海藻糖及不同渗透性保护剂组成的红细胞冻干保护剂保护冻干红细胞并检测冻干红细胞复冰后红细胞及血红蛋白的回收率．结果显示：荷载海藻糖的红细胞在添加不同浓度保护剂保护下各组的红细胞损失率差异具有显著性（P〈0．05或P〈0．01），其中以有PVP360的保护液组中的细胞损失最大（0．24％），含有PVP40且胞外海藻糖浓度为150mmol／L时，红细胞的损失最小（0．02％）．海藻糖浓度为150mmol／L与海藻糖浓度为50mmol／L的保护剂组之间存在统计学差异（P〈0．01）。冻干红细胞在添加不同PVP40浓度的冻干保护剂作用再水化后红细胞和血红蛋白回收率也不相同。15％PVP40＋150mmol／L海藻糖＋2％BSA在红细胞冻干中的保护效果最好，红细胞和血红蛋白回收率分别为（61．29±4．93）％，（62．49±5．91）％，与其它各组间存在显著差异（P〈0．01）。含有甘油的冻干保护液对红细胞冻干过程中的保护效果最好，红细胞和血红蛋白回收率分别为（65．97±4．52）％和（67．24±5．94）％，与其它渗透性保护剂组相比存在显著性差异（P〈0．01）。结论：红细胞冻干保护剂为0．8mol／L甘油＋15％PVP40＋150mmol／L海藻糖＋2％BSA是最佳保护剂浓度配方。     

不同冻干保护体系对海藻糖负载红细胞冻干保存影响的研究

本研究旨在评价冻干保护剂人血白蛋白、葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮和甘油对海藻糖负载后红细胞冰冻干燥保存的影响,筛选最佳冻干保护体系。将浓缩红细胞在37℃,浓度为800 mmol/L的海藻糖溶液中孵育7 h,经PBS液冲洗3遍后制成海藻糖负载的浓缩红细胞。对照组为海藻糖负载红细胞不添加保护剂,直接冻干;实验组将人血白蛋白、葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮、甘油等组成的冻干保护体系与海藻糖负载浓缩红细胞混合,两组样品在常温下平衡30 min,移入-80℃深低温冰箱,预冻24 h,入冻干机冻干处理24 h。用温度为37℃,6%羟乙基淀粉40注射液快速再水化样品,用氰化血红蛋白试剂盒测定血红蛋白溶血率,计算血红蛋白回收率,同时测定干燥样品含水量。结果表明：当样品含水量在3%-4%时,对照组冻干红细胞血红蛋白回收率为（33.57±2.89）%,白蛋白组血红蛋白回收率为（51.15±1.98）%,差异有显著性意义（P〈0.05）。选用不同浓度的葡聚糖为冻干保护剂,血红蛋白回收率较对照组明显降低,随浓度增加,血红蛋白回收率逐渐升高,当浓度为36%时,血红蛋白回收率为（22.15±4.12）%,差异有显著性意义（P〈0.05）。不同浓度的聚乙烯吡咯烷酮（PVP）组成的冻干保护体系,当浓度小于40%时,血红蛋白回收率明显低于对照组,差异有显著性意义（P〈0.05）。10%甘油组血红蛋白回收率为（3.93±1.80）%,差异有显著性意义（P〈0.05）。结论：人血白蛋白在海藻糖负载的冻干红细胞中发挥重要保护作用,葡聚糖与浓度小于40%PVP可削弱细胞内海藻糖的保护作用。液态的甘油不宜作为红细胞冰冻干燥保存的保护剂。     

细胞内外海藻糖对红细胞冰冻干燥保存的影响

目的研究细胞内海藻糖对红细胞冻干保存后血红蛋白回收率及ATP水平影响。在一定条件下负载红细胞,细胞内海藻糖浓度保持恒定,研究细胞外不同浓度的海藻糖对红细胞冰冻干燥保存的影响。方法将浓缩红细胞在37℃,浓度为800 mmol的海藻糖溶液中孵育7 h,制成海藻糖负载的浓缩红细胞,对照组为PBS负载浓缩红细胞,行冻干保存,测定Hb回收率及细胞内ATP水平。将PBS液、浓度为50 mmol、200 mmol、400 mmol的海藻糖溶液与海藻糖负载浓缩红细胞按1∶1比例混匀,行冻干保存及再水化,用氰化血红蛋白试剂盒测定Hb溶血率,计算Hb回收率。结果经海藻糖负载的红细胞冻干保存,Hb回收率(44.46±5.15)%,细胞内ATP水平(1.91±0.33)μmol/gHb,对照组Hb回收率(7.71±2.71)%,细胞内ATP水平(0.88±0.25)μmol/gHb。2组相比较,P0.05,差异有统计学意义。细胞外PBS液组Hb回收率为(10.36±0.97)%,50 mmol海藻糖组,Hb回收率为(33.57±2.89)%,200 mmol海藻糖组,Hb回收率为(38.64±0.54)%,400 mmol海藻糖组,Hb回收率为(18.10±1.9)%。对照组PBS液组与50 mmol组、200 mmol组、40 0mmol组分别比较,差异有统计学意义。400 mmol组与200 mmol组、5 0 mmol组分别比较,差异有统计学意义(P0.01)。200 mmol组与50 mmol组相比较,差异无统计学意义。结论细胞内的海藻糖大大提高冻干红细胞Hb回收率且可保持冻干红细胞正常ATP水平。细胞外的海藻糖对红细胞冻干保存有保护作用,随着细胞外液中海藻糖浓度增加,冻干红细胞Hb回收率减少。     

深低温长期保存红细胞的效果评价

目的 对红细胞在深低温(-70±5)℃下保存12年的效果进行评价.方法 采用ACD-B抗凝全血制备浓缩红细胞,加入冰冻保护剂于(-70±5)℃保存12年.快速解冻后,用Haemonetics215型全自动血液处理机洗涤去甘油.洗涤后制备成红细胞悬液,检测其中的红细胞回收率、残余白细胞、残余血小板、甘油残留含量、游离血红蛋白含量,并进行ATP、2,3-DPG的检测.结果 红细胞在深低温保存12年复苏去甘油后除红细胞回收率(71.40％)略低外,其它各项指标均符合中华人民共和国国家标准.深低温保存12年后的红细胞与新鲜红细胞相比,2,3-DPG含量没有显著性差异,ATP含量下降为新鲜红细胞67.2％.结论 用含甘油的冰冻保护剂深低温长期保存红细胞是一种安全、有效的方法.     

两种处理对低温保存红细胞效果的影响

目的比较两种处理对红细胞保护剂深低温（-80℃）保存红细胞效果的影响。方法采用CPDA抗凝全血制备浓缩红细胞（RBC）,分别加入深低温保护剂79.1%甘油（glycerol）＋8%葡萄糖＋1%果糖＋0.3%EDTA-Na2,于室温平衡30 min后随机分成A、B两组,A组加入10%二甲基亚砜（DMSO）＋4%右旋糖苷-40（Dextran-40）,B组不作任何处理,于-80℃保存1年后,快速解冻,比较两组红细胞回收率、残余白细胞和血小板、游离血红蛋白浓度、RBC的渗透脆性和甘油残留量。结果两种处理对残余白细胞、血小板及甘油残留量无影响,在红细胞回收率、游离血红蛋白浓度、RBC体外溶血试验结果的差异均有统计学意义（P〈0.01）。结论用甘油保存RBC再加10%DMSO＋4%Dextran-40是一种更为安全、有效的保存方法。     

红细胞深低温长期保存效果的探讨

目的对红细胞在深低温(-70±5)℃下保存7年的效果评估。方法采用ACD-B抗凝全血制备浓缩红细胞,加入冷冻保护剂(-70±5)℃保存;快速解冻后,用Haemontics215型全自动血液处理机洗涤去甘油;检测洗涤后的红细胞制剂的红细胞回收率、残余白细胞、血小板、游离血红蛋白、体外溶血情况以及甘油残留含量。结果各项指标均能符合国家规定的质量标准。结论用甘油深低温长期保存红细胞是一种安全、有效的方法。     

海藻糖水替代机制对冻干红细胞保护作用的探讨

目的探讨海藻糖对冻干红细胞复水回收率和残余水含量的影响及其对红细胞膜的保护机制。方法将红细胞分别与100、200、400、600、800、1 000 mmol/L海藻糖负载溶液孵育,共6组,并设置对照组,用海藻糖检测试剂盒特异性检测红细胞中海藻糖加载量;用冷冻干燥机对红细胞做冷冻干燥,Karl-Fisher滴定法结合卡式炉法测定冻干红细胞中残余水含量;细胞计数仪检测复水后红细胞数目。结果随着负载海藻糖溶液浓度的上升,冻干红细胞复水回收率先平稳后上升,当负载溶液浓度达到800 mmol/L时回收率最高;残余水含量先保持不变,然后下降,当负载溶液浓度达到800和1 000 mmol/L时,残余水含量(%)3.47±0.21和2.43±0.18。此外,冻干红细胞组与冻干血影细胞组残余水相同。结论初步证实了海藻糖通过水替代作用保护红细胞膜。     

冰冻保存Rh阴性稀有血液方法的建立

目的探索一种甘油化冰冻保存Rh阴性红细胞制备、融化及洗涤等环节的可行性方法。方法取22袋(1U/袋)Rh阴性全血,在制备甘油化红细胞时,采用电子摇摆秤和输血器自动控制法代替手工摇摆法控制甘油流速和流量;37℃～42℃水浴融化后,在洗涤Rh阴性冰冻红细胞时,采用9%氯化钠(NaCl)高渗溶液平衡后,再用0.9%NaCl等渗溶液洗涤二次,并计算红细胞的回收率及其相关指控指标。结果冰冻红细胞的回收率为(87.52±2.31)%,而甘油残余量、上清液游离血红蛋白(Hb)含量及体外溶血率分别为(6.76±2.38)g/L、(0.73±0.05)g/L及(9.78±1.85)%。结论采用上述简化方法制备、融化及洗涤冰冻红细胞,不仅缩短了时间,而且获得较满意的红细胞回收率,其他相关质控指标也均符合国家标准。     

不同保存期全血制备洗涤红细胞的超微结构变化

目的 探讨不同保存期的全血制备洗涤红细胞前后电镜下红细胞形态的变化。方法 采集CPD—A抗凝全血。实验分Ⅰ～Ⅵ组，分别于4℃保存7、10、15、20、25、30d。于制备前取全血1滴，5％戊二醛固定，经2000r／min离心10min后，分出血浆，取样检测血红蛋白。余下的红细胞再加等量生理盐水，1500r／min离心5min，连续2次，取样为制备后测定组。结果 组Ⅰ和组Ⅱ制备前后红细胞成双面凹的圆盘结构，细胞均匀混悬。组Ⅲ制备前红细胞形态正常，制备后少数红细胞出现聚集状、球形或边缘不整齐，并有棘形红细胞出现。组Ⅳ、组Ⅴ、组Ⅵ于制备前血浆微红；制备后，球形红细胞、棘形红细胞、中问漏孔的红细胞增加。结论 制备洗涤红细胞的最佳时间应在4℃保存10d内的全血，保存15d以后的全血制备洗涤红细胞形态发生异常变化，出现棘形红细胞，囊泡化后的红细胞易溶血，红细胞寿命缩短，影响洗涤红细胞的质量。     

mPEG修饰红细胞Rh抗原稳定性的研究

本研究旨在探究mPEG修饰的红细胞Rh抗原的稳定性。利用红细胞膜蛋白SDS—PAGE电泳技术分析mPEG修饰后红细胞膜蛋白与mPEG结合情况，用红细胞血影凝集实验及40cCPD保养液保存的修饰红细胞与匹配血液体外混血实验，观察mPEG修饰后红细胞Rh抗原被遮蔽的稳定性。结果发现：不同保存时间的mPEG修饰的红细胞在模拟输血（即混血前后）的血型保持不变，同时mPEG修饰的红细胞在保存过程中游离血红蛋白水平正常，并且混血后经37℃孵育的mPEG修饰的红细胞游离血红蛋白水平低于不混合的修饰的红细胞。比较分析PEG特异的碘染和考马斯亮蓝染的显色图谱发现，特殊的碘染显示出mPEG与红细胞膜蛋白结合的条带，mPEG—SPA与红细胞膜蛋白结合后导致蛋白分子迁移速度发生改变。mPEG修饰的红细胞血影凝集实验证实，修饰红细胞在质膜裂损后mPEG仍有效地遮蔽抗原。结论：mPEG—SPA不论在红细胞膜蛋白被单独提取后，还是膜破损后以及存活状态下，均能与红细胞膜蛋白稳固结合。     

XE-5000血细胞分析仪计数有核红细胞的性能评价

目的探讨SysmexXE．5000血细胞分析仪自动计数外周血有核红细胞（NRBC）的方法学特点,评价其临床应用价值。方法评析其重复性、线性范围、携带污染率,并对697份静脉血标本作常规测定,评价其对NRBC的报警、定量测定,并与手工涂片法进行对照。结果XE．5000血液分析仪测定NRBC的重复性较好,线性范围较广,携带污染率较小。以显微镜复检为金标准,XE．5000与显微镜计数法计数外周血中NRBC数量有极好的相关性（r=0．997）,其有核红细胞报警的灵敏度为100％,特异度为85．1％。结论SysmexXE．5000血细胞分析仪可灵敏、准确、精密地自动计数外周血中NRBC,适合临床检测NRBC。     

血细胞分析仪对外周血有核红细胞计数性能的评价

目的评价Sysmex XE-2100血细胞分析仪计数外周血有核红细胞（NRBC）的性能。方法选择门诊与住院患者乙二胺四乙酸二钾抗凝血标本,采用Sysmex XE-2100血细胞分析仪与手工显微镜方法计数NRBC,并对结果进行比较。结果血细胞分析仪与手工显微镜方法之间相关性良好,相关系数为0.938 4;58份标本仪器法NRBC在0.00%～0.99%标本中14份（24.1%）手工法NRBC结果为0.00%。24份仪器法NRBC结果为0.00%的标本中22份（91.2%）手工法小于或等于1.00%;仪器法重复性明显好于手工法,NRBC平均CV为8.0%。结论 Sysmex XE-2100血细胞分析仪与手工显微镜法之间相关性较好;仪器法重复性明显好于手工法;尽管出现少量仪器法与镜检法不一致结果,但均伴有其他白细胞和（或）血小板异常报警提示,也进行了显微镜复核。     

Blood bank issues associated with red cell exchanges in sickle cell disease

Sickle cell disease (SCD) patients are prone to develop complications that include stroke, acute chest syndrome, and other crises. Some of these complications require chronic transfusion therapy or red cell exchange (RCE), either for therapeutic or prophylactic reasons. Due to a discrepancy of red cell antigens between African Americans and Caucasians (majority blood donors), the incidence of alloantibody formation is very high, which makes it difficult to find compatible red cell units, especially for urgent RCE. Some of the above conditions require immediate oxygen delivery to the tissues. Thus, SCD patients undergoing RCE should receive red blood cells with special attributes that include matching for Rh and Kell blood group antigens; RBCs should be fresh in order to provide (1) immediate oxygen delivery and (2) longer surviving cells to reduce the interval between RCE. Also, these units should be pre-storage leukoreduced to prevent febrile non-hemolytic reactions and screened for sickle cell traits to avoid transfusing red cells containing HbS. This requires a concerted effort between the apheresis unit, the local blood bank, and the central blood supplier.     

Sysmex XE-5000自动血液分析仪的临床评价

目的 对Sysmex XE-5000全自动血细胞分析仪的主要性能进行评价.方法 对Sysmex XE-5000的精密度、线性范围、与镜检的相关性和交叉污染率进行测定,并与Sysmex XE-2100血细胞分析仪进行比较.同时,对微量血和体液模式进行了评估.结果 Sysmex XE-5000全自动血细胞分析仪精密度表现优异,重复性、稳定性好,线性范围宽,交叉污染率低.通过XE-5000分析,微量血与静脉血血细胞分析结果基本没有差异.体液模式脑脊液细胞计数、分类与人工镜检表现出良好的相关性.结论 Sysmex XE-5000全自动血细胞分析仪是一种较理想的血细胞分析仪.     

牛、猪红细胞表面异种抗原改造的比较

把动物红细胞输用给人,即异种输血,可以缓解目前血源紧张的矛盾,但牛和猪的红细胞与人的血浆发生强烈的凝集反应,不能直接输用.本研究首次对牛和猪红细胞表面抗原进行修饰改造,并对改造后的猪、牛红细胞进行比较,从而为开拓丰富来源、安全有效的人血代用品奠定基础.使用基因重组的咖啡豆α-半乳糖苷酶清除牛和猪红细胞表面的主要异种抗原-α-Gal抗原,结合使用化学材料甲氧基聚乙二醇（mPEG）修饰遮蔽牛和猪红细胞表面的非主要异种抗原-non-αGal抗原,以实现对牛和猪红细胞表面异种抗原的改造.结果：改造后的牛、猪红细胞与人混合血浆的盐水凝集反应消失,具有和人红细胞相似的血清学特征;牛红细胞比猪红细胞脆性低,异种抗原的表达量低,及其他的一些特征说明牛红细胞比猪红细胞更适合作为人红细胞代用品.结论：改造后的牛红细胞与人血浆相匹配,有可能成为人红细胞代用品.     

经辐射处理离体血在保存期内红细胞与血小板参数的变化

目的 研究不同剂量＾６０Ｃｏ－γ射线辐照离体血后在保存期内对红细胞与血小板诸参数的影响。方法 应用＾６０Ｃｏ－γ射线单次均匀照射，总剂量分别为１５、２０、２５、３０和３５Ｇｙ。应用ＳｙｓｍｅｘＦ－８００血液分析仪测定照射前后及保存第３、７、１４和２１天红细胞诸参数，包括血红蛋白（Ｈｂ）、红细胞（ＲＢＣ）、红细胞平均容量（ＭＣＶ）、红细胞比积（ＨＣＴ）、红细胞分布宽度（ＲＤＷ）；以及血小板诸参数，包     

XE-2100全自动血细胞分析仪对有核红细胞分析的应用评价

目的评价Sysmex XE-2100全自动血细胞分析仪对有核红细胞（NRBC）分析结果的准确性。方法采用仪器法和显微镜计数法分别对2006年1月至2011年2月间139例外周血NRBC阳性的临床血液样本进行测定。结果仪器法对NRBC的检测结果与显微镜计数法比较,中、高值差异无统计学意义（P〉0.05）,低值差异有统计学意义（P〈0.05）。仪器的重复性良好。结论 Sysmex XE-2100全自动血细胞分析仪分析结果准确、快速,可为临床医生提供准确血细胞监测数据。