糖尿病难愈创面与晚期糖基化终末产物的关系

创面愈合是一个复杂而有序的过程，包括炎症反应、细胞增殖、组织成熟和重建3个阶段。糖尿病(diabetes mellitlls，DM)机体内非酶促糖基化反应加速，晚期糖基化终末产物(AGEs)水平升高，干扰内皮细胞与白细胞间的相互作用。还能使单核巨噬细胞功能受抑，分泌细胞因子的能力下降，且在创面漫润的时间延长。内皮细胞和成圩堆细胞都是创面愈合过程中的主要修复细胞，两膜表面均存在多种AGEs结合蛋白。AGEs可抑制内皮细胞增殖，并可以诱导其凋亡，而且与作用时闻及含量相关。AGEs也能抑制成纤堆细胞合成胶原的能力。生长因子对细胞趋化、增殖，细胞闻基质(ECM)的形成和血管生成有显作用，而糖基化修饰后的碱性成纤堆细胞生长因子(bFGF)促有丝分裂的活性明显降低。AGEs水平的升高可进一步削弱机体的抗感染能力。总之，糖尿病难愈创面的形成是一个多因素多环节参与的病理过程，尽管发病机制目前尚不清楚，但非酶促糖基化反应可能是其中一个重要的致病环节。     

EGF和bFGF在创伤修复中的作用和临床应用

重组人表皮生长因子(rhEGF)及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)两种重要的细胞因子,可刺激成纤维细胞分泌胶原等细胞外基质,刺激血管内皮细胞形成新生毛细血管,刺激成纤维细胞的分裂增殖,并形成创面处的新生肉芽组织.     

碱性成纤维细胞生长因子与损伤修复

人体组织损伤的修复是一个多种细胞参与,多种生长因子调控的复杂过程,其中生长因子的作用尤为关键.通过基础研究及临床应用,碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growthfactor,bFGF)促创面愈合及多种损伤修复的功能愈来愈受到重视.     

湿润生肌膏对肛瘘术后创面肉芽组织中碱性成纤维细胞生长因子mRNA表达的影响

目的探讨湿润生肌膏对肛瘘手术患者术后创面肉芽组织中碱性成纤维细胞生长因子mRNA表达的影响。方法选取2016年1月至2016年10月于该院接受手术治疗的低位单纯性肛瘘患者95例作为研究对象,随机分为观察组、对照组与凡士林组;在术后不同时期分别提取3组患者的创面组织总RNA,通过Poly A Tract(r)mRNA Isolation System系统进行分离纯化后,使用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)观察碱性成纤维细胞生长因子mRNA的表达变化,并比较不同组别患者的疗效。结果观察组术后7、14、21d的创面愈合率分别为(51.72±4.33)%、(63.85±6.26)%、(95.51±2.79)%,与对照组及凡士林组比较差异有统计学意义(P0.05);观察组痊愈29例(90.63%),显效3例(9.37%),治疗效果明显优于对照组及凡士林组患者(P0.05);术后7d时,3组患者碱性成纤维细胞生长因子mRNA阳性值最高,而观察组患者镜下血管内皮细胞、成纤维细胞与单核细胞等大量细胞的细胞质中出现碱性成纤维细胞生长因子mRNA阳性表达区域多于其他两组。结论在肛瘘术后应用湿润生肌膏治疗对创面肉芽组织中碱性成纤维细胞生长因子mRNA的表达有影响,在创口愈合的过程中,碱性成纤维细胞生长因子mRNA的阳性表达可以促进修复细胞的迁移与增殖,加速创面的修复能力。     

表皮生长因子诱导糖尿病难愈性创面成纤维细胞增殖的对照观察

目的:探讨表皮生长因子对糖尿病难愈性创面成纤维细胞增殖的影响。方法:选择2004-01/2005-12广西医科大学第一附属医院烧伤整形康复中心住院糖尿病足患者5例(糖尿病组)。平均年龄72岁;病程14年,经严格内科及换药治疗创面超过8周仍不愈合。另选同期健康志愿者7人(对照组),平均年龄74岁。实验在广西医科大学实验中心完成。将糖尿病难愈性创面及对正常对照组成纤维细胞于Dulbecco’s改良的Eagle’s培养基中培养,待细胞培养成对数生长期,分别加入浓度为0.1,0.25,0.5,0.75,1,5,10μg/L的表皮生长因子于Dulbecco’s改良的Eagle’s培养基中培养24h,与未加入表皮生长因子的成纤维细胞(空白对照组)进行比较,分别改用加有不同浓度表皮生长因子的培养液继续培养,以四甲基偶氮唑盐法测定成纤维细胞增殖活性,各孔细胞在490nm处的光吸收值(A值)越大表示细胞增殖越强。结果:在不同浓度的表皮生长因子刺激下,两组成纤维细胞的增殖活动均较未加入表皮生长因子的空白对照组有明显提高,差异具有显著性意义(P<0.05);糖尿病组最大吸光值为0.35±0.13,表皮生长因子刺激的最适浓度为0.5μg/L,对照组最大吸光值为0.58±0.07,表皮生长因子刺激的最适浓度为0.25μg/L。两组表皮生长因子刺激的最适浓度及成纤维细胞最大增殖程度差异有显著性意义(P=0.026)。结论:表皮生长因子能促进糖尿病难愈性创面成纤维细胞的增殖,但是糖尿病难愈性创面成纤维细胞对于表皮生长因子的增殖应答被削弱。     

Notch1信号通路对AGEs诱导大鼠心脏肌成纤维细胞转分化的调控

目的:探讨Notch1信号通路在糖基化终末产物诱导的大鼠心脏肌成纤维细胞转分化中的表达及其可能的调控作用。方法:体外培养SD乳鼠心脏成纤维细胞,予以200μg/ml浓度AGEs刺激、Notch信号抑制剂处理。运用CCK-8检测细胞的增殖情况;Western blot检测Notch1信号通路及肌成纤维细胞相关蛋白α号通路及的表达。结果:(1)AGEs促进心脏成纤维细胞的增殖,并呈时间依赖性(P0.05),同时Notch信号抑制剂DAPT显著抑制细胞的增殖(P0.05)。(2)AGEs刺激心脏成纤维细胞α-SMA及Notch1信号通路蛋白Notch1和Hes1的表达(P0.05)。(3)运用γ内分泌酶抑制剂DAPT抑制心脏成纤维细胞Notch1信号可下调α-SMA的表达(P0.05)。结论 :Notch1信号可能参与促进AGEs诱导的大鼠心脏成纤维的增殖及向肌成纤维细胞方向转化。     

组织工程化血管的生成及修复:大鼠血管内皮细胞增殖与碱性成纤维细胞生长因子的关系

目的:观察碱性成纤维细胞生长因子(碱性成纤维细胞生长因子)对血管内皮细胞增殖的影响及其促细胞增殖作用与原癌基因c-fos和c-myc表达之间的关系。方法:实验于2002-06/2003-02在广东医学院附属医院整形外科研究所实验室完成。在建立血管内皮细胞体外培养模型的基础上,通过氚标记胸腺嘧啶脱氧核苷参入实验,Northern印迹分析,观察碱性成纤维细胞生长因子对血管内皮细胞DNA合成及原癌基因表达的影响。结果:碱性成纤维细胞生长因子作用血管内皮细胞后16h,血管内皮细胞氚标记胸腺嘧啶脱氧核苷参入率开始明显增加(P<0.05),24h达高峰(P<0.01);碱性成纤维细胞生长因子显著诱导原癌基因c-fos和c-myc表达,其表达活性分别于1h和2h达到高峰。结论:碱性成纤维细胞生长因子是血管内皮细胞的强效有丝分裂原,其对血管内皮细胞DNA合成的促进作用与原癌基因c-fos和c-myc表达明显相关。c-fos和c-myc原癌基因表达变化参与了碱性成纤维细胞生长因子促血管内皮细胞DNA合成过程,合理调控其表达变化有增强碱性成纤维细胞生长因子促血管内皮细胞增殖的生物学效应,为碱性成纤维细胞生长因子广泛而有效地应用于组织工程血管形成和血管移植及组织修复提供强有力的理论依据。     

生肌玉红胶原海绵修复创面损伤

背景:生肌玉红胶原海绵能显著促进创面愈合。目的:观察生肌玉红胶原海绵对兔皮肤创面愈合的影响。方法:在新西兰白兔背部制造3处全层皮肤缺损创面,分别以生肌玉红胶原海绵、贝复剂(重组碱性成纤维细胞生长因子外用溶液)、生理盐水修复。观察各组创面愈合时间、创面愈合率,检测创面修复组织内成纤维细胞数、血红素氧化酶1、转化生长因子β1 mRNA与蛋白及增殖细胞核抗原蛋白表达。结果与结论:与贝复剂、生理盐水比较,生肌玉红胶原海绵可显著促进成纤维细胞增殖(P<0.05),增加创面血红素氧化酶1、转化生子因子β1及增殖细胞核抗原的表达(P<0.05),提高创面愈合率(P<0.05),缩短创面愈合时间(P<0.05)。证实生肌玉红胶原海绵能够促进创面修复,其作用机制可能是通过提高创面血红素氧化酶1、转化生长因子β1表达促进细胞增殖,增加成纤维细胞等创面修复细胞。     

组织工程化血管的生成及修复：大鼠血管内皮细胞增殖与碱性成纤维细胞生长因子的关系

目的:观察碱性成纤维细胞生长因子(碱性成纤维细胞生长因子)对血管内皮细胞增殖的影响及其促细胞增殖作用与原癌基因c-fos和c-myc表达之间的关系.方法:实验于2002-06/2003-02在广东医学院附属医院整形外科研究所实验室完成.在建立血管内皮细胞体外培养模型的基础上,通过氚标记胸腺嘧啶脱氧核苷参入实验,Northem印迹分析,观察碱性成纤维细胞生长因子对血管内皮细胞DNA合成及原癌基因表达的影响.结果:碱性成纤维细胞生长因子作用血管内皮细胞后16 h,血管内皮细胞氚标记胸腺嘧啶脱氧核苷参入率开始明显增加(P＜0.05),24 h达高峰(P＜0.01);碱性成纤维细胞生长因子显诱导原癌基因c-fos和c-myc表达,其表达活性分别于1 h和2 h达到高峰.结论:碱性成纤维细胞生长因子是血管内皮细胞的强效有丝分裂原,其对血管内皮细胞DNA合成的促进作用与原癌基因c-fos和c-myc表达明显相关.c-fos和c-myc原癌基因表达变化参与了碱性成纤维细胞生长因子促血管内皮细胞DNA合成过程,合理调控其表达变化有增强碱性成纤维细胞生长因子促血管内皮细胞增殖的生物学效应,为碱性成纤维细胞生长因子广泛而有效地应用于组织工程血管形成和血管移植及组织修复提供强有力的理论依据.     

碱性成纤维细胞生长因子对增生性瘢痕与正常皮肤成纤维细胞胶原、纤维连接蛋白表达的影响

背景:碱性成纤维细胞生长因子能促进愈合伤口产生胶原蛋白、纤维连接蛋白和基质酶的基质成分.然而,细胞增殖、细胞外基质及新生血管的形成或伤口基质重塑过程失调,会导致瘢痕组织过度增殖.目的:观察碱性成纤维细胞生长因子在正常皮肤创面愈合和增生性瘢痕形成中的作用.方法:从5例进行瘢痕修复手术患者身上同时取正常皮肤和增生性瘢痕组织,分离培养正常人皮肤成纤维细胞和增生性瘢痕成纤维细胞.应用RT-PCR和酶联免疫吸附法检测两种成纤维细胞胶原、纤维连接蛋白基因表达和蛋白合成.采用JC-1染色和流式细胞术测定成纤维细胞线粒体膜电位改变,采用化学发光法检测细胞内ATP水平改变.观察碱性成纤维细胞生长因子对两种细胞的上述指标的影响.结果与结论:不同浓度碱性成纤维细胞生长因子可减慢增生性瘢痕成纤维细胞生长,抑制增生性瘢痕成纤维细胞Ⅰ型胶原表达和合成(P<0.05).碱性成纤维细胞生长因子对正常皮肤和增生性瘢痕成纤维细胞Ⅲ型胶原表达和合成均无影响.然而可上调正常皮肤成纤维细胞表达纤维连接蛋白(P<0.05).此外,10,100 μg/L碱性成纤维细胞生长因子处理后增生性瘢痕成纤维细胞线粒体膜电位呈去极化趋势,正常皮肤成纤维细胞中ATP水平显著增高(P<0.05).结果表明,碱性成纤维细胞生长因子在正常皮肤创面愈合和增生性瘢痕形成中可能有不同的作用和机制.