急性髓系白血病中16号染色体倒位的研究现状

inv(16)是急性髓系白血病(AML)M_4Eo亚型的特异性核型异常,且预示较好的预后。inv(16)的结果是形成CBFβ-MYH11融合基因。应用RT-PCR、FISH、流式细胞术等技术可对其进行检测。部分inv(16)AML患者有MRP1基因缺失,但目前认为MRP1缺失与inv(16)AML的预后无关。     

t(11;17)(q23;q21)见于两种具有不同形态学改变和基因重排的急性白血病

急性髓系白血病(AML)大多有特异性染色体重排，它们常显示特定的形态学改变和基因重排，例如t(8；21)白血病有M2的形态学改变和AML1-ETO融合基因，t(15；17)白血病有M3的形态学改变和PML—RARα融合基因，inv(16)白血病有M4Eo的形态学改变和CBFβ-MYH11融合基因，涉及11q23的易位有M5的形态学改变和MLL基因重排。     

继续医学教育试题(4)

一、选择题1·梅毒血清学试验中的密螺旋体抗体试验之一TPPA,A·是用Reiter株螺旋体抗原包被明胶颗粒;B·是用Nichols株螺旋体包被明胶颗粒;C·是用Nichols株抗原包被明胶颗粒;D·是用Reiter株抗原包被醛化绵羊红细胞。()2·M4Eo型白血病:A·是一种急性粒细胞白血病;B·患者骨髓和外周血中嗜酸性粒细胞比例升高;C·外周血单个核细胞免疫标志CD5、CD19阳性;D·可测出CBFβ-MYH11融合基因。()3·尿脱氧吡啶啉(DPD)是用于骨质疏松症诊断的生化指标,A·DPD存在于Ⅰ型胶原纤维中;B·是反映骨吸收的指标;C·尿DPD可用竞争性酶免疫…     

实时定量RT-PCR技术测定初治白血病患者常见融合基因转录子水平及其标准化的探讨

目的 了解白血病常见融合基因M—bcr—abl（表达产物为P210^bcr-abl）、m—bcr—abl（表达产物为P190^bcr-abl）、TEL—AML1、AML1-ETO、PML—RARα、CBFβ-MYH11在初治白血病患者中的表达水平。方法 采用基于TaqMan探针的实时定量RT—PCR（RQ—PCR）技术检测195例白血病患者骨髓细胞融合基因转录子水平，其中M—bcr—abl^＋慢性粒细胞白血病慢性期（CML—CP）50例、M—bcr—abl^＋急性淋巴细胞白血病（ALL）10例、m—bcr—abl^＋ALL19例、TEL—AML1^＋ALL11例、AML1-ETO^＋急性髓系白血病（AML）30例、PML—RARα急性早幼粒细胞白血病（APL）58例、CBFβ-MYH11^＋AML患者17例，并检测13例M—bcr-abl^＋CML-CP患者的外周血细胞融合基因转录子水平。以abl作为内参基因，融合基因转录子水平以融合基因转录子拷贝数／abl基因转录子拷贝数×100％表示。结果CML—CP患者骨髓及外周血M-bcr—abl转录子水平相似（中位值分别为30％和35％，P〉0.05）、ALL患者M—bcr—abl及m-bcr-abl转录子水平相似（中位值分别为64％和54％，P〉0．05），ALL患者M—bet—abl转录子水平明显高于CML—CP患者（P〈0．001）。ALL患者TEL—AML1转录子中位水平为228％。表达特异性融合基因的AML患者中，AML1-ETO转录子水平明显高于CBFβ-MYH11及PML—RARα（中位值分别为388％，145％和47％，P值均〈0．001），CBFβ-MYH11转录子明显高于PML—RARα（P〈0．001）。L型、V型及S型PML—RARα转录子中位水平分别为45％、44％及55％，L型明显低于S型（P=0．04）。结论 不同类型融合基因转录子在初治白血病患者中的水平不同，并有个体差异。初治患者融合基因转录子水平的测定不仅为检测微量残留病、评价疗效提供基准值，而且是不同实验室间数据比较、实现标准化的基础。     

细胞形态检查在伴AML1-ETO及CBFβ-MYH11阳性急性髓系白血病中的作用

目的探讨伴AML1-ETO和伴CBFβ-MYH11阳性急性髓系白血病患者骨髓细胞形态、免疫表型、染色体核型特点及预后基因表达,以及形态对此类白血病的提示作用。方法瑞士吉姆萨染色法观察骨髓细胞形态,流式细胞术检测白血病细胞免疫表型,PCR检测白血病43种融合基因,G显带法观察染色体核型,一代测序毛细管电泳法方法检测髓系预后基因。结果伴AML1-ETO阳性的患者6例(37.5%)以原始粒细胞增多为主,8例(50%)以核浆发育不平衡的异常中幼粒细胞增多为主,2例(12.5%)以原始、幼稚单核细胞增生为主;伴CBFβ-MYH11阳性6例(85%)以原始、幼稚单核细胞、原始粒细胞及异常嗜酸性粒细胞增生为主,1例以原始、幼稚单核细胞增生,未见异常嗜酸性粒细胞增多。结论AML1-ETO和CBFβ-MYH11阳性形态发现率分别为87.5%和86%,提示分子生物学检查在急性髓系白血病诊断中具有不可替代的作用。     

急性髓系白血病中16号染色体倒位的研究现状

inv（16）是急性髓系白血病（AML）M4Eo亚型的特异性核型异常，且预示较好的预后。inv（16）的结果是形成CBFβ－MYH11融合基因。应用RT－PCR、FISH、流式细胞术等技术可对其进行检测。部分inv（16）AML患者有MRP1基因缺失、但目前认为MRP1缺失与inv（16）AML的预后无关。     

AML-1/ETO基因相关的AML-M2型白血病免疫表型分析

本研究探讨AML/ETO基因重排的FAB分型为AML-M2患者的骨髓免疫表型的特征和预测性,以及与急性早幼粒白血病（APL）的区别。应用流式细胞术分析17例经荧光原位杂交（FISH）检测AML-1/ETO融合基因阳性、FAB分型为AML-M2（M2/ETO＋）患者骨髓的免疫表型,并与34例AML-1/ETO阴性、FAB分型AML-M3、临床诊断为APL患者进行了比较。结果发现,17例M2/ETO＋患者骨髓中均可见一群（15.89%-68.53%）原始细胞和一群SSC较高异质性的粒细胞。原始细胞表达干细胞相关抗原CD34、HLA-DR和髓系抗原CD33、CD13、MPO。在M2/ETO＋患者中CD33表达强度显著低于APL患者（P〈0.001）,HLA-DR、CD19和CD34＋CD56＋共表达的阳性率均显著高于APL患者（P〈0.001）,而CD9的表达率则显著低于APL患者（P〈0.001）。M2/ETO＋患者粒细胞表达分化的髓系抗原CD11b和CD15,并可分为CD15＋CD11b-和CD15＋CD11b＋两群,而成熟的粒细胞标志CD10均为阴性,与早幼粒细胞的表达图形相似。17例（100%）M2/ETO＋患者的粒细胞均表达CD56,显著高于M3患者（6/34例,17.56%）。结论：AML-1/ETO基因重排的AML-M2型（FAB分型）白血病具有独特的免疫表型,对其基因重排有较高的预测性。应用多参数免疫分型技术可较容易地将M2/ETO＋亚型白血病与APL鉴别。     

13例inv(16)/t(16;16)急性髓细胞白血病患者临床及实验室结果分析

目的初步分析inv(16)/t(16;16)急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者的临床特征和实验室结果,从而对AML分型诊断和治疗干预提供指导。方法回顾性分析13例初诊AML伴inv(16)/t(16;16)患者的临床特点及实验室结果。结果 13例经RT-PCR方法确诊为CBFβ-MYH11阳性AML患者,临床上多有肝脾肿大、齿龈增生等浸润特征,血常规提示白细胞异常升高伴原始细胞明显增多。FAB分型结果为M4或M5型,免疫分型提示原始细胞高表达CD34及CD117等早期抗原,同时髓系抗原CD33、CD13、MPO等高表达并向单核系分化,其中有3例患者CD34、CD14双阳性细胞伴有CD2表达。除2例患者拒绝化疗要求出院以外,所有患者第一疗程化疗后均达完全缓解,中大剂量阿糖胞苷巩固化疗,且化疗疗效好。结论 inv(16)/t(16;16)AML预后好,但传统的染色体核型分析具有局限性,根据临床特点及免疫分型特征,在RT-PCR检测结果的基础上,尚需进一步增加荧光原位杂交(FISH)等检测,有助于排除RTPCR假阳性和假阴性结果,从而为临床实施个体化治疗方案提供依据。     

m-bcr／abl融合基因型慢性粒细胞性白血病临床和实验室研究

目的研究2例表达m型（ela2）bcr／abl融合基因慢性期慢性粒细胞性白血病（CML-CP）患者的临床及实验室特征。方法患者骨髓细胞分别用R带技术进行染色体核型分析．流式细胞术进行免疫分型，RT-PCR进行bcr／abl融合基因检测，治疗采用羟基脲、阿糖胞苷或羟基脲、HA（高三尖杉酯硷，阿糖胞苷）及干扰素方案。结果2例患者染色体核型均为：46，XY，t（9,22）（q34；q11）；免疫分型：CD13、CD15、CD33阳性．其中例2同时表达CD10抗原（34．35％）：RT-PCR分析例1初诊时M型bcr／abl融合基因阳性（b3a21，治疗后M型bcr／abl转阴而m型bcr／abl（ela2）阳性，例2初诊时即为M型bcr／abl融合基因阴性而in型bcr/abl（ela21阳性：两例患者骨髓像及临床均表现为慢性期．但例2外周血白细胞计数增高不显著（15～47×10^9／L），脾脏不肿大。结论 m-bcr／ablCML是罕见的CML分子亚型。具独特的临床和实验室特征，其发现对于临床诊断和生物学研究具有重要的意义。     

m-bcr/abl融合基因型慢性粒细胞性白血病临床和实验室研究

目的研究2例表达m型（ela2）bcr／abl融合基因慢性期慢性粒细胞性白血病（CML-CP）患者的临床及实验室特征。方法患者骨髓细胞分别用R带技术进行染色体核型分析．流式细胞术进行免疫分型，RT-PCR进行bcr／abl融合基因检测，治疗采用羟基脲、阿糖胞苷或羟基脲、HA（高三尖杉酯硷，阿糖胞苷）及干扰素方案。结果2例患者染色体核型均为：46，XY，t（9,22）（q34；q11）；免疫分型：CD13、CD15、CD33阳性．其中例2同时表达CD10抗原（34．35％）：RT-PCR分析例1初诊时M型bcr／abl融合基因阳性（b3a21，治疗后M型bcr／abl转阴而m型bcr／abl（ela2）阳性，例2初诊时即为M型bcr／abl融合基因阴性而in型bcr/abl（ela21阳性：两例患者骨髓像及临床均表现为慢性期．但例2外周血白细胞计数增高不显著（15～47×10^9／L），脾脏不肿大。结论 m-bcr／ablCML是罕见的CML分子亚型。具独特的临床和实验室特征，其发现对于临床诊断和生物学研究具有重要的意义。     

伴AML-1/ETO融合基因的急性髓细胞白血病M2型患者骨髓的多参数免疫表型特征

目的探讨伴AML-1／ETO基因重排的急性髓细胞白血病M2型（AML-M2）患者骨髓的多参数免疫表型特征及多参数免疫表型检测对此亚型的预测性。方法应用多参数流式细胞术分析30例经荧光原位杂交（FISH）检测AML-1／ETO融合基因阳性，FAB分型为AML-M2（简称M2／ETO^＋）患者骨髓的免疫表型，并与36例FAB分型为AML-M2、AML-1／ETO融合基因检测为阴性（简称M2／ETO^-）和34例FAB分型为AML-M2（急性早幼粒细胞白血病，APL）患者的免疫表型进行比较。结果30例M2／ETO^＋患者骨髓中均可见一群原始细胞（15．89％～68．53％）和一群侧向散射（SSC）较高异质性、分化的粒细胞。原始细胞表达干细胞相关抗原CD34、HLA-DR和髓系抗原CD33、CD13、MPO，并显示特异的抗原表达模式。在M2／ETO^＋患者中CD33表达的平均荧光强度显著低于M2／ETO^-和APL患者（MFI分别为98±75、244±184和845±523，P均〈0．01），CD19（90．0％）和CD34^＋CD56^＋（100％）共表达的阳性率均显著高于M2／ETO^-（11．11％，25．0％）和APL患者（8．82％，0％），P均〈0．01，与APL比较CD9^＋MPO^＋的共表达率显著降低（0％vs．93．75％），而HLA-DR表达则显著升高（100％vs．27．27％）。M2／ETO^＋患者粒细胞表达分化的髓系抗原CD11b和CD15，并可分为CD15^＋CD11b^-和CD15^＋CD11b^＋两群，而成熟的粒细胞标志CD10均为阴性，并且81．48％M2／ETO^＋患者的粒细胞表达CD56，显著高于M2／ETO^-患者（22．22％）和APL患者（17．56％）。结论伴AML-1／ETO基因重排的AML—M2型白血病具有独特的免疫表型，对其基因重排有较高的预测性。应用多参数免疫分型技术可较容易地将M2／ETO^＋亚型白血病与APL鉴别。     

四色流式细胞术检测急性B淋巴细胞白血病残留细胞

目的探讨利用多参数流式细胞术检测急性B淋巴细胞白血病(BALL)残留细胞的方法和意义。方法采用四色流式细胞术,以4～6组四色抗体组合检测213例BALL患者免疫分型;以CD34、CD10、CD45、CD19为主的2种四色荧光标记抗体组合监测50例297份BALL患者骨髓标本微量残留白血病细胞,同时检测分析26份化疗后处于再生期骨髓标本中B祖细胞的免疫表型特点,并以相对定量方法比较了再生期B祖细胞与B系白血病细胞CD10、CD19和CD34表达量的差异。结果213例BALL患者中,71.8%患者存在CD45、CD34、CD19、CD10表达量的异常,只存在CD38弱阳性及髓系标志患者占8.1%。微量残留白血病细胞监测的50例患者中,12例患者存在0.06%～7.73%的白血病细胞,其中11例残留白血病细胞以CD45、CD34、CD19、CD10异常表达为主。50例患者中5例临床复发,4例在复发前7～17周微量残留病(MRD)检测阳性,且均>0.1%,1例MRD检测阴性。再生期B祖细胞依据CD45、CD34、CD19、CD10、CD22和CD20表达不同可分为3期。结论多参数流式细胞术检测MRD具有快速、敏感可定量的优势,对白血病复发有更强的预测性。     

免疫分型在单核细胞相关性急性髓细胞性白血病(M4/M5)鉴别诊断中的应用

目的探讨CD14、CD11b、CD64、CD4在鉴别诊断单核细胞相关性急性髓细胞性白血病(AML)(M4/M5)中的应用评价。方法采用流式细胞术分析420例急性髓细胞性白血病患者骨髓或外周血标本的免疫表型。结果在单核细胞相关性AML(M4/M5)中CD14、CD11b、CD64和CD4的表达率依次为45.4%、46.1%、83.0%和62.4%。与非单核细胞相关性急性髓细胞性白血病相比表达率高,差异有统计学意义(P<0.01)。其中CD14、CD11b特异性高(100%和91.8%),CD64敏感性高(83.0%)。结论 CD14、CD11b、CD64、CD4有助于M4/M5与其他AML各亚型的鉴别诊断。     

244例髓细胞白血病FAB分型与WHO分型关系及其意义

目的对244例髓细胞白血病[急性原粒细胞白血病部分分化型（M2b）、急性早幼粒粒细胞白血病（M3）、急性粒一单核细胞白血病伴嗜酸粒细胞增多亚型（M4EO）、慢性粒细胞白血病（CML）]患者血液学及临床特征进行分析。方法以细胞形态学为基础，结合细胞遗传学、分子生物学和分子基因学检查方法检测患者标本。结果细胞形态学特征：M2b异常中幼粒细胞，M3异常早幼粒细胞，M4EO异常嗜酸粒细胞，CML粒系细胞。染色体检测表明：M2b、M3、M4EO、CML分别与各自特异性染色体t（8；21）（q22；q22）、t（15；17）（q22；q21）、inv（16）（p13；q22）、t（9；22）（q34；q11）密切相关。融合基因检测表明：M2b、M3、M4EO、CML分别与融合基因AML-ETO、PML-RARα、CBFβ-MYH11、BCR-ABL密切相关。结论M2b、M3、M4EO、CML4种白血病患者不论在临床特点上，还是细胞形态学上都有各自一定的特征。4种白血病分别与特定的染色体具有一定的相关性。4种白血病分别与特定融合基因具有一定的相关性。特定的染色体和融合基因可作为白血病的标志物，对白血病的诊断、预后估计、监测治疗和微小残留白血病等方面具有一定的价值。世界卫生组织（WHO）分型有利于白血病的诊断和治疗。     

双重t(8;21)易位为特征的近四倍体克隆急性髓细胞性白血病一例

目的报道1例以CD7+和双重t(8;21)易位为特征的近四倍体克隆急性髓细胞性白血病(AML).方法本例AML患者骨髓细胞分别用R带技术进行染色体核型分析,流式细胞术进行免疫分型和细胞倍体分析,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)进行AML1-ETO融合基因检测.结果染色体核型分析46,xx,t(8;21)/80-81,xxx,-x,-1,-2,-3,t(3;5)(q29;q31),-4,-5,-7,t(8;21)×2,-9,-16,-17,-18,-19;免疫分型CD7、CD13、CD33、HLA-DR、CD34阳性;细胞倍体显示双峰状(DI=2.05);RT-PCR分析AML1-ETO融合基因阳性;化疗后未获缓解,生存期4个月.结论四倍体克隆与M2/t(8;21)白血病有密切的联系且为其继发性改变,免疫表型表现为异质性,通常预后差,其可能为M2/t(8;21)的一个特殊亚型.     

荧光原位杂交技术在急性粒-单核细胞白血病inv(16)检测中的应用研究

为了探讨荧光原位杂交(FISH)技术检测inv(16)(p13q22)，在急性粒．单核细胞白血病临床诊断和预后判断中的意义，采用MYH11探针，包括双重标记序列，对6例形态学诊断为急性粒．单核细胞白血病的骨髓细胞中期染色体进行CBFβ-MYH11融合基因的检测，并与经典细胞遗传学比较。结果表明：G显带核型分析发现4例inv(16)(2例M4Eo和2例M4)，其中1例M4同时伴有22三体( 22)，1例为M4CR8个月后复发同时伴亚2倍体核型。FISH检测6例均显示inv(16)异常荧光信号，其中例2除inv(16)外还同时发现16p13缺失的红色荧光信号。结论：FISH检测inv(16)的敏感性高，特异性强，是细胞遗传学检查的重要补充，对M4的临床诊断，预后判断具有重要的临床价值。     

244例髓细胞白血病FAB分型与WHO分型关系及其意义

目的对244例髓细胞白血病[急性原粒细胞白血病部分分化型(M2b)、急性早幼粒粒细胞白血病(M3)、急性粒-单核细胞白血病伴嗜酸粒细胞增多亚型(M4EO)、慢性粒细胞白血病(CML)]患者血液学及临床特征进行分析。方法以细胞形态学为基础,结合细胞遗传学、分子生物学和分子基因学检查方法检测患者标本。结果细胞形态学特征:M2b异常中幼粒细胞,M3异常早幼粒细胞,M4EO异常嗜酸粒细胞,CML粒系细胞。染色体检测表明:M2b、M3、M4EO、CML分别与各自特异性染色体t(8;21)(q22;q22)、t(15;17)(q22;q21)、inv(16)(p13;q22)、t(9;22)(q34;q11)密切相关。融合基因检测表明:M2b、M3、M4EO、CML分别与融合基因AML1-ETO、PML-RARα、CBFβ-MYH11、BCR-ABL密切相关。结论M2b、M3、M4EO、CML4种白血病患者不论在临床特点上,还是细胞形态学上都有各自一定的特征。4种白血病分别与特定的染色体具有一定的相关性。4种白血病分别与特定融合基因具有一定的相关性。特定的染色体和融合基因可作为白血病的标志物,对白血病的诊断、预后估计、监测治疗和微小残留白血病等方面具有一定的价值。世界卫生组织(WHO)分型有利于白血病的诊断和治疗。     

免疫分型用于68例急性白血病的分型

要为了评价免疫分型在急性白血病（AL）分型中的科学意义，应用形态学分型、直接免疫荧光标记流式细胞仪检测免疫分型对68例AL进行了分析。结果表明：形态学与免疫学检查符合率为94．1％，有4例形态学误诊被免疫分型纠正；髓系中较特异抗原为CD13、CD33，AML—M3多为CD34低表达，HLA—DR阴性，AML—M4、M5易有CDl4表达，髓系中易见淋系相关抗原表达，常见为CD7；淋系中亦可合并髓系抗原表达。结论：免疫分型可提高AL的诊断分型准确性，特殊类型AL如急性未分化性白血病（AUL）、AML—M0等的诊断必须依赖免疫分型，     

CD66c在成人急性白血病细胞上的表达及意义

目的探讨CD66c及其基因CEACAM6在成人急性白血病细胞上的表达及意义.方法体外培养HL-60、K562、LCL721.221和Jurkat等急性白血病细胞,RT-PCR检测急性白血病患者骨髓细胞和白血病细胞中CEACAM6 mRNA的表达,并用多参数流式细胞术检测白血病细胞及白血病患者骨髓细胞CD66c分子的表达.同时对199例白血病患者骨髓细胞作细胞遗传学分析,并对25例CD66c阳性急性B淋巴细胞白血病（B-ALL）患者进行白血病微量残留病（MRD）分析.结果①HL-60、K562、LCL721.221和Jurkat细胞的细胞膜和细胞质CD66c均阴性.②127例急性髓系白血病（AML）患者中4例CD66c阳性（3.15%）,以M2、M4为主;79例ALL中CD66c阳性28例（35.44%）,均为B-ALL;CD66c只在common B-ALL（54例中有20例）和pre B-ALL（11例中有8例）亚型表达,8例Ph＋B-ALL患者CD66c均阳性.③MRD阳性与阴性组患者比较,6个月内复发率差异有统计学意义（维持治疗14周时MRD阳性者8例,其中6例复发;MRD阴性者17例,其中2例复发）.④CEACAM6 mRNA在CD66c阳性B-ALL细胞强表达,在HL-60细胞呈弱表达,在K562、LCL721.221和Jurkat细胞不表达.结论CD66c在ALL中阳性表达是白血病MRD检测的标志之一.CD66c抗原表达与CEACAM6 mRNA的表达高度相关.     

CD7在急性白血病中的表达及临床意义的探讨

目的　探讨CD7在急性白血病中的表达及临床意义。方法　采用流式细胞术微量全血直接标记法测定32例急性白血病患者细胞表面抗原,分析 CD7 分子在其中的表达。结果　CD7分子在急性淋巴细胞性白血病(ALL)和急性髓细胞性白血病(AML)均可表达,两者阳性数无显著性差异(P<0.01);20例AML中有5例可见CD7 、CD34共表达,主要分布于M0、M1、M4和 M5;CD7阳性AML、CD7阳性ALL的外周血白细胞数均高于CD7阴性AML和CD7阴性ALL (P<0.01)。结论　CD7在AML 、ALL中均可表达,对CD7阳性AML应结合CD34、CD79a等指标综合考虑。