溃疡性结肠炎大鼠肺组织中Sirt1的表达及其与氧化应激和炎症反应的影响

目的探讨溃疡性结肠炎大鼠致肺损伤的病理机制中Sirt1的作用及其与氧化应激和炎症反应的关系。方法采用结肠黏膜组织致敏加三硝基苯磺酸(TNBS)-50%乙醇灌肠的方法建立大鼠UC模型,48只Wistar雄性大鼠,随机分为正常组与模型组,每组各24只,每个观察时间点正常组与模型组各8只。于造模后第0、2、4周动态观察肺、结肠组织病理形态学改变,Western bolt检测肺组织中Sirt1的表达,Elisa法检测肺组织中谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、TNF-α、IL-6和IL-10浓度。结果造模第2、4周时,模型组肺组织发生病理改变,增加了氧化应激及炎症反应,Sirt1表达降低。结论肺组织中Sirt1低表达与氧化应激反应和炎症损伤密切相关,其可能是UC肺损伤的分子机制之一。     

Caspase-1介导的细胞焦亡对脑出血大鼠神经损伤的影响

目的:观察胱天蛋白酶1(caspase-1)介导的细胞焦亡对脑出血大鼠神经损伤的影响。方法:(130只成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、脑出血12 h组、脑出血24 h组、脑出血48 h组和脑出血72 h组,每组6只。在大鼠右侧纹状体注射自体非抗凝血建立脑出血模型。采用Western blot方法检测患侧纹状体内caspase-1和细胞焦亡执行蛋白gasdermin D(GSDMD)的表达及活化情况。(2)54只成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、脑出血组和Ac-YVAD-CMK(caspase-1选择性抑制剂)给药组,每组18只。侧脑室注射Ac-YVAD-CMK 20 min后,建立脑出血模型。采用前肢放置实验、转角实验和改良神经功能缺损评分观察脑出血大鼠的神经功能变化;采用HE染色、干湿比重法和Fluoro-Jade C(FJC)染色观察神经损伤情况;采用Western blot法检测caspase-1、GSDMD、白细胞介素1β(IL-1β)和IL-18的表达;采用免疫荧光双标及免疫荧光和TUNEL共染色的方法,观察神经元和小胶质细胞焦亡情况。结果:与脑出血组比较,Ac-YVAD-CMK给药组大鼠的神经功能显著改善(P0.05),神经细胞肿胀减轻,固缩坏死细胞数量减少,病灶侧基底脑组织水肿明显缓解(P0.05),FJC染色阳性细胞的数量显著减少(P0.05),caspase-1和GSDMD的活化片段及IL-1β和IL-18蛋白表达水平均显著下降(P0.05),GSDMD和TUNEL阳性小胶质细胞数量显著减少(P0.05)。结论:抑制caspase-1介导的细胞焦亡可以减轻脑出血大鼠的神经损伤。     

米屈肼对心衰大鼠心肌细胞凋亡和心脏射血功能的影响及可能机制

目的 探讨米屈肼(THP)是否通过调控沉默信息调节因子2相关酶1(Sirt1)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路抑制充血性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡及改善心脏射血功能。方法 将60只清洁级SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、米屈肼组以及卡托普利组，每组15只。建模成功后，超声心动图检测各组大鼠心功能；HE染色观察各组大鼠心脏组织结构；TUNEL法检测各组大鼠心肌凋亡；Western blot与RT-PCR方法检测各组大鼠心肌组织内Sirt1、NF-κB蛋白与mRNA的表达；酶联免疫吸附法检测各组大鼠血清IL-6、TNF-α水平。结果 米屈肼能够上调心力衰竭模型大鼠心脏EF、FS水平、减轻心肌细胞水肿与炎性细胞浸润程度、降低心肌细胞凋亡指数、血清IL-6以及TNF-α水平。米屈肼能够上调心力衰竭模型大鼠心肌组织Sirt1蛋白与mRNA的表达水平，下调NF-κB蛋白与mRNA的表达水平。结论 米屈肼可能通过上调SIRT1/NF-κB信号通路抑制充血性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡、改善心脏射血功能。     

PARP-1抑制剂通过激活SIRT1-PGC-1α轴减轻慢性阻塞性肺疾病大鼠的炎症和氧化应激反应

目的：通过构建慢性阻塞性肺疾病（COPD）大鼠实验模型，探讨聚二磷酸腺苷核糖聚合酶-1(PARP-1)抑制剂是否通过调控沉默信息调节因子相关酶1(SIRT1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)减轻COPD大鼠的炎症和氧化应激反应，探究SIRT1-PGC-1α轴作为PARP-1抑制剂作用新靶点的可能性。方法：将48只SD大鼠随机选取12只作为健康组，剩余大鼠构建COPD实验模型，将造模成功的大鼠随机分为模型组、PARP-1抑制剂处理组、PARP-1抑制剂+PGC-1α抑制剂组，HE染色观察肺组织病理形态变化，ELISA检测大鼠肺组织TNF-α、IL-6、IL-1β、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）水平，荧光定量PCR法检测各组大鼠SIRT1、PGC-1α mRNA表达水平，Western blot检测SIRT1、PGC-1α蛋白表达。结果：健康组大鼠肺组织结构完整，与健康组相比，模型组大鼠肺组织产生结构损伤，有大量炎症细胞浸润，肺泡灌洗液中TNF-α、IL-1β、IL-6含量均显著升高，血清中MDA含量显著升高，SOD含量显著降低，SIRT1、PGC-...     

下调miR-217 抑制类风湿性关节炎患者外周血单个核细胞炎症反应的实验研究

目的:探讨下调miR-217表达对类风湿性关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMC)炎症反应的影响及作用机制。方法:分离培养RA患者PBMC细胞,脂多糖(LPS)诱导PBMC细胞24 h,ELISA法检测炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10的表达,qRT-PCR检测miR-217和Sirt1 mRNA表达,Western blot检测Sirt1蛋白表达。分别转染anti-miR-217和pcDNA3.1-Sirt1至PBMC细胞,构建miR-217低表达、Sirt1过表达的PBMC细胞,ELISA法检测PBMC细胞分泌TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10的变化。双荧光素酶报告基因验证miR-217与Sirt1的关系。结果:LPS诱导PBMC细胞24 h后,TNF-α、IL-1β和IL-6水平升高,IL-10水平降低。miR-217在LPS诱导的PBMC细胞中表达上调,Sirt1 mRNA和蛋白表达下调。下调miR-217表达或上调Sirt1表达均可抑制PBMC细胞TNF-α、IL-1β和IL-6表达,促进IL-10表达。miR-217在PBMC细胞中负向调控Sirt1表达,上调miR-217表达抑制了Sirt1过表达对LPS诱导的PBMC细胞中炎症因子表达的影响。结论:下调miR-217可能通过负向调控Sirt1表达抑制RA患者PBMC细胞炎症反应,可作为治疗RA的新靶点。     

WPY对重症急性胰腺炎大鼠肺内IL-1βmRNA表达的影响

目的：观察中药WPY对重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)肺组织内IL-1βmRNA表达的影响。方法：SD大鼠48只随机分为4组，正常对照组、SAP模型组、WPY高，低剂量治疗组。采用牛磺胆酸钠胰腺被膜下注射诱导大鼠SAP模型，分别于术后3、6、12小时检测血清淀粉酶，半定量RT-PCR检测肺组织IL-1βmRNA的表达。结果：造模组血清淀粉酶显著升高，WPY治疗后血清淀粉酶显著下降；正常对照组、造模组和治疗组肺组织均可见IL-1β的表达，造模组较正常对照组表达高，且随时间3、6、12h变化肺组织内IL-1β表达呈递增趋势，用WPY后，随着药物剂量增加IL-1β表达呈递减趋势。结论：中药WPY可以降低大鼠急性胰腺炎早期3，6，12h血清淀粉酶和肺内IL-1βmRNA的表达，从而提示WPY可以减轻细胞因子介导的全身炎症反应。     

游泳运动通过Sirt1信号减轻小鼠心肌梗死后心脏病理性重塑

目的：探讨游泳运动(Sw)调控沉默信息调节因子1(Sirt1)信号减轻小鼠心肌梗死(MI)后心脏病理性重塑的作用。方法：采用冠状动脉左前降支结扎制备小鼠MI模型，随机分为4组：假手术组、MI组、MI+Sw组和MI+Sw+EX527 (Sirt1抑制剂)组。游泳运动采用无负重游泳9周，检测左室内压最大上升和下降速率(±dp/dt_max),HE和Masson染色观察心肌结构和纤维化程度，TUNEL染色检测细胞凋亡率，RT-qPCR检测炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA水平，Western blot检测cleaved caspase-3、Bcl-2、Bax、Sirt1、Ac-NF-κB和NF-κB蛋白水平。结果：与假手术组相比，MI组±dp/dt_max显著降低(P<0.01)，心肌纤维排列紊乱、断裂，纤维化程度、TUNEL阳性细胞数以及TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA水平均显著增加(P<0.01)，同时，cleaved caspase-3、Bax和Ac-NF-κB的表达增加，Bcl-2和Sirt1表达降低(P&...     

青藤碱对大鼠心脏移植排斥反应期间ICAM-1和IL-2的影响

目的：观察大鼠同种异位心脏移植排斥反应期间的病理特征，探讨青藤碱对大鼠心脏移植排斥反应的影响及其发生机制。方法：SD健康大鼠为供体，Wistar大鼠为受体，建立大鼠异位心脏移植模型。实验分4组：A组为健康SD大鼠心脏作对照组，B组为SD大鼠到SD大鼠的同基因移植组，C组为SD大鼠到Wistar大鼠异基因移植组，D组为清藤碱治疗组。以ELISA、免疫组织化学检测移植心组织中IL-2和ICAM-1的表达。结果：A、B组未见排斥反应发生，心脏组织中的ICAM-1和IL-2表达水平很低；C组有明显的炎症反应并见大量淋巴细胞浸润，组织中ICAM-1和IL-2的表达水平明显升高（P〈0．05）；D组炎症反应有所减轻，同时少有淋巴细胞浸润；组织仅微弱表达ICAM-1和IL-2。结论：移植心脏ICAM-1和IL-2的表达水平与排斥反应的发生和发展有关，青藤碱能显著抑制移植心ICAM-1和IL-2的表达和淋巴细胞的浸润，减轻排斥反应，明显延长移植物的存活。     

Purmorphamine对帕金森病炎症细胞模型的影响及其作用机制

为探讨Shh信号通路激活剂,2,6,9-三取代嘌呤化合物(Purmorphamine,PM)对帕金森病炎症细胞模型中炎症因子TNF-α,IL-1β和Peli1等的表达,以及对PC12细胞的影响及其作用机制,本研究应用MTT法和实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,Q-PCR)技术分别检测了细胞活性和相关基因的表达。结果显示:(1)MTT法检测结果显示:与对照组细胞相比,脂多糖(LPS)组、PM组和二甲基亚砜(DMSO)组BV2细胞的存活率无明显差异(P0.05);而与LPS组相比,PM+LPS组PC12细胞的存活率显著升高(P0.01)。2)Q-PCR实验结果显示:与对照组相比,LPS-24 h组TNF-α、IL-1β、Peli1的表达显著升高,LPS-4 h组Smo和Gli1的表达显著升高,而LPS-24 h组TRAF3表达显著下降(P0.01);与对照组相比,PM-24 h组的Smo、Gli1表达显著升高(P0.01);与LPS组相比,PM+LPS组BV2细胞TRAF3的表达显著升高,而炎症因子TNF-α,IL-1β,Peli1的表达显著下降(P0.01)。由此我们推测:PM可提高炎症因子作用下PC12细胞的存活率,其作用机制可能与增加TRAF3的表达有关。     

白藜芦醇通过SIRT1减轻蛛网膜下腔出血大鼠神经系统炎症反应

目的:白藜芦醇(RSV)对蛛网膜下腔出血(SAH)大鼠神经系统沉默信息调节因子同源蛋白1(SIRT1)的表达及炎症反应的影响。方法:48只成年雄性SD大鼠分为对照组(Control)、蛛网膜下腔出血组(SAH)、RSV治疗组(RSV)和RSV联合组SIRT1抑制剂EX 527处理组(RSV+EX 527),利用自身血液注射法制备SAH大鼠模型,神经功能缺损评分检测大鼠神经功能变化,Western Blot检测SIRT1表达水平变化,免疫荧光染色观察小胶质细胞表面标记CD11b的表达变化,利用ELISA检测神经系统炎性细胞因子TNF-α和IL-1β变化。结果:与正常对照组相比,SAH大鼠神经功能受损明显(P 0. 05),中枢神经系统SIRT1表达降低(P 0. 05),小胶质细胞活化明显(P 0. 05),TNF-α和IL-1β均显著升高(P 0. 05);经过RSV治疗后,与SAH大鼠相比,治疗组大鼠神经功能明显得到改善(P 0. 05),神经系统SIRT1表达增加(P 0. 05),小胶质细胞活化受到抑制(P 0. 05),炎性细胞因子TNF-α和IL-1β水平下降(P 0. 05);使用EX 527处理后,RSV的神经保护作用受到抑制,表现为SAH大鼠神经功能恢复不明显,中枢神经系统小胶质细胞持续活化,细胞因子TNF-α和IL-1β水平维持在较高水平。结论:RSV通过促进SIRT1表达抑制炎症反应发挥对SAH大鼠中枢神经系保护作用。     

二丁酰环磷酰苷和氨茶碱对PC12细胞缺氧葡萄糖剥夺保护作用初探

目的探讨二丁酰环磷酰苷（db—cAMP）和氨茶碱分别作用以及联合用药对缺氧葡萄糖剥夺（oxygen—glueose deprivation,OGD）条件下大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤（PC12）细胞活性和凋亡的影响。方法采用OGD方法建立体外培养的PC12细胞缺氧缺血模型。将PC12细胞分为正常对照组和OGD组,OGD组又分为未用药组,氨茶碱组,db—cAMP组和联合用药组（氨茶碱和db—cAMP）。用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法观察不同药物和不同加药时间（0h,1h,2h,4h,8h,16h）对OGD后PC12细胞活性影响;用Hoechst33342荧光染料测定细胞凋亡。结果经OGD4h后,OGD组与正常组相比细胞活性降低和凋亡率增加（P〈0．05）,db—cAMP 1×10^-4μmol／L组与未用药组相比细胞活性增高,凋亡率减低（P〈0．05）;氨茶碱5×10^-2μg／L组与未用药组相比细胞活性和凋亡率无明显差别（P〉0．05）;3×10^-2μg／L氨茶碱和1×10^-5μmol／L的db—cAMP联合用药组与未用药组相比细胞活性增高,凋亡率减低（P〈0．05）;联合用药组与1×10^-4μmol／L的db—cAMP组相比细胞活性和凋亡率无明显差异（P〉0．05）;OGD损伤后4h内加药组较未用药组细胞活性明显增加（P〈0．05）,8h以后加药组与1h和2h加药组相比活性明显降低（P〈0．05）。结论提示db—cAMP对缺氧缺血损伤有保护作用,氨茶碱和db—cAMP两药联合使用有协同作用,OGD损伤后4h内给药可提高细胞活性,其中1—2h内给药效果最好。     

甲基莲心碱通过调控miR-29a-3p/AQP4表达抑制Aβ1-42致PC12细胞的损伤

目的探讨甲基莲心碱(Nef)在β淀粉样蛋白(Aβ1-42)损伤大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤细胞PC12的作用及其分子机制。方法将PC12细胞分为对照组、模型组(4μg/mL Aβ1-42培养24 h)和干预组(低、中、高剂量甲基莲心碱)。MTT法检测PC12细胞存活;流式细胞计量术检测细胞凋亡;Western blot检测水通道蛋白4(AQP4)、Bcl-2和Bax表达量;qPCR检测细胞中miR-29a-3p和AQP4 mRNA表达。生物学信息预测和双荧光素酶基因报告分析miR-29a-3p和AQP4的靶向关系。在模型组转染miR-29a-3p、si-AQP4,或转染anti-miR-29a-3p并进行高剂量Nef干预,考察其对Aβ1-42损伤PC12细胞存活和凋亡的影响。结果与模型组相比,甲基莲心碱组细胞存活率和Bcl-2、miR-29a-3p表达明显升高,细胞凋亡率和Bax、AQP4 mRNA和蛋白表达明显降低(P<0.05)。AQP4是miR-29a-3p的靶基因。miR-29a-3p过表达和抑制AQP4表达均显著提高PC12细胞存活率和Bcl-2表达量(P<0.05),降低细胞凋亡率和Bax蛋白水平(P<0.05)。抑制miR-29a-3p表达逆转甲基莲心碱对Aβ1-42损伤PC12细胞存活、Bcl-2蛋白水平的促进作用,以及逆转甲基莲心碱对细胞凋亡率、Bax蛋白表达的抑制作用。结论甲基莲心碱通过miR-29a-3p/AQP4抑制Aβ1-42所致PC12细胞损伤,促进细胞存活,并抑制细胞凋亡。     

自噬参与低氧预处理抗PC12细胞糖氧剥夺损伤过程

目的:观察低氧预处理(HPC)对氧糖剥夺(OGD)损伤的PC12细胞的作用,同时探讨自噬在其中的作用。方法:培养的PC12细胞按照处理因素分为6组:对照组、HPC模型组、3-甲基腺嘌呤(3-MA)组、低氧预处理后氧糖剥夺(HPC+OGD)组、3-甲基腺嘌呤预处理后行低氧预处理及氧糖剥夺(3-MA+HPC+OGD)组和OGD组。CCK-8检测细胞存活率;caspase-3活性检测试剂盒检测酶活性;TUNEL染色和流式细胞术检测细胞凋亡的情况;Western blot法检测自噬相关蛋白LC3、beclin-1和凋亡相关蛋白caspase-3的表达。结果:与对照组相比,OGD组细胞存活率明显降低;与3-MA+HPC+OGD组及OGD组相比,HPC+OGD组细胞存活率明显升高(P0.05)。与对照组相比,OGD组细胞的caspase-3酶活性明显升高;与3-MA+HPC+OGD组及OGD组相比,HPC+OGD组的caspase-3酶活性明显降低(P0.05)。与对照组相比OGD组细胞凋亡明显增多;HPC+OGD组与OGD组相比凋亡明显减少(P0.05)。此外,与对照组相比,OGD组的激活型caspase-3蛋白水平明显升高(P0.05);且HPC+OGD组与OGD组相比激活型caspase-3蛋白水平明显减少而LC3、beclin-1的蛋白水平明显升高(P0.05)。结论:HPC抗OGD损伤的机制可能与其激活细胞自噬有关。     

促红细胞生成素对急性肾损伤大鼠肾小管细胞凋亡和p-MAPKAPK-2表达的影响*

目的：探讨促红细胞生成素（EPO）对急性肾损伤大鼠肾小管细胞凋亡和MAPKAPK-2水平的影响。 方法：30 只SD雄性大鼠分为假手术组、模型组、EPO治疗组，假手术组仅分离肾被膜后逐层关闭腹腔；模型组采 用缺血再灌注法建立急性肾损伤模型；EPO治疗组为急性肾损伤大鼠腹腔注射EPO 50 U/kg，每周3 次，共6 周，其 余大鼠注射等体积的生理盐水。ELISA法检测各组大鼠肾功能指标改变情况，H-E染色观察各组大鼠肾组织结构改 变情况，RT-PCR和免疫印迹检测肾组织p-MAPKAPK-2 mRNA和蛋白表达水平，流式细胞术检测肾小管细胞凋亡 率。结果：与假手术组相比，模型组大鼠肾功能降低；与模型组相比，EPO治疗组肾功能好转，差异均有统计学 意义；假手术组大鼠肾组织未见水肿及炎症细胞浸润，结构完整。模型组大鼠肾组织大量水肿，有炎症细胞浸润 且肾间质见散在出血点，EPO治疗组肾组织明显改善，水肿缓解；与假手术相比，模型组MAPKAPK-2 mRNA水 平、蛋白水平均升高，肾小球细胞凋亡率升高；与模型组相比，EPO治疗组上述指标均降低，差异均有统计学意义。 结论：EPO能抑制急性肾损伤大鼠肾小管细胞凋亡，降低p-MAPKAPK-2的水平，减轻急性肾损伤程度。     

大蒜素对氧糖剥夺再灌注致PC12细胞损伤的保护作用及抗氧化应激机制

目的探讨大蒜素(AL)保护氧糖剥夺再灌注(OGD/RP)致PC12细胞损伤的抗氧化应激机制。方法采用无糖的Earle’s平衡盐溶液加缺氧法复制氧糖剥夺再灌注致PC12细胞损伤模型,同时给予不同浓度的大蒜素进行干预。采用MTT法检测细胞存活率;化学比色法测定细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出率;Hoechst 33342染色法检测大蒜素对细胞凋亡的影响,并计算凋亡率;生化法检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性或含量;RT-PCR和Western blotting分子生物学方法检测氧化应激相关因子SOD、肿瘤坏死因子(TNF-α)、过氧化氢酶(CAT)mRNA和蛋白的表达。结果与正常对照组比较,OGD/RP模型组PC12细胞存活率下降,LDH漏出率、细胞凋亡率明显升高;细胞SOD、GSH-Px活性明显降低,MDA含量明显升高;细胞SOD、CAT mRNA及蛋白表达明显下降,TNF-αmRNA及蛋白表达明显增加。与模型组比较,大蒜素(60、30mg/L)可显著升高OGD/RP PC12细胞的存活率,降低凋亡率和LDH漏出率;大蒜素(60、30mg/L)可显著升高OGD/RP PC12细胞SOD、GSH-Px活性,减少MDA含量;大蒜素(60mg/L)可明显升高OGD/RP PC12细胞SOD、CAT mRNA及蛋白表达,降低TNF-αmRNA及蛋白表达。结论大蒜素对OGD/RP致PC12细胞损伤具有保护作用,其机制与抗氧化应激有关。     

miR-122对脑缺血再灌注损伤小鼠脑梗死体积及胰岛素样 生长因子-1受体通路的影响

目的：探讨miR-122 对脑缺血再灌注损伤小鼠脑梗死体积及胰岛素样生长因子-1 受体（IGF-1R）通路的 影响。方法：将SPF 级雄性 C57BL 小鼠，运用线栓法建立脑缺血再灌注损伤（I/R）模型，分对照组（ 假手术 组）、模型组（I/R 模型组）、模拟物组（I/R 模型+miR-122 模拟物）、抑制物组（I/R 模型+miR-122 抑制物），比 较小鼠神经功能和认知功能，测定小鼠脑梗死体积，H-E 染色检测脑组织结构改变，RT-PCR 测定miR-122、IGF- 1R mRNA水平，免疫印迹测定IGF-1R 蛋白表达，流式细胞术检测神经元细胞凋亡情况。结果：与对照组相比， 模型组和模拟物组小鼠旋转圈数明显增多，悬挂实验评分降低，且模拟物组小鼠旋转圈数多于模型组，悬挂实验 评分低于模型组；与模型组相比，抑制物组小鼠旋转圈数明显减少，悬挂实验评分明显升高。与对照组相比，模 型组和模拟物组小鼠PT%、T% 值均降低，且模拟物组较模型组降低的更为显著；与模型组相比，抑制物组小鼠 PT%、T% 值显著升高。与对照组相比，模型组和模拟物组大鼠脑梗死体积明显增加，且模拟物脑梗死体积大于 模型组；与模型组相比，抑制剂组大鼠脑梗死体积显著减小。对照组脑组织结构完整，神经元排列紧密，无染色 不匀现象，模型组脑组织神经元排列呈疏松状态，着色不匀，有大量空泡样病理结构改变，模拟物组脑组织结构 改变较模型组严重，抑制物组脑组织损伤病理变化逐渐减弱，神经元排列较密，空泡样病理改变减少。与对照组 对比，模型组miR-122 水平呈显著升高状态，其余3 组miR-122 水平从高到低依次为模拟物组、模型组、抑制物组。 与对照组比较，模型组、模拟物组IGF-1R mRNA 水平均呈下降趋势；与模型组比较，模拟物组 IGF-1R mRNA 水平有所升高。与对照组比较，模型组IGF-1R 蛋白表达明显下降，模型组IGF-1R 蛋白高于模拟物组，抑制物组 IGF-1R 蛋白高于模型组、模拟物组。神经元细胞凋亡从高到低依次为模拟物组、模型组、抑制物组、对照组，4 组神经元细胞凋亡率比较差异有统计学意义。结论：miR-122 低表达可减少脑缺血再灌注损伤小鼠脑梗死体积， 增加IGF-1R 通路活性，对脑缺血再灌注损伤小鼠脑组织有一定的预防作用。     

miR-671-5p通过靶向肿瘤坏死因子α诱导蛋白8调控胰腺癌细胞增殖和凋亡

目的：探讨miR-671-5p 靶向肿瘤坏死因子α 诱导蛋白8（ TNFAIP8）对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响。 方法：实时荧光定量PCR（ qRT-PCR）和免疫印迹检测20 例胰腺癌组织和与其配对的癌旁正常组织miR-617-5p、 TNFAIP8 mRNA和TNFAIP8表达水平,验证miR-671-5p 和TNFAIP8的靶向调控关系。将体外培养胰腺癌细胞 capan-1分为miR-NC组、miR-671-5p 组、si-NC 组、si-TNFAIP8 组、miR-671-5p+pcDNA组和miR-671-5p+pcDNATNFAIP8 组。采用四甲基偶氮唑蓝（ MTT）实验检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,免疫印迹检测细胞周 期蛋白D1（ cyclin D1）、p21、B细胞淋巴瘤/ 白血病-2（ Bcl-2）和Bcl-2 相关蛋白（ Bax）的表达水平。结果：与 癌旁正常组织比较,胰腺癌组织miR-617-5p 表达量显著降低,TNFAIP8 的表达量显著升高。miR-671-5p 靶向负向 调控TNFAIP8 表达。与miR-NC组比较,miR-671-5p 组capan-1 细胞活力显著降低,细胞凋亡率显著升高,cyclin D1和Bcl-2 的表达量显著降低,p21 和Bax 的表达量显著升高;与si-NC 组比较,si-TNFAIP8 组capan-1 细胞活力 显著降低,细胞凋亡率显著升高,cyclin D1和Bcl-2 表达量显著降低,p21 和Bax 表达量显著升高;与miR-671- 5p+pcDNA 组比较,miR-671-5p+pcDNA-TNFAIP8 组capan-1 细胞活力显著升高,细胞凋亡率显著降低,cyclin D1和Bcl-2 的表达量显著升高,p21 和Bax 的表达量显著降低。结论：miR-671-5p 通过靶向下调TNFAIP8 抑制胰 腺癌细胞增殖并促进其凋亡。上调miR-671-5p 是胰腺癌潜在治疗靶点。     

永久缺血缺氧对PC12细胞自噬的影响

目的建立缺血缺氧损伤细胞模型,探讨永久性缺血缺氧致神经细胞损伤机制及其对PC12细胞自噬的影响。方法采用经典的神经细胞模型PC12细胞作为研究对象,利用无糖的DMEM培养基和缺氧罐(95%N_2和5%CO_2)培养PC12细胞,模拟体内神经细胞缺血缺氧环境。细胞分为对照组(在正常条件下,使用完全培养基培养细胞)和糖氧剥夺(OGD)处理组(在缺氧条件下,使用OGD培养基培养细胞):0.5h(OGD+0.5h)、2h(OGD+2h)、6 h(OGD+6h)、12h(OGD+12h)和24h(OGD+24h)。利用MTT检测细胞存活率,通过流式细胞仪检测细胞凋亡率,比色法检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放率,免疫荧光以及Western blotting法检测低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、环氧化酶-2(COX2)、微管相关蛋白轻链3(LC3)和Beclin-1的表达,透射电子显微术检测自噬体的超微结构,探讨不同永久性缺血缺氧时间对细胞损伤以及自噬的影响。结果与对照组相比,细胞存活率下降,呈OGD时间依赖性,且自OGD 6h显著下降,差异具有统计学意义(P0.05);细胞凋亡率和坏死率持续增高,与OGD时间呈正相关,且自OGD 12h后显著升高,差异具有统计学意义(P0.05);HIF-1α和COX2蛋白表达随OGD时间延长逐渐升高,OGD 12h后增高显著,差异具有统计学意义(P0.05)。OGD组被荧光标记的绿色的LC3蛋白相对于对照组,数量增多,绿色荧光增强。Beclin-1蛋白表达结果显示,Beclin-1的表达与OGD时间呈正相关,并由OGD6h开始明显增加,差异具有统计学意义(P0.05)。结论缺血缺氧能够诱导PC12细胞氧化应激及自噬激活。     

骨髓间充质干细胞通过上调EPO表达减轻缺氧损伤引起的PC12细胞凋亡

 目的：观察骨髓间充质干细胞（BM-MSCs）对氯化钴（CoCl2）诱导的PC12细胞缺氧损伤及凋亡的影响并探讨其作用机制。方法：将PC12细胞分为以下几组：空白对照组、CoCl2处理组、BM-MSCs-siCTL+CoCl2处理组和BM-MSCs-siEPO +CoCl2处理组。应用MTT、流式细胞术（FCM）及Hoechst  33258染色法检测BM-MSCs对CoCl2诱导的细胞活性下降及凋亡的影响。采用逆转录PCR（RT-PCR）和Western blotting检测BM-MSCs的促红细胞生成素（EPO）表达情况。同时通过RT-PCR法检测PC12细胞的Bcl-2与Bax表达情况。此外应用分光光度法检测caspase-9和-3活性。结果：MTT结果显示BM-MSCs共培养能够提高PC12细胞活力, 0.6 mmol/L CoCl2单独处理组24 h和48 h细胞存活率仅为（43.0±6.4）%和（33.8±5.7）%,1∶15细胞比BM-MSCs共培养24 h和48 h后细胞存活率明显上升,分别为（77.9±3.8）%和（75.2±9.7）%（P＜0.01）。RT-PCR 和Western blotting显示0.6 mmol/L CoCl2处理24 h和48 h明显诱导BM-MSCs的EPO表达上调,而EPO siRNA可完全抑制BM-MSCs的EPO表达（P＜0.01）。FCM及Hoechst 33258结果表明CoCl2处理能诱导PC12细胞损伤及凋亡,BM-MSCs-siCTL与PC12细胞共培养可有效抑制CoCl2的细胞毒性作用,减少细胞缺氧性损伤及凋亡,而EPO siRNA可明显阻断BM-MSCs的抗细胞凋亡作用（P＜0.01）。 RT-PCR结果显示BM-MSCs共培养组PC12细胞的Bcl-2表达较CoCl2处理组明显升高,而Bax表达较CoCl2处理组明显降低;EPO siRNA明显抑制BM-MSCs介导的Bcl-2表达升高和Bax表达降低（P＜0.01）。分光光度法结果显示BM-MSCs-siCTL共培养组的caspase-9和-3活性较CoCl2处理组明显降低,而BM-MSCs-siEPO共培养组的caspase-9和-3活性较BM-MSCs-siCTL共培养组明显增加（P＜0.01）。结论：BM-MSCs共培养能抑制CoCl2诱导的PC12细胞凋亡,其细胞保护作用的机制可能与其上调EPO的表达有关。     

MiR-146a-5p对高脂饮食/链脲佐菌素诱导的糖尿病肾病大鼠肾组织的保护作用*

目的 ：探究miR-146a-5p对高脂饮食（ HFD） 和链脲佐菌素（ STZ） 诱导的糖尿病肾病（ DN） 大鼠肾的保护 作用及其作用机制。方法 ：SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、miR-146a-5p 阴性对照组（ mimic对照组） 和 miR-146a-5p mimic处理组（ mimic处理组） 。测量各组大鼠体质量及最后24 h饮水量和尿量 ;全自动生化分析仪 检测尿液中尿蛋白,血液中血糖、血脂、尿素氮和血清肌酐含量;H-E 染色观察肾小球损伤;TUNEL染色观察 肾组织凋亡,免疫印迹检测肾组织中凋亡标记物半胱氨酸蛋白酶3（caspase 3,cas3）,淋巴细胞瘤-2 相关蛋白 X （Bax） 和B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）的表达; 酶联免疫吸附测定（ELISA）检测外周血中炎症因子肿瘤坏死因 子-α（ TNF-α）,诱导型一氧化氮合酶（ iNOS）、白细胞介素（IL）-6（IL-6）和IL-10的含量,免疫印迹检测肾组 织中iNOS 和IL-10 的蛋白表达。结果：与正常对照组相比,HFD/STZ 诱导的模型组大鼠体质量明显降低,饮水 量、尿量和血液生化指标显著升高;肾小球体积增大,基底膜明显扩张,伴有大量炎性细胞浸润,且细胞凋亡数 目明显增多,Bax/Bcl-2 比值和cleaved cas3 表达显著上调;炎症因子TNF-α、iNOS、IL-6 和IL-10 的水平明显上 调。与模型组相比,mimic 处理组大鼠体质量明显增加,饮水量、尿量及血液生化指标显著降低;肾小球体积增大, 基底膜明显扩张及炎性细胞的浸润等病理变化明显缓解,细胞凋亡数显著减少,Bax/Bcl-2 比值和cleaved cas3 表 达显著下调;促炎因子TNF-α、iNOS 和IL-6 的水平明显降低,抗炎因子IL-10 的水平明显升高,mimic 对照组差 异无统计学意义。结论：MiR-146a-5p 能减轻HFD/STZ 诱导的糖尿病肾病大鼠肾损伤,其机制是通过抑制肾细胞 凋亡及炎症反应,阻止糖尿病肾病的进一步发展。