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1.
目的: 探讨阿魏酸(ferulic acid, FA)对红藻氨酸(kainic acid, KA)诱导的PC12细胞凋亡的作用及其机制。方法:采用50 μmol/L KA诱导PC12细胞凋亡建立阿尔茨海默病神经细胞模型,然后将处理后的PC12细胞分为KA模型组和KA+FA (25、50和100 μmol/L)处理的低、中、高剂量组,同时设立正常对照组。采用MTT比色法检测PC12细胞的存活率;采用免疫细胞化学法观察PC12细胞中凋亡蛋白Bcl-2、Bax和细胞色素C (Cyt C)的表达;annexin Ⅴ+PI双染流式细胞术检测PC12的细胞凋亡率;蛋白免疫印记技术检测PC12细胞中Bcl-2、Bax和Cyt C的表达水平。结果:MTT法和免疫细胞化学检测显示,与正常组相比,模型组PC12细胞的存活率明显下降,且细胞中Bcl-2表达减少(P<0.01),而Bax和Cyt C表达升高,Bcl-2/Bax比值下降(P<0.01),流式细胞术检测细胞的凋亡率显示,模型组细胞的凋亡率显著上升(P<0.01)。蛋白印迹术检测显示,模型组细胞中Bcl-2表达量减少,Bax和Cyt C表达量升高,与正常组比较差异显著(均P<0.01)。当采用FA干预后,与模型组相比,25、50和100 μmol/L组细胞的存活率明显上升,细胞凋亡率减少,而且能增加Bcl-2阳性百分率和表达水平,明显减少Bax和Cyt C阳性百分率和表达水平,使Bcl-2/Bax比值增加 (P<0.05或P<0.01)。结论:KA在50 μmol/L时可明显诱导PC12发生凋亡,FA在25~100 μmol/L时能显著抑制KA诱导的PC12细胞凋亡,其神经保护机制可能是通过抑制Bax和Cyt C的表达,升高Bcl-2表达和Bcl-2/Bax比值,从而阻断内源性细胞凋亡通路而提高神经细胞的存活率。 相似文献
2.
目的:探讨RNA干扰沉默Apaf-1基因对氧糖剥夺/复氧复糖PC12细胞线粒体凋亡通路的影响。方法:PC12细胞随机分为3组:正常组(Control)、模型组(Model)、Apaf-1基因沉默组(Apaf-1-siRNA)。正常组于CO2培养箱内正常培养,其余2组给予氧糖剥夺2 h、复氧复糖24 h处理,Apaf-1-siRNA组于造模前将化学合成的siRNA通过脂质体转染于PC12细胞靶向沉默Apaf-1基因。用荧光标记的siRNA检测Apaf-1转染效率,Western blot检测转染后PC12细胞Apaf-1蛋白表达,CCK-8检测细胞存活率,TUNEL染色检测细胞凋亡指数,流式细胞术检测细胞凋亡率,免疫荧光染色检测Bax/Bcl-2比值,Western blot检测线粒体凋亡通路关键蛋白Apaf-1、caspase-9、caspase-3表达。结果:Apaf-1-siRNA可有效沉默PC12细胞Apaf-1蛋白表达(P<0.05)。与Control组相比,Model组细胞存活率明显降低(P<0.05),细胞凋亡指数和凋亡率显著升高(P<0.05),Bax/Bcl-2比值升高(P<0.05),线粒体凋亡通路关键蛋白Apaf-1、caspase-9、caspase-3表达显著升高(P<0.05);与Model组相比,Apaf-1-siRNA组细胞存活率显著升高(P<0.05),细胞凋亡指数和凋亡率显著降低(P<0.05),Bax/Bcl-2比值降低(P<0.05),Apaf-1、caspase-9、caspase-3蛋白表达均明显降低(P<0.05)。结论:靶向沉默Apaf-1基因可有效降低氧糖剥夺/复氧复糖PC12细胞线粒体凋亡通路关键蛋白Apaf-1、caspase-9、caspase-3表达,抑制细胞凋亡,提高细胞存活率。 相似文献
3.
目的: 探讨槲皮素对鱼藤酮诱导的PC12细胞凋亡的影响及其作用机制。方法: 运用鱼藤酮诱导损伤PC12细胞,经300 μmol/L槲皮素预处理后,观察细胞形态学改变,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blotting检测Bax和Bcl-2蛋白的表达,JC-1染色检测细胞线粒体膜电位,比较各组的差异。结果: 与鱼藤酮组相比,槲皮素加鱼藤酮处理组细胞形态明显改善,凋亡率降至6.3%(P<0.01),Bcl-2表达增加(P<0.01),Bax表达降低(P<0.01),线粒体膜电位上升(P<0.01)。结论: 槲皮素对鱼藤酮诱导的PC12细胞凋亡具有抑制作用,上调Bcl-2和下调Bax蛋白的表达,维持线粒体膜电位可能是其作用的机制之一。 相似文献
4.
目的:研究miR-155特异性siRNA增强阿糖胞苷(Ara-C)诱导的Burkitt淋巴瘤Raji细胞凋亡及其机制。方法:Ara-C与miR-155 siRNA单独或者联合干预Raji细胞增殖。qRT- PCR检测脂质体转染siRNA后miR-155的表达;CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blotting法检测caspase-3的表达。结果:qRT-PCR显示,转染miR-155 siRNA后,Raji细胞的miR-155表达明显下降(P<0.05),Ara-C或miR-155 siRNA单独处理细胞后均显示出增殖抑制作用,而两者联合使用的增殖抑制作用更显著(P<0.05)。各组细胞进行药物干预48 h后行流式细胞术,结果显示Ara-C或miR-155 siRNA单独处理细胞凋亡率分别为(16.5±0.3)%和(14.6±0.3)%,与对照组[(3.6±0.4)%]比较差别有统计学意义(P<0.05),Ara-C+miR-155 siRNA组的凋亡率[(38.4±1.4)%]分别与Ara-C和miR-155 siRNA单独处理组比较,差别有统计学意义(P<0.05)。Ara-C+miR-155 siRNA组与Ara-C组及miR-155 siRNA组相比,caspase-3的水平明显增高。结论:miR-155特异性siRNA具有增强阿糖胞苷对Raji细胞增殖抑制及诱导Raji细胞凋亡的作用,其机制与caspase-3凋亡途径有关。 相似文献
5.
目的:探讨辐射诱导表达载体pcEgr-hp53体外稳定转染人肺腺癌A549细胞后联合X射线照射,诱导细胞凋亡的作用及相关凋亡蛋白Bax、Bcl-2和caspase-3蛋白表达的变化。方法:以脂质体介导携有外源野生型p53基因的辐射诱导表达载体pcEgr-hp53和pcDNA3.1,体外转染A549细胞,筛选稳定转染的细胞克隆并扩增培养,所表达的A549-hp53和A549-vect分别接受0、0.5、2和5Gy X射线照射,即8个实验组,采用TUNEL法和流式细胞术检测稳定转染联合辐射对细胞凋亡和Bax、Bcl-2和caspase-3蛋白表达变化的影响。结果:A549-hp53组加不同剂量照射与0 Gy组比较,其百分数均明显增加(0.5-5Gy,P〈0.05-P〈0.01),Bcl-2蛋白表达在0.5-5Gy时明显下降,而Bax蛋白明显增加(P〈0.05-P〈0.01),caspase-3蛋白表达在2-5Gy时明显增加(P〈0.01);A549-hp53照射组不同剂量照射,与A549-vect相应照射剂量组比较,其百分数在0.5Gy时无明显差异,在2-5 Gy时为(P〈0.01),Bcl-2蛋白表达明显下降(0.5Gy,P〈0.01;2-5Gy,P〈0.05),Bax和caspase-3蛋白表达0.5-5Gy时明显增加(P〈0.05-P〈0.01)。结论:体外p53基因转染联合X射线照射可诱导肿瘤细胞凋亡明显增多,凋亡相关蛋白Bcl-2表达下调,Bax、caspase-3表达上调,具有显著的肿瘤抑制作用。 相似文献
6.
《中国病理生理杂志》2015,(10)
<正>目的:观察PCSK9在ox LDL诱导PC12凋亡中的作用及机制。方法:用ox LDL单独处理或PCSK9 siRNA转染后处理PC12细胞,Hoechst 33258染色和流式细胞术检测细胞凋亡,RT-PCR、Western blot分别检测PCSK9、BACE1、caspase-3、caspase-9、Bcl-2和Bax的表达,ELISA检测培养液中Aβ40和Aβ42含量。结果:75 mg/L ox LDL可诱导PC12凋亡,增加PCSK9 mRNA和蛋白 相似文献
7.
目的 研究土槿乙酸诱导人黑色素瘤(SK-28)细胞凋亡。方法 采用Hoechst33342/PI核荧光双染色法、DNA片段化分析检测细胞凋亡;用ELISA kit和RT-PCR检测p53、Fas、caspase-3、Bax和Bcl-2的蛋白和mRNA的表达。结果 土槿乙酸明显诱导SK-28细胞凋亡(p<0.05);作用12h后,p53的蛋白表达水平显著增加,作用24h后,增加了Fas/APO-1蛋白表达和Bax mRNA表达,降低了Bcl-2 mRNA表达,提高了caspase-3活性。结论 土槿乙酸可通过激活p53 引发Bcl-2介导的线粒体途径和Fas/APO-1介导的死亡受体途径,诱导人黑色素瘤SK-28细胞凋亡。 相似文献
8.
目的:探讨肢体缺血再灌注(LIR)后肺的损伤性变化以及细胞凋亡在肺损伤发生中的作用;探讨一氧化氮(NO)对LIR后肺组织细胞凋亡的影响。 方法:采用本室常规方法复制大鼠LIR模型,给予外源性一氧化氮合酶底物(L-Arg)和一氧化氮合酶抑制剂(L-NAME)处理,采用原位末端标记法(TUNEL)检测缺血4 h再灌注4 h时各组动物肺组织细胞凋亡情况;采用放免法检测凋亡相关细胞因子TNF-α在肺组织的表达,结合计算机分析系统对结果进行定量分析;采用免疫组织化学方法检测Bcl-2、Bax、caspase-3、TNF-α蛋白表达情况,结合自动图像分析系统对其结果进行定量分析;在光镜下观察肺组织的形态学改变。结果:大鼠LIR后4 h,肺泡Ⅱ型上皮细胞、肺血管内皮细胞呈凋亡改变,肺组织TNF-α、caspase-3、Bax明显上调,Bcl-2表达下调。L-Arg处理组,凋亡细胞数明显减少,肺组织TNF-α、caspase-3、Bax的表达情况与IR组相比明显减弱,Bcl-2表达明显增强;L-NAME处理组动物肺组织TNF-α、caspase-3、Bax的表达情况与IR组相比明显增强,Bcl-2表达明显减弱。结论:细胞凋亡参与了大鼠LIR后急性肺损伤的发生,且与TNF-α有关;NO可通过减弱细胞凋亡相关因子TNF-α的表达,减轻LIR后肺组织的细胞凋亡。 相似文献
9.
目的:探讨西兰花多肽组分II诱导胶质瘤细胞凋亡的作用及机制。方法:培养人神经胶质瘤SHG-44细胞,将其分为对照组以及3、10、30和100 mg/L西兰花多肽组分II组,MTT法检测西兰花多肽组分II作用后细胞活力的变化;Annexin V/PI 检测细胞的凋亡率;倒置显微镜观察西兰花多肽组分II诱导细胞凋亡的形态学变化;免疫细胞化学和Western blotting法检测西兰花多肽组分II作用后Bax、Bcl-2蛋白表达,Western blotting法检测caspase-3蛋白表达。结果:西兰花多肽组分II作用SHG-44细胞24 h 、48 h和72 h时均可以降低细胞活力,作用呈时间-剂量依赖性。Annexin V/PI 检测细胞凋亡率发现,各用药组细胞凋亡率随着药物剂量的增加而显著升高。倒置显微镜下观察,西兰花多肽组分II作用SHG-44细胞72 h后,各用药组细胞的密度随药物浓度升高而明显降低,并可见到明显的凋亡小体。细胞免疫组织化学和Western blotting结果显示,药物作用SHG-44细胞72 h后,与对照组比较,细胞Bax蛋白表达呈上升趋势,Bcl-2蛋白表达呈下降趋势,各用药组Bax/Bcl-2比值均明显增加(P<0.05或P<0.01);Western blotting检测caspase-3蛋白发现,各药物组caspase-3蛋白表达量均增加,与空白对照组比较,30和100 mg/L西兰花多肽组分II组差异有统计学意义(P<0.01)。结论:西兰花多肽组分II可提高神经胶质瘤细胞中Bax/Bcl-2蛋白的比值,促进caspase-3蛋白活化,从而诱导肿瘤细胞凋亡。 相似文献
10.
《中国病理生理杂志》2021,(6)
目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)对氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)诱导PC12细胞损伤的作用。方法:体外培养PC12细胞,分为4组(n=3):正常(normal)组、模型(OGD/R)组、OGD/R+si-NC组(si-NC组)和OGD/R+MALAT1 siRNA组(siRNA组)。RT-qPCR检测MALAT1的表达,MTT法检测PC12细胞活力,流式细胞术检测PC12细胞凋亡率,Western blot分析环加氧酶2(COX-2)、Bax及Bcl-2蛋白的表达,ELISA试剂盒检测炎症因子的含量。结果:同normal组相比,OGD/R组MALAT1表达升高(P0.01),细胞活力显著降低(P0.01),细胞凋亡率显著升高(P0.01),炎症因子前列腺素E_2(PGE_2)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达显著增加(P0.01),COX-2和Bax表达显著上调,Bcl-2和IL-10含量显著降低(P0.01)。同si-NC组相比,siRNA干扰MALAT1的表达后,PC12细胞活力显著提高(P0.01),细胞凋亡率显著降低(P0.05),炎症因子PGE_2和TNF-α表达显著减少(P0.05或P0.01),IL-10表达明显增加(P0.05),COX-2和Bax表达显著下调(P0.05),Bcl-2明显上调(P0.05)。结论:下调MALAT1表达可减轻OGD/R诱导的PC12细胞损伤,其机制可能涉及减轻炎症反应和抑制细胞凋亡。 相似文献
11.
12.
13.
目的:体外研究人Burkitt淋巴瘤细胞系Raji细胞和人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUC-MSC)间的相互作用,探讨MSC在恶性肿瘤治疗中的潜在应用前景。方法:将Raji细胞和hUC-MSC进行直接接触和非接触共培养,观察MSC对Raji细胞的作用,采用CCK-8法观察Raji细胞的增殖情况,流式细胞术检测Raji细胞周期的变化,同时应用siRNA干扰技术分析血管内皮生长因子(VEGF)在MSC向Raji细胞迁移过程中的作用(即用siRNA阻断Raji细胞VEGF的表达),ELISA法检测Raji细胞培养上清VEGF的分泌量,qRT-PCR法检测Raji细胞VEGF mRNA表达的变化。结果:MSC及其条件培养基(MSC-conditioned medium,MSC-CM)均促进Raji细胞的增殖,72 h MSC-CM培养的Raji细胞增殖活性为0.99±0.05,而对照组为0.71±0.07(P<0.01)。无论是直接接触还是条件培养基均促使Raji细胞从G0/G1期向S期的转化,MSC-CM的作用尤其明显,S期的细胞数目由16.33±1.37增加到28.50±1.41,而G0/G1期细胞数目则由77.70±1.57下降到54.40±1.57(P<0.01)。siRNA干扰Raji细胞后,VEGF无论是在蛋白水平还是mRNA水平都明显下降,且MSC向Raji细胞的趋化能力也显著降低(96.00±5.28 vs 143.00±7.20,P<0.01)。结论:MSC具有向Raji细胞趋化的作用,其机制与Raji细胞分泌VEGF呈正相关;MSC可促进Raji细胞从G0/G1期向S期转化,从而促进Raji细胞的增殖。 相似文献
14.
目的探讨氨甲酰化促红细胞生成素(CEPO)对6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)诱导PC12细胞损伤及凋亡的保护作用及其可能机制。方法借助CCK8、流式细胞(Flow cytometry,FCM)、Western-blotting和逆转录PCR(RT-PCR)技术检测PC12模型细胞相关指标的变化,实验数据以SPSS15软件统计分析。结果 CCK8结果显示6-O-HDA处理能够显著降低PC12模型细胞的存活率,而CEPO处理对其变化显示抑制作用;FCM技术探察结果显示,6-OHDA处理能够明显诱导PC12模型细胞的损伤与凋亡,而CEPO预处理能够减轻PC12模型细胞的损伤与凋亡(P<0.05);借助Western-blotting技术探察显示6-OHDA+CEPO处理组的PC12细胞的Cleaved caspase-3蛋白表达量显著低于6-OHDA处理组(P<0.05);RT-PCR结果显示,6-OHDA处理明显降低PC12模型细胞的Bcl-2 mRNA的表达(P<0.05)以及上调PC12模型细胞的Bax mRNA的表达(P<0.01),而CEPO处理明显上调Bcl-2 mRNA的表达水平(P<0.05)以及抑制Bax mRNA的表达(P<0.05)。结论CEPO处理能够显著抑制6-OHDA所诱导的PC12细胞的损伤及凋亡,其作用机制可能与其上调Bcl-2,并下调Bax和Caspase-3的表达有关。 相似文献
15.
目的:探讨姜黄素对β淀粉样蛋白25-35(Aβ_(25-35))诱导的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞存活率、乳酸脱氢酶(LDH)释放率及凋亡的影响。方法:以Aβ_(25-35)作用于PC12细胞,分别采用MTT法和LDH试剂盒检测细胞的存活率和LDH释放率;实验随机分为空白对照组、模型组、姜黄素10μmol/L组和姜黄素20μmol/L组,采用流式细胞术及Annexin V-FITC/PI双染法检测凋亡情况,采用比色法和Western blot法检测凋亡相关蛋白胱天蛋白酶(caspase)-3、caspase-8和caspase-9的活性和表达。结果:与模型组比较,姜黄素可显著升高Aβ_(25-35)诱导的PC12细胞存活率,降低LDH释放率和凋亡率(P0.01);同时可显著降低caspase-3、caspase-8和caspase-9的活性和表达(P0.05或P0.01)。结论:姜黄素可显著抑制caspase-3、caspase-8和caspase-9的表达,从而抑制Aβ_(25-35)诱导的PC12细胞凋亡。 相似文献
16.
目的: 探讨PI3K/Akt信号通路在米诺环素(minocycline,MC)抑制硝普钠(sodium nitoprusside,SNP)诱导的PC12细胞凋亡中的作用。方法:将体外培养的PC12细胞分为4组:空白对照组、SNP组、MC+SNP组和PI3K抑制剂LY294002+ MC+SNP组。用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡;Western blotting检测不同时点(0.5、1、2、3 h)各处理组PI3K/Akt通路蛋白p-Akt和Akt的表达。结果:SNP处理PC12细胞24 h能抑制细胞生长,加入10 μmol/L MC预处理30 min可明显提高细胞活力,降低细胞凋亡率(P<0.05),抑制SNP诱导的PC12细胞凋亡。MC组的p-Akt表达高于其它组,而加入LY294002后可阻断MC的上述效应。结论:MC可通过调控PI3K/Akt通路抑制SNP诱导的PC12细胞凋亡。 相似文献
17.
目的:探讨外源性三磷酸腺苷(ATP)诱导PC12细胞的膜孔形成及关键分子靶标。方法:用不同浓度的ATP处理培养的PC12细胞,采用倒置相差显微镜观察形态,CCK-8法检测细胞存活率,YO-PRO-1染色检测细胞膜通透性,Western blotting和real-time PCR检测P2X7 受体和pannexin 1(Panx1)表达的变化。结果:(1)ATP(1 mmol/L、3 mmol/L、5 mmol/L)作用3 h,可见随着ATP浓度升高,PC12细胞变圆,脱壁细胞增多;当ATP浓度为3 mmol/L或5 mmol/L时,PC12细胞活力较对照组显著下降(P<0.05)。(2)不同浓度的ATP(0、1、3、5 mmol/L)作用1 h,PC12细胞摄入YO-PRO-1的荧光强度随着浓度增加而增加;同一浓度的ATP作用不同时间(15、30、60 min),随着时间的增加,胞内的荧光强度也增加。(3)亮蓝G(P2X7受体的抑制剂)预处理可明显拮抗ATP引起的细胞活力下降和胞内荧光强度增强(P<0.05),而生胃酮(Panx1的抑制剂)预处理不改变细胞活力和胞内的荧光强度(P>0.05)。(4)ATP作用3 h使PC12细胞 P2X7受体的mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05),而Panx1 mRNA和蛋白表达变化不大(P>0.05)。结论:胞外高浓度ATP引起PC12细胞的膜孔形成可能主要与P2X7受体的表达和激活有关。 相似文献
18.
目的研究二氢杨梅素(DHM)对3.硝基丙酸(3-nitropropionic acid,3-NP)诱导的PCI2细胞损伤的保护作用及可能机制。方法M啊法测定细胞存活率,TBA(硫代巴比妥酸)法检测丙二醛(MDA)含量,WST-1(水溶性四唑盐)法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性,实验数据采用SPSS17.0软件统计分析。结果①MTr结果显示3-NP处理能显著降低Pcl2细胞的存活率,而DHM预处理对此变化有抑制作用;②MDA测定结果显示3-NP处理能显著增加PCI2细胞的MDA含量(P〈0.05),而与3-NP处理组相比,3-NP+DHM组PCI2细胞的MDA含量显著降低(P〈0.05),接近对照组水平(P〉0.05);③SOD测定结果显示,与对照组比较,3-NP处理显著降低了PCI2细胞SOD的活性(P〈0.05),而3-NP+DHM组PCI2细胞SOD的活性较3-NP组有显著提高(P〈0.05),接近对照组水平(P〉O.05)。结论②DHM预处理能拮抗3-NP诱导的PCI2细胞的损伤,其机制可能与降低细胞内脂质过氧化水平,提高抗氧化酶的活性有关。 相似文献
19.
Yoon Ok Jang Baek Gyu Jun Soon Koo Baik Moon Young Kim Sang Ok Kwon 《Clinical and molecular hepatology》2015,21(2):141-149