内皮细胞——血小板血栓定量分析系统

我们开发了一套计算机图像处理系统,用于定量分析体外锥--板血流模拟装置实验中内皮细胞--血小板的相互作用。测量的参数包括反映在流态下内皮细胞形态变化的细胞面积、周长、长轴、短轴、形态指数和倾斜角,和反映流动状态下血小板--内皮细胞相互作用的相关参数血小板粘附率、表面粘附密度、血小板扩散系数和表面作用常数等。该系统已在实验中得到应用。     

血小板激活因子对内皮细胞形态参数影响的计算机定量分析

利用具有大容量、高运算速度和高分辨率的计算机图像分析系统建立了定量分析内皮细胞(EC)面积、形状因子、细胞间距及细胞间空隙面积占细胞单层面积百分比的软件,并分析了血小板激活因子(PAF)对EC形态     

血小板激活因子对内皮细胞形态参数影响的计算机定量分析

利用具有大容量、高运算速度和高分辨率的计算机图像分析系统建立定量分析内皮细胞(endothelial cell,EC)面积、形状因子、细胞间距及细胞间空隙面积占细胞单层面积百分比的软件,并分析血小板激活因子(platelet activating factor,PAF)对EC形态参数的影响。结果表明,对照组EC相互连接紧密,细胞间隙较窄。PAF作用60min,细胞明显回缩,膜表面有很多粗细不等的突起,细胞间隙增大。计算机定量分析表明,PAF(10~-?mol/L)作用10min,就可使细胞间距和细胞间空隙面积占细胞单层面积百分比增大,30min细胞面积减小,形状因子增大,证明细胞发生了回缩,这可能是PAF增加血管壁通透性的重要机制。计算机图像分析有助于迅速、准确地定量测定EC形态变化,为研究EC在血管屏障中的作用提供了新方法。     

高脂饮食对大鼠主动脉内皮细胞形态及刚度的影响

目的研究高脂饮食对大鼠主动脉内皮细胞形态与刚度的影响。方法将SD大鼠随机分为高脂饲养组(AS组,n=3)与对照组(CON组,n=3),利用植块法获得大鼠胸主动脉内皮细胞。在倒置显微镜下观察细胞形态,通过荧光染色比较两组细胞F-actin平均荧光强度,利用原子力显微镜(atomic force microscopy,AFM)检测细胞刚度。结果细胞在植块后第7 d有少量细胞爬出,第14 d细胞融合成单层,利用Ⅷ因子免疫荧光染色法证实为内皮细胞。高脂饮食引起细胞周长(P0.01)、长轴/短轴比率(P0.01)、面积增大(P0.05);细胞圆度减小(P0.01)。高脂组F-actin平均荧光强度明显高于对照组(P0.01)。AFM显示高脂饲养引发内皮细胞刚度显著增大(P0.01)。结论高脂饮食将引发内皮细胞形态与刚度发生改变,进而影响血管正常功能,使其成为动脉粥样硬化的重要诱因。     

血小板激活因子对内皮细胞形态参数影响的计算机量分析

利用具有大容量、高运算速度和高分辨率的计算机图像分析系统建立量分析内皮细胞面积、形状因子、细胞间距及细胞间空隙面积占细胞单层面积百分比的软件，并分析血小板激活因子对ＥＣ形态参数的影响。结果表明，对照组ＥＣ相互连接紧密，细胞间隙较窄。ＰＡＦ作用６０ｍｉｎ，细胞明显回缩，膜表面有很多粗细不等的突起，细胞间隙增大。计算机定量分析表明，ＰＡＦ（１０＾８ｍｏｌ／Ｌ）作用１０ｍｉｎ，就可使细胞间距和细胞间空隙     

体外肿瘤细胞对血管内皮细胞影响的观察

目的 观察肿瘤细胞与血管内皮细胞的关系及其在体外直接接触培养时内皮细胞的形态变化。方法 免疫磁珠阳性选择法分离培养大鼠肺血管内皮细胞,生长至汇合状态时加入不同的肿瘤细胞(小鼠树突状细胞肉瘤细胞DCS、人胃癌细胞MGC-803、小鼠肺腺癌细胞LA795)共培养,光镜、扫描电镜、免疫组织化学、transwell法及荧光分子传递等方法观察内皮细胞的形态、功能的变化。结果培养的内皮细胞部分呈卵石样,部分呈长梭形。长至汇合状态的内皮细胞再加入肿瘤细胞后,内皮细胞形态发生明显变化,汇合细胞中间出现许多圆形管腔样结构;肿瘤细胞往往分布在新形成的腔隙内;肿瘤细胞条件培养基可支持内皮细胞的生长,促进内皮细胞的运动;luciffer yellow分子可直接从肿瘤细胞传递到内皮细胞。结论 肿瘤细胞与内皮细胞可进行通讯,肿瘤细胞可直接引起内皮细胞结构和功能表型的改变。     

重组人骨形态发生蛋白2与碱性成纤维细胞生长因子联合促进兔骨髓基质细胞血管内皮细胞生长因子表达及其成骨潜能

背景：了解在体外或体内环境下,应用重组人骨形态发生蛋白2和碱性成纤维细胞生长因子,能否达到既加强成骨又促进血管内皮细胞生长因子表达的双重作用。 目的：观察兔骨髓基质细胞经重组人骨形态发生蛋白2与碱性成纤维细胞生长因子刺激后,其血管内皮细胞生长因子表达及成骨潜能的变化。 方法：取兔双侧股骨骨髓基质细胞,采用骨髓基质细胞体外培养技术,单独或联合以重组人骨形态发生蛋白2、碱性成纤维细胞生长因子刺激细胞。细胞培养5 d后,进行细胞形态、增殖情况、碱性磷酸酶活性、成骨结节、血管内皮细胞生长因子阳性细胞率等项目的检测。 结果与结论：联合先后应用重组人骨形态发生蛋白2、碱性成纤维细胞生长因子在细胞计数、碱性磷酸酶活性、矿化面积百分率、血管内皮细胞生长因子阳性细胞率4个检测项目上优于同时应用重组人骨形态发生蛋白2或碱性成纤维细胞生长因子以及单独应用重组人骨形态发生蛋白2或碱性成纤维细胞生长因子。结果表明合理的联合使用重组人骨形态发生蛋白2和碱性成纤维细胞生长因子,不仅可促进骨髓基质细胞的快速增殖及向成骨细胞转化,还可促进促血管内皮细胞增生的重要介质血管内皮细胞生长因子的表达。     

正常眼角膜内皮细胞分析及其临床意义

目的：探讨正常眼角膜内皮细胞数目、形态及其临床价值。方法：Ｔｏｍｅｙ分光显微镜（ＥＭ１０００）和内皮细胞分析仪（ＥＭ１０２０）对５２只正常眼角膜内皮细胞进行检测,计算机辅助对细胞数目和形态学进行分析。结果：５２只正常眼角膜内皮细胞密度为２８６５．４１±４３８．８９细胞数／ｍｍ２,细胞面积变异系数为４８．７５±１４．０４％,六角形细胞数占５２．０３±９．７３％。结论：正常眼角膜内皮细胞存有细胞变大、移行和重新组合等修复活动,对角膜内皮细胞的检测和形态学分析有利于指导手术方式的改进。     

滋养细胞诱导肾小球内皮细胞损伤的机制及细胞因子干预靶点研究

目的通过研究病理状态的滋养细胞与肾小球内皮细胞共培养后细胞的形态变化、ET-1表达改变及VEGF干预效果,探讨子痫前期肾小球内皮细胞的损伤机制及针对该损伤的保护机制。方法将紫外线、水浴分别诱导凋亡、坏死的滋养细胞与肾小球内皮细胞共培养,荧光显微镜下观察细胞形态,real-time PCR检测ET-1mRNA;;表达,同时给予VEGF干预,琼脂糖凝胶电泳进行PCR产物验证。结果肾小球内皮细胞吞噬死亡的滋养细胞后ET-1mRNA;;表达量增加,应用VEGF干预后ET-1mRNA;;表达量下降。结论在子痫前期中,肾小球内皮细胞可能是通过吞噬死亡的滋养细胞引起ET-1的表达变化,进而发生损伤。VEGF可以抑制ET-1的表达从而改善该损伤。     

TNF-α引起的微血管内皮细胞功能障碍及其细胞分子机制

血管内皮细胞是肿瘤坏死因子 (ＴＮＦ α)作用的靶细胞之一。由ＴＮＦ α引起的血管内皮细胞损伤在很多心脑血管疾病和血栓性疾病的发病中具有重要意义。本工作主要研究不同浓度的ｒｈＴＮＦ α(简称ＴＮＦ)引起微血管内皮细胞功能、代谢的早期损伤以及其与微血管内皮细胞中原癌基因和凋亡相关基因表达的关系 ,试图从中说明ＴＮＦ引起微血管内皮细胞功能障碍的表现及其部分细胞分子机制。实验是在体外培养的第二代大鼠肺微血管内皮细胞(ＲＰＭＶＥＣ ,简称内皮细胞 )中进行的。细胞经光镜、电镜的形态观察 ,ｖＷＦ免疫组化阳性 ,ＣＤ3 1免疫…     

剪切流动下内皮细胞变形的模拟

血液流动和内皮的耦合是重要的生物医学问题 ,引起了学者们的广泛的兴趣。目前已知内皮细胞能感知流场的剪切应力而改变其形态和功能。由于剪切应力被认为是引起内皮细胞重建的始发信号 ,所以了解内皮细胞与流动应力之间的相互作用机制是十分重要的。我们建立了一个理论模型来模拟内皮细胞与流场应力之间的相互作用。根据二维计算流体动力学方法研究了内皮细胞应力、压力的分布以及内皮细胞在剪切应力作用下的变形情况。结果表明 :( 1)内皮细胞的变形随 α(对应于流体作用于细胞表面的切应力 )的变化而变化。当 α>0 .0 2 1时 ,细胞的变形随 α的增大而显著增大 ;( 2 )流动引起了细胞表面应力和压力分布的不均匀 ,从而导致了细胞的变形。但内皮细胞的最大应力总是位于细胞的顶点。同时 ,我们用流室系统提供剪切流动 ,测量了不同剪切应力作用下培养的人主动脉内皮细胞的变形。所得到的实验结果与上述数值模拟结果是吻合的。本文结果提示 ,由于剪切流动引起细胞表面应力和压力分布的不均一 ,可能在细胞激活和细胞功能的调节 (如细胞骨架的调节 ,粘附分子的表达与分布等 )机制上具有特殊的作用。本研究为综合应用动力学方程来建立内皮细胞模型提供了工作框架     

TNFα引起的微血管内皮细胞功能障碍及其分子机制

血管内皮细胞是肿瘤坏死因子 (ＴＮＦα)作用的靶细胞之一。由ＴＮＦα 引起的血管内皮细胞损伤在很多心脑血管疾病和血栓性疾病的发病中具有重要意义。本工作主要研究不同浓度的ｍＴＮＦα(简称ＴＮＦ)引起微血管内皮细胞的功能、代谢的早期损伤以及其与微血管内皮细胞中原癌基因和凋亡相关基因表达的关系 ,试图从中说明ＴＮＦ引起微血管内皮细胞功能障碍的部分分子机制。1 细胞增殖动力学　在体外培养的肺微血管内皮细胞 (ＰＭＶＥＣ)中发现 ,加入ＴＮＦ( 2 0ｎｇ/ｍＬ)后 ,细胞形态从圆形、多角形变成梭形 ,细胞的纵轴拉长 ,横轴缩小 ,…     

切应力作用下与血管平滑肌细胞联合培养的内皮细胞的形态学改变

内皮细胞与平滑肌细胞是血管壁的主要组成细胞。血管平滑肌细胞与流体切应力是影响血管内皮细胞形态和功能的重要因素。形态学作为内皮细胞研究中最直观的指标,一直受到重视。单独培养的内皮细胞丧失了在体条件下的长梭形、沿流体方向平行排列的特征,呈现“铺路石”样外观。与平滑肌细胞联合培养的内皮细胞呈长梭形,与在体条件下的内皮细胞形态较为接近;但排列无极性,这可能是因为内皮细胞缺少了与其腔面直接作用的流体应力的缘故。为了了解切应力对联合培养的内皮细胞的影响,本文建立了用于内皮细胞和平滑肌细胞联合培养的应力测试系…     

与平滑肌细胞联合培养的内皮细胞的形态学和生长增殖

目的　探讨平滑肌细胞对内皮细胞形态和增殖的影响 ,为内皮细胞种植的组织工程学提供理论基础。　方法　模拟血管壁的内层结构及内皮细胞平滑肌细胞间的相互影响途径 ,建立内皮细胞与平滑肌细胞联合培养的模型 ,应用形态学、细胞计数对内皮细胞的结构和增殖进行研究。　结果　联合培养的新内皮细胞呈伸长性生长 ,沿细胞长轴排列的微丝增多 ,增殖受抑制。　结论　内皮细胞和平滑肌细胞联合培养的新模型是目前研究这两种细胞间相互影响的最佳方式。联合培养的内皮细胞的形态结构更接近于在体生理状态 ,这一变化可能更有利于其抗应力功能的调节     

蛋白激酶C与内皮细胞骨架蛋白和血管通透性研究进展

蛋白激酶C作为一种重要的蛋白激酶和细胞内信号分子,可作用于多种底物蛋白;内皮细胞骨架蛋白作为PKC的一种重要作用底物,在维持细胞形态、黏附及细胞连接中起重要的作用。炎症介质等作用于内皮细胞膜受体或通过其他途径,可引起细胞骨架蛋白含量、分布和功能的变化,导致内皮回缩,细胞连接间隙形成,是血管通透性增加的主要机制。而激活的PKC作用于骨架蛋白是引起血管通透性增加的重要途径之     

切应力对联合培养的血管内皮细胞F-肌动蛋白排列的影响

与平滑肌细胞联合培养的血管内皮细胞在静态时形态就开始发生变化,即由单独培养条件下在的多边形到联合培养条件下的长梭形。切应力作用下,联合培养的内皮细胞的形态在较短时间内发生更进一步的变化。F－actintlEylli持细胞形态及使内皮细胞与细胞外基质的粘附上起着重要的作用。为了探讨切应力对联合培养的血管内皮细胞卜肌动蛋白的排列的影响,本文应用平滑肌细胞与内皮细胞联合培养模型,将牛主动脉平滑肌细胞和内皮细胞进行联合培养,待内皮细胞形成单层后,用手行平板流动胜,将内皮细胞置于40dyn／cm’稳定层流切应力之下12、24／…     

内皮细胞和平滑肌细胞联合种植研究

内皮细胞在人工器官表面的种植是当前组织工程学研究领域的热点课题之一。平滑肌细胞是内皮细胞的周细胞,对内皮细胞的形态结构、生理功能、再生和修复有重要影响。本文综述了进行内皮细胞和平滑肌细胞联合种植的意义、方法及联合种植后内皮细胞功能变化的研究概况,并对研究中有待解决的问题作了进一步的分析和探讨。     

以体外共培养系统进行乳腺癌细胞株对正常内皮细胞作用的研究

目的本文建立了体外肿瘤细胞与内皮细胞的共培养体系 ,试图以这种体外共培养环境下了解乳腺癌细胞对正常内皮细胞的作用 ,模拟研究体内肿瘤细胞对血管内皮细胞的细胞性质和行为的作用和影响。方法对乳腺癌细胞株MCF -7、MDA -MB -231与正常、新鲜脐带的静脉内皮细胞体外共培养的细胞比例和培养条件进行了实验摸索 ,分别建立了体外乳腺癌细胞株MCF -7、MDA -MB -231与正常脐带静脉内皮细胞的体外共培养体系。以同期培养的正常脐带静脉内皮细胞为对照 ,对以上述体系共培养后的内皮细胞进行形态学研究 ,基因表达分析和血管新生状况进行缩时观察。本文所用的内皮细胞均以CD31免疫磁珠进行分选 ,并进行形态学和免疫组化鉴定。结果所建立的细胞共培养体系条件能够使乳腺癌细胞株MCF-7、MDA -MB -231与内皮细胞同步生长 ,并细胞比例和培养时间分别在1∶2、72h和1∶3、96h时达到最佳。经共培养后的内皮细胞形态和超微结构均与同期培养的正常内皮细胞对照比较表现明显不同 ,其细胞形态有明显的不规则的变形和呈游走状。超微形态呈 (1)细胞核膨大、核胞比例增大、核仁增大 ,(2)细胞质内质网疏松、变形 ,(3)细胞表面纤毛减少 ,(4)细胞表面窗孔加深 ,(5)细胞间隙增大 ;与血管新生相关的基因ESM、IGFBP -3、ανβ3、     

内皮细胞微丝结构与血管内皮完整性关系的探讨

为证实内皮细胞微丝与血管内皮完整性之间的直接关系，用Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ－ｐｈａｌｌｏｉｄｉｎ显示了体外培养的牛主动脉内皮细胞形成一微密单层细胞后的微丝形态及用细胞毒素Ｂ孵育单层内皮细胞后的细胞形态及微丝的变化。结果表明：内皮细胞内的微丝结构ＤＰＢ是维持内皮细胞之间连接的重要结构。文内还对内皮细胞微丝结构与动脉粥样硬化早期病变的关系进行了讨论。     

超声乳化术中不同灌注液对角膜内皮细胞的影响

目的:观察超声乳化术中使用不同灌注液(世可和平衡盐液)对兔眼角膜内皮细胞结构及功能的影响。方法:3.5月龄纯种日本大耳白兔,随机分为正常对照组、空白对照组、世可组和平衡盐液组,采用接触性角膜内皮显微镜进行角膜内皮细胞形态学定量测定。锥兰-茜素红活性染色,观察各组角膜内皮细胞微细结构的变化。结果:术后6h,各组较正常对照组细胞密度和六边形细胞百分率降低;细胞面积和六边形细胞百分率均高于正常对照组;光镜显示空白对照组角膜内皮细胞形态改变明显,而世可组和平衡盐液组角膜内皮细胞改变轻微,无细胞坏死。结论:在超声乳化术中,灌注液对角膜内皮的损伤为化学性损伤,在相同手术条件下,世可对角膜内皮细胞具有良好的保护作用。