基因工程

961211 利用脉冲场毛细管电泳分离DNA大分子[会,英]/Sudor, J.…//Abstr. Pap. Am. Chem. Soc. -1995,209Meet.,Pt.1.-ANYL003[译自DBA,1995,14(22),95-12943] 利用复杂聚合物溶液脉冲场毛细管电泳研究了ds DNA大分子的电迁移特性。研究了输入交替电场的2种不同形式(正弦波和方波输入信号)。以输     

交变脉冲电场凝胶电泳分离染色体DNA分子

交变脉冲电场凝胶电泳是一种可用来分离染色体大分子DNA的新的凝胶电泳方法。通过交替采用两个不同方向的不均匀电场,使DNA分子在挤过凝胶筛孔时不断改变方向,从而获得大分子DNA的高分辨率电泳。本文报道用自行设计的交变电场电泳仪进行脉冲电场凝胶电泳分离酵母染色体DNA,可分成11个条带。用自身连接的lDNA作为分子量标准物,可分出14个条带。     

Shotgun法测序制备高纯度水稻基因组DNA的方法探讨(英)

在用散弹 (shotgun)法测定水稻 (OryzasativaL .ssp .indica)基因组全序列的过程中 ,叶绿体和线粒体DNA的污染问题非常严峻 .应用脉冲场电泳 (PFGE)技术对水稻基因组DNA进行纯化 ,结果表明它能够有效去除叶绿体和线粒体DNA ,使其污染率从 3%降低到 0 2 % .同时 ,比较了水稻绿苗和黄化苗的DNA得率 ,以及HB法和NIB法制备大分子质量(HMW)DNA的异同 .最后提出一套制备水稻基因组DNA的方法 ,包括黄化苗培养 ;细胞核的分离、包埋和裂解 ;脉冲场电泳纯化、回收聚集在低熔点 (LMP)胶中的水稻HMWDNA .用该方法所得的水稻基因组DNA ,纯度高 (无叶绿体和线粒体DNA污染 )、基因组完整 (机械剪切和降解少 )、回收率高 (操作过程中DNA损失少 ) .另外 ,首次报道在融化的低熔点(LMP)胶中对水稻HMWDNA于 38℃进行超声波处理 ,能够获得用于shotgun文库和梯度文库构建所需要的各种DNA片段(1 5～ 3kb ,3～ 12kb) ,并且效果优于在TE中进行操作     

脉冲凝胶电泳系统及其应用

脉冲凝胶电泳系统是近年来发展起来的一种分离大分子染色体DNA的新型电泳技术。本文介绍了该技术的基本原理以及各种脉冲凝胶电泳系统,并比较了各个系统的优缺点。简要介绍了该技术在酵母、寄生虫以及高等动物染色体DNA的核型分析与基因定位中的应用。     

小麦蓝矮植原体染色体DNA的分离

[目的]分离小麦蓝矮(WBD)植原体染色体DNA,并建立WBD植原体染色体分离纯化体系.[方法]采用差速离心和脉冲电泳(PFGE)方法富集纯化WBD植原体染色体DNA,并通过PCR和Southern blot进行检测验证,实时荧光定量PCR方法对分离纯化效果进行定量检测.[结果]脉冲电泳凝胶中出现一条大小约为650 kb的条带,经PCR检测和Southern blot分析表明该条带为WBD植原体的染色体DNA.实时荧光定量PCR检测结果表明采用差速离心与脉冲电泳结合的方法可以将WBD植原体基因组的相对拷贝数提高436.5倍.[结论]采用差速离心与脉冲电泳法结合可以有效地从感染WBD长春花中分离到纯的WBD植原体染色体DNA,WBD植原体染色体DNA大小约为650 kb.     

一种无桥的水平板型凝胶电泳

凝胶电泳是研究核酸、蛋白质等生物大分子的一项重要技术,也是DNA的限制性核酸内切酶切割片段的分析、分离、纯化的一种不可缺少的方法。虽然垂直(管柱型及板型)凝胶电泳早已被广泛应用,但它不能用低浓度琼脂糖凝胶分离大分子DNA。水平板型凝胶     

DNA大分子电泳

《DNA大分子电泳:理论和应用》(Electrophoresis of large DNA molecules: theory and application)由Eric Lai和Bruce W. Birren编著,1990年冷泉港实验室出版社出版,156页。该书是根据冷泉港实验室1990年3月班巴里会议所发表的论文编辑而成。它阐述了脉冲场凝胶电泳的原理和实践方面最新内容。该技术于1983年公诸于世,尔后根据各自经验进行     

XeCl 准分子激光辐照生物大分子对其结构影响初步研究-Ⅰ308 nm紫外激光辐照小牛胸腺DNA的电镜观察与分析

XeCl 308 nm紫外激光(单脉冲输出能量33.4 mJ,脉冲频率 2次/秒,辐照时间45秒,光斑6×3 mm,透镜焦距300 mm)辐照330 mm处小牛胸腺DNA(固体).用扫描电子显微镜和透射电子显微镜可以观察到DNA受照射后有断裂、分叉、扭曲、聚集和交联等现象,影响生物大分子的初级结构和高级结构的变化.在我们的实验条件下是以影响DNA构象变化为主.     

用垂直凝胶脉冲电泳分离染色体DNA

脉冲电场凝胶电泳(PFGE)是近几年发展起来的一种分离高分子DNA片段(50—10000kb)的有效方法。包括正交场,六边形场,反向场和垂直胶脉冲电泳。本文改进了垂直胶脉冲电场(TAFE)的条件,使酵母DCo4染色体电泳核型从11条带提高到14条。利用TAFE鉴定了蛋白酶消化法和TLS法制备的人基因A,其分子长度主要分布在200—450kb。     

肠道沙门菌O:4(B)菌群脉冲场凝胶电泳分子分型

为了明确2010年食源性疾病监测中分离的肠道沙门菌O:4(B)菌群的PFGE分子型别,探讨其多态性及其与分子流行病学关系,我们将分离获得的29株O:4(B)血清型沙门菌进一步鉴定培养,挑取单个菌落增菌,供试菌株基因组DNA用限制性内切酶Xba Ⅰ消化酶切后进行脉冲场凝胶电泳分型,所得结果用Bionumerics5.1软件进行聚类分析.实验结果表明,根据电泳指纹图谱,可将29株肠道沙门菌O:4(B)菌群分为24个PFGE型别,菌株间的相似值在56.31%~100%之间,同一血清型别的沙门菌有多个PFGE型别.脉冲场凝胶电泳对O:4(B)群沙门菌有较高的分型能力,可有效的应用于食物中沙门菌溯源分析及分子流行病学研究.     

海岛棉(Gossypium barbadense)DNA的提纯

介绍一种从棉花(Gossypium barbadense)种子中分离天然状、大分子和高纯度DNA的方法。首先,用有机溶剂(醇、醚和酮)抽提除去脂肪、类脂、棉毒素及其它色素,然后,用胰蛋白酶(Trypsin)和去垢剂(SDS)进行处理脱蛋白;最后,用4％珠状琼脂糖凝胶(Sepharose4B Gel)柱层析分离纯化DNA:此方法简便、有效,一般适用于含大量内源多酚类化合物、色素和类脂植物材料中DNA的抽提和纯化。     

动物遗传工程

860729 利用DNA处理过的精子对牛进行人工授精[英]/Schellander, K.…∥Anim. Biotechnol.-1995,6(1).-41～50[译自DBA,1995,14(14),95-08402] 研究了用DNA处理过的精子进行人工授精,以此用精细胞作载体将外源DNA导入牛基因组的     

生物大分子分离技术:过去、现状和未来

生物大分子包括多肽、酶、蛋白质、核酸(DNA和RNA)以及多糖等。生物大分子分离技术是生命科学研究中的关键技术之一。当前,各学科之间的交叉渗透为生物大分子分离技术的发展提供了更多的契机。对以沉淀、透析、超滤和溶剂萃取为代表的传统分离技术,以及色谱,电泳等现代分离技术的发展概况、原理、特点及应用进行了综述。并结合生命科学的发展现状,展望了生物大分子分离技术的发展前景。     

用电注入质粒DNA转化完整酵母细胞的新方法

已经发现,用电场脉冲可以将质粒DNA(YEp13)引入完整的酵母细胞。电注入法的转化频率决定于起始电场强度、放电电容器的电容及应用的脉冲。用起始电场强度5kv/cm和电容/1μF的3个连续脉冲得到转化子数最多(90±20个/μgDNA)。电注入方法简单,且在转化处理后2-3天内即可得到转化子。     

大肠杆菌溶菌物的羟基磷灰石柱层析分离

我们在进行脱氧核糖核酸(DNA)复制的调节控制研究时,感到有必要建立某些分离DNA与RNA、蛋白质的技术,特别是小量实验材料中各种生物大分子物质的分离,以提供     

稻曲病菌UV-2菌株细菌人工染色体文库构建及分析

【目的】稻曲病(Rice false smut)是由稻曲病菌[Villosiclava virens (Cooke) Tak.]引起的严重危害水稻的真菌病害。构建稻曲病菌UV-2的大片段DNA细菌人工染色体(Bacterial artificial chromosome, BAC)文库, 为致病相关基因的鉴定及在图位克隆、比较基因组学等方面的研究奠定基础。【方法】以幼嫩菌丝为材料制备大分子基因组DNA包埋块, 用Hind III部分酶解后经脉冲凝胶电泳筛选, 回收大片段DNA并与pIndigoBAC536-S 载体连接, 连接产物转化大肠杆菌菌株DH10B T1 Phage-Resistant 细胞后进行蓝白斑筛选, 白色菌落捡入384孔板置于?80 °C低温保存。【结果】成功构建UV-2菌株的高质量、高覆盖度的BAC文库, 该文库共含10 368个克隆, 平均插入片段为124.4 kb, 空载率小于1%, 约覆盖该菌基因组的36.8倍。【结论】克服了真菌大分子基因组DNA制备难控制的技术难题, 建立了首个稻曲病菌的BAC文库。该文库已作为一种公共基因组资源向研究者开放(http://GResource.hzau.edu.cn)。     

交变脉冲电场凝胶电泳与植物大分子DNA的制备

介绍了交变脉冲电场凝胶电泳的原理、方法及其在植物大分子DNA制备方面的应用。     

酵母人工染色体克隆技术及其进展

酵母人工染色体克隆(YAC)是最近几年发展起来的大分子 DNA 克隆技术.文章综述了 YAC 克隆技术的发展,YAC 的分离、分析与鉴定,以及这一技术在分子生物学中的应用.     

基因库构建

922472 从人21染色体构建并鉴定酵母人工染色体部分文库[英]/Bellis,M.…∥DNA Cell Biol.-1991,10(4).-301～310[译自DBA,1992,11(1),92-00024] 构建酵母人工染色体(YAC)的一般方法是:琼脂糖制备DNA、EcoRI部分酶切、脉冲电场凝胶电泳(PFGE)对片段大小的筛选、反向电场电洗脱(field-inversion electroelution)、连接、用PFGE选择大小并消除未连接载体、洗脱、转化酿酒酵母、铺板于ura~-、trp~-培养基上、复印到尼尤膜上、筛选人源克隆。以体细胞杂交系WA-17(人源部分只有21染色体)在质粒pYAC4中     

抗生素和干扰素

941480藻类作为生物活性产物源[英]/Glaxo/Cannell,R.J.P.∥Pestic.Sci.-1993,39(2).-147～153[译自DBA,1993,12(26),93-15067] 从藻类分离了多种生物活性次级代谢产物。这些产物包括(a)抗生素:例如由红藻科得到的卤化链烯、fimbrolides、2,3,5,6-四溴吲哚、劳藻酚、obutsol,霍氏双岐藻(Scytonema hofmanni)的氰细菌(cyanobacterin)疫苗;(b)