葡聚糖凝胶Sephadex LH-20柱层析分离纯化蓝莓花色苷的研究

本论文初步探讨了采用Sephadex LH-20凝胶柱层析分离纯化蓝莓花色苷的工艺条件,比较了花色苷在不同缓冲液浓度、不同流速和不同上样量条件下的分离效果,并将最佳分离条件下得到的组分进行紫外可见波长扫描,对其中的花色苷组分进行HPLC检测。结果表明,当以30%的酸化甲醇为洗脱液,采用混合流速进行洗脱,进样量为20 mg时,蓝莓花色苷的分离效果最好,共收集到七个峰组分。经紫外-可见光谱扫描,可确定组分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ为非花色苷类物质;组分Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ为花色苷类物质。由HPLC检测可知:组分Ⅳ中只含一种蓝莓花色苷;组分Ⅵ、Ⅶ均以一种花色苷为主,且其峰面积比例达到85%以上;组分Ⅴ中主要含两种花色苷。     

高速逆流色谱分离纯化紫甘蓝花色苷

优化出超声波溶剂辅助法提取紫甘蓝花色苷的最佳工艺条件,并用高速逆流色谱法对其进行分离纯化,建立HSC-CC分离制备紫甘蓝花色苷类化合物的方法。采用正交试验优化超声波溶剂辅助提取紫甘蓝花色苷的工艺条件,再高速逆流色谱对其进行分离纯化。结果表明,超声波溶剂辅助提取紫甘蓝花色苷的最佳工艺条件为超声时间8min,超声辅助提取温度40℃,乙醇体积分数65%;HSCCC制备紫甘蓝花色苷类化合物的方法:溶剂系统为正丁醇-甲基叔丁基醚-乙腈-水-三氟乙酸(2:2:1:5:0.01,V/V/V/V),流速为2mL/min,主机转速设定为800r/min,紫外检测波长为254nm,在该条件下分离制备得到3种化合物。经HPLC检测其纯度分别为76.28%,45.46%,91.46%。用超声波溶剂辅助和高速逆流色谱能分离得到了高纯度的紫甘蓝花色苷,该法具有简便、快速的优点,为紫甘蓝花色苷的分离纯化提供了高效、稳定、可靠的方法。     

加热方法对紫甘蓝花色苷组分及其清除自由基活性的影响

目的:研究蒸汽加热和微波加热处理对紫甘蓝花色苷及其清除自由基活性的影响。方法:采用HPLC-MS法分析花色苷组分,ORAC法评价其清除自由基活性。结果:紫甘蓝花色苷主要有7种组分:矢车菊素-3-槐糖苷-5-葡萄糖苷(组分Ⅰ)、矢车菊素-3-槐糖苷(组分Ⅱ)、芥子酰矢车菊素-3-槐糖苷-5-葡萄糖苷(组分Ⅲ)、芥子酰矢车菊素-3-槐糖苷(组分Ⅳ)、p-香豆酰阿魏酰芥子酰芍药素-3-槐糖苷-5-葡萄糖苷(组分Ⅴ)、芥子酰矢车菊素-3-槐糖苷-5-葡萄糖苷(组分Ⅵ)、二芥子酰矢车菊素-3-槐糖苷-5-葡萄糖苷(组分Ⅶ),其中,组分Ⅰ、Ⅲ、Ⅵ、Ⅶ含量较高。蒸汽加热和微波加热对紫甘蓝花色苷组分种类均无明显影响,而对其相对含量有所影响,微波加热较蒸汽加热对两种花色苷组分Ⅵ和Ⅶ影响显著。蒸汽加热,花色苷组分Ⅵ和Ⅶ分别增加4.46%和10.25%;微波加热,花色苷组分Ⅵ和Ⅶ分别增加10.90%和28.60%。加热后花色苷组分Ⅰ和Ⅲ相对含量有所减少,蒸汽加热两者分别减少2.15%和13.32%,微波加热分别减少6.07%和35.10%。两种加热处理对花色苷组分Ⅱ和Ⅳ相对含量无明显影响。ORAC评价结果表明,微波加热和蒸汽加热对花色苷清除自由基活性有一定的影响,对照组、微波组和蒸汽组的ORAC值分别为0.329±0.030,0.326±0.027,0.293±0.021μmol Trolox/m L。结论:蒸汽加热和微波加热影响紫甘蓝花色苷各组分的相对含量及其清除自由基活性。     

紫马铃薯花色苷的提取纯化与鉴定

对超声波辅助提取紫马铃薯花色苷工艺条件进行优化,并用NKA-9大孔吸附树脂进行纯化,液相色谱结合紫外-可见光谱扫描分离和鉴定花色苷组成。结果表明：花色苷最佳提取条件为料液比1:50(2.5g/100mL柠檬酸溶液)、超声功率400W、提取温度45℃、提取时间10min,以干质量计算紫马铃薯种花色苷含量为1.362mg/g;用NKA-9大孔吸附树脂纯化,8倍柱床体积洗脱出占总量98.35%的的花色苷,花色苷纯度达到90.23%;高效液相色谱鉴定出紫马铃薯含有5种组分,其中3种分别是矢车菊素-3-葡萄糖苷、矢车菊素-3-芸香糖苷和芍药-3-葡萄糖苷,其含量分别为0.27、0.057mg/g和0.46mg/g,三者总和占马铃薯中总花色苷含量的57.78%。马铃薯中含量最高的花色苷成分出峰保留时间为12.224min,其结构未知。     

高速逆流色谱分离纯化桑葚花色苷及其抗氧化活性

以桑葚为原料,在经过大孔树脂纯化的基础上,通过高速逆流色谱技术对桑葚花色苷进行分离纯化,结合紫外-可见光谱、高效液相色谱-质谱联用及核磁共振技术对分离纯化得到的组分进行鉴定,同时测定桑葚花色苷粗提取物和分离得到的花色苷组分对脂质体抑制率和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-trinitrophenylhydrazine,DPPH)自由基清除能力。最终确定正丁醇-甲基叔丁基醚-乙腈-水-三氟乙酸(2∶2∶1∶5∶0.01,V/V)为两相溶剂体系,以上相为固定相、下相为流动相,在主机转速850 r/min、流速2 mL/min、检测波长254 nm条件下进行分离纯化,最终得到4个分离组分(组分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)。经鉴定发现组分Ⅳ为非花色苷类,组分Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ分别为飞燕草素-3-葡萄糖苷、矢车菊素-3-葡萄糖苷和天竺葵素-3-葡萄糖苷,其含量和纯度分别为17.4、33.7、9.8 mg/100 mg和92.27%、94.05%、90.82%。桑葚花色苷粗提物以及组分Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ对抑制脂质体过氧化和DPPH自由基清除率的半抑制浓度分别为(0.77±0.02)、(0.34±0.02)、(0.55±0.04)、(0.68±0.01)g/L和(0.40±0.01)、(0.16±0.01)、(0.22±0.01)、(0.35±0.03)g/L。     

高效液相色谱(HPLC)结合电喷雾电离源-质谱(ESI-MS)鉴定杜仲叶功能组分

为纯化、鉴定杜仲叶功能组分,采用70%乙醇对杜仲叶进行超声波辅助水提。经大孔树脂NKA-Ⅱ、聚酰胺、Sephadex LH-20柱层析逐步分离纯化,从粗提物中得到4种组分。通过薄层色谱(TLC)、紫外光谱(UV)、高效液相色谱(HPLC)及电喷雾电离源-质谱(ESI-MS)对4种组分进行分析与鉴别,结果表明:从杜仲叶中分离纯化的活性物质,经鉴定主要为绿原酸(Ⅰ)、金丝桃苷或陆地锦苷(Ⅱ)、槲皮素-3-乙酰葡萄糖苷(Ⅲ)、槲皮素(Ⅳ),其中槲皮素-3-乙酰葡萄糖苷(Ⅲ)在相关文献中未见报道。     

运用Mix-D-optimal设计开发紫甘蓝花色苷抗氧化复合果蔬汁饮料

优化紫甘蓝花色苷复合果蔬汁饮料的配方,并测定其抗氧化性.运用Mixture-D-optimal设计,以糖酸比为响应值,在未添加其他添加剂的条件下,利用苹果汁、黄瓜原汁和紫甘蓝花色苷三种原汁自身的糖、酸及风味物质进行复合,形成酸甜适口、风味相容的粉色复合果蔬汁饮料.实验结果表明:紫甘蓝花色苷抗氧化复合果蔬汁饮料的最佳配方...     

大孔树脂分离纯化紫甘蓝中的花色苷

采用大孔吸附树脂法纯化紫甘蓝中的花色苷,考察不同极性树脂对花色苷的静态吸附性能及动态吸附性能和纯化效果的影响,确定紫甘蓝花色苷的纯化工艺条件。研究发现HPD 500树脂对花色苷的吸附选择性最好。以色价为标准,同时考虑到吸附率和解吸率,确定了HPD 500树脂对紫甘蓝中花色苷的纯化工艺条件。结果表明,HPD 500树脂纯化花色苷的最佳条件为:上柱液pH2.5,上柱液吸光度0.707,上柱液体积1.5 BV,吸附流速1.5 BV/h,洗脱流速1.5 BV/h,解吸液为质量分数60%的酸性乙醇(pH2.5)。最佳条件下得紫甘蓝花色苷色价为47.8,提高为初始值(2.3)的20.8倍。     

黑豆皮花色苷的中压液相色谱制备及结构鉴定

以黑豆皮为实验材料,用乙醇浸提法对黑豆皮中的花色苷进行提取,用大孔吸附树脂对花色苷进行纯化,经冷冻干燥得到黑豆皮花色苷粗品。利用中压制备色谱对花色苷组分进行分离,通过质谱分析鉴定经中压制备色谱分离后的花色苷组分。结果表明:黑豆皮花色苷粗品中的总花色苷含量为26.9%,经中压制备色谱对花色苷粗品进行分离后的2峰中矢车菊素-3-葡萄糖苷纯度达到91.46%。黑豆皮中的主要花色苷为天竺葵素-3-O-芸香糖苷、芍药色素-3-O-葡萄糖苷、矢车菊素-3-O-葡萄糖苷和锦葵素-3-葡萄糖苷-4-乙醛。     

黑果小檗果实中锦葵素-3-O-葡萄糖苷的分离纯化及安全性研究

目的 建立并验证黑果小檗果实中锦葵素-3-O-葡萄糖苷(malvidin 3-O-glucoside, Ma-3G)的分离纯化方法,并评估其安全性。方法 利用超声辅助浸提法提取黑果小檗果实中的花色苷(Berberis atrocarpa Schneid anthocyanin,BHSA)粗提物,将BHSA粗提物用乙酸乙酯萃取,AB-8大孔吸附树脂、聚酰胺树脂纯化,采用Sephadex LH-20凝胶柱对纯化后BHSA进行分离,分别考察洗脱液浓度、上样量对花色苷不同组分分离效果的影响,并筛选出最佳分离条件,将最佳条件下分离得到的Ma-3G进行紫外可见光谱扫描及高效液相色谱法检测。采用固定剂量法对小鼠以2000 mg/kg Ma-3G的单次口服剂量进行安全性实验。结果 经乙酸乙酯萃取、AB-8大孔吸附树脂、聚酰胺树脂纯化后得到BHSA粗品纯度为50.76%, Sephadex LH-20凝胶柱层析的最佳分离条件为上样量20 mg,洗脱液为含有0.5%HCl的20%甲醇溶液,在此条件下成功获得了Ma-3G单体。使用面积归一化法进行纯度测定,结果显示其纯度为99.48%。黑果小檗果实中Ma-3...     

棉籽抗菌活性肽的分离纯化及鉴定

通过体外模拟消化系统对棉籽分离蛋白(cottonseed protein isolate,CPI)进行酶解,得到具有抗菌活性的酶解产物,并采用超滤(ultrafiltration,UF)、阴离子交换色谱(anion exchange chromatography,AEC)、半制备高效液相色谱(semi-preparation high performance liquid chromatography,semi-P-HPLC)分离技术对棉籽抗菌活性肽进行分离纯化,用电喷雾串联质谱(electrospray ionization-tandem mass spectrometry,ESI-MS/MS)鉴定棉籽抗菌肽的氨基酸序列。在抗菌活性肽分离纯化过程中,用UF对具有抗菌活性的CPI酶解产物进行分离,得到3个组分U-Ⅰ~U-Ⅲ。抗菌活性检测表明U-Ⅲ的抗菌能力最强;用AEC分离U-Ⅲ得到3个组分QF-Ⅰ~QF-Ⅲ,其中QF-Ⅱ抗菌能力最强;进一步采用semi-P-HPLC分离QF-Ⅱ得到4个组分PF-Ⅰ~PF-Ⅳ,其中PF-Ⅲ的抗菌能力最强,经HPLC检测为单一峰,ESI-MS/MS检测分析得到该肽的氨基酸序列为ISGLIYEETR(Ile-Ser-Gly-Leu-Ile-Tyr-Glu-Glu-Thr-Arg)。     

薰衣草花CO2超临界萃取部位成分的研究

目的：对新疆产薰衣草花CO2 超临界萃取部位的成分进行研究。方法：采用CO2 超临界萃取技术提取及多种柱色谱法分离,光谱技术鉴定结构。结果：分离得到9 种化合物,经光谱方法依次鉴定为白桦酸(Ⅰ)、β-谷甾醇(Ⅱ)、胡萝卜苷(Ⅲ)、胆甾醇(Ⅳ)、7- 羟基-6- 甲氧基香豆素(Ⅴ)、芳樟醇(Ⅵ)、乙酸芳樟酯(Ⅶ)、硬脂酸( Ⅷ) 、硬脂酸甲酯( Ⅸ) 。结论：化合物Ⅳ为首次从唇形科植物中分离得到,化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅷ和Ⅸ为首次从薰衣草属植物中分离得到。     

猕猴桃根抗肝损伤活性的研究

采用CCl4引起小鼠急性肝损伤建模,并通过测定血清中ALT和AST两种转氨酶活性的变化确定最佳的药剂量为60 mg/kg.然后在最佳药剂量的条件下分别给予急性肝损伤小鼠猕猴桃根不同部分的萃取物进行活性筛选.结果标明:猕猴桃根的乙醇提取物经乙酸乙酯萃取后,再经大孔树脂(AB-8)柱乙醇梯度洗脱,其中45%、60%的乙醇洗脱物对CCl4引起的急性肝损伤小鼠血清中的ALT和AsT的活性有显著的降低作用,抑制率分别为63.2%和51.4%.利用MCI和ODS色谱柱层析对有活性的乙醇洗脱物进行分离,最终得到5种乌苏酸型化合物.     

紫甘蓝花色苷色素稳定性研究

以大孔吸附树脂分离纯化,冻干所得紫甘蓝色素粉末为原料,研究pH、温度、抗坏血酸、金属离子及寡糖等因素对紫甘蓝花色苷稳定性影响。结果表明,pH对紫甘蓝花色苷稳定性影响较大,花色苷含量随pH增大而下降,且当pH>7时,花色苷稳定性呈极显著降低趋势;紫甘蓝花色苷热稳定性较好,但温度>80℃时,紫甘蓝花色苷热稳定性较差;金属离子影响存在差异,Na~+、K~+对花色苷稳定性无显著性影响,Ca~(2+)对其稳定性影响显著,而Zn~(2+)、Al~(3+)影响达到极显著程度;高浓度抗坏血酸影响紫甘蓝花色苷稳定性;蔗糖对紫甘蓝花色苷表现为辅色作用,葡萄糖、乳糖、果糖等寡糖对紫甘蓝花色苷稳定性影响较小。     

超高效液相色谱-质谱联用法(UPLC-MS/MS)测定辣椒制品中苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的含量

建立简便快速的测定辣椒制品中4种苏丹红染料的检测方法,以乙腈为提取溶剂,采用乙腈-0.1%水溶液的流动相体系和正离子电离模式,用UPLC-MS/MS测定4种苏丹红染料;苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ线性范围为0～200ng/mL,R2大于0.9911,检出限分别为1.0、2.0、2.0、4.0μg/kg,加标回收率均大于75%,RSD小于10%。该方法简便灵敏,准确快速,可用于辣椒制品中4种苏丹红染料的测定及确证。     

藏紫菀化学成分的研究

目的研究藏紫菀的化学成分。方法用硅胶和Sephadex LH-20柱等进行分离纯化,用物理、化学和光谱学方法鉴定化合物的结构。结果分离并鉴定出6种化合物,分别为：β-谷甾醇（Ⅰ）、α-菠菜甾醇（Ⅱ）、18,19-二羟基-5α,10β-新克罗烷-二烯＊丁烯羟酸内酯（Ⅲ）、胡萝卜苷（Ⅳ）、水杨酸（Ⅴ）、芹菜素（Ⅵ）。结论化合物Ⅱ、Ⅴ系首次从此种植物中分离得到。     

河东乌麦色素提取及其理化性质的研究

首次从河东乌麦麸皮中提取一种天然红色素 ,用酸性乙醇水溶液提取 ,粗色素得率为 14 .7%。经光谱学、薄层色谱及定性分析初步推断该色素为水溶性黄酮类花色苷色素 ,主要由 3种组分组成。理化性质试验表明 ,该色素吸收光谱随pH值而改变 ,pH =3 .0时 ,色素的λmax为 5 3 0nm ;该色素对短时间高温耐受性较好 ,但光稳定性及耐氧化还原性差 ;Zn2 + 、K+ 、Cu2 + 、Mn2 + 、Al3 + 、Ca2 + 、Mg2 + 对色素无不良影响 ,Fe3 + 使其变色 ;蔗糖、食盐、柠檬酸能使色素增色 ,茶多酚有突出的增色、稳定作用 ;质量分数 0 .1%的苯甲酸钠和山梨酸钾对色素影响不大 ;急性毒性实验表明该色素为实际无毒。     

蘘荷红色素分离纯化及喷雾干燥工艺优化

研究分离纯化及喷雾干燥化蘘荷红色素的工艺条件。比较10 种大孔吸附树脂对红色素的静态、动态吸附与解吸效果,红色素纯化液经真空浓缩后用喷雾干燥法制备红色素的粉末。结果表明：LSA-21大孔吸附树脂分离纯化蘘荷红色素效果好,其工艺条件为上柱液pH 5.0、上样液质量浓度3.85 mg/mL、吸附流速2 BV/h,以酸性蒸馏水为解吸剂,解吸流速3 BV/h;喷雾干燥工艺条件为加入待喷液质量分数2%的可溶性淀粉,调整可溶性固形物质量分数达到 12%～14%、进料速率3.0～4.0 kg/h、进口风温度 174～177 ℃、出口风温度 65～71 ℃、排风速率 0.34～0.38 m3/min、雾化压强100 kPa。红色素粉末经薄层层析色谱与高效液相色谱检测均由3 种单体构成。     

基质固相分散术-UPLC 法检测禽蛋中对位红和苏丹红

建立禽蛋中对位红和苏丹红Ⅰ～Ⅳ号5 种色素的液相色谱检测方法。采用基质固相分散术,以氧化铝作基质分散基体,混合均匀的样品用正己烷- 丙酮(99.5:0.5,V/V)直接洗脱,吹干后定容测定,外标法定量。5 种色素的平均回收率为63.8%～96.2%,平均变异系数为0.52%～10.07%,检测限为0.01～0.02mg/kg。在检测的100个样品中,1 例检出苏丹红Ⅳ号。     

霞草花化学成分研究

目的研究霞草花的化学成分。方法用色谱技术分离、纯化,通过理化常数和波谱分析鉴定化合物结构。结果从霞草花分离出7种化合物,分别为丁香醛(Ⅰ),皂草黄素(Ⅱ),大豆脑苷Ⅰ(Ⅲ),3,4-二羟基苯甲酸(Ⅳ),熊果苷(Ⅴ),β-谷甾醇(Ⅵ),胡萝卜苷(Ⅶ)。结论化合物Ⅰ~Ⅶ均为首次从霞草花中分离得到,其中化合物Ⅰ,Ⅳ,Ⅴ为首次从该属植物分离得到,化合物Ⅱ为首次从该种植物分离得到。