反式-2-己烯醛对梨果黑斑病菌Alternaria alternata的抑菌作用及其机理

本实验以梨果黑斑病菌Alternaria alternata为研究对象,采用滤纸片扩散法研究植物源挥发性物质反式-2-己烯醛对A. alternata生长的抑制作用和对黑斑病的控制作用,通过检测膜完整性进一步探讨其抑菌作用的机理。结果表明:反式-2-己烯醛能显著抑制A. alternata的孢子萌发和菌丝生长,且其抑制作用存在剂量效应,其中2.0μL/mL处理后A. alternata的孢子萌发率和菌落直径仅为对照的13.9%和36.67%,同时反式-2-己烯醛熏蒸处理能有效控制梨果黑斑病的扩展。进一步研究表明反式-2-己烯醛处理严重破坏了A. alternata细胞膜完整性,膜电导率和核酸渗出率显著增加(P0.05)。此外,反式-2-己烯醛均不同程度上降低了A. alternata交链格孢酚单甲醚、链格孢酚、交链格烯和腾毒素4种毒素的产生量。上述结果表明反式-2-己烯醛能够通过破坏A. alternata细胞膜完整性和抑制其毒素的产生而降低A. alternata生长和致病性。     

ε-聚赖氨酸对梨果实黑斑病菌Alternaria alternata的抑制作用及其机理

本实验以梨果实黑斑病菌Alternaria alternata为研究对象,通过测定菌落直径与病斑直径研究ε-聚赖氨酸（ε-poly-L-lysine,ε-PL）对A. alternata生长的抑制作用和对黑斑病的控制作用,并进一步通过测定细胞膜完整性、线粒体膜电位及其代谢产物水平探讨其抑菌作用的机理。结果表明：ε-聚赖氨酸能显著抑制A. alternata的菌丝生长（P＜0.05）,且其抑制作用存在浓度依赖效应关系,其中100 mg/L和200 mg/L的ε-PL处理7 d时菌落直径仅分别为对照组的43.24%和29.54%,同时ε-PL处理能有效控制梨果实黑斑病的扩展。进一步的研究表明ε-PL处理严重破坏了A. alternata孢子细胞膜和线粒体的完整性,提高了菌丝体电导率。但同时研究发现,ε-PL促进了A. alternata黑色素及链格孢酚、交链格烯、链格孢酚单甲醚3 种毒素的产生,而对腾毒素的产生起抑制作用。综上,ε-PL主要通过延缓A. alternata生长、破坏孢子细胞膜和线粒体完整性而降低A. alternata的致病性。     

低温贮藏期间梨果皮酚类物质及抗氧化性变化

为了研究甘肃省主要梨果低温贮藏期间果皮酚类物质含量及其抗氧化性的变化,在苹果梨、早酥梨和皇冠梨果皮总酚、总黄酮测定的基础上,采用HPLC法分析8种主要酚类物质含量;并通过FRAP、DPPH和ABTS+·法评价不同时期酚类提取物的抗氧化能力,及其与酚类物质含量的相关性。8种主要酚类物质中熊果苷含量最高,其在苹果梨、早酥梨和皇冠梨果皮的平均含量分别达到10. 22、16. 92和11. 17 mg/g FW;除早酥梨果皮中儿茶素和苹果梨、皇冠梨中芦丁含量在低温贮藏期间呈升高趋势外,总酚、总黄酮及其他主要酚类物质均呈下降趋势;果皮酚类提取物的抗氧化能力随贮藏期的延长而下降,且与总酚、总黄酮、阿魏酸含量呈显著正相关(P <0. 05)。梨果皮酚类物质含量及特性因品种、贮藏期而异,该研究为进一步揭示梨果皮酚类物质的变化规律及其开发利用提供理论依据。     

ε-聚赖氨酸对樱桃采后病原菌橘青霉和链格孢菌的抑菌作用研究

目的 探究ε-聚赖氨酸(ε-polylysine,ε-PL)对樱桃果实采后病原菌橘青霉(Penicillium citrinum)和链格孢菌(Alternaria alternata)的抑菌作用和抑菌机制。方法 本研究测定100、200、400、800 mg/Lε-PL处理对2种病原菌菌丝生长、孢子萌发、细胞膜透性的影响;采用扫描电子显微镜(scanningelectron microscope,SEM)观察ε-PL处理对病原菌孢子的形态的影响;并在樱桃果实上接种2种病原菌,观测ε-PL处理在果体上的抑菌作用。结果 ε-PL对P.citrinum和A.alternata菌落直径扩展的抑制效果随着处理浓度的增加而提高,大于200 mg/L的ε-PL显著抑制孢子萌发;经ε-PL处理后2种病原菌的电导率、OD_280nm、OD_260nm均显著升高(P<0.05),细胞膜通透性增加,蛋白质和核酸等内容物渗漏,细胞膜完整性遭到破坏;经SEM观察发现,ε-PL处理后P. citrinum和A. alternata孢子变形、凹陷,失去正常的细胞形态;大于400 mg/L的ε-PL处理能抑制樱桃果实上的病斑扩展。结论 ε-PL处理可以破坏P. citrinum和A. alternata的细胞膜,导致细胞内容物外渗,使菌丝生长和孢子萌发受阻,进而抑制病原菌的生长,同时,ε-PL处理可以抑制P.citrinum和A. alternata对果实的侵染,在樱桃的采后保鲜方面具有一定的防腐效果。     

采后纳米氧化锌对苹果黑斑病和青霉病的控制

通过离体(in vitro)和体内(in vivo)实验,研究了纳米氧化锌处理对苹果采后主要致腐病菌Alternaria alternata和Penicillium expansum生长的抑制及对病害的控制效果。结果表明:纳米氧化锌对两种病菌的菌丝生长均具有明显的抑制作用,且抑制效果随浓度的升高而增加,其中20%的纳米氧化锌对A.alternata和P.expansum的抑菌率分别达到86.85%和49.60%,对前者抑制效果显著优于后者。20%纳米氧化锌处理对A.alternata孢子萌发的抑制较对照下降了87.37%,而15%纳米氧化锌处理对P.expansum孢子萌发的抑制较对照下降了94.56%。同时纳米氧化锌也显著降低了损伤接种A.alternata和P.expansum苹果病斑直径的扩展,其中以5%纳米氧化锌处理效果最好,分别与对照相比降低了76.24%和65.32%,更高浓度处理并没有增强抑制效果。由此表明,纳米氧化锌可通过直接抑菌作用来减轻苹果黑斑病和青霉病的发生。     

外源一氧化氮对苹果采后黑斑病的控制

在离体条件下研究了NO供体硝普钠(sodium nitroprusside,SNP)对苹果黑斑病菌互隔交链孢(Alternaria alternata)生长、菌落形态及其超微结构的影响,并在体内条件下研究了其对苹果黑斑病的治愈作用。结果表明SNP处理能显著的抑制A.alternata的孢子萌发和菌丝生长,存在浓度依赖效应,当浓度为1 g/100 m L SNP,与对照相比,其对菌丝生长和孢子萌发的抑制率分别达到70%和75.9%;扫描电镜和透射电镜观察发现SNP处理的A.alternata菌丝表面粗糙,粗细不均匀,部分出现塌陷;孢子细胞受到不同程度的破坏,细胞膜发生破裂。同时发现外源SNP处理对损伤接种的苹果黑斑病具有治愈作用,其中0.5 g/100 m L SNP处理效果最佳。可见外源NO作为代替化学合成药物的防腐剂在采后病害控制中具有潜在的应用前景。     

采后亚硒酸钠处理对杏果黑斑病的控制及贮藏品质的影响

通过离体和体内实验研究亚硒酸钠对杏果黑斑病菌互隔交链孢（Alternaria alternata）的抑制作用及黑斑病的控制效果和贮藏品质的影响。结果表明,亚硒酸钠处理能显著抑制A. alternata菌落的生长和孢子萌发,且存在质量浓度效应,40 mg/L的亚硒酸钠能显著抑制A. alternata菌落的生长,其菌落直径较对照降低了30.8%,同时亚硒酸钠还能使A. alternata菌丝发生凹陷、扭曲等形态结构的改变;体内实验表明,采后亚硒酸钠处理能有效抑制损伤接种A. alternata的杏果黑斑病的扩展,其中20 mg/L亚硒酸钠的控制效果最佳,其病斑直径较对照减小了11%;采后亚硒酸钠处理还能够明显减少杏果乙烯的释放和呼吸强度的升高,延缓质量损失率和硬度的降低。可见硒在果蔬采后防腐保鲜中具有潜在的应用前景。     

壳聚（寡）糖对柑橘酸腐、黑腐病菌的抑制作用及对采后病害的防治

通过体外实验测定不同浓度的壳聚糖和壳寡糖对酸腐和黑腐病菌孢子萌发、芽管长度和菌丝生长的抑制作用;采用刺伤接种方法评价壳聚糖和壳寡糖对柑橘果实两种病害的防治作用。离体实验结果表明,壳聚糖和壳寡糖浓度为10mg/mL时几乎完全抑制两种病原菌的菌丝生长;浓度为0.5mg/mL壳聚糖和壳寡糖能完全抑制柑橘酸腐病菌（Geotrichum candidum）孢子萌发和芽管伸长的效果,而2mg/mL的壳聚糖才能完全抑制柑橘黑腐病菌（Alternaria citri）孢子萌发和芽管伸长,但相同浓度的壳寡糖抑制A.citri的孢子萌发和芽管伸长效果较差。体内实验结果表明,其病害防治效果具有浓度依赖性,高浓度（1%）的壳聚糖和壳寡糖对果实病害的防治效果较低浓度的防治效果好。     

核黄素对厚皮甜瓜果实粉霉病和黑斑病的影响

研究不同浓度核黄素处理时厚皮甜瓜果实损伤接种粉红单端孢（Trichothecium roseum）和互隔交链孢（Alternaria alternata）的病斑直径,以及离体培养条件下核黄素处理对两种病原物孢子萌发和菌丝生长的影响。同时研究核黄素处理对厚皮甜瓜果实苯丙烷代谢的影响。结果表明：核黄素浓度为1.0 mmol/L时对甜瓜粉霉病和黑斑病病斑直径的抑制效果最佳。离体培养情况下核黄素处理对T. roseum和A. alternata的孢子萌发率和菌丝生长有抑制效果,其中以浓度为1.0 mmol/L效果最佳。核黄素处理显著提高了厚皮甜瓜果实过氧化物酶和苯丙氨酸解氨酶的活性,还显著提高了总酚、类黄酮、木质素的含量。由此表明,采后核黄素处理可活化苯丙烷代谢,增加相关酶活性及抗性物质的积累,从而强化果实细胞壁结构,抑制果实采后病害的发生。     

橙子果皮诱导抗病组分对意大利青霉的抑菌活性及作用机制

对前期研究发现的毛霉诱导脐橙果皮产生的抗病性红色物质组分进行分离纯化,并分析其对柑橘意大利青霉的抑菌活性及作用机制。结果表明,在50～200 μg/mL质量浓度下,红色物质组分对意大利青霉孢子萌发、芽管伸长、菌落生长和菌丝生物量增加表现出很强的剂量依赖型抑制作用。进一步研究表明：红色物质处理改变了菌丝细胞壁几丁质结构与分布,降低了几丁质含量;破坏了细胞膜通透性,降低了细胞膜总脂质含量和麦角固醇含量,影响了细胞膜的正常功能。说明红色物质作为替代化学杀菌剂的新型柑橘采后安全保鲜剂具有良好的研究和开发前景。     

柠檬皮中柠檬苦素对根霉的抑菌活性和机理

通过测定柠檬皮中柠檬苦素对根霉的最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC)、孢子萌发抑制率、菌丝萌发抑制率确定其抑菌活性,根据测定各因素对抑菌活性的影响确定抑菌活性的稳定性;并通过扫描电镜观察和测定根霉细胞外碱性磷酸酶(AKP)含量和蛋白质含量,菌丝体的总糖含量,分析柠檬皮中柠檬苦素对根霉的抑菌机理。结果表明:柠檬皮中柠檬苦素对根霉的最低抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)分别为1250、5000 μg/mL;对根霉孢子萌发的抑制效果更强,对孢子萌发和菌丝生长抑制的EC₅₀值分别为918.34和1707.31 μg/mL。柠檬苦素对根霉的抑菌活性不受温度和明胶的影响;pH为4时,抑菌活性最强;Fe3+、Fe2+均能显著(p<0.05)提高柠檬苦素的抑菌活性。柠檬苦素能使根霉的糖、蛋白质、AKP等胞内物质渗出;扫描电镜观察也发现经柠檬苦素处理的根霉孢子凹陷和皱缩严重,且溶出物明显;菌丝出现断裂扭曲、变形、变细。因此,柠檬苦素能破坏根霉的细胞壁和细胞膜的完整性,使胞内物质渗出,菌丝体和孢子变形,从而使根霉生长代谢受到影响。     

Chemical composition and antifungal activity of essential oil from Cicuta virosa L. var. latisecta Celak

The essential oil extracted from the fruits of Cicuta virosa L. var. latisecta Celak was tested in vitro and in vivo against four foodborne fungi, Aspergillus flavus, Aspergillus oryzae, Aspergillus niger, and Alternaria alternata. Forty-five different components accounting for 98.4% of the total oil composition were identified by gas chromatography-mass spectrometry. The major components were γ-terpinene (40.92%), p-cymene (27.93%), and cumin aldehyde (21.20%). Antifungal activity was tested by the poisoned food technique against the four fungi. Minimum inhibitory concentration against the fungi was 5 μL/mL and percentage inhibition of mycelial growth was determined at day 9. The essential oil had a strong inhibitory effect on spore production and germination in all tested fungi proportional to concentration. The oil exhibited noticeable inhibition on dry mycelium weight and synthesis of aflatoxin B? (AFB?) by A. flavus, completely inhibiting AFB(1) production at 4 μL/mL. The effect of the essential oil on inhibition of decay development in cherry tomatoes was tested in vivo by exposing inoculated and control fruit to essential oil vapor at a concentration of 200 μL/mL. Results indicated that the essential oil from C. virosa var. latisecta (CVEO) has potential as a preservative to control food spoilage.     

吡啶-2,6-二羧酸处理对梨果采后黑斑病控制作用及其抑菌机理

由互隔交链孢（Alternaria alternata）引起的黑斑病是梨果主要采后病害之一,会导致严重的经济损失。本实验以梨果黑斑病菌A. alternata为研究对象,通过体内外实验研究了枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）代谢产物吡啶-2,6-二羧酸（pyridine-2,6-dipicolinic acid,DPA）对A. alternata生长的抑制和对梨果黑斑病的控制作用,并进一步探讨了其抑菌作用的机理。结果表明：DPA能显著抑制A. alternata的菌落生长、孢子萌发以及芽管伸长,其中2.0 mmol/L DPA处理后培养9 d时A. alternata菌落直径仅为对照组的51.76%,4.0 mmol/L处理可完全抑制A. alternata的生长。DPA处理对梨果黑斑病的扩展有明显的控制作用,贮存至第11天时,20.0 mmol/L DPA处理组早酥梨病斑直径仅为对照组的55.17%。进一步研究表明,DPA处理提高了A. alternata细胞膜的通透性,菌丝电导率、蛋白质和核酸渗漏量显著增加,同时DPA处理降低了细胞膜组分麦角甾醇质量浓度,提高了A. alternata丙二醛浓度。结论：DPA可通过延缓A. alternata生长、提高膜通透性、破坏细胞膜的完整性和促使膜脂氧化而发挥抑菌作用。     

刺梨白粉病拮抗菌的筛选及其抑菌机制初探

为筛选出对刺梨白粉病具有良好抑制作用的拮抗菌,从健康刺梨及其根系土壤进行微生物分离,以刺梨白粉病病原菌(Sphaerotheca pannosa)为靶标菌株,采用叶盘法对拮抗菌进行筛选,通过形态学、生理生化特征以及16S rRNA对筛选的拮抗菌进行鉴定,测定其OD值绘制生长曲线,并探究拮抗菌对病原菌孢子萌发和菌丝的影响及其产酶情况。结果表明:共分离得到48株细菌,其中JK-6和JK-32具有显著抑制作用,经鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)和空气芽孢杆菌(Bacillus aerius),对刺梨白粉病的防治效果达到了60%和57%;拮抗菌作用下致使病原菌的孢子在萌发过程中发生异常膨大现象,菌丝表面变得粗糙、膨大、缠绕和融断;产酶情况表明两株拮抗菌均可产生蛋白酶、纤维素酶以及果胶酶。为刺梨白粉病的生物防治提供了理论基础,具有进一步研究价值。     

五种杀菌剂对花生褐斑病菌室内毒力的影响和田间药效

为了筛选对花生褐斑病田间防治效果好的杀菌剂,结合室内毒力测定（菌丝生长速率法和载玻片萌发法）和田间小区药效试验对四种杀菌剂与常规使用的杀菌剂多菌灵进行了比较。结果表明,室内毒力测定中,多菌灵对菌丝的抑制效果最强,抑菌率为91.4%;其余四种供试杀菌剂中以咪酰胺效果最好,抑菌率达85.6%;王铜效果最差;多菌灵对分生孢子的抑制率为60.9%,其余四种杀菌剂效果差异不显著。田间药效试验结果显示,咪酰胺2 000mg/kg对花生褐斑病的田间防治效果达60.62%,远远高于对照药剂多菌灵（15.53%）以及其它三种供试杀菌剂（王铜、爱可和戊唑醇）。此外咪酰胺比清水对照增产32.28%,也远远高于其它几种药剂。通过室内毒力试验和田间药效试验表明,田间杀菌剂防治花生褐斑病时,咪酰胺比对照药剂多菌灵具有更好的防治效果,适用于花生褐斑病重病地区。     

苹果腐败霉菌的拮抗酵母菌筛选鉴定及拮抗机理初探

从苹果果皮中筛选出对引起苹果采后病害的扩展青霉(Penicillium expansum)、互隔交链格孢霉(Alternaria alternata)和黑曲霉(Aspergillus niger)具有拮抗作用的酵母菌,并初步研究其拮抗机理。结果表明:筛选得到两株可以同时拮抗三种腐败霉菌的拮抗酵母菌Y4和Y9,根据酵母菌菌落性状、生理生化特征并结合分子生物学的分析结果,鉴定为Candida railenensis和Aureobasidium pullulans,其中A.pullulans为类酵母真菌。C.railenensis的最佳拮抗浓度为109 CFU/mL,对P.expansum、A.alternata和A.niger的菌丝生长、孢子萌发和芽管生长均有显著(p<0.05)的抑制作用。扫描电镜观察到C.railenensis能够包围和吸附腐败霉菌孢子,与它们竞争营养与空间,此外还能够吸附P.expansum菌丝体与其直接作用。C.railenensis的主要抑病机理是营养与空间竞争,并且其生防效果的发挥是多种方式共同作用的综合结果。     

壳聚糖金属配合物对黑曲霉的抑制活性研究

通过观察黑曲霉菌丝体的生长及孢子萌发情况,考察壳聚糖(CS)及壳聚糖锌(CS-Zn)、壳聚糖镍(CS-Ni)的抗真菌性能。结果表明：壳聚糖、壳聚糖锌和壳聚糖镍对黑曲霉孢子萌发和菌丝体生长均具有明显抑制作用,且壳聚糖金属配合物的抑菌效果比壳聚糖本身更强,其中壳聚糖镍最强。壳聚糖镍对黑曲霉的抑菌活性受壳聚糖分子质量、环境pH 值、质量浓度因素的影响较大。分子质量为5kD 的CS 制备的CS-Ni 抗真菌效果最好;CS-Ni 抑菌效果在pH3～7.5 时随pH 值降低而增强;随CS-Ni 质量浓度(0～0.75mg/mL)的增加而增强。     

一株拮抗酿酒葡萄灰霉病的枯草芽孢杆菌T3筛选、鉴定及抑菌分析

为筛选出对酿酒葡萄灰霉病具有良好抑制作用的拮抗菌,从酿酒葡萄根际土壤进行微生物分离,以灰葡萄孢(Botrytis cinerea)为靶标菌株,采用牛津杯法对拮抗菌进行筛选,通过形态学、生理生化特征以及16S rDNA进行鉴定分析,对拮抗菌进行生长特性及抑菌分析。结果表明:筛选出一株对灰葡萄孢(Botrytis cinerea)具有显著抑制作用的T3菌株,经鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),培养24~48 h T3菌株进入稳定期,最适的生长温度为37 ℃,最适pH为7.0。T3菌株对灰葡萄孢(Botrytis cinerea)MIC为3.6×105 CFU/mL,MBC为3.6×106 CFU/mL,3.6×109 CFU/mL T3菌株对灰葡萄孢(Botrytis cinerea)抑菌直径为31.6±0.2 mm(P<0.05),抑菌效价为158.0±1.0 mm/mL(P<0.05)。扫描电镜观察T3菌株造成灰葡萄孢(Botrytis cinerea)菌丝畸形、扭曲、顶端膨大、原生质收缩、孢子稀松,抑制菌丝生长及孢子萌发。本实验为酿酒葡萄灰霉病的生物防治提供新的微生物资源,具有进一步研究价值。     

江香薷活性成分香芹酚对指状青霉的抑菌作用

以指状青霉菌(Penicillium digitatum)为供试菌,研究江香薷活性成分香芹酚的抑菌活性及其抑菌机理。本文采用二倍稀释法测定其最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MFC),以此评价香芹酚对指状青霉菌的抑菌效果;并通过研究香芹酚对指状青霉的菌丝形态变化、孢子萌发率、细胞膜渗透性和菌体内可溶性糖含量,阐述香芹酚对指状青霉菌的抑菌机理。结果表明:香芹酚对指状青霉菌的MIC、MFC分别为0.125 mg/mL和0.25 mg/mL;经不同浓度香芹酚处理后的指状青霉,菌丝形态发生明显改变,孢子萌发率显著降低,细胞膜渗透性增强,菌体内可溶性糖含量降低。说明香芹酚能有效抑制指状青霉菌的孢子萌发,破坏细胞膜结构完整性,内含物外渗,降低营养物质含量,影响病原菌正常生长发育,从而发挥抑菌效果。