基于高活菌数的瑞士乳杆菌和鼠李糖乳杆菌混合发酵工艺优化

以瑞士乳杆菌和鼠李糖乳杆菌混合发酵培养,利用两菌株细胞代谢的差异,以静置发酵24 h后得到的活菌数目为指标,通过单因素实验和正交实验,研究了瑞士乳杆菌和鼠李糖乳杆菌高活菌数混合发酵的最适发酵条件。结果表明,瑞士乳杆菌和鼠李糖乳杆菌高活菌数混合发酵的最优条件为:发酵温度37℃,初始pH=6.8,接种量6%,瑞士乳杆菌:鼠李糖乳杆菌=1∶2,瑞士乳杆菌优先接种3 h。最终得到乳酸菌总活菌数为7.2×10~9m L~(-1)。与在相同条件下单独发酵的瑞士乳杆菌和鼠李糖乳杆菌活菌数相比,分别提高了1∶8倍和10.2倍。为乳酸菌的高活菌数发酵奠定了基础。     

鼠李糖乳杆菌Probio-M9连续传代过程中的遗传稳定性

目的：探究鼠李糖乳杆菌Probio-M9在连续传代过程中的遗传稳定性。方法：以鼠李糖乳杆菌Probio-M9为研究对象,对其传代过程中第0,25,50,75,100代的菌株形态变化、碳水化合物利用能力以及菌株代谢特性进行比较,同时应用比较基因组学分析其在连续培养100代过程中基因组水平的变化。结果：鼠李糖乳杆菌Probio-M9在连续培养100代过程中,其菌体形态、碳水化合物利用能力等表型特征及代谢特性均无显著性（P>0.05）变化,表型特征稳定。同时以鼠李糖乳杆菌Probio-M9原始菌株基因组作为参考序列,对不同代时15株菌进行测序,基因组大小及GC含量表明15株连续培养的菌株与鼠李糖乳杆菌Probio-M9原始菌株基因组均无明显差异。系统发育关系表明15株菌与原始基因组具有较近的亲缘性。从识别到的SNP位点来看,每两个代时菌株间均未发现稳定遗传的突变位点,且菌株共线性良好,从基因组水平编码基因的突变水平证实了鼠李糖乳杆菌Probio-M9在连续培养100代过程中具有稳定表型特征及代谢特性。结论：鼠李糖乳杆菌Probio-M9在连续传代过程中具有良好的遗传稳定性,为其进一步开...     

瑞士乳杆菌的益生特性

研究了瑞士乳杆菌作为发酵肉制品发酵剂的发酵特性;在模拟胃肠道环境中对酸和胆盐的耐受性;另以Caco-2细胞为体外肠道上皮细胞模型,研究了瑞士乳杆菌对小肠的黏附性和影响黏附的因素。实验结果表明,瑞士乳杆菌不产粘液,不产气,不产H2S,不产氨,不产H2O2,不具有氨基酸脱羧酶活性,不具有硝酸还原酶能力,具有抑制S.aureus和E.coli能力,能耐受一定量的NaCl和NaNO2,发酵葡萄糖产酸。瑞士乳杆菌同时还具有较好的耐酸和耐胆盐性能。通过瑞士乳杆菌的小肠黏附实验发现,生长稳定期的瑞士乳杆菌与Caco-2细胞有很好的黏附效果,当瑞士乳杆菌与Caco-2细胞共培养时间为2h时,黏附趋于饱和,且黏附环境pH值为7.0时黏附性最强。结果显示瑞士乳杆菌具备益生活性,满足发酵肉制品中益生菌制剂的筛选标准,可作为发酵菌种用于发酵肉制品的生产。     

动物双歧杆菌乳亚种V9连续传代过程中遗传稳定性评价

目的:以具有优良益生特性的动物双歧杆菌乳亚种V9为研究对象,对其连续传代过程中的遗传稳定性进行研究。方法:动物双歧杆菌乳亚种V9在TPY培养基中连续培养100代,对其0,25,50,75,100代的菌体形态、碳水化合物利用情况以及结合比较基因组学进行综合分析。结果:动物双歧杆菌乳亚种V9在连续传代过程中不同代时的菌体形态、碳水化合物利用情况均无显著差异(P＞0.05),并以动物双歧杆菌乳亚种V9原始基因组作为参考序列,研究发现不同代时的动物双歧杆菌乳亚种V9的基因组大小和GC含量与原始基因组均无显著差异(P＞0.05),系统发育树结果表明不同代时的动物双歧杆菌乳亚种V9与原始基因组亲缘关系较近,通过识别SNP突变位点发现不同代时的动物双歧杆菌乳亚种V9基因组保守,均未发现稳定遗传的突变位点,进一步进行碳水化合物代谢活性酶注释,结果发现不同代时菌株具有相似的碳水化合物代谢相关基因,遗传特征高度相似。结论:本研究从表型特性和基因组层面综合评估了动物双歧杆菌乳亚种V9的遗传稳定性,可为其进一步开发研究及产业化提供保障。     

瑞士乳杆菌增菌培养基的筛选

以冻干后菌体的存活率为依据,首先筛选出存活率最高的瑞士乳杆菌基础培养基为10%的脱脂乳培养基;然后分别采用单因素实验和正交实验,优化培养基成分及用量;最后确定瑞士乳杆菌的增菌培养基配方为:10%脱脂乳+0.1%乳糖+1.0%酵母膏+10%麦芽汁+1.0g/100mL柠檬酸三钠.在此优化培养基中,瑞士乳杆菌培养至10h左右,其活菌数可达8.16×109cfu/mL.     

瑞士乳杆菌发酵乳对骨强度的影响

利用8月龄SD去卵巢大鼠研究瑞士乳杆菌发酵乳对骨强度可能产生的影响.将患有骨质疏松症的大鼠.随机分为6组(每组8只),每天喂1次瑞士乳杆茵发酵乳,对照组饮用水、脱脂乳、普通酸乳和瑞士乳杆菌发酵乳乳清多肽提取物,实验观察10周.用瑞士乳杆菌发酵乳长期喂养大鼠,能明显增加骨骼的承栽能力.提高骨骼抵抗骨折的能力.     

弱后酸化保加利亚乳杆菌突变株与亲本菌株H+-ATPase基因的相似性比较

为了确定德氏乳杆菌保加利亚亚种H+-ATPase的调控机制,以H+-ATPase缺陷的德氏乳杆菌保加利亚亚种突变菌株和亲本菌株KLDS1.9201作为研究对象.首先分别提取亲本和突变菌株的基因组DNA,随后利用PCR的方法扩增出H+-ATPase蛋白的全部编码基因并测序,最后利用DNAMAN软件比较亲本和突变菌株的H+-ATPase的相似性.结果表明亲本和突变菌株H+-ATPase编码基因的相似性为100％.H+-ATPase缺陷的德氏乳杆菌保加利亚亚种突变菌株KLDS1.9201-11和亲本菌株KLDS1.9201的H+-ATPase活力之间的差异并不是由于编码基因发生了突变,可能是转录水平的降低导致H+-ATPase酶蛋白的表达量降低,进而影响酶活力.为进一步研究德氏乳杆菌保加利亚亚种H+-ATPase的调控机制奠定了基础.     

瑞士乳杆菌H11发酵乳饮料的ACE抑制活性及代谢组学研究

目的:研究瑞士乳杆菌H11与副干酪乳杆菌Lc-01两种发酵乳饮料在贮藏期间的代谢差异变化。方法:使用气相色谱-质谱（SPME-GC-MS）联用、高效液相色谱（HPLC）和超高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱（UPLC/Q-TOF MS）技术对4 ℃、贮藏28 d期间发酵乳饮料中的挥发性风味物质、代谢物以及ACE抑制活性之间的差异进行分析。结果:在4 ℃贮藏28 d后,瑞士乳杆菌H11发酵乳饮料的体外ACE抑制活性比副干酪乳杆菌Lc-01高60%以上,ACE抑制肽VPP和IPP含量也显著高于Lc-01（P<0.05）。采用SPME-GC-MS发现瑞士乳杆菌H11发酵乳饮料中香气成分丰富,特征风味物质2-庚酮和2-壬酮相对含量较高,分别为43.84%和12.39%。基于UPLC/Q-TOF MS的结果表明,贮藏期间两种发酵乳饮料的主要代谢差异物为肽、氨基酸和有机酸。结论:瑞士乳杆菌H11在制备发酵乳饮料方面存在巨大潜力。     

喷雾干燥钝化瑞士乳杆菌工艺的优化

应用响应面分析法研究了喷雾入口温度、喷雾出口温度、喷雾压力、菌种和保护剂体积比对瑞士乳杆菌产酸性能的影响.以瑞士乳杆菌发酵后其蛋白酶的水解度作为衡量标准,确定钝化的最佳工艺参数为:喷雾入口温度140%、喷雾出口温度65℃、喷雾压力20MPa、菌种和保护剂的体积比为1:4.按此最佳工艺条件钝化瑞士乳杆菌,经过发酵后测其酸度和水解度.     

瑞士乳杆菌冻干发酵剂制备中保护剂的选择

通过对不同种类不同浓度的冻干发酵剂复水后活菌数和乳酸脱氢酶的测定,比较了几种冻干保护剂对瑞士乳杆菌的保护效果.实验表明,选用10%～15%脱脂奶,10%～15%海藻糖作为保护剂,对瑞士乳杆菌的冻干保藏有较好的保护效果.     

基于肽组学的瑞士乳杆菌酪蛋白水解差异分析

为了探究瑞士乳杆菌酪蛋白的水解能力及多肽产物的差异,选取两株瑞士乳杆菌菌株,研究其发酵过程中主要酪蛋白组分的消耗、多肽的动态变化与生物活性肽的生成,以及两株瑞士乳杆菌菌株的蛋白水解基因与胞壁蛋白酶酶活特性。结果表明:两株瑞士乳杆菌对β-酪蛋白和αs1-酪蛋白的水解有明显差异,而无明显偏好性。肽总量在发酵过程中呈现先增加后减少的趋势,分子质量为2 000~10 000 u的多肽与总肽含量变化一致,而180~500 u的小分子质量多肽则先消耗后积累。LC-MS/MS结果表明:发酵产物中多肽呈现异质性,7M3产生的特异性肽更多,多来自β-酪蛋白的f78-99区域,并偏好切割αs1-酪蛋白的C端;而M108则产生更多来源于αs1-酪蛋白N端及中间序列的肽段。两株菌株各含不同的胞壁蛋白酶基因及转运系统,发酵前期M108酶活较高。     

瑞士乳杆菌与干酪乳杆菌在不同原料中的发酵特性研究

研究了瑞士乳杆菌和干酪乳杆菌单独与组合,以及与嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌组合在纯牛乳、纯豆乳和混合乳中发酵12h后pH值和酸度值变化,以此来说明它们在3种原料中的生长情况.结果表明,瑞士乳杆菌在纯牛乳和混合乳中产酸能力很强,在纯豆乳中产酸能力不够强,生长不够好;干酪乳杆菌在纯豆乳中生长产酸能力比瑞士乳杆菌强;研究还得出瑞士乳杆菌和干酪乳杆菌组合,以及他们分别与嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌组合在纯豆乳生长产酸能力相当.     

瑞士乳杆菌冻干保护剂的选择

研究几种高、低分子化合物对冻干瑞士乳杆菌的保护作用.以冻干后的活菌存活率和凝乳时间为考察指标,先进行单因素试验筛选出保护效果最好的4种物质甘油、葡萄糖、组氨酸和牛血清白蛋白,用这4种物质复配,进行复合保护剂正交试验.结果表明:将增菌培养基发酵液(含10%脱脂乳)与冻干保护剂溶液混合冻干,最佳保护剂配方为0.5%甘油+15.0%葡萄糖+150 mg/L组氨酸+1.5%牛血清白蛋白.加入冻干保护剂后,瑞士乳杆菌冻干后存活率可达89%.     

海藻酸钠固定瑞士乳杆菌条件优化

采用海藻酸钠固定瑞士乳杆菌,制备具有血管紧张素转化酶(ACE)抑制活性的酸乳,通过单因素试验和L9(34)正交试验确定其最优固定条件。结果表明,最优固定条件是1.5g/100mL海藻酸钠溶液、菌液浓度1:10(m/V)、0.1mol/L CaCl2溶液、固定时间1h。将固定化的瑞士乳杆菌与传统酸乳发酵剂(保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌)复配接入到11g/100mL牛乳中,在37℃条件下发酵至凝乳,凝乳时间为8h,pH值为4.2,凝乳状态好,口感柔和、细腻,成品酸乳ACE抑制活性为70.3%。     

不同品牌酸乳中德氏乳杆菌的分离鉴定及RAPD分析

从不同品牌的10 种酸乳中分离得到10 株德氏乳杆菌(Lactobacillus delbrueckii),经生理生化实验及特异性PCR 鉴定,L.d3、L.d4、L.d5、L.d6、L.d8、L.d10 为德氏乳杆菌保加利亚亚种(Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus),L.d1、L.d2、L.d7、L.d9 为德氏乳杆菌乳酸亚种(Lactobacillus delbrueckii subsp. lactis)。利用24 个随机引物对上述10 株德氏乳杆菌进行随机扩增DNA 多态性分析,并使用NTSYSpc-2.10e 软件对扩增图谱数据进行处理,得出10 个菌株之间的遗传相似系数矩阵及聚类分析图。结果表明,10 个菌株相互间的遗传相似系数在0.4167～0.8833 之间,不同菌株间存在一定的亲缘关系及遗传异质性。     

风干肉中产脂肪酶瑞士乳杆菌TR13全基因组测序及序列分析

瑞士乳杆菌TR13是从自然风干羊肉中分离筛选到的1株产脂肪酶活性高的菌株,为能够更好地研究该菌株在羊肉发酵过程中的代谢机理和功能,采用PacBio Illumina HiSeq测序平台对细菌TR13进行完成图测序分析。结果表明,瑞士乳杆菌TR13基因组为1套环状无质粒分子,基因组序列总长度为2 172 224 bp,GC含量为36.82%。基因组中预测到2 536个编码基因,编码基因总长度为1 883 532 bp,平均长度为799.46 bp,平均密度为1.08个/kb,对应蛋白质平均序列长度为265 aa,占基因组百分比为86.71%。TR13菌株基因组中包含15个rRNA操纵子和63个tRNA。预测到可能的毒力基因75个,耐药基因150个。编码基因通过GO、COG和KEGG数据库的对比分析,完成了TR13菌株基因组基本功能注释和代谢通路基因信息注释,注释信息可为菌株应用研究提供一定理论依据。     

比较基因组学揭示鼠李糖乳杆菌Probio-M9在种内的基因组差异

鼠李糖乳杆菌是人和动物肠道的共生菌,在食品、医药和动物养殖等多个领域均有应用。本文以鼠李糖乳杆菌Probio-M9全基因组为对象,结合NCBI公开的214株鼠李糖乳杆菌基因组序列进行比较基因组学分析,解析不同鼠李糖乳杆菌基因组差异。结果发现,215株鼠李糖乳杆菌共识别到16 915个泛基因,247个核心基因;后续通过247个核心基因构建系统发育树,分离源和分离地不存在明显聚类趋势。鼠李糖乳杆菌Probio-M9处在分支最大的分支Ⅱ中,该分支各菌株之间的遗传关系近,差异很小,区分难度大;对分支Ⅱ中98株鼠李糖乳杆菌进行RAST注释分析,鼠李糖乳杆菌虽在功能方面整体存在高度相似性,但其中部分菌株与鼠李糖乳杆菌Probio-M9存在一定差异,相较于其它鼠李糖乳杆菌,鼠李糖乳杆菌Probio-M9具有更强的自身代谢、转录、运输等方面的调控能力,并且含有与益生功能相关的基因,如谷胱甘肽(gshAB)、胞外多糖(rmlA~rmlD、epsH)及提高宿主代谢能力(tagE)相关基因。通过比较基因组学揭示鼠李糖乳杆菌Probio-M9在种内的基因组差异,为鼠李糖乳杆菌Probio-M9的开发及应用奠定了基础。     

瑞士乳杆菌特性及应用研究进展

瑞士乳杆菌是乳酸菌的一种,是对人体健康有益的菌种。具有较强的蛋白水解能力,调节肠道菌群能力,增强免疫力及抗高血压的功效,还具有产生细菌素或生物活性肽的潜能,并且可与发酵乳制品中的益生元结合产生合生素,因此被广泛用于食品发酵中。该文综述了瑞士乳杆菌基因组特征,蛋白水解系统,抗高血压,产生的胞外多糖所具有的免疫调节的益生特性,以及其在食品和菌体生物表面活性剂中的应用。     

瑞士乳杆菌发酵乳对骨密度的影响研究

利用8月龄SD去卵巢大鼠研究瑞士乳杆菌发酵乳对骨密度和骨矿物质含量可能产生的影响。将患有骨质疏松症的大鼠，随机分为5组（每组8只），每天喂一次瑞士乳杆菌发酵乳，对照组饮用水、脱脂乳和普通酸乳，实验观察10周。用双能X射线骨密度测量仪测定骨密度及骨矿物质含量。右股骨用于测量骨密度指标，左股骨测量骨钙含量。瑞士乳杆菌发酵乳相对于水和酸奶而言，能够明显的增加骨密度和骨矿物质的含量，饮用瑞士乳杆菌发酵乳组大鼠的骨密度及骨矿物质含量的平均值较脱脂乳、普通酸奶组高，但统计无显著性差异。用瑞士乳杆菌发酵乳长期喂养大鼠，能明显增加其骨密度、骨矿物质含量和增加骨骼的承载能力，提高骨骼抵抗骨折的能力。     

鼠李糖乳杆菌LV108传代的稳定性

为了对鼠李糖乳杆菌LV108在连续传代过程中的遗传稳定性进行研究。通过测定鼠李糖乳杆菌LV108在传代过程中发酵特性、益生特性的变化,并用RAPD方法分析不同传代菌株基因组的变化。结果表明,LV108经过20代传代后,其发酵乳p H值、酸度、持水力、黏度均未发生显著变化;耐酸及耐胆盐能力无显著变化,在p H值为3.0和胆盐质量分数0.3%的培养基中,存活率分别大于90%和45%;对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均为中度抑制以上,在传代过程中变化不显著;α-ALDC,LDH,α-Gal酶的活力在传代过程中也较为稳定。统计分析20个引物PCR扩增指纹图谱中的各类扩增带,基因组相似率在0.9761~0.9973之间,在传代过程中各代菌株基因组之间具有极大的相似性。因此,LV108可作为良好的发酵菌株应用于工业生产中。