生物素测定方法的分析

生物素是一种B族维生素。近几年，生物素受到的广泛的关注，与此同时，生物素测定方法的研究也取得了迅速的发展。本文介绍了近年来生物素测定常用的几种方法，例如微生物法、高压液相色谱法、生物传感器法、毛细管电泳法、荧光法、ELISA法、微分脉冲伏安法，并简单介绍了生物素分析的研究现状与进展。     

一种生物素产生菌的简便快速平板筛选方法

介绍一种简便快速筛选生物素产生菌的方法,该方法运用微生物生长圈法原理,以生物素营养缺陷型菌株为指示菌。制作混有该指示菌的缺乏生物素的培养基单层平板,将土壤样品稀释涂布在此平板上培养,所形成的菌落如果分泌生物素到培养基中,菌落周围就会产生指示菌的生长圈,由此可初步获得生物素产生菌。实验利用初筛和复筛并结合管碟法检测,从大量土壤样品中筛选产生物素能力较强的菌株,运用高效液相色谱法验证,确定该筛选方法有效可靠。     

D-生物素合成研究进展

D-生物素属于B族维生素，也是合成维生素C的必要物质，最初在酵母的研究过程中被发现，之后与其相关的报道层出不穷。在工业中，D-生物素以化学法合成，但化学法有工艺繁杂以及会对环境造成危害等弊端，而利用生物法合成D-生物素则有工艺简单和环境友好等优点，因此近些年通过微生物合成D-生物素的研究越来越广泛。该文综述了D-生物素的生理作用、化学合成法、生物合成法以及微生物合成D-生物素的研究进展，旨在为以后研究者们对微生物合成D-生物素的研究提供参考。     

生物素的测定方法及应用进展

生物素是生物生长发育中一种非常重要的营养物质,它参与机体的多种新陈代谢活动,被广泛应用于食品、医药、饲料、发酵等领域,对工农业生产和人们的日常生活产生了重要的影响。伴随着生物素应用的扩增,检测生物素的方法也在不断发展变化,通过检测生物素的含量可以对有关生物素的工农业生产加以指导,实现产品的最优化,维护人们的健康。简要介绍了生物素的主要分析方法及最新的应用进展,并对生物素检测手段的未来发展作了展望。     

食品中生物素分析方法现状及发展趋势

介绍了常用分析方法在生物素分析中的应用,包括:滴定分析法、分光光度法、薄层色谱法、微生物法、气相色谱法、高效液相色谱法、质谱分析法、免疫分析法等,以及各种方法的适用范围和优缺点.评述了生物素分析的现状与进展.     

国标法和试剂盒法对婴幼儿食品中生物素质量分数的测定

比较GB5413.19-2010《食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中游离生物素的测定》中微生物法和商品化生物素检测试剂盒法对婴幼儿食品中生物素质量分数测定的差异性,为相关企业和检测机构提供有益参考。两方法均是利用植物乳杆菌(LactobaciLLus pLantarum)对生物素具有敏感性的特点,通过测定菌株的生长变化来反映样品中生物素质量分数。结果表明,国标法测定标准曲线在生物素质量分数为(0.01~0.1)×10-2μg/g范围内具有良好的线性关系(R2=0.9963),试剂盒法在(0.08~0.72)×10-2μg/g范围内线性良好(R2=0.9747)。以这两种方法对5份婴幼儿食品中生物素质量分数进行检测比较,两者均能有效测定生物素质量分数,国标法检测最大RSD%为2.836,而试剂盒法最大RSD%为9.777,但均不影响最终结果判断。两种方法均适合于婴幼儿食品中生物素的测定,国标法相对于试剂盒法有更好的稳定性,但操作过程较为繁杂;而试剂盒法的检测周期短,适合于大批量检测工作。     

生物素测定法的研究(第Ⅰ报)

本文为建立一种快速、准确地测定生物素浓度的方法进行了研究,进而应用于谷氨酸生产中生物素的测定。     

传统微生物法与试剂盒法测定乳粉中生物素比较

目的比较微生物法和试剂盒法测定配方奶粉中生物素的结果。方法用国标GB 5009.259-2016和试剂盒方法测试标准参考物质和不同配方奶粉中生物素含量,对结果进行精密度和相对偏差比较。结果微生物方法测得标准参考物质生物素平均值为173.6μg/100g,试剂盒法测得标准参考物质生物素平均值为199.4μg/100g,与标准物质指定值(189μg/100g)相对标准偏差分别为8.49%,5.34%;对不同配方奶粉生物素检测, 2种方法的相对标准偏差10%。结论微生物法与试剂盒法测试配方奶粉中生物素结果接近,可综合实验室人员和经济条件选择适当的方法进行测试。     

传统微生物法测试乳粉中生物素与试剂盒法方法比较

目的 微生物法和试剂盒法测试配方奶粉中生物素含量比较。方法 用国标方法GB5009.259-2016和试剂盒方法测试标准参考物质和不同配方奶粉中生物素含量,对结果进行精密度和相对偏差比较。 结果 微生物方法测得标准参考物质生物素平均值为173.6 μg/100g,试剂盒方法标准参考物质生物素平均值为199.4μg/100g,与标准物质指定值(189 μg/100g)相对偏差分别为8.49%,5.34%;对不同配方奶粉生物素检测,两种方法的相对偏差<10%。 结论 微生物法与试剂盒法测试配方奶粉中生物素结果接近,可综合实验室人员和经济条件选择适当的方法进行测试。     

基于国标法和试剂盒法对乳粉质控样品 生物素含量的测定

目的 用国标法和试剂盒法对乳粉质控样品的生物素含量进行测定, 评价两种方法对生物素检测结果差异性。方法 根据两种方法中植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)对游离生物素的特异性和灵敏性, 测定菌株的生长情况从而得到乳粉中生物素的含量。结果 国标法测定所得标准曲线范围为0~1 ng/100 g(R2=0.9993), 试剂盒法测定所得的标准曲线范围是0~0.72 μg/100 g(R2=0.9983), 线性关系良好; 两种方法测定生物素的含量差异不显著(P＞0.05), 结果均符合要求并在给定值的范围内。结论 两种方法对质控样品检测结果准确, 稳定性好, 适用于乳粉中生物素的检测。     

SPR技术检测奶粉中生物素

目的利用表面等离子共振(surface plasmon resonance,SPR)技术,建立快速定量测定牛奶中生物素的方法。方法将生物素共价偶联到表面等离子共振芯片CM5表面,并对竞争结合的生物素结合蛋白的结合浓度及芯片的再生条件进行优化,检测芯片的稳定性。在无抗生素牛奶中添加系列质量浓度的生物素,利用免疫竞争抑制原理构建标准曲线,并对市售10个奶粉样品进行检测。结果制备的芯片稳定,50个循环相对标准偏差(relative standarddeviation,RSD)小于10%。日间批内同一样品差异为8.75%,该方法的检测限为0.1μg/100g,回收率为80.4%~91.2%。10个牛奶产品中生物素含量全部在固定的允许范围内。所建立的方法可以在4 h内完成样品的前处理和检测。结论该方法是一种简便、快捷的定量检测方法。     

特殊医学用途婴儿配方食品中生物素含量的测定

本研究建立了超高效液相色谱-串联质谱法测定特殊医学用途婴儿配方食品中生物素含量的分析方法。样品经0.2 mol/L磷酸121℃水解30 min提取,并通过生物素免疫亲和柱净化后,采用Acquity UPLC BEH C18(100 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱进行分离,以乙腈-0.1%甲酸溶液为流动相进行梯度洗脱,经电喷雾电离串联质谱在多离子反应监测(MRM)模式下进行测定,内标法定量。在最优化条件下,生物素在0.50~50.00 ng/mL范围内线性关系良好(R²=0.9986),方法检出限为0.75μg/100 g。特殊医学用途婴儿配方食品中生物素相对标准偏差在0.42%~4.77%之间,不同添加浓度回收率为97.27%~102.06%。该方法具有样品处理操作简单,灵敏度高,分析周期短等优点,可以满足特殊医学用途婴儿配方食品中生物素含量的测定,可为企业质量控制和政府监管提供有力的技术支撑。     

谷氨酸生产中生物素含量的检测

微生物检测法是利用营养缺陷型菌株细胞的生长、繁殖与环境中某一限制性营养因子含量之间存在关联性而建立起来的一种生物检测方法.微生物法可以免去繁琐的样品预处理步骤,适合于生物素含量测定.在生物素浓度为0～0.8μg/L的范围内可以获得重复性较好的线性关系.利用该方法,分析了玉米浆、糖蜜、淀粉水解糖液中生物素的含量,分别为248.18μg/kg,1790.53μg/kg和1.25μg/L.     

婴儿配方食品中生物素测定

植物乳杆菌（ATCC No.8014)对生物素有很高的灵敏性，利用这种特异性，可以定量地测出奶基婴幼儿食品中的生物素的含量。为了达到定量测定的目的，在供繁殖试验菌株所用培养基中供给除生物素以外的所有营养成分，这样植物乳杆菌的生长就会同标准溶液及未知测定溶液的生物素的水平相对应。结果表明，本文法的重现性好，变异系数为3.34%，平均回收率为97%。     

BIOTIN-ACTIVE COMPOUNDS,THEIR EXISTENCE IN NATURE AND THE BIOTIN REQUIREMENTS OF YEASTS

After a short account of the discovery of biotin and the progress of early biotin research, the natural occurrence of biotin with particular consideration to the raw materials used in the fermentation industry and its products is described. Of the many known biotin derivatives, those appearing in nature and those which can be converted to biotin-active (or inactive) compounds by simple procedures are reported. Ways to by-pass the need for biotin in microbes is discussed. The importance of biotin in yeast production, the biotin requirements of yeast, and the effect of culture conditions on these requirements are reported. The close relationship between the participation of biotinylenzymes and the biotin requirements is noted.     

生物素的研究进展

本文时生物素的生理功能、代谢,生物素的化学合成、生物合成,生物素的最新应用进展等作了简要综述,可为广大食品与发酵工作者提供参考。     

微生物法检测叶酸、生物素、维生素B12接种液制备方法的优化

目的解决使用微生物法GB 5009.211-2014、GB 5009.259-2016、GB 5413.14-2010检测食品中叶酸、生物素、维生素B_(12)接种液制备耗时长的问题。方法将标准方法制备的接种液与甘油水按1:1(V:V)比例混匀,分装于小离心管,-80℃冻存。再通过用冻存不同时间的接种液检测样品,分析标准曲线线性、中间精密度和加标回收率来验证制备方法的适用性。结果标准曲线线性关系r~2均0.99,中间精密度叶酸RSD为1.5%～3.2%,生物素RSD为1.7%～4.2%,维生素B_(12) RSD为2.5%～9.3%;回收率方面,叶酸为99.5%～101.0%,生物素98.6%～101.3%,维生素B_(12)90.3%～96.4%。鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、莱氏曼氏乳杆菌接种液超低温冻存有效时间长分别为6、8、3个月。结论优化后的接种液制备方法缩短了检测周期,操作简便、方法可靠,适合检测使用。     

重组酶等温扩增试纸条快速检测阪崎克罗诺杆菌

将重组酶聚合酶等温扩增（recombinase polymerase amplification,RPA）与免疫层析试纸条（lateral flow strip,LF）相结合,建立一种阪崎克罗诺杆菌快速检测方法（RPA-LF）。将引物分别用生物素和地高辛修饰后进行RPA,产生生物素和地高辛标记的双链DNA产物,扩增产物与胶体金标记的地高辛抗体及试纸条上固定的链霉亲和素发生特异性结合,最终在试纸条上呈现肉眼可见的结果。灵敏度分析结果显示,该方法对纯培养目标菌的检测限为1.7×102 CFU/mL,特异性分析结果显示RPA-LF方法与其他常见病原菌无交叉反应。利用人工污染的食物样品评估RPA-LF检测效果,结果显示不同样品增菌4 h或6 h后,检测限达到1.7×100 CFU/g。利用20 种实际样品作为检测对象、利用国标方法作为对照,评估方法的检测效果,结果显示本研究所建立的方法与国家标准检测方法获得一致的检测结果。     

A RAPID METHOD FOR DETERMINING BIOTIN ACTIVITY IN RAW MATERIALS FOR FERMENTATION

The biotin activity of a raw material towards yeast may consist of the sum of the activities of biotin, desthiobiotin, oxybiotin, biocytin and possibly other factors. Some of these substances only stimulate certain strains of yeast; on the other hand, the strains of lactobacilli generally used for estimation of biotin activity utilize only D-biotin. It is thus desirable to have a method available in which a manufacturer's own strain of yeast is used as test organism for biotin activity. A simple method for biotin determination based on the cup plate assay is described. Biotin-free agar is inoculated with yeast and a series of standard solutions of D-biotin and a series of dilutions of the raw material under investigation are placed in holes cut in the agar. After incubation, the zones of growth are measured and from their diameters the biotin activity can be calculated.