大蒜素对脂多糖诱导腹腔巨噬细胞炎症反应的抑制作用及机制

目的:探讨大蒜素对脂多糖(LPS)诱导小鼠腹腔巨噬细胞炎症反应的抑制作用及机制。方法:建立LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞炎症反应细胞模型,并用地塞米松和不同浓度大蒜素处理,MTT法检测细胞活力,中性红吞噬实验检测吞噬能力,Griess法检测一氧化氮(NO)及ELISA法检测COX-2酶活性和IL-6的分泌,qPCR检测环氧合酶2(COX-2)、一氧化氮合酶(iNOS)和IL-6的mRNA表达水平,Western Blot检测COX-2、iNOS和IL-6的蛋白表达以及核转录因子NF-κB p65及其磷酸化产物的相对表达。结果:大蒜素浓度在40~160 μg/mL范围内对腹腔巨噬细胞均无细胞毒性;与LPS组比较,大蒜素处理组能促进腹腔巨噬细胞的吞噬能力,能显著(P<0.05)抑制炎症因子COX-2酶活性、NO和IL-6的分泌,能显著(P<0.05)抑制基因COX-2、iNOS和IL-6 mRNA和蛋白的相对表达,并极显著(P<0.01)抑制NF-κB p65信号通路的磷酸化。结论:大蒜素能显著抑制LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞的炎症反应,其机制可能与抑制NF-κB信号通路激活有关。     

知母皂苷元对脂多糖诱导的BV2小胶质细胞亚型M1/M2的极化及其抗炎活性

本研究探讨了知母皂苷元（SAR）对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的BV2小胶质细胞M1向M2亚型的极化及其抗炎作用机制。采用MTT法评价SAR对小胶质细胞存活率的影响;Griess法检测NO释放水平;ELISA法检测细胞上清中TNFα、IL1β、IL6和IL10的表达;免疫细胞化学法检测原代小胶质细胞M1和M2亚型,检测p-p65（磷酸化核转录因子亚基65）、p-p38（磷酸化促分裂素原活化蛋白激酶38）和PPARγ在小胶质细胞中的表达。SAR 0.01~1 μmol/L浓度时对正常状态和LPS 100 ng/mL诱导的炎症状态下BV2小胶质细胞存活率无显著影响,10和25 μmol/L浓度时表现出一定的细胞毒活性;与正常组相比,LPS组NO释放量增加了22.64%,TNFα、IL1β和IL6的表达量上调了25.5%、13.28%和48.21%,而IL10的表达量下调了14.97%,Cox2阳性和Ym1/2阴性表达的M1亚型小胶质细胞显著增加,p38和p65的磷酸化水平分别是正常组的2.80倍和1.86倍,PPARγ的表达量降低了73.90%;与LPS模型组比较,SAR在0.1和1 μmol/L浓度时能抑制NO的释放和炎症因子TNFα、IL1β、IL6的分泌;0.1和1 μmol/L SAR促进小胶质细胞向M2亚型极化,显著降低p38和p65的磷酸化水平并上调PPARγ的表达。知母皂苷元的抗炎作用机制为通过激活PPARγ而抑制p65和p38的磷酸化,促进小胶质细胞由M1向M2亚型极化,减少炎症因子的表达和炎症效应分子NO的释放。     

竹节参总提物对LPS诱导BV2小胶质细胞炎症反应的保护作用

本文研究了竹节参总提物对脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）刺激所致的BV2小胶质细胞炎症反应的保护作用及其机制。MTT筛选不同浓度竹节参总提取对小胶质细胞增殖影响;一氧化氮试剂盒检测NO表达水平;PCR检测IL-1β、TNF-α和iNOS的mRNA表达;免疫荧光检测NF-κB表达及定位。竹节参总提物在3.125~50 mg/L对正常状态及LPS 1 μg/mL诱导的炎症状态下小胶质细胞生长均无明显影响;与正常组比较,模型组NO释放量是其11.82倍,TNF-α、IL-1β和iNOS的mRNA表达量分别是正常组的1.35、1.78和2.50倍,并且NF-κB核移位明显;与模型组比较,竹节参总提物在3.125~50 mg/L均能不同程度抑制NO释放量,并减少IL-1β、TNF-α和iNOS的mRNA表达水平;25、50 mg/L竹节参总提物有效抑制了小胶质细胞中NF-κB的核移位。竹节参总提物可减轻LPS诱导的BV2小胶质细胞炎症反应,其主要机制为抑制NF-κB的核移位,进而降低了炎症因子的分泌。     

铁观音茶提取物对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症反应的抑制作用及机制

研究铁观音茶提取物对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞炎症反应的抑制作用及机制。用脂多糖作用于RAW264.7细胞,建立炎症模型,并用吲哚美辛和不同浓度铁观音提取物处理,检测NO和IL-6的分泌情况,qPCR检测一氧化氮合酶(iNOS)、环氧合酶2(COX-2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、白细胞介素6(IL-6)mRNA相对表达,Western Blot检测炎症相关蛋白激酶(IKKβ),核转录因子κB抑制因子(IκB)、核转录因子κB p65(NF κB p65)及其磷酸化产物的相对表达。结果显示,铁观音茶提取物能显著抑制炎症介质NO分泌和IL-6蛋白表达量(p<0.05),抑制炎症相关基因iNOS、COX-2、TNF-α和MCP-1等表达,并极显著抑制NF-κB信号通路相关蛋白IKKβ、IkB和p65的磷酸化(p<0.01)。以上结果表明,铁观音茶提取物可明显抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症反应,其机制可能与抑制NF-κB信号通路激活有关。     

枸杞环肽调控NLRP3及NF-κB信号通路减轻BaP诱导的气道上皮细胞炎性损伤

该研究通过活性追踪法分离枸杞活性肽（Lycium barbarum L. Bio-active Peptide,LBP）,并研究其抗苯并芘（Benzopyrene,BaP）诱导的气道上皮细胞损伤活性及潜在机制。利用CCK-8法检测LBPs细胞毒性;ELISA法检测LBP-1抑制BaP诱导的人支气管上皮16-HBE细胞炎症因子（TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-18、NO和PGE2）的分泌;Western Blot法检测LBP-1及BaP对16-HBE细胞COX-2、iNOS及NLRP3炎症小体和NF-κB信号通路相关蛋白表达的影响。结果显示,LBP-1能显著减轻BaP暴露导致的16-HBE细胞活力降低,且浓度小于1 mmol/L时无显著细胞毒性;LBP-1降低了由BaP暴露导致的细胞炎症因子分泌增加,TNF-α、IL-1β、IL-18、IL-6、NO和PGE2的浓度分别降低了34.93%、27.41%、31.05%、35.28%、51.15%及27.46%,同时PGE2和NO的关键酶（COX-2、iNOS）的表达分别降低了81.72%及41.70%;Western Blot结果显示,LBP-1可抑制IκBα和p65的磷酸化,降低NLRP3及含有Card的凋亡相关斑点样蛋白（Apoptosis-associated Speck-like Protein containing a CARD,ASC）的表达,从而抑制了NLRP3及NF-κB信号通路的激活。以上结果证实LBP-1可通过调控炎性细胞因子及NLRP3、NF-κB信号通路相关蛋白的表达发挥抗BaP诱导的气道上皮细胞炎性损伤的作用。     

虾青素DHA单酯对脂多糖诱导炎症反应的保护作用

目的：通过构建脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的BV2小鼠小胶质细胞和斑马鱼炎症模型研究虾青素二十二碳六烯酸（docosahexaenoic,DHA）单酯的抗炎活性。方法：采用光学显微镜观察细胞形态,四甲基偶氮唑蓝法检测细胞活性,Griess法测定NO水平。向斑马鱼胚胎显微注射虾青素,体视显微镜下观察胚胎发育,采用试剂盒检测胚胎中活性氧（reactive oxygen species,ROS）产生量和丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量;采用实时荧光定量聚合酶链式反应测定炎症因子的表达水平。结果：虾青素DHA单酯干预后,细胞内炎症因子表达水平与模型组相比极显著下降（P＜0.01）,接近于空白对照组;游离虾青素和虾青素DHA单酯均能保护斑马鱼胚胎的发育,降低LPS诱导的胚胎畸形率,有效抑制炎症斑马鱼体内ROS产生,同时显著降低MDA含量,下调炎症因子的表达水平,并且虾青素DHA单酯的效果更佳。结论：虾青素DHA单酯比游离虾青素具有更好的抗炎活性,对LPS诱导的炎症反应有明显的保护作用。     

阿里红多糖对Aβ25-35诱导的小胶质细胞炎症 反应的影响

目的 探讨阿里红多糖(Fomes Officinals polysaccharide, FOPS)及多糖组分(FOP-a)对Aβ25-35诱导的BV-2小胶质细胞炎症反应的抑制作用。方法 采用Aβ25-35诱导BV-2小胶质细胞活化建立阿尔茨海默病(alzheimer disease, AD)炎症细胞模型, 将BV-2细胞分为空白组、炎症模型组(加40 μg/mLAβ25-35)、不同浓度的FOPS及FOP-a干预组(6.25、12.5、25 μg/mL)。在倒置显微镜下观察细胞形态, 酶联免疫法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测细胞上清中IL-6及单核细胞趋化因子(MCP-1)分泌量; Western blotting法测定NF-κB及IκBα蛋白表达量。结果 Aβ25-35诱导后小胶质细胞出现阿米巴样状态, 通过不同剂量FOPS及FOP-a干预, 能明显改善Aβ25-35对BV-2细胞造成的损伤, 与模型组比较, FOPS及FOP-a可提高细胞存活率。ELISA实验结果显示与空白组比较, 模型组IL-6及MCP-1的分泌量增加, 与模型组比较, FOPS及FOP-a均能减少IL-6及MCP-1的分泌量, 差异有统计学意义(P<0.05)。Western blotting结果显示, 与空白组比较, 模型组细胞上调NF-κB-p65蛋白表达、减少IκBα的蛋白表达, 与模型组比较FOPS及FOP-a均能减少NF-κB-p65和上调IκBα的蛋白表达。结论 阿里红粗多糖及多糖组分均能减轻Aβ25-35诱导的BV-2细胞的炎症作用, 其中FOPS浓度为12.5 μg/mL、FOP-a浓度为25 μg/mL时效果最佳。     

羊栖菜多酚通过核转录因子-κB/丝裂原活化蛋白激酶通路缓解脂多糖诱导的RAW264.7细胞炎症反应

目的：研究羊栖菜多酚对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导小鼠单核巨噬细胞白血病细胞RAW264.7细胞炎症反应的影响。方法：噻唑蓝法测定细胞活力;Griess法测定一氧化氮（NO）水平;实时荧光定量聚合酶链式反应测定白细胞介素（interleukin,IL）-6、IL-1β、肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor,TNF）-α、环氧合酶2（cyclooxygenase-2,COX-2）和诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）的基因相对表达量;流式细胞术测定细胞吞噬能力;蛋白免疫印迹法测定信号通路丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinases,MAPKs）和核转录因子（nuclear factor,NF）-κB信号通路关键蛋白表达水平。结果：羊栖菜多酚对RAW264.7细胞的安全质量浓度范围为0～160 μg/mL。与LPS组相比,羊栖菜多酚剂量依赖性降低巨噬细胞吞噬能力并抑制NO的生成。同时,羊栖菜多酚下调促炎细胞因子（IL-1β、IL-6、TNF-α）和炎症诱导酶（iNOS、COX-2）的mRNA水平,且作用效果与给药剂量及LPS刺激时间相关。这些炎性介质的表达与羊栖菜多酚抑制p38 MAPK和NF-κB p65的激活有关。结论：羊栖菜多酚可通过减弱p38 MAPK和NF-κB p65信号通路的激活水平,抑制下游炎症介质的转录表达,从而缓解LPS诱导的巨噬细胞炎症反应。     

人参、甘草、五味子复合醋提物对老年小鼠急性炎性肝损伤保护作用的研究

目的:本研究旨在通过脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）诱导肝损伤小鼠考察复合醋提物（MVE）对老年小鼠炎性肝损伤的保护效果。方法:将小鼠随机分为正常对照组、MVE组、LPS组、LPS+MVE组。通过苏木精-伊红染色评估肝组织病理情况和免疫组织化学染色判断髓过氧化物酶的表达变化。同时,检测肝组织中白介素-1β、白介素-17、CXC趋化因子配体1、CXC趋化因子配体17等生化因子水平。免疫印迹法测定肝脏中Toll样受体4（Toll-like receptor 4,TLR4）和p-NF-κB p65蛋白表达量变化。结果:复合醋提物能减少中性粒细胞及炎症细胞浸润,极显著降低LPS模型小鼠肝脏谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、活性氧（ROS）水平（P<0.01）,并降低促炎因子和中性粒细胞趋化因子水平（P<0.05）,降低炎症通路TLR4和p-NF-κB p65的蛋白表达水平（P<0.001）。结论:MVE能改善LPS诱导急性炎症小鼠的肝损伤,此外,MVE还能通过平衡促炎和抗炎因子水平变化、抑制TLR4-NF-κB信号通路,最终达到发挥护肝作用效果。     

天麻素调控SIRT3改善BV2细胞衰老和炎症的作用

目的:探讨天麻素对D-半乳糖诱导的BV2细胞衰老的保护作用及机制。方法:使用不同浓度（10、20、30和40 μg/mL）的D-半乳糖刺激BV2细胞24 h,建立细胞衰老模型,并用CCK-8法筛选出D-半乳糖的最佳造模浓度;实验分为4组:正常组、模型组、Silent mating type information regulation 2 homolog 3（SIRT3）抑制剂+天麻素组和天麻素组;用CCK-8法检测不同浓度（10、20、30、40和50 μmol/L）的天麻素对D-半乳糖刺激的BV2细胞活力的影响,并筛选出最佳的天麻素浓度;使用β-半乳糖苷酶（Senescence β-Galactosidase,SA-β-Gal）染色检测细胞衰老面积;使用生化法检测各组细胞活性氧（Reactive oxygen species,ROS）水平;使用Enzyme linked immunosorbent assay（ELISA）法检测各组细胞神经炎症因子IL-1β（Interleukin 1β,IL-1β）、IL-6（Interleukin 6,IL-6）和TNF-α（Tumor necrosis factor α,TNF-α）水平;使用免疫荧光法检测各组细胞SIRT3荧光强度;使用Western Blot法检测细胞SIRT3、P16和P21的蛋白表达水平。结果:30 μg/mL的D-半乳糖刺激BV2细胞活力极显著降低（P<0.01）,引起BV2细胞中SA-β-Gal染色面积和衰老蛋白P16和P21表达极显著增加（P<0.01）,细胞中ROS水平和炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α水平极显著增高（P<0.01）,细胞内SIRT3蛋白表达极显著降低（P<0.01）。而30 μmol/L天麻素能极显著提高D-半乳糖刺激的BV2细胞活力（P<0.01）,并且极显著降低细胞SA-β-Gal染色面积和衰老蛋白P16和P21表达水平（P<0.01）,极显著降低ROS水平和神经炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α水平（P<0.01）,极显著提高细胞内SIRT3蛋白荧光强度和表达水平（P<0.01）。结论:天麻素能够提高D-半乳糖刺激的BV2细胞活力,改善BV2细胞衰老染色和衰老蛋白表达,并降低ROS水平和减缓炎症反应,这可能与天麻素提高SIRT3蛋白表达有关。     

阿里红多糖减弱β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)致BV-2细胞的神经炎症反应

目的探讨阿里红多糖(Fomes officinals Ames polysaccharide,FOPS)及多糖纯化组分(FOP-a)对小胶质细胞(BV-2)炎症反应的抑制作用。方法采用声淀粉样蛋内毒性片段(amyloid-β_(25-35),Aβ_(25-35))(40μg/mL)诱导小胶质细胞BV-2活化,建立炎症反应模型,利用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞存活率,并用酶联免疫法考察FOPS及FOP-a对Aβ_(25-35)诱导的BV-2细胞产生的IL-1及TNF-α炎症因子的影响;LDH试剂盒检测BV-2细胞中乳酸脱氢酶活性表达变化;采用QPCR方法检测FOPS及FOP-a对BV-2细胞中EL-6、TNF-a、MCP-1、iNOS、COX-2及NF-κB等基因mRNA表达的影响;采用蛋白印迹方法检测FOPS及FOP-a对BV-2细胞中iNOS及COX-2蛋甶表达的影响。结果 FOPS及FOP-a可抑制Aβ_(25-35)诱导的BV-2细胞IL-1及TNF-α炎症因子的释放和LDH活性表达(P0.05)。FOPS及FOP-a显著抑制EL-6、TNF-a、MCP-1、iNOS、COX-2及NF-κB等基因mRNA表达(P0.05)。FOPS及FOP-a抑制促炎因子iNOS、COX-2的蛋白表达(P0.05)。结论阿里红多糖及纯化组分可明显减轻Aβ_(25-35)诱导下产生的小胶质细胞BV-2的神经炎症反应。     

虫草素抑制脂多糖诱导的小胶质细胞活化及神经保护作用

目的：研究虫草素抑制脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）诱导小胶质细胞激活及其神经保护作用。方法：培养原代小鼠小胶质细胞,以LPS激活小胶质细胞使NO大量释放,同时给予不同浓度的虫草素（0.1～10 μmol/L）处理,四甲基偶氮唑蓝（3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT）法检测细胞存活率,Griess法测定小胶质细胞NO释放,逆转录聚合酶链式反应法检测细胞内诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxidesynthase,iNOS）的mRNA表达。以硝普钠作为NO供体,以1,1-二苯基苦基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基作为自由基的供体,分别考察虫草素对NO和DPPH自由基的直接清除作用。分别以H2O2和以LPS激活的小胶质细胞条件培养液损伤小鼠PC12神经元细胞,MTT法考察虫草素对PC12细胞损伤的保护作用。此外,以羟胺法测定超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性。结果：虫草素能够显著抑制LPS激活的原代小鼠小胶质细胞NO产生及iNOS mRNA表达,同时不影响细胞的存活率;虫草素具有显著的NO清除和DPPH自由基清除作用;虫草素本身对PC12小鼠神经元细胞的生长没有显著影响,但能够显著抑制H2O2或活化小胶质细胞的条件培养液引起的PC12细胞损伤。此外,虫草素可显著提高H2O2损伤的PC12细胞中SOD活性。结论：虫草素可通过抑制iNOS转录和直接清除NO而抑制LPS激活小胶质细胞的NO产生;虫草素还可通过抑制小胶质细胞激活而对PC12神经元细胞产生保护作用,也可通过提高SOD活性而保护H2O2损伤的PC12细胞。因此,虫草素可能对与小胶质细胞激活相关的神经退行性疾病具有潜在的防治作用。     

粉葛与葛根多糖对脂多糖诱导RAW264.7细胞的抗炎作用

该研究通过脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症模型,对粉葛粗多糖（FGC）、葛根粗多糖（GGC）以及粉葛均一多糖（FGJ）的抗炎作用进行比较。用CCK8试剂盒检测FGC、GGC以及FGJ对细胞活力的影响;相关试剂盒检测细胞产生NO、TNF-α、IL-6的分泌情况;蛋白印迹法检测NF-κB、Nrf2/HO-1通路相关蛋白表达,QPCR检测TNF-α、IL-6的mRNA表达,通过流式检测活性氧的产生。结果显示,在浓度为10、20、40 μg/mL时,FGC、GGC以及FGJ对细胞均没有毒性（p>0.05）。各浓度的FGC、FGJ不能抑制LPS诱导产生的的NO、TNF-α、IL-6（p>0.05）,GGC在浓度为40 μg/mL时,对NO、TNF-α、IL-6的抑制率达到38.46%、52.90%、55.87%,可以抑制细胞内ROS释放,在10、20、40 μg/mL时抑制率达到37.28%、41.05%、54.09%,在浓度为40 μg/mL时,对iNOS、COX-2、p-p65、p-IκBα的抑制率达到29.27%、95.04%、27.18%、28.45%,对Nrf2、HO-1蛋白的表达有促进作用,在浓度40 μg/mL时显著地抑制IL-6与TNF-α的mRNA表达,抑制率达到57.70%、81.68%。结果证明,GGC与FGC、FGJ相比抗炎活性更加明显,并且其抗炎作用是通过NF-κB与Nrf2/HO-1两条通路来实现的。     

红松松仁多糖对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症反应的抑制作用

目的:探讨红松松仁多糖PNP40c-1对脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)诱导RAW264.7细胞炎症反应的抑制作用及可能机制。方法:以LPS刺激RAW264.7细胞诱导炎症模型,分别采用MTT法、比色法、酶联免疫法、RT-PCR和Western Blot等方法,比较LPS诱导前后巨噬细胞的细胞活力、吞噬能力、一氧化氮(nitric oxide,NO)/一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,iNOS)和细胞因子表达的变化;同时对Nrf2/HO-1信号通路中关键蛋白核因子E2相关因子2(nuclear factor(erythroid-derived 2)-like 2 protein,Nrf2)和血红素氧化酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)的mRNA和蛋白表达水平进行研究,以探讨PNP40c-1的具体作用机制。结果:在LPS诱导RAW264.7细胞的炎症反应中,PNP40c-1以剂量依赖性显著提高巨噬细胞的吞噬能力(P<0.05),抑制LPS诱导的NO和iNOS过量表达;PNP40c-1还可通过Nrf2/HO-1信号通路调节炎症因子如肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α),白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白介素-6(IL-6)的分泌,缓解炎症反应。结论:红松松仁多糖PNP40c-1对LPS诱导的炎症反应具有一定的抑制作用,其作用机制与调节Nrf2/HO-1信号通路有关。     

不同生理状态下人参总皂苷对HepG2细胞CYP2B6 mRNA和蛋白表达的影响

本文研究人参总皂苷在正常和炎症状态下对HepG2细胞CYP2B6 mRNA和蛋白表达的影响。采用索式提取法提取人参总皂苷,Real-Time PCR及Western Blot技术检测细胞中CYP2B6 mRNA和蛋白表达。结果显示,正常状态下人参总皂苷低(15 g/mL)、中(60 g/mL)与高(240 g/mL)剂量均显著诱导CYP2B6 mRNA表达(p0.05),中、高剂量均显著诱导CYP2B6蛋白的表达(p0.05)。使用LPS孵育细胞制造炎症模型,LPS对CYP2B6 mRNA表达无影响,但显著诱导CYP2B6蛋白的表达(p0.05)。使用人参总皂苷和LPS共同孵育细胞后,炎症状态下人参总皂苷中、高剂量对CYP2B6 mRNA的表达仍有显著诱导效果(p0.05),低和中剂量则均能显著诱导CYP2B6蛋白的表达,但高剂量则对CYP2B6的蛋白表达则呈现抑制作用(p0.05)。提示炎症状态能够改变人参总皂苷对CYP2B6 mRNA和蛋白的表达,因此联合用药时,应考虑不同生理状态下人参对代谢性药物相互作用的影响。     

4 种迷迭香化合物对脂多糖诱导的RAW264.7细胞氧化应激和炎症的抑制作用

目的：研究4 种迷迭香化合物（鼠尾草酸、鼠尾草酚、迷迭香酚和迷迭香酸）对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的RAW264.7细胞氧化应激和炎症反应的抑制作用。方法：以LPS诱导RAW264.7细胞构建炎症模型,通过比色法、实时荧光定量聚合酶链式反应、Western blot等方法表征迷迭香化合物对活性氧（reactive oxygen species,ROS）、炎症因子以及相关酶类的影响。结果：上述4 种迷迭香化合物对LPS诱导的细胞内ROS相对含量、丙二醛（malonic dialdehyde,MDA）含量、NO释放量和肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor α,TNF-α）、白细胞介素1β（interleukin 1β,IL-1β）、IL-6 mRNA相对表达量,以及诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）和环氧合酶2（cyclooxygenase 2,COX-2）蛋白相对表达量的升高有显著抑制作用,对超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）和过氧化氢酶（catalase,CAT）活力有显著保护作用,且具有浓度依赖效应。质量浓度10 μg/mL的鼠尾草酸对LPS诱导的ROS相对含量、NO释放量、TNF-α mRNA相对表达量、MDA含量升高的抑制作用和对SOD和CAT活力的保护作用更好,质量浓度10 μg/mL的迷迭香酚对LPS诱导的IL-1β、IL-6 mRNA相对表达量、iNOS和COX-2蛋白相对表达量升高的抑制作用更好。结论：4 种迷迭香化合物均具有一定的抗氧化和抗炎作用,能缓解炎症反应,其中水溶性迷迭香酸有效质量浓度高于其他3 种。     

黑灵芝多糖对脂多糖诱导巨噬细胞M1/M2表型转化的影响

目的：观察黑灵芝多糖对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导小鼠腹腔巨噬细胞M1/M2表型转化的影 响。方法：中性红检测巨噬细胞吞噬;流式细胞仪检测细胞活性氧（reactive oxygen species,ROS）和甘露糖受体 （mannose receptor,MR）水平;Griess法测定NO水平;酶联免疫吸附实验测定细胞因子白细胞介素（interleukin, IL）-1β和IL-10水平。结果：与LPS组相比,黑灵芝多糖可显著降低巨噬细胞吞噬能力并抑制IL-1β、NO和ROS的生 成,提示黑灵芝多糖可抑制巨噬细胞向M1表型极化。同时,黑灵芝多糖可上调LPS处理的巨噬细胞MR表达和IL-10 水平,促进巨噬细胞向M2表型极化。在黑灵芝多糖＋LPS组中加入MR抑制剂,发现黑灵芝多糖抗LPS介导的炎症 反应有所减弱。结论：黑灵芝多糖对LPS致炎巨噬细胞极化表型具有调控作用,且其可通过MR抑制巨噬细胞向M1 表型极化而促进向M2表型极化。     

紫云英苷对LPS诱发的大鼠小肠上皮细胞(IEC-6)的抗炎作用

本研究探究了紫云英苷对脂多糖(LPS)诱发的大鼠小肠上皮隐窝细胞(Rat intestinal epithelial cells,IEC-6)炎症模型抗炎作用。构建LPS诱发IEC-6细胞炎症模型,采用MTT法、酶联免疫吸附试验(ELISA)、实时荧光定量PCR和Western Blot法检测紫云英苷对IEC-6炎症细胞的存活率、相关炎症因子、基因及蛋白表达水平;结果显示,随着紫云英苷浓度的增加,IEC-6细胞的存活率逐渐增加,紫云英苷剂量(50μg/m L、100μg/m L)组存活率为90.68%和95.76%(p0.05或p0.01);酶联免疫吸附试验表明,与LPS组相比,紫云英苷50μg/m L,100μg/m L剂量显著抑制炎症因子,对IL-6炎症因子分泌水平抑制率分别为21.98%(p0.05)和29.05%(p0.01),m RNA表达水平分别降低了34.90%(p0.05)和41.60%(p0.01)。TNF-α炎症因子分泌水平抑制率分别为16.25%(p0.05)和23.37%(p0.01),m RNA表达水平分别降低了34.11%(p0.05)和43.84%(p0.01);蛋白通路方面,100μg/m L的紫云英苷可显著抑制LPS诱导的IEC-6细胞NF-κB通路中P-IKKα/β降低了27.46%(p0.05)、P-IκBα降低了41.52%(p0.05)、P-p65降低了37.78%(p0.01)。本探究为紫云英苷作为一种潜在缓解炎症性肠病药物的开发提供了可靠的依据。     

蔓越莓提取物对脂多糖诱导RAW246.7细胞炎症反应的抑制作用

研究蔓越莓提取物对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导RAW246.7细胞炎症反应的抑制作用及其作用机制。筛选LPS浓度建立细胞炎症模型;采用噻唑蓝[3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide,MTT]法测定蔓越莓提取物对RAW246.7细胞活力的影响;利用4,6-联脒-2-苯基吲哚(4′,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)染色法观察蔓越莓提取物对细胞核形态的影响;采用荧光分析法测定一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)的活力;酶联免疫吸附剂测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)试剂盒测定IL-1、IL-6、TNF-α细胞因子的水平;蛋白质印迹法(Western-Blot)法检测Nrf2/NF-κB通路相关蛋白的水平。实验结果显示5μg/m L的LPS建立炎症模型,LPS与细胞共培养24 h时炎症水平达到最高,蔓越莓提取物在5μg/m L~400μg/m L范围内对RAW246.7细胞无显著性毒性作用,细胞核形态完整,无明显损伤;与模型组比较,蔓越莓提取物在无毒性浓度范围内显著降低LPS诱导RAW246.7细胞炎症反应的NOS活力和IL-1、IL-6、TNF-α水平,且呈现出剂量依赖关系。Western-Blot实验结果显示蔓越莓提取物量效依赖性地降低Keap1、IKKα/β、NF-κBp65蛋白表达的水平,而上调了Nrf2、HO-1的蛋白表达水平。结果证明蔓越莓提取物能够有效地抑制LPS诱导的炎症反应,其作用机制可能与经典的抗氧化通路Keap1/Nrf2/HO-1和炎症通路NF-κBp65蛋白表达有关。