Caco-2细胞模型构建及抗高血压肽VPP和IPP小肠吸收机制研究

Caco-2细胞模型为小肠内皮细胞转运模型,本实验构建Caco-2细胞模型并研究抗高血压肽Val-Pro-Pro（VPP）和Ile-Pro-Pro（IPP）的小肠吸收机制。从细胞形态、电阻值和荧光素钠透过率等方面验证了Caco-2细胞模型;通过转运时间、肽浓度、吸收抑制剂和促进剂比较了VPP和IPP的小肠转运途径及外排机制。结果表明：构建的Caco-2细胞模型可用于VPP和IPP的模拟小肠吸收机制研究;VPP和IPP的小肠转运途径是旁路转运,VPP和IPP都存在外排泵的作用,IPP外排作用没有VPP大,所以生物利用度高于VPP。     

Caco-2细胞模型评价食品功能因子的吸收、代谢及其功能研究进展

Caco-2细胞源自于人结肠癌细胞系，其表现出许多与小肠上皮细胞相似的特性，具有微绒毛结构、刷状边缘以及细胞间紧密连接等，是目前应用最广泛、最经典的模型之一。近年来，随着细胞培养技术的发展，通过体外细胞培养来评价食品功能因子的吸收、代谢机制及其功能成为研究热点。本文从Caco-2细胞模型的建立和评估方法入手，对功能食品提取物在Caco-2细胞中的抗炎、抗氧化、抗增殖等功能性进行系统概述，再结合功能食品提取物在Caco-2细胞中的吸收、代谢、转运机制，对Caco-2细胞模型在共培养等方面的研究进行展望，以期改进Caco-2细胞模型的局限性，为进一步研发准确度高，材料成本低，更接近人体内部环境的细胞培养模型奠定基础。     

牛肝菌多酚细胞抗氧化活性评价模型研究

目的:确定牛肝菌多酚的细胞抗氧化活性评价模型。方法:基于人结肠癌细胞Caco-2、人肝细胞L02和人肝癌细胞HepG2 3种细胞,检测黄牛肝菌多酚的细胞抗氧化活性,确定适宜的细胞抗氧化评价模型。采用适宜细胞模型测定红牛肝菌、黄牛肝菌和黑牛肝菌多酚的细胞抗氧化活性,并与牛肝菌的多酚提取率、氧化自由基吸收能力进行相关性分析,验证方法的有效性和准确性。结果:3种细胞模型均能检出黄牛肝菌多酚的细胞抗氧化活性,而在检测多酚浓度范围、灵敏度方面存在差异,Caco-2、L02和HepG2模型检出限分别为0.025,0.1,0.2 g黄牛肝菌提取的多酚,其中Caco-2检出限最低,明显优于L02和HepG2模型。基于Caco-2细胞模型测定3种牛肝菌多酚的抗氧化能力,与牛肝菌的多酚提取率、ORAC相关系数分别为0.9662和0.9156,为显著性相关,Caco-2细胞模型有效、准确。结论:Caco-2细胞模型更适用于牛肝菌多酚细胞抗氧化活性检测,可与ORAC等体外化学评价方法联合评价牛肝菌多酚的抗氧化活性。     

体外肠道细胞模型及其在评价花青素吸收转运中的研究进展

花青素广泛存在于自然界的多种植物中,目前研究证明花青素具有多种生物活性,其生物活性取决于生物可及性及生物利用度。诸多研究表明,肠上皮细胞的吸收转运是影响花青素生物利用度的一个关键。基于此背景,肠道细胞吸收模型已被广泛运用于研究花青素的吸收转运及其机制。本文概述了用于研究功能活性成分吸收转运的肠道模型,并以花青素为代表阐述了其吸收转运机制,特别是基于Caco-2细胞单层模型对其吸收转运的研究,以期为探究食品功能活性成分在肠道细胞模型中的吸收利用提供借鉴。     

肠道吸收细胞模型研究进展及其在类胡萝卜素上的应用

膳食化合物在维持人体生理功能和预防疾病等方面至关重要,但其必须被人体高效吸收利用才能充分发挥其功能活性。肠道吸收细胞模型已成为体外模拟人体膳食化合物吸收利用及机制研究的有效手段。针对不同的膳食化合物,选取合理的肠道细胞吸收模型以及在现有细胞模型的基础上进一步改进,对于实现高效模拟人体对该膳食化合物的吸收利用具有重要意义。因此,本文概述了人体肠道上皮细胞的结构和功能,系统地综述了体外肠道细胞吸收模型研究进展,并以类胡萝卜素为代表,阐述了其肠道吸收转运机制,重点探讨了Caco-2单细胞模型和Caco-2/HT29-MTX细胞共培养模型在其吸收利用上的应用,以期为更好地利用肠道细胞吸收模型体外模拟人体对不同膳食化合物的吸收利用提供借鉴。     

基于酶活力模型和细胞模型分析红毛藻多糖降血脂活性

目的：对红毛藻（Bangia fusco-purpurea）中多糖组分进行分离纯化，分析多糖组分的体外降血脂活性，阐明红毛藻的降血脂活性功效机理，为红毛藻的精深加工和高值化应用提供科学依据。方法：采用热水提取-乙醇沉淀法从红毛藻中提取粗多糖；除去蛋白质后，通过Sephadex G75葡聚糖凝胶柱层析纯化后得到红毛藻多糖（B. fusco-purpurea polysaccharide，BFP）；采用DEAE-cellulose 52柱层析对BFP进一步分级纯化得到3 个多糖组分F1、F2和F3；通过酶动力学分析各组分对胰脂肪酶活性的影响；采用噻唑蓝法测定BFP组分F1、F2和F3对HepG2细胞和Caco-2细胞活力的影响；通过高血脂/高胆固醇HepG2细胞模型、油酸诱导Caco-2细胞模型分析BFP组分F1、F2和F3的体外降血脂活性。结果：酶动力学分析结果表明，BFP组分F3显著抑制了胰脂肪酶活性，且为可逆竞争性抑制；细胞模型结果表明，F1、F2和F3在质量浓度0～500 mg/mL范围内对所试细胞均无显著毒性作用；F1显著抑制Caco-2细胞对游离脂肪酸的吸收；F3对高血脂HepG2细胞模型中甘油三酯的合成和高胆固醇HepG2细胞模型中脂类的合成均有显著抑制作用。结论：BFP组分可有效抑制胰脂肪酶活性和细胞对游离脂肪酸的吸收、降低胆固醇和甘油三酯的合成，具有潜在的降血脂活性。     

基于Caco-2单层细胞模型的兜唇石斛多糖的转运机制研究

以兜唇石斛多糖(DAP)为研究对象,借助人小肠上皮细胞Caco-2(the human colon carcinoma cell line)单层细胞模型,体外模拟DAP在小肠中的转运情况。在前期得到的DAP为基础,探究DAP的粘度对其转运情况的影响,同时建立Caco-2细胞的模型,采用MTT法测定DAP对Caco-2细胞存活率的影响,并考察了DAP在小肠的吸收转运的特征。实验表明:DAP的粘度与其在Caco-2细胞中的转运能力呈负相关趋势,粘度越大,转运速率越慢;在测定TEER值及荧光素钠渗透情况,观察Caco-2细胞的形态,建立了良好的细胞模型;DAP的存在下,Caco-2细胞的存活率为91.8%以上,因此DAP对Caco-2细胞存活无影响;DAP在Caco-2不同单边层的转移率分别为0.35%±0.02%和0.32%±0.02%,表观渗透率分别为(0.42±0.02)×10-6 cm/s和(0.19±0.18)×10-6 cm/s,表明DAP在小肠中不易被吸收。本研究所得结果为进一步研究DAP在肠道中的吸收机制奠定基础。     

卵黄高磷蛋白磷酸肽在Caco-2细胞单层模型中的促钙转运作用

结合高温低压处理、胰蛋白酶和嗜热菌蛋白酶复合酶解制备具有高钙结合能力的卵黄高磷蛋白磷酸肽(Phosvitin phosphopeptides,PPP)。通过优化确定制备PPP-Ca的最佳条件为pH 9.5,多肽与钙质量比7∶1,此条件下钙螯合率达到97%,PPP-Ca在模拟胃肠道消化中显示了极高的稳定性。使用Caco-2细胞单层模型验证PPP-Ca在体外的钙转运作用,通过细胞形态、电阻值和荧光素钠透过率等验证Caco-2细胞模型,毒性实验(MTT)结果显示PPP-Ca对Caco-2细胞呈现低毒性作用。研究PPP-Ca和PPP对Caco-2细胞转运钙离子质量浓度和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)活性的影响,采用RT-PCR测定Calbindin D9K mRNA的相对表达量。结果表明,PPP和PPP-Ca能够显著提高AKP活性,钙转运量从(3.06±0.08)μg增到(5.66±0.62)μg,Calbindin D9K mRNA的表达量增加2倍,进而增强人体肠道中钙的转运吸收。研究结果为开发新的钙补充剂和卵黄高磷蛋白提供了科学证据。     

转运葡萄糖苷类化合物的Caco-2细胞模型建立

建立转运葡萄糖苷类化合物的Caco-2细胞模型,为葡萄糖及葡萄糖苷类化合物肠道吸收研究提供基础.通过对Caco-2细胞最适培养基的选择、单层致密性的测定、单层通透性和细胞两侧碱性磷酸酶活性比的测定、单层亚显微结构的观察、细胞葡萄糖转运蛋白SGLT1和GLUT2的mRNA及蛋白表达水平的分析,建立可靠的细胞模型.研究表明:Caco-2细胞的最适培养基为添加体积分数15％血清的DMEM低糖培养基;Caco-2细胞在14～17 d的跨膜电阻趋于稳定,苯酚红的表观渗透系数达到0.49×10-6～0.51×10-6 cm·s-1,微绒毛分化成熟,细胞两侧碱性磷酸酶比值达到2.0以上.葡萄糖转运载体SGLT1的mRNA表达在14 d时显著高于17 d和21 d,葡萄糖转运载体SGLT1和GLUT2的蛋白表达在14、17、21 d无显著差异(P<0.05).Caco-2细胞培养14～17 d即可建立可靠的肠细胞吸收模型,用于葡萄糖及葡萄糖苷类化合物吸收的体外研究.     

乳源生物活性肽QEPV体内外的吸收转运（英文）

发酵乳作为一种长寿食品备受关注。多肽Gln-Glu-Pro-Val(QEPV)是一种来源于发酵乳,具有免疫调节作用的生物活性肽。通过Caco-2细胞单层膜模型及小鼠模型,研究乳源性生物活性肽QEPV在体外和体内的转运吸收情况。结果表明:乳源性生物活性肽QEPV具有非常好的稳定性,且能够穿过由Caco-2细胞形成的转运模型,但当QEPV质量浓度高于3.00 mg/mL时穿膜速率趋于稳定。流式细胞术和超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱结果表明Caco-2细胞不能吸收QEPV,由于QEPV是不具有空间结构的小肽,可以初步推测出QEPV主要通过胞旁转运方式透过Caco-2细胞单层膜模型的结论。同时,QEPV可以经过腹腔注射和灌胃方式被小鼠吸收,但肠道吸收效率较差,腹腔吸收效率较好。     

乳源生物活性肽QEPV体内外的吸收转运

发酵乳作为一种长寿食品备受关注。多肽Gln-Glu-Pro-Val（QEPV）是一种来源于发酵乳,具有免疫调节 作用的生物活性肽。通过Caco-2细胞单层膜模型及小鼠模型,研究乳源性生物活性肽QEPV在体外和体内的转运吸 收情况。结果表明：乳源性生物活性肽QEPV具有非常好的稳定性,且能够穿过由Caco-2细胞形成的转运模型,但 当QEPV质量浓度高于3.00 mg/mL时穿膜速率趋于稳定。流式细胞术和超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱结果 表明Caco-2细胞不能吸收QEPV,由于QEPV是不具有空间结构的小肽,可以初步推测出QEPV主要通过胞旁转运方 式透过Caco-2细胞单层膜模型的结论。同时,QEPV可以经过腹腔注射和灌胃方式被小鼠吸收,但肠道吸收效率较 差,腹腔吸收效率较好。     

Caco-2细胞模型快速培养法的建立与评价

Caco-2细胞模型可用于预测各种途径的食品营养物质吸收,被普遍用于营养物质开发的早期快速筛选过程中。传统Caco-2单层细胞模型的建立通常需要培养21 d,本研究建立一种快速培养Caco-2单细胞层的方法以缩短实验周期、降低成本。采用向标准培养基中添加生长因子的方法培养Caco-2细胞,分别研究细胞模型跨膜电阻值(TEER)、亲水标志物的渗透性、关键蛋白基因的表达、细胞膜特征形态等评价模型的完整性。表明快速培养法(9 d)获得的Caco-2模型跨膜电阻值(TEER)220Ω·cm2;漏出标志物荧光黄表观分配系数为(0.39±0.15)×10-6 cm/s;肠腔侧(apical,AP)/基底侧(Basolateral,BL)碱性磷酸酶活力比值为5.481±0.5304,单细胞层极性分化明显;q RT-PCR检测细胞单层关键蛋白质(P-gp、MRP2)的m RNA表达量快速法同标准培养法无显著差异。此法仅需9 d即可形成完整Caco-2细胞模型。结论是向标准培养基中添加生长因子的Caco-2细胞模型快速培养法可推广。     

山杏仁乙醇提取物抑制Caco-2细胞生长

用水和乙醇溶液制备山杏仁提取物,通过细胞增殖分析试验研究其对人结肠腺癌细胞（Caco-2）生长的影响,结果表明,山杏仁乙醇提取物具有显著抑制Caco-2细胞生长作用,水提取物则没有显示抑制作用。用不同方法制备山杏仁乙醇提取物E1、E2和E3研究其对Caco-2细胞生长作用,其中E3的抑制Caco-2作用最显著。研究乙二醇、异丙醇和叔丁醇的提取物对Caco-2细胞生长作用,结果表明,3种提取物均没有显示抑制作用。检测E3的蛋白与脂肪含量,结果分别为35.5%和64.4%（两者之和为99.9%）。山杏仁中含有抑制Caco-2细胞生长的活性成分,用乙醇可提取该活性成分,该活性成分可能是以特定形式存在的蛋白质或脂肪或两者复合物。     

鳕鱼皮源锌肽螯合物结构表征及基于Caco-2细胞模型评价其促锌吸收特性

本文研究一种新型鳕鱼皮胶原蛋白源锌螯合肽(Gly-Pro-Ala-Gly-Pro-Arg)与锌离子的螯合物,探究其结构,利用Caco-2细胞模型评估其对锌的转运吸收特性,为开发锌源补充剂提供理论依据。通过质谱、圆二色谱、红外光谱技术对锌肽螯合物进行结构表征,结果显示其空间构象发生改变,氨基、羧基及酰胺键参与锌离子配位,其中锌螯合活性为(7.21±1.34)μg/mg。以Caco-2单层细胞模型评价促锌转运吸收作用,结果表明,锌肽螯合物促锌转运作用显著,且与转运时间呈正相关;锌肽螯合物在中、低浓度时促锌吸收明显,而在高浓度时,对锌抑制吸收,抑制作用主要体现在30~120 min。     

猪骨汤胞内抗氧化活性评价模型研究

以猪骨汤为试验材料,通过总抗氧化能力检测(FRAP法)猪骨汤的化学抗氧化活性。采用人结肠腺癌细胞Caco-2、人正常肝细胞L-02、人肝癌细胞HepG2和狗肾上皮细胞MDCK为细胞模型,研究猪骨汤的细胞抗氧化活性(CAA),比较猪骨汤对4种类型的细胞内源性和外源性(AAPH诱导产生)活性氧自由基的清除作用。结果表明:虽然猪骨汤总化学抗氧化力很低((0.041±0.002) mmol/L FeSO4),但是可显著清除上皮细胞MDCK、Caco-2的内源性胞内自由基,并以短时间作用(1 h)的清除能力为佳;猪骨汤对外源性AAPH诱导的上皮细胞Caco-2和MDCK胞内自由基的清除能力明显优于L-02和HepG2,提示其对不同类型的细胞作用存在差异,对上皮细胞类具有较佳的胞内抗氧化活性。     

乳提技术提高干姜提取物生物利用度及其抗炎活性研究

本研究通过细胞和动物实验,以市售的干姜水提物为对照,研究干姜乳提物的生物利用度及抗炎功效优势。采用高效液相色谱法分析干姜提取物中姜酚类物质的含量,通过构建Caco-2细胞吸收模型及结肠炎大鼠模型,研究干姜乳提物的生物利用度及对结肠炎大鼠的改善作用。结果显示：干姜乳提物中特征性活性成分6-姜酚的含量较干姜水提物提高了13.1%;Caco-2细胞对干姜乳提物中总姜酚吸收量高于干姜水提物,在培养24 h后,细胞中干姜乳提物中总姜酚吸收量较干姜水提物提高了34.9%;相比于干姜水提物,干姜乳提物能显著改善结肠炎引起的大鼠体重的下降,降低其疾病活动指数（disease activity index,DAI）、结肠萎缩和脾脏指数,结肠组织中炎症因子（肿瘤坏死因子-α,tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)表达水平显著降低（P<0.05）,超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性增强,丙二醛（malondialdehyde,M...     

红毛藻多糖对H2O2诱导的Caco-2细胞氧化损伤的保护作用

目的：研究红毛藻多糖（Bangia fusco-purpurea polysaccharide,BFP）对H2O2诱导的人结肠腺癌（Caco-2）细胞氧化应激损伤的保护作用。方法：构建过氧化氢（H2O2）诱导的Caco-2细胞氧化损伤模型,通过形态学观察和测定细胞裂解液中的抗氧化物水平及相关酶活力,评价BFP对Caco-2细胞氧化损伤的保护作用。结果：BFP可明显提高H2O2诱导氧化损伤的Caco-2细胞活力,降低细胞内活性氧生成水平,提高细胞内超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活力以及还原型谷胱甘肽水平,减少丙二醛生成,并通过抑制Caspase-3和Caspase-9活性来改善氧化应激损伤引起的细胞凋亡。结论：BFP对H2O2诱导氧化应激损伤的Caco-2细胞具有保护作用,可通过增强细胞内源性抗氧化酶活力、提高非酶类抗氧化物水平和抑制细胞凋亡明显缓解H2O2诱导的Caco-2细胞氧化应激损伤。     

银条水苏糖抑制人结肠癌Caco-2细胞增殖的作用及机制

研究中国传统蔬菜银条中所含天然活性成分——银条水苏糖对人结肠癌细胞Caco-2增殖的抑制作用及其可能机制。采用无血清培养基培养Caco-2细胞,分析银条水苏糖对Caco-2细胞增殖的抑制作用,流式细胞术考察银条水苏糖对Caco-2细胞凋亡的影响,通过检测LDH释放率分析细胞损伤程度。结果表明:银条水苏糖对Caco-2细胞株具有生长抑制作用,且存在剂量和时间依赖关系,Annexin-V-PI双染的结果提示,Caco-2细胞凋亡率随着银条水苏糖浓度的升高而上升,同时比较各试验组Caco-2细胞LDH释放率,发现银条水苏糖抑制了Caco-2细胞还原丙酮酸为乳酸的能力,限制了Caco-2细胞能量通路,影响了细胞周期,进而导致细胞凋亡,说明抑制细胞能量通路,"饿死细胞"可能是银条水苏糖抗肿瘤作用的机理之一。     

细胞代次对t-BHP诱导Caco-2细胞构建氧化应激模型的影响

目的:探究细胞代次对叔丁基过氧化氢（t-BHP）诱导构建人克隆结肠腺癌细胞（Caco-2）氧化应激模型的影响。方法:以不同浓度t-BHP（1、2和3 mmol/L）处理第F15代Caco-2细胞1、2、3、4、5和6 h后测定不同处理下细胞丙二醛（MDA）和8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）的含量,以确定构建Caco-2细胞氧化应激模型的基础条件。再以8-OHdG为分子标志物,探究细胞代次（F14、F15、F18、F19和F20）对Caco-2细胞氧化应激模型构建的影响。结果:采用1、2和3 mmol/L t-BHP处理F15代Caco-2细胞3~6 h均可稳定构建氧化应激模型。当以2.0 mmol/L t-BHP处理不同代次Caco-2细胞5 h后,F14、F15和F18代细胞的8-OHdG浓度均显著高于对照（P<0.05）,而F19和F20代细胞的8-OHdG浓度与对照无显著差异。结论:Caco-2细胞代次会影响其氧化应激模型的构建,F19代之前的Caco-2细胞采用2 mmol/L t-BHP处理细胞5 h可稳定构建氧化应激模型。     

高活性抗氧化肽的体外胃肠耐受性研究

研究了高活性抗氧化肽在体外模拟胃肠消化吸收过程中的耐受性。以6条抗氧化合成肽为研究对象,采用体外胃肠消化模型和Caco-2细胞单层模型,模拟其胃肠消化吸收过程,分别测定抗氧化肽在胃肠消化中的降解与转化、含量变化及以TEAC活性和ORAC活性为指标的抗氧化活性变化。结果表明,6条抗氧化肽均耐受胃消化,不耐受肠的消化,但是经胃肠消化吸收后仍具有很强的抗氧化活性,分别高于阳性对照还原型GSH和Vc;YPWY、GWEW和YEW在肠阶段发生C端氨基酸降解,生成短肽YPW、GWE和YE,而且可以完整地透过Caco-2细胞。这项研究为这些抗氧化肽作为功能配料进行开发利用提供了理论依据。