基于图像计数酿酒酵母的统计分析

图像计数可快速定量微生物的活细胞浓度，但对其统计参数及定量结果的可靠性研究较少。该研究以酿酒酵母为材料，研究了自行设计的微型计数板图像计数方法中异常数、中位数、平均数、图像间菌体数量的相对标准偏差等统计量与计数图像数量的关系，比较了图像计数和GB 4789.15—2016平板计数定量的相对标准不确定度，以及结果的差异性和相关性等。结果表明，酿酒酵母10⁵～10⁷ CFU/mL时，图像计数可使用中位数、平均数统计活菌数量；10⁵ CFU/mL时需计数50个图像，10⁶～10⁷ CFU/mL时计数13个图像可准确获得酿酒酵母浓度。图像计数的相对标准不确定度(0.022～0.100)小于平板计数法(0.099)。在10⁵～10⁷ CFU/mL时，图像计数与平板计数对酿酒酵母定量的结果一致。     

基于PI荧光图像计数的乳制品荧光性质分析

为分析添加PI染料时乳制品中不同的荧光成分如酪蛋白、黄油、维生素B1、维生素B2、维生素C等对荧光图像观察的影响,探究了不同乳制品及其成分在PI染色观察条件下的荧光性质,并以酿酒酵母为目标菌,研究了10种乳制品中酿酒酵母PI荧光图像计数结果。结果表明,酪蛋白、黄油、维生素B1、维生素B2、维生素C等成分及10种乳制品在发射光615 nm均可产生荧光,但不影响PI染色的酿酒酵母荧光计数的观察结果。使用荧光显微镜对添加105~107 CFU/mL酿酒酵母菌液的10种乳制品进行PI染色计数,并将荧光图像计数结果与平板计数结果进行比较。其中经荧光图像计数后得到的菌液浓度对数值分别在5.69~5.93、6.18~6.28、7.13~7.21之间,对应平板计数结果的对数值分别5.49~5.63、6.02~6.06、7.02~7.06之间,二者结果一致。使用 PI 进行荧光图像计数时,乳制品荧光虽然存在但不会对酿酒酵母荧光图像观察与计数造成影响。     

螺旋平板法在菌悬液计数及食品和化妆品菌落总数检测中的应用

应用螺旋平板法和国标方法分别对金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、大肠杆菌的培养菌悬液以及食品、化妆品样品161份进行菌落总数检测,国标法培养48h后进行手工计数,螺旋平板法自动接种培养48h后进行仪器自动计数,将两种方法结果进行比较,结果无显著性差异(P＞0.05)。因此螺旋平板法适用于菌悬液计数及食品和化妆品菌落总数的测定。     

3种不同培养基和1种测试片检测水溶性化妆品中菌落总数的结果分析

目的使用t检验法分析3种不同培养基和1种测试片检测水溶性化妆品中菌落总数结果。方法参照《化妆品安全技术规范》(2015年版),使用卵磷脂吐温80营养琼脂、TTC营养琼脂、平板计数琼脂方法进行样品菌落总数检测,然后使用Petrifilm TM菌落测试片检测样品。运用配对t检验法评价4种不同方法对水溶性化妆品中菌落总数计数结果一致性的影响。结果在10~2、10~3 CFU/m L 2种不同浓度,平板计数琼脂法结果波动性最大,无法抑制菌落蔓延,而TTC营养琼脂和菌落测试片相对卵磷脂吐温80营养琼脂,具有抑制菌落蔓延生长、提高计数结果准确性的作用。结论在一定浓度下,可根据实际情况来选择相应培养基检测水溶性化妆品中菌落总数以提高检测效率和质量。     

平板计数法与纸片法检测食品微生物菌落总数的比较分析

食品污染的微生物主要是细菌,通过对食品微生物菌落总数进行检测,能够掌握食品受污染程度。而平板计数法与纸片法均能够对食品微生物菌落总数进行检测,对二者进行比较分析,能够为菌落计数标准方法的调整提供思路。一、实验方法比较准备平板计数琼脂培养基和菌落总数测试片,并准备饼干、蛋糕以及两份质控样品。具体实验如下:1.平板计数法。(1)培养基的配制。     

无皂乳液聚合法制备单分散大粒径聚苯乙烯微球研究

采用无皂乳液聚合法制备了聚苯乙烯微球。分析了单体浓度、引发剂浓度、离子强度、反应温度对微球粒径及粒径分布的影响,优化聚合配方和工艺,制得了大粒径(粒径达1.7um)、单分散(分散指数为0.059)的聚苯乙烯微球。考察了微球在不同试剂及温度下的溶胀性能。     

TTC在乳及乳制品菌落总数检测中的应用

检测乳及乳制品菌落总数,为达到菌落在培养基中清晰可辨,在平板计数琼脂培养基中添加2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)。以灭菌乳、发酵乳、冰淇淋为样品基质,分别加入适当菌含量的大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、枯草芽胞杆菌工作菌悬液,制备适当浓度的TTC平板计数琼脂,同时以不添加TTC的平板计数琼脂作为对照,对同一样品进行菌落计数并同国标方法结果进行对比。TTC平板计数琼脂终浓度在0.001%~0.002%时能够使菌落显色,且与不添加TTC的对照组对比结果一致。在检测成分复杂的乳及乳制品样品时添加适宜浓度的TTC,有助于菌落的辨认,能够提高检验人员菌落计数的准确性,可用于检测乳及乳制品中菌落总数。     

护手霜中菌落总数测定用培养基的探讨

检测化妆品菌落总数时,为使菌落在培养基中清晰可辨,允许在卵磷脂、吐温80一营养琼脂培养基中添加2,3,5-三苯基氯化四氮唑(以下简称TTC)。文章以护手霜为样品基质,分别加入适当菌含量的大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌、酵母工作菌悬液,制备5mg/100mL浓度的TTC卵磷脂、吐温80-营养琼脂,同时以不添加TTC卵磷脂、吐温80一营养琼脂平板进行验证,以营养琼脂培养基作为对照,对菌落计数结果进行对比。结论:添加了5mg/100mLTTC的培养基用于化妆品菌落总数检测时对G+有明显的抑制作用,建议在日常检测过程中需慎重选择。     

酒酒球菌计数方法研究

以酒酒球菌为试验材料,分别用平板计数法、浊度计法、分光光度计法进行计数,所得的细胞数分别与对应的NTU值、OD值建立回归方程,方程分别为y=(0.0913 3.0075x)×107;y=(73.561x-4.8994)×107.结果显示,两个方程均有极显著的直线回归关系(P＜0.01),但前者的回归系数大于后者.因此,在酒酒球菌计数时最好用浊度计法代替平板计数法.     

实验室菌落计数精密度控制研究-Ⅱ方法研究

为使室间及室内检测数据的准确度及精密度控制控制在一定的范围,保证相关的卫生微生物实验室出具准确的检测数据,选用明胶菌片作为菌落计数室间及室内质控比对品。随机抽取明胶菌片和滤纸菌片各10片进行计数检测;取同一批号的明胶菌片发放给不同实验室进行室间比对;明胶菌片分别经1个月、3个月及6个月保存后进行稳定性计数测定。结果显示同一批次明胶菌片和滤纸菌片的相对标准偏差(RSD)分别为11%和223%,表明明胶菌片的精密度高于滤纸菌片;75个实验室室间明胶菌片计数结果95%的可信区间为551×107～803×107CFU片,有9683%的单位在此范围中;明胶菌片4℃冰箱保存1、3、6个月的检测结果的均数误差差异无显著性。采用明胶菌片作为菌落计数质控比对品,在精密度、准确度及可操作性方面都能达到相应的要求。     

一株来自河南的雪莲菌TK3优势菌相分析

对一株来自河南省的雪莲菌TK3进行初步菌相分析,扫描电镜结果表明：TK3是由乳酸菌及酵母菌构成的混菌共生体系,菌体附着在基质上,形成紧密不易分离的颗粒。对其菌相进行分离纯化得到6种优势菌,经镜检分析、生理生化分析及16S rDNA/26S rDNA鉴定,鉴定结果分别为：乳明串珠菌(Leuconostoc lactis)、乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、单孢酿酒酵母(Kazachstania unispora)、马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)以及exigua酿酒酵母(Kazachstania exigua),在发酵乳中存在的数量级分别为107、107、107、106、106、107CFU/mL,并且在4℃存放7d后各个菌群数量仍保持稳定。     

脉冲电场制备磁性Fe_3O_4海藻酸盐微球的工艺研究

以Fe_3O_4纳米粉末作为磁性材料,以海藻酸钠、壳聚糖作为微胶囊制备材料,以大肠杆菌为细胞模型,以CaCl_2为交联剂,采用脉冲电场微球成型工艺制备载细胞磁性微胶囊。以微球粒径为检测指标,正交设计考察显著影响因素及影响规律。采用振动磁强计测定徽囊的饱和磁化强度。实验结果表明,海藻酸钠溶液浓度是影响载磁微球粒径的显著因素。在Fe_3O_4浓度为1 mg/mL、海藻酸钠浓度为10 mg/mL金属锐孔孔径为450μm、泵速4 mL/h、CaCl_2浓度为20 mg/mL的工艺条件下,制备了球形度均匀、分散性好、具有强磁响应性、平均粒径132.2μm的超顺磁性微球,制备工艺对被包封细胞的生长代谢活性无影响。Fe_3O_4包封率为93%～96%。脉冲电场工艺可实现磁性载细胞微球的高效简便制备。     

海藻酸钠-培养基-刃天青-硅藻土微球法快速检测细菌总数

通过制备海藻酸钠-培养基-刃天青-硅藻土（alginate-medium-resazurin-diatomaceous silica,AMRD）微球,建立一种快速检测细菌总数的新方法。结果表明：单倍培养基浓度下,海藻酸钠∶硅藻土为1∶1.4（m/m）时,AMRD微球变色时间与细菌数量呈最佳线性关系,检测限为2.02×102 CFU/mL,检测时间为2～16.5 h。AMRD微球对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的检测灵敏度分别为1.62×103、2.03×103 CFU/mL。微球对细菌的吸附符合Freundlich等温吸附方程,参数1/n在0.5～1.0 之间,属于中等吸附,低浓度条件下受温度影响不大,吸附饱和需要30～45 min。AMRD微球细菌计数法是一种快速而经济的细菌计数新方法,有望用于食品、饮用水以及环境检测等领域细菌总数的定量检测。     

Effects of the nonionic surfactant tween 80 on microbial reductive dechlorination of chlorinated ethenes

Recent field studies have indicated synergistic effects of coupling microbial reductive dechlorination with physicochemical remediation (e.g., surfactant flushing) of dense nonaqueous phase liquid (DNAPL) source zones. This study explored chlorinated ethene (e.g., tetrachloroethene [PCE]) dechlorination in the presence of 50-5000 mg/L Tween 80, a nonionic surfactant employed in source zone remediation. Tween 80 did not inhibit dechlorination by four pure PCE-to-cis-1,2-dichloroethene (cis-DCE) or PCE-to-trichloroethene (TCE) dechlorinating cultures. In contrast, cis-DCE-dechlorinating Dehalococcoides isolates (strain BAV1 and strain FL2) failed to dechlorinate in the presence of Tween 80. Bio-Dechlor INOCULUM (BDI), a PCE-to-ethene dechlorinating consortium, produced cis-DCE in the presence of Tween 80, further suggesting that Tween 80 inhibits dechlorination by Dehalococcoides organisms. Quantitative real-time PCR analysis applied to BDI revealed that the number of Dehalococcoides cells decayed exponentially (R(2) = 0.85) according to the Chick-Watson disinfection model (pseudo first-order decay rate of 0.13+/-0.02 day(-1)) from an initial value of 6.6 +/-1.5 x 10(8) to 1.3+/-0.8 x 10(5) per mL of culture after 58 days of exposure to 250 mg/L Tween 80. Although Tween 80 exposure prevented ethene formation and reduced Dehalococcoides cell numbers, Dehalococcoides organisms remained viable, and dechlorination activity pist cis-DCE was recovered following the removal of Tween 80. These findings suggest that sequential Tween 80 flushing followed by microbial reductive dechlorination is a promising strategy for remediation of chlorinated ethene-impacted source zones.     

Microbial inhibitory and radical scavenging activities of cold‐pressed terpeneless Valencia orange (Citrus sinensis) oil in different dispersing agents

BACKGROUND: Due to their low solubility in water, oil‐based bioactive compounds require dispersion in a surface‐active agent or appropriate solvents to ensure maximum contact with microorganisms. These combinations, however, may change their physical and/or chemical characteristics and consequently alter the desired functionality. The objective of this study was to determine the impact of selected dispersing agents, ethanol, dimethyl sulfoxide (DMSO), and Tween‐80, on cold‐pressed terpeneless (CPT) Valencia orange oil to function as a free radical scavenger and an antimicrobial food additive. RESULTS: When dissolved in ethanol or DMSO, the orange oil fraction had similar minimum inhibitory concentrations (MIC) for Listeria monocytogenes ATCC 19 115 (0.3% and 0.25% v/v respectively), which were significantly lower (P ≤ 0.5) than the MIC for Salmonella typhimurium ATCC 14 028 (1% v/v). Both ethanol and DMSO oil dispersion systems exhibited an intermediate MIC (0.75% v/v) for Lactobacillus plantarum WCFS1. The orange oil (up to 3%) in an aqueous solution of 0.1% Tween‐80 yielded no inhibitory activities against any of the test bacteria. However, the 1% natural orange oil dispersed in Tween‐80 exhibited 56.86% 2,2‐diphenyl‐1‐picryl hydrazyl (DPPH) radical inhibition versus 18.37% and 16.60% when the same level of orange oil was dissolved in DMSO or ethanol, respectively. At the same orange oil concentration, the oil/Tween‐80 suspension yielded 57.92% neutralization of hydroxyl radicals. This represents 71.37% of the mannitol antioxidant activity, which was used as a positive control. CONCLUSIONS: These findings suggest that Tween‐80 is an appropriate dispersing agent only if the antioxidant functionality is desired. If both antimicrobial and antioxidant properties are needed, the CPT Valencia orange oil should be dispersed in either DMSO or ethanol. Copyright © 2010 Society of Chemical Industry     

2种新方法与国标法检测蜡样芽胞杆菌计数结果的比较研究

目的探寻一种操作简便、结果精确的蜡样芽胞杆菌计数方法。方法选用3种不同方法[分别为国标法、蜡样芽胞杆菌显色培养基法和BACARA(蜡样芽胞杆菌选择性培养基)法]对乳粉中蜡样芽胞杆菌质控样品及标准菌株菌悬液进行定量检验。运用配对t检验法分别比较显色培养基法、BACARA法与国标法检测蜡样芽胞杆菌计数结果一致性。结果 2种新方法与国标法计算检验结果在统计学上并无明显差异(P>0.05),一致性较好。结论 BACARA法具有快速、简便等优点。     

多孔壳聚糖微球的制备

以不同黏均分子量的壳聚糖为材料,用扫描电子显微镜观察壳聚糖微球表面、内部结构及形态,并以其为主要参考指标,研究了壳聚糖黏均分子量、NaOH浓度、乙酸乙酯比例、壳聚糖浓度、凝结时间等对壳聚糖形成多孔微球的影响,优化了制备多孔壳聚糖微球的工艺参数。结果表明:采用2.5%黏均分子量448.4kDa的壳聚糖为载体、3.0%的NaOH为凝结液、乙酸乙酯与NaOH溶液比例为1:20、在凝结液中处理3h时,能制备得到较好的多孔壳聚糖微球。     

反相微乳液的研究及其在淀粉微球制备的应用

淀粉来源广泛，价格低廉，具有很好的生物兼容性和降解性，近年来，以淀粉为原料，开发新产品或新应用途径，已成为研究的热门课题。本文首先提出以环己烷和氯仿为油相，Span80和Tween60作为复合乳化剂，碱性淀粉溶液为水相的反相微乳液，并以此制备粒度分布较均匀的，满足药物控释要求的淀粉微球。研究反应条件对微球粒度的影响，并应用SPSS统计工具推导出微球粒度与搅拌速度、油水相体积比、淀粉溶液浓度、表面活性剂用量及交联剂用量等因素之间的多元线性回归方程。     

pH响应比色酶联免疫吸附法检测牛奶中猪霍乱沙门氏菌

人类常常因误食被猪霍乱沙门氏菌感染的食物而引发中毒。因此,急需构建适用于快速、灵敏检测食物中猪霍乱沙门氏菌污染的新方法。鉴于此,本文构建了一种pH响应比色酶联免疫吸附法灵敏检测牛奶中猪霍乱沙门氏菌。该方法利用葡萄糖氧化酶催化底物葡萄糖产生葡萄糖酸,导致溶液pH下降,进而引发溴甲酚紫（Bromocresol purple,BCP）溶液颜色由紫色变成亮黄色,随后通过记录BCP颜色变化（OD₄₃₀/OD₅₉₀）实现目标菌的定量检测。当菌浓度为2.54×103~6.17×105 CFU/mL,该方法定量检测猪霍乱沙门氏菌可用方程一表述:y₁=0.1051ln （x）+0.7024（R2=0.7513）;当菌浓度为6.17×105~1.67×107 CFU/mL,该方法定量检测猪霍乱沙门氏菌可用方程二表述:y₂=1.3216ln （x）-15.797（R2=0.9711）;当菌浓度大于1.67×107 CFU/mL时,BCP溶液呈现明显亮黄色,OD₄₃₀/OD₅₉₀值趋于稳定,无法实现猪霍乱沙门氏菌定量检测。将六个不同浓度的猪霍乱沙门氏菌（2.5×103~5.6×106 CFU/mL）加标至牛奶中,检测结果显示回收率介于72.16%~103.58%,相对标准偏差介于7.54%~15.30%。总之,本研究所构建的比色ELISA方法适用于牛奶中不同浓度的猪霍乱沙门氏菌快速、灵敏定量检测。