食源性产志贺毒素大肠杆菌的分离及菌株特征分析

了解不同食品中产志贺毒素大肠杆菌的流行情况、菌株特征及潜在致病性。方法 对我国不同地区采集的355份食品样品进行产志贺毒素大肠杆菌分离鉴定,对菌株进行stx1/stx2基因分型、eae等毒力基因检测,并对菌株进行多位点序列分型(MLST)分析。结果 355份样品中44份stx2基因阳性,共分离出11株非O157 产志贺毒素大肠杆菌,其中3株携带stx2a亚型,3株携带stx2e亚型,1株携带stx2b亚型,4株不能分型;5株携带ehxA、saa毒力基因,2株携带subA基因,1株携带katP基因;MLST将11株菌分为7个不同的ST型,存在与溶血性尿毒综合症患者肠出血性大肠杆菌分离株(HUS-associated enterohemorrhagic E.coli,HUSEC)及主要流行血清群产志贺毒素大肠杆菌亲缘关系较近的ST型别。结论 我国食品中存在一定程度的非O157产志贺毒素大肠杆菌污染,部分菌株具有潜在致病性,应加强对食品中STEC的监测。     

新疆部分地区食源性大肠杆菌耐药性的研究

本研究对新疆乌鲁木齐、石河子、奎屯农贸市场以及超市的肉品、蔬菜、乳制品和即食食品中的大肠杆菌进行检测,从198份样品中分离出63株大肠杆菌。采用K-B法,对63株大肠杆菌进行17种抗生素敏感试验;采用PCR技术检测9种耐药基因。药敏结果表明,63株大肠杆菌对四环素(44.44%)、氨苄西林(39.68%)和萘啶酮酸(38.10%)耐药率较高,所有受试菌株对亚胺培南(0.00%)敏感性最强;肉品、蔬菜分离株对四环素(57.14%、52.94%)耐药性最强,乳源性分离株对氨苄西林(26.67%)耐药性最强,即食食品分离株对17种抗生素敏感;乌鲁木齐、奎屯、石河子分离株对四环素(65.00%、40.00%、32.14%)耐药率最高。PCR结果表明,耐药菌株中,sul2耐药基因检出率最高(75.00%),add B耐药基因的检出率最低(19.23%)。1重以上耐药菌株占总菌数的63.49%,3重以上耐药菌株占总菌数的39.68%。新疆地区食源性大肠杆菌多重耐药性比较严重。     

临沂市食源性单增李斯特菌分子特征分析

目的：基于全基因组测序分析临沂市食源性单增李斯特菌的毒力基因、耐药基因携带情况及分子分型特征。方法：利用测序数据对27株食源性单增李斯特菌株进行多位点序列分型、毒力基因和耐药基因分析,并构建基于cg-SNP的系统发育树。结果：27株分离菌株共分为10个ST型,其中ST121为优势型别。27株单增李斯特菌有26株菌携带磷霉素（FosX）耐药基因,占96.3%,2株菌携带四环素类（tetM）和甲氧苄氨嘧啶类（dfrG）2种耐药基因,仅有1株菌不耐药。27株菌出现两种毒力缺失,第一种是毒力岛LIPI-1缺失,缺失率为7.4%。第二种是毒力岛LIPI-2中inlF单一缺失,缺失率为40.7%。系统发育树分析显示,27株菌株距离较近,聚集于3个分支中。绝大部分菌株分离自肉制品,占74.1%(20/27)。结论：食源性单增李斯特菌存在多种耐药基因,毒力基因分布以毒力岛（LIPI-1、LIPI-2）为主,具有潜在的致病性。建议临沂市单增李斯特菌专项监测工作在牲畜肉制品的基础上,应加大对冷冻饮品及其乳制品原料、生禽肉类、水果蔬菜类样本的监管,进一步降低单增李斯特菌所致食源性疾病流行风险。     

食品中克罗诺杆菌分离菌株生物被膜形成、耐药性及毒力基因检测

研究食品中克罗诺杆菌分离菌株的生物被膜形成、耐药性以及携带毒力基因情况。在成都市周边农贸市场和路边小摊采集食品样品129份,采用DFI 阪崎肠杆菌显色培养基分离克罗诺杆菌;通过16S rRNA序列比对分析鉴定分离菌株;采用试管法和微孔板法分析菌株生物被膜形成能力,同时研究温度对细菌成膜能力影响;采用纸片法检测分离菌株对18种抗生素的耐药性;采用PCR方法检测分离菌株携带cpa、hly、sip 和ompX毒力基因情况。结果发现从129份食品样本中共检出克罗诺杆菌43株,检出率为33.3%。43株克罗诺杆菌食品分离菌株的成膜率为90.7%,并且温度对细菌成膜影响明显。四种毒力基因中,ompX检出率为100%;cpa检出率为13.9%;hly检出率为11.6%;sip基因未检出。耐药表型检测发现43株克罗诺杆菌食品分离菌株对青霉素、克林霉素、万古霉素、苯唑西林和杆菌肽B的耐药率为100%,对利福平的耐药率达97.7%;对红霉素的耐药率为7%;对环丙沙星、庆大霉素、四环素、氯霉素、亚胺培南、磺胺甲恶挫、呋喃妥因、头孢西丁、链霉素、阿米卡星、氧氟沙星等100%敏感。本研究表明克罗诺杆菌食品分离菌株具有较好的形成生物被膜能力,对常见的抗生素耐药率较高,并且分离菌株携带一定的毒力基因,对食品安全造成潜在威胁。     

温州市食品中小肠结肠炎耶尔森氏菌分布及分子分型研究

目的 了解温州市食品中小肠结肠炎耶尔森氏菌的分子分型及分布特征。方法 4 ℃增菌后用选择性培养基对食品中的小肠结肠炎耶尔森氏菌进行分离鉴定,分析阳性菌株的生物型、血清型、毒力基因型、耐药性和脉冲场凝胶电泳（PFGE）分子型别。结果 采集6类食品,共676份样品,其中68份样品检出69株小肠结肠炎耶尔森氏菌,检出率为10.1%（68/676）。调理肉制品检出率最高（20.5%,9/44）,其次为速冻食品（17.2%,11/64）。95.7%（66/69）的分离株为生物1A型,生物血清型以1A/O∶5（29.0%）为主,其次为1A/O∶8（14.5%）;88.4%（61/69）的菌株仅携带ystB基因,检出1株4/O∶3型菌株携带毒力基因ail、ystA、yadA、virF。分离株对14种抗菌药物的敏感率达到94%以上。32株血清已分型菌株,分为29种PFGE带型。结论 温州市食品中存在一定程度的小肠结肠炎耶尔森氏菌污染,且检出致病性小肠结肠炎耶尔森菌,菌株耐药率处于较低水平,分子分型提示菌株呈高度遗传多态性。     

辽宁省婴幼儿食品中肠集聚性大肠埃希菌的病原学特征及耐药谱研究

目的 对2018—2020年辽宁省婴幼儿食品中致泻大肠埃希菌开展持续监测,了解和掌握本省内致泻大肠埃希菌的病原学特征、药物敏感性特征,为本省致泻大肠埃希菌流行病学研究奠定坚实基础,为可能导致的食源性疾病合理用药提供依据。方法 采集辽宁省共208份婴幼儿食品,分离肠杆菌科细菌,并进行16S rRNA基因测序分析与生化鉴定。对鉴定得到的大肠埃希菌进行毒力基因检测,收集分离的肠集聚性大肠埃希菌（EAEC）进一步进行血清学分型和耐药谱研究。结果 16S rRNA基因测序通过对肠杆菌科进行种鉴定,发现与生化结果一致。其中EAEC的检出率较高,且EAEC的毒力基因pic携带率高。毒力基因分型和血清分型具有一致性。共检测出25株EAEC,其中40%菌株（血清型O134:H9）携带毒力基因pic,28%菌株（血清型O3:H2）同时携带毒力基因aggR和astA,16%菌株（血清型O9:H6）携带毒力基因aggR,16%菌株（血清型O62:H7）携带毒力基因astA。78株大肠埃希菌中EAEC毒力基因的携带率为32.1%。25株EAEC为多重耐药株,主要对β内酰胺类、大环内酯类、喹诺酮类、四环素类抗菌药...     

奶牛场采奶环节大肠埃希氏菌分离鉴定及对抗生素和消毒剂的抗性分析

为了解奶牛场采奶过程中大肠埃希氏菌污染状况、菌株所携带毒力基因及其对抗生素和消毒剂抗性。选择成都市某奶牛场随机采集655份样品,对致病性大肠埃希氏菌进行分离鉴定,并检测分离株携带的毒力基因、耐药基因以及抗消毒剂基因,筛选出毒力强菌株,分别检测菌株对抗生素和消毒剂的敏感性。结果表明,一共分离得到249株大肠埃希氏菌,鉴定致病性大肠埃希氏菌有123株,其中,肠道聚集性大肠埃希氏菌(EAEC)为该奶牛场主要致病性大肠埃希氏菌,占比77.23%;16株携带2~4种毒力基因不同来源菌株被挑选出来,检出了14种耐药基因和1种耐消毒剂基因。药敏试验中,耐药性最高为杆菌肽B(100.00%),依次是青霉素(93.75%)、利福平和万古霉素(87.50%),菌株呈现多重耐药现象(2~10耐);针对选取的8种常用消毒剂,发现3种对奶牛场中绝大多数大肠埃希氏菌有显著抑菌效果,可推荐使用。该奶牛场致病性大肠埃希氏菌以EAEC为主,菌株对抗生素和消毒剂有一定的抗性,应引起重视。     

温州市食品中肠出血性大肠杆菌O157∶H7污染状况调查

目的调查温州市食品中肠出血性大肠杆菌O157∶H7的污染状况,了解肠出血性大肠杆菌O157∶H7毒力因子的携带与耐药情况。方法采用分层随机抽样的方法,对2008—2011年抽取的231份食品样品,用免疫磁珠富集法对大肠杆菌O157∶H7进行分离,对该分离株进行生化、血清学鉴定,以纸片法(K-B法)进行药敏试验;采用PCR方法检测O、H抗原基因和stx1、stx2、eaeA、hlyA等4种毒力基因。结果 231份样品中,分离出1株肠出血性大肠杆菌O157∶H7,检出率为0.43%;O157抗原和H7抗原的核酸检测结果阳性,但未检测到stx1、stx2、eaeA、hlyA等4种毒力基因,菌株对红霉素、利福平、150μg/片和10μg/片两种浓度的0/129(二氨基二异丙基喋啶磷酸盐)耐药。结论温州市食品中存在大肠杆菌O157∶H7的污染,检出率较低,但提示要加强主动监测,通过有效干预,防范肠出血性大肠杆菌O157∶H7所致食源性疾病的发生。     

多重耐药与药物敏感大肠杆菌菌株在体外模拟胃肠道环境的生存力研究

目的 大肠杆菌是人和温血动物肠道重要的兼性厌氧寄居菌群, 也是水源和食品粪便污染指示菌。研究多重耐药型大肠杆菌和药物敏感型大肠杆菌菌株在体外模拟胃肠道环境下的生存能力, 本文数据为控制有害大肠杆菌提供理论依据。方法 从奎屯市超市采集30份零售食品, 分离出8份大肠杆菌阳性样品, 污染率为27%。利用纸片扩散法对分离的8株大肠杆菌进行耐药实验, 从8株菌中选出1株具有多重耐药的E27号菌和1株药物敏感型菌株E25号菌进行人工胃液和人工肠液耐受试验。结果 所测定的8株大肠杆菌对大多数耐药纸片敏感, 大肠杆菌对氨苄西林和四环素耐药率较高。8株菌中有4株耐药菌和4株敏感菌。结论 所选出的两株菌, E25在人工胃肠液中的耐受力较好, 菌株E27在人工胃肠液中耐受力较差, 敏感菌株E25要比多重耐药菌株E27菌数减少的缓慢。     

免疫磁珠法检测食品中的沙门菌及分离菌株的耐药性

为检测沙门菌在本市食品中的污染和耐药情况,采集各类食品样品303件,经增菌后通过特异的免疫磁珠（IMS）吸附并接种XLD平板分离沙门菌.分离的菌株按年度分成2组,分别以改良K-B法测试对28种抗生素的耐药性.在303件样品中检出87件阳性,总阳性率28.71%.分离到的112株沙门菌以德比、肠炎血清型占优势.肉类制品的阳性率40.20%（82/204）明显高于其它食品,共分离出107株沙门菌（107/112,95.54%）.菌株耐药率在2年中有显著改变的抗生素有环丙沙星、复方新诺明、妥布霉素、二甲胺四环素、氯霉素和链霉素.耐10种以上抗生素的多重耐药株有12株（12/112,10.71%）,有4株头孢哌酮耐药株.IMS用于食品中沙门菌的分离效果较好.结果显示耐环丙沙星和多重耐药菌株的增多说明加强食源性沙门菌耐药监测的重要性。     

屠宰猪中大肠杆菌毒力基因检测及耐药性分析

为了解屠宰猪中大肠杆菌的毒力因子、种群分型以及耐药性情况,分析潜在的食品安全问题,为食品安全和临床用药提供理论依据,对来自屠宰猪中77?株大肠杆菌,包括陕西53?株、重庆16?株及河南8?株,进行毒力基因、种群分型及耐药性的检测。结果显示,iutA基因的检出率最高,优势群系为A群系;且菌株的耐药情况严重,12?种常见抗生素中对四环素、甲氧苄啶/磺胺甲二唑的耐药性普遍高。大多数菌株耐3～9?种药（90.91%）,最高可对11?种抗生素耐药。屠宰猪中存在耐药性菌株的污染,且极有可能是通过猪肉生产过程进入到食物链中,对消费者的健康存在一定的潜在危害,需要加强卫生监督。     

动物性食品源大肠杆菌质粒介导喹诺酮的耐药机制研究

本研究以动物性食品源大肠杆菌为研究对象,采用琼脂二倍稀释法调查菌株对抗生素的药物敏感性,通过PCR扩增及产物测序检测质粒介导喹诺酮耐药(PMQR)基因的分布以及喹诺酮耐药决定区(QRDR)靶基因突变,旨在更好的了解食源性大肠杆菌对喹诺酮类药物产生耐药性的分子机制。645份动物性食品样品中共检出大肠杆菌179株,总检出率为27.7%。179株动物性食品源大肠杆菌对15种抗生素均表现出不同程度的耐药性,其中对四环素、链霉素、萘啶酸和复方新诺明的耐药水平较高。PMQR基因阳性菌株共14株,占受试菌株的7.8%,其中有11株能通过接合转移将PMQR基因转移至受体菌中。QRDR靶位突变在PMQR阳性菌株中普遍存在,介导菌株对喹诺酮的高水平耐药。研究结果表明,动物性食品可能成为耐药菌株的潜在"蓄水池",并通过食物链将耐药性传递给人类,从而引起人类的感染以及耐药菌株的流行。     

奶源大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析

目的了解原料乳和乳房炎奶样中大肠杆菌的污染情况及菌株耐药性。方法通过选择培养和聚合酶链式反应方法对2个奶牛场采集到的206份奶样(129份乳房炎牛奶样品和77份原料乳样品)进行大肠杆菌的分离鉴定,采用药敏纸片法对分离株进行25种常用抗生素耐药特征检测。结果 206份奶样中大肠杆菌的污染率为8.3%(17/206),其中乳房炎和原料乳样品的污染率分别为7.0%(9/129)和10.4%(8/77)。从17份污染的样本中共分离到34株大肠杆菌,其中乳房炎奶样分离到18株,原料乳分离到16株。药敏结果显示,奶样分离株对氨苄西林耐药最为普遍(44.1%,15/34),对头孢类抗生素也有较强耐药性[如头孢唑啉和头孢噻吩(20.6%,7/34)]。最常见的耐药谱为AMP(11.8%,4/34),AMP-CXM-CFZ-KF-F和AMP-CXM-CFZ-CTX-PRLCRO-KF(5.9%,2/34)。此外,A,B奶牛场分离株的耐药率(P=0.007)和耐药谱总体差异显著(P=0.043)。结论奶样中存在大肠杆菌的污染情况,菌株普遍对氨苄西林和头孢类抗生素耐药且部分对非兽用抗生素也有一定的耐药性。因此,为避免耐药大肠杆菌对人类,尤其是抵抗力较弱的老年人和婴幼儿的感染和中毒,除应加强对奶源地的管理外,还需防止抗生素的滥用。     

Characterisation of Escherichia coli O157 strains from humans, cattle and pigs in the North-West Province, South Africa

Escherichia coli O157 strains cause diseases in humans that result from the consumption of food and water contaminated with faeces of infected animals and/or individuals. The objectives of this study were to isolate and characterise E. coli O157 strains from humans, cattle and pigs and to determine their antibiotic resistant profiles as well as detection of virulence genes by PCR. Eight hundred faecal samples were analysed for typical E. coli O157 and 76 isolates were positively identified as E. coli O157 strains. 16S rRNA sequence data were used to confirm the identity of the isolates. Susceptibility profiles to 9 antibiotics were determined and the multiple antibiotic resistant (MAR) patterns were compiled. A large proportion (52.6%-92.1%) of the isolates from pigs, cattle and humans were resistant to tetracycline, sulphamethoxazole and erythromycin. Thus the phenotype Smx-T-E (sulphamethozaxole-tetracycline-erythromycin) was present in most of the predominant MAR phenotypes obtained. Cluster analysis of antibiotic resistances revealed a closer relationship between isolates from pig and human faeces than cattle and humans. PCR were performed to amplify STEC virulence and tetracycline resistance gene fragments. A tetB gene fragment was amplified among the isolates. Eighteen (60%) of the isolates possessed the hlyA gene and 7(23.3%) the eae gene while only 5(16.7%) possessed both genes. Although shiga toxin genes were detected in the E. coli O157:H7 positive control strain none of the isolates that were screened possessed these genes. In a related study we reported that the prevalence of E. coli O157 was higher in pigs than cattle and humans. A high market demand for pork and beef in South Africa amplifies the risk that diseased animals pose to human health. This highlighted the need for proper hygiene management to reduce the prevalence of E. coli O157 in farm animals and prevent the spread from animals to humans.     

Occurrence of non-O157 shiga toxin-producing Escherichia coli in ready-to-eat food from supermarkets in Argentina

Between June 2000 and December 2001, 500 food samples were collected from supermarkets and shops selling ready-to-eat food in Rosario, Argentina, and examined for Escherichia coli. Forty-nine E. coli isolates from food samples were further characterized for virulence genes by multiplex polymerase chain reaction (PCR) targeting the stx1, stx2, stx2e, eaeA, CNF1, CNF2, Einv, LTI, STI, and STII genes in four groups. Out of 49 E. coli isolates screened by multiplex PCR, only 10 possessed Shiga toxin genes, stx1 and stx2 genes and none possessed the other genes. The Shiga toxin positive E. coli strains (STEC) were isolated from soft, cottage cheeses, chicken with sauce and vegetables mayonase. These E. coli isolates were serogrouped and belonged to O18 (two strains), O8, O57w, O79, O44, and O128; three strains were untypeable. Pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) with XbaI generated a unique profile for each, having 10-15 bands ranging from 50 to 500 kb, except that strain ARG 20 generated small bands and was partly degraded. These strains are potential foodborne pathogens and their presence in ready-to-eat food illustrates the need to keep a careful watch for the source of pathogens and then develop methods to control them.     

食源性大肠杆菌O157毒力、耐药性及CRISPR分型分析

为深入了解食品源大肠杆菌O157的生物学特点,本研究对2014-2015年分离的39株大肠杆菌O157进行了PCR鉴定,毒力基因和耐药性检测,并利用规律成簇的间隔短回文重复序列(CRISPR)分型技术对菌株的遗传特性进行了分析。结果表明,39株菌株中有8株鉴定为O157:H7,31株为O157;检测的11种毒力基因中,eae存在于所有菌株中,stx2存在于82.50%菌株中,stx1未检出,其他毒力岛基因esp A、etp D、tir、tox B、iha和kat P携带率分别为92.31%、94.87%、87.18%、79.49%、69.23%和46.15%。药敏试验结果表明,菌株对四环素、复方新诺明、链霉素、氯霉素和氨苄西林等抗生素高度耐药,超过30%菌株具有多重耐药性。CRISPR分型结果表明菌株具有较高的遗传多样性,39株菌株中有33株存在CRISPR1位点,8株E.coli O157:H7产生了相同的CRISPR spacer图谱,而26株E.coli O157产生了13种spacer图谱。本研究为食源性疾病的监测、疾病溯源和流行病学研究提供重要的基础数据。     

乳品生产链金黄色葡萄球菌的污染、耐药性分析及β-内酰胺类药物耐药基因的检测

为分析乳品生产链中金黄色葡萄球菌(Sa)的污染及耐药情况,从部分乳品生产企业采集乳样(生鲜牛乳、生产车间半成品牛乳、成品牛乳)523份,按照GB 4789.10-2010及PCR方法分离鉴定Sa菌株1;采用微量肉汤稀释法,测定Sa分离株对12种抗生素的药敏性,并利用多重PCR方法分析Sa对β-内酰胺类药物耐药性的产生与其耐药相关基因(mecA、blaZ)的关联性。结果显示,乳样Sa总分离率为24.9%(129株),其中生鲜牛乳、中间半成品牛乳及成品牛乳Sa污染率分别为37.5%、7.1%和0.0%;受试Sa分离株对青霉素的耐药率(97.7%)最高,其它依次是氨苄西林(95.4%)、甲氧苄啶/磺胺甲噁唑(61.9%)、阿莫西林/克拉维酸(61.7%)、红霉素(39.7%)、四环素(36.6%)、盐酸林可霉素(35.2%);所有菌株均对苯唑西林、头孢噻呋、氟苯尼考敏感;多重耐药Sa分离率为69.8%,主要对青霉素类、磺胺类、大环类脂类、林可胺类及四环素类表现出多重耐药;多重PCR检测结果显示,129株测试Sa的nuc、blaZ、mecA阳性率分别为100.0%、60.5%及0.0%;不同生产环节乳源Sa携带blaZ基因与其对β-内酰胺类药物的耐药表型有一定的对应关系。结果表明,乳品生产链Sa污染及耐药现状已不容乐观,应引起重视,避免食源性疾病的发生。     

Diversity of Antibiotic Resistance Genes in Enterococcus Strains Isolated from Ready‐to‐Eat Meat Products

The objective of the study was to answer the question of whether the ready‐to‐eat meat products can pose indirect hazard for consumer health serving as reservoir of Enterococcus strains harboring tetracyclines, aminoglycosides, and macrolides resistance genes. A total of 390 samples of ready‐to‐eat meat products were investigated. Enterococcus strains were found in 74.1% of the samples. A total of 302 strains were classified as: Enterococcus faecalis (48.7%), Enterococcus faecium (39.7%), Enterococcus casseliflavus (4.3%), Enterococcus durans (3.0%), Enterococcus hirae (2.6%), and other Enterococcus spp. (1.7%). A high percentage of isolates were resistant to streptomycin high level (45%) followed by erythromycin (42.7%), fosfomycin (27.2%), rifampicin (19.2%), tetracycline (36.4%), tigecycline (19.9%). The ant(6′)‐Ia gene was the most frequently found gene (79.6%). Among the other genes that encode aminoglycosides‐modifying enzymes, the highest portion of the strains had the aac(6′)‐Ie‐aph(2′′)‐Ia (18.5%) and aph(3′′)‐IIIa (16.6%), but resistance of isolates from food is also an effect of the presence of aph(2′′)‐Ib, aph(2′′)‐Ic, aph(2′′)‐Id genes. Resistance to tetracyclines was associated with the presence of tetM (43.7%), tetL (32.1%), tetK (14.6%), tetW (0.7%), and tetO (0.3%) genes. The ermB and ermA genes were found in 33.8% and 18.9% of isolates, respectively. Nearly half of the isolates contained a conjugative transposon of the Tn916/Tn1545 family. Enterococci are widely present in retail ready‐to‐eat meat products. Many isolated strains (including such species as E. casseliflavus, E. durans, E. hirae, and Enterococcus gallinarum) are antibiotic resistant and carry transferable resistance genes.