小样发酵法抗生素残留的检测

实验在GB/T 4789.27-2008《食品卫生微生物学检验鲜乳中抗生素残留检验》的基础上,结合实际生产需要推行简便实用的"小样"发酵抗生素残留检测方法,采用的菌种由国标法的嗜热链球菌转变为发酵乳常用的乳酸菌菌种,并进行不同母菌种配制方法的对比,达到简化母菌种配制过程。推荐的方法不仅节约时间,提高工作效率,还节约费用,达到简便、实用的效果,更加适用于乳品企业进行生鲜牛乳小样发酵法抗生素的检测。     

乳酸菌发酵法检测鲜乳和乳粉中的两种抗生素残留

根据抗生素能抑制乳酸菌发酵的原理,建立了用乳酸菌发酵检测鲜乳及乳粉中青霉素和头孢噻呋残留的方法。通过向无抗乳中添加抗生素,接种乳酸菌,测定发酵过程中的pH,得出两种抗生素的检测限。结果表明:以鲜乳为本底时,青霉素和头孢噻呋的检测限分别为0.08U/mL、0.08μg/mL;以乳粉为本底时,青霉素和头孢噻呋的检测限分别为0.1 U/mL、0.08μg/mL。该方法简单、快速、价格低廉,适于推广。     

生鲜牛乳中抗生素检测方法的新问题

国家标准中明确规定了生鲜牛乳中不得检出抗生素,GB/T4789.27-2003中也规定了鲜乳中抗生素残留的检测方法,但目前使用较多的β-内酰胺酶的使用,在一定程度上对检测工作带来了困难,掩盖了抗生素的残留量.本文从牛乳中抗生素的残留来源、检测方法和β-内酰胺酶的现状、检测两个方面进行论述.     

新霉素半定量胶体金试纸条的研制

建立了一种快速、简单的检测牛乳中新霉素残留量的胶体金免疫层析法。将不同浓度的新霉素人工合成完 全抗原包被在硝酸纤维素膜上作为检测线（T1、T2线）,与待测牛乳样品中的新霉素竞争结合新霉素单克隆抗体- 胶体金标记物,通过两条T1、T2线显色情况使传统新霉素胶体金试纸条由定性检测准确到半定量检测。试纸条对 牛乳样品的半定量检测限分别为200 μg/kg和400 μg/kg,该检测限满足欧盟及国家对新霉素检测的需求,且检测牛 乳样品能够满足现场快速检测的要求,为现场快速检测牛乳中新霉素残留提供了更精确的参考依据。     

高效液相色谱-三重四级杆质谱联用法检测荷斯坦和水牛原料乳中喹诺酮残留

目的建立高效液相色谱-三重四级杆质谱联用法检测我国南方地区荷斯坦和水牛原料乳中喹诺酮类抗生素类残留的分析方法。方法采集南方地区15个荷斯坦牧场和15个水牛牧场的120份原料乳,采用高效液相色谱-三重四级杆质谱联用法检测其中的喹诺酮类抗生素残留情况。结果检出限和回收率分别为0.05~0.25μg/L和88.2%~109.2%。水牛乳中喹诺酮类抗生素残留检出率为8.06%,荷斯坦牛乳中抗生素残留率为6.89%。结论该方法检测牛乳中喹诺酮类结果准确可靠,南方地区的荷斯坦牛乳和水牛乳喹诺酮类残留量与国内外相比程度较低,原料乳总体上处于安全范围。     

微生物抑制法快速检测鲜牛乳中红霉素残留

目的利用微生物抑制法快速检测鲜牛乳中红霉素残留。方法将待测的牛奶样品和空白样品经杀菌后接入乳酸菌,经过相同时间发酵后,计算待测牛奶样品发酵前后的pH变化差值与空白样品发酵前后的pH变化差值,从而判断鲜牛奶中红霉素残留的含量。结果经过单因素及正交实验,确定乳酸菌发酵产酸条件如下:接种量0.15 U/L、发酵温度40℃、菌粉溶解时间25 min、发酵时间3.5 h,利用乳酸菌发酵产酸建立了检测鲜牛奶中红霉素残留的标准曲线Y=0.024X-0.013(其中,Y为△pH,X为鲜牛乳样品中的红霉素浓度),线性相关系数R~2=0.9949,检测的灵敏度IC_(50)为29.71μg/L,检测的线性范围为0~50μg/L,加标回收率为103.54%~124.58%,同一批次内检测的变异系数为4.39%~16.46%。结论建立的检测方法可用于筛选鲜牛乳中是否有抗生素残留并进行定量检测。     

一种简单有效检测牛乳中抗生素残留的方法

根据当牛乳不含抗生素或抗生素浓度很低时,乳酸菌能发酵牛乳生成酸奶的原理,建立了乳酸菌抑制法来检测牛乳中抗生素残留。具体步骤为:称取约100 g纯牛乳/复原乳,90℃、10 min杀菌,冷却至(43±1)℃,接检测菌种3%~4%,并加入1m L溴甲酚紫指示剂,搅拌均匀,(43±1)℃下发酵。若发酵2.5 h发酵液仍为紫色,可初步判定为有抗奶;若发酵4 h仍未凝乳,则确定为有抗奶,反之,则为无抗奶。该方法操作简单、乳酸菌剂购买方便且易保存,适于在企业推广。     

阿尤恩地区自然发酵牛乳中乳酸菌分离鉴定及多样性研究

为了分离、保藏自然发酵乳中乳酸菌菌种,丰富自然发酵乳中乳酸菌多样性信息。本文采用传统的纯培养分离方法和宏基因组16S rRNA基因测序技术对阿尤恩地区自然发酵牛乳的乳酸菌多样性进行研究。纯培养结果表明:5份自然发酵牛乳中共分离出111株乳酸菌,鉴定为5个属10个种,其中Lactococcus lactis,占总分离株的45.95%;宏基因组测序结果发现,5份样品中的细菌归属于8个门、66个属和131个种,其中优势菌门为Firmicutes(69.63%),优势菌属为Lactococcus(31.80%),优势菌种同样为Lactococcus lactis(22.95%),另外还检测到含量较高的Streptococcus thermophilus(17.12%)、Lactobacillus helveticus(14.44%)等菌种。通过分析发现,Lactococcus lactis为阿尤恩地区5份自然发酵牛乳样品的优势菌种,并且自然发酵牛乳样品中细菌种类丰富,样品间细菌组成存在相似性和差异性。     

牛乳中青霉素G残留三种检测方法的比较研究

本实验对乳中抗生素残留的三种微生物检测法进行比较,确定三种检测法对牛乳中青霉素G残留的检测限、检测时间、检测成本、操作难易程度等关键参数,同时指出国标TTC法在检测限方面的缺陷,建议采用经济省时、简便易行、检测限较低的试管扩散法作为AOAC纸片法及国标TTC法的补充,应用于牛乳中β-内酰胺 类抗生素残留的检测.     

一种发酵乳中乳酸菌总数快速检测技术的研究

以还原法为理论基础,开发并建立一种应用于发酵乳饮料成品乳酸菌数指标的快速检测方法。本方法应用仪器记录了样品加入反应试剂后的颜色变化(RGB),通过数理统计分析,采用斜率法,以R值斜率表示样品颜色的变化速度。本研究对发酵乳样品进行了预处理,以符合刃天青还原法的反应条件。以GB 4789.35《食品安全国家标准食品微生物学检验乳酸菌检验》为标准,建立了R值斜率与乳酸菌菌落总数之间的标准方程,经验证本方法检测结果与GB 4789.35《食品安全国家标准食品微生物学检验乳酸菌检验》检测结果无显著差异。与现有标准方法相比,在时效性、运营成本等方面具有较大优势。     

高效液相色谱法测定乳制品中纳他霉素分析方法的改进

目的优化高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)测定乳制品中纳他霉素含量的分析方法。方法对测定纳他霉素GB/T 21915-2008《食品中纳他霉素的测定》的高效液相色谱法中样品的提取溶剂、蛋白沉淀剂、色谱流动相及流速进行优化,并对优化后的方法进行方法学验证。结果选择10%的冰乙酸水溶液作为样品提取溶剂;乙酸锌和亚铁氰化钾作为蛋白沉淀剂;甲醇-水-冰乙酸(60:40:2,V:V:V)作为流动相;流速为1.0 mL/min。可以在7 min内完成对目标物的分离,线性方程为Y=43315X-1751,r~2=0.99997,方法平均回收率在98.5%~106.3%之间,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)均小于2.2%,方法检出限为0.02 mg/L。结论该方法前处理简单,回收率及灵敏度高,准确度和稳定性好,适用于对纯牛奶、乳酸菌饮料、奶粉等乳制品中纳他霉素的分离和定量检测。     

能力验证乳粉中乳酸菌计数不确定度的评定

目的对能力验证乳粉样品中乳酸菌计数进行不确定度评定。方法依据能力验证作业指导书和GB4789.35-2010《食品安全国家标准食品微生物学检验乳酸菌检验》进行测定,再根据JJF 1059.1-2012《测量不确定度评定与表示》对不确定度来源进行分析和评定。结果乳酸菌计数过程中,分散性对结果不确定贡献较大,因此测定结果的不确定度采用检测结果的分散性进行评定。6份样品乳酸菌计数结果扩展不确定度为分别为0.02012、0.04337、0.01992、0.03296、0.02182和0.031379(P=95%,k=2.09)。结论此方法适用于类似检测条件下乳酸菌计数不确定度的评定。     

核桃粕发酵乳菌种筛选及发酵条件优化研究

该试验对乳酸菌发酵核桃粕乳的不同菌株进行筛选,通过pH值、酸度及感官评定分析,从9株乳酸菌中筛选出嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)和植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)两株优良菌种。研究两株乳酸菌的复配比例,并与传统发酵剂发酵的核桃粕乳进行品质对比。结果表明,以嗜酸乳杆菌:植物乳杆菌(1∶1)接种发酵后得到的发酵核桃粕发酵乳综合品质最佳,其感官评分90分,氨基酸态氮含量57.0 mg/L,活菌总数7.35×107 CFU/mL,经发酵后的营养价值明显优于传统发酵剂发酵的核桃粕乳。     

乳球菌属对抗生素最小抑菌浓度的分析

抗生素与乳酸菌一直被人们所关注,乳酸菌作为功能性发酵剂以及益生菌应用于发酵食品和饲料中并且安全性使用史的时间很自中国不同地区不同乳源的明串珠球菌属、乳球菌属、肠球菌属及嗜热链球菌属等4个种属的26株乳球菌为研究对象,采用16S rRNA对其进行基因序列的分析鉴定;用最小抑菌浓度(MIC,Minimum Inhibitory Concentration)法对其进行10种分别属于氨基糖苷类、四环素类、氟喹诺酮类、糖肽类、大环内酯类、苯丙醇类和安莎霉素类7类常见抗生素耐药性以及敏感性的解析,探讨不同抗生素对不同乳酸菌菌株的耐药性。结果表明,属于4个种属的26株乳球菌菌株对属于7类的10种常见抗生素的耐药性均有不同。本实验结果可以为人们在使用抗生素与乳酸菌时提供一定的参考,并在其共同应用过程中更合理化和安全化。     

Simultaneous Determination of Erythromycin,Tetracycline, and Chloramphenicol Residue in Raw Milk by Molecularly Imprinted Polymer Mixed with Solid-Phase Extraction

A rapid, simple, and efficient method was described for the simultaneous determination of three common antibiotic residues including erythromycin, tetracycline, and chloramphenicol in raw milk. A molecular imprinting technique combined with solid-phase extraction (SPE) was used to pretreat the test samples and then simultaneously detected with HPLC. The whole process, only including one step of pretreatment, was able to detect the entire target molecule using specific enrichment and analysis method. The detection was verified by comparison with Chinese standard methods of GB/T 22988-2008, GB/T 22990-2008, and GB/T 29688-2013. The testing lines, accuracy, reproducibility, specificity, and recoveries were evaluated, and calculated values were in line with established standards. The recoveries of erythromycin, tetracycline, and chloramphenicol were 77.82~87.08, 81.02~88.17, and 72.94~83.57%, respectively. By using of this novel solid-phase extraction substrate, the detection limits for erythromycin, tetracycline, and chloramphenicol were 10, 20, and 10 μg kg^?1, respectively. The method was suitable for routine analysis, and the experimental procedure was simplified, with the detection time greatly reduced. This method showed broad application prospects for the detection of antibiotic residues in raw milk.     

甘肃牧区传统发酵乳制品中优良乳酸菌的分离筛选

从甘肃牧区传统发酵乳制品中分离筛选适合发酵乳生产的乳酸菌,对分离纯化的乳酸菌进行了发酵性能检测,筛选出产酸快、发酵活力高、凝乳时间短、后酸化能力弱、遗传性状稳定的菌株。筛选的6株菌株单菌发酵牛乳,均在6.5 h内凝乳,发酵乳酸度＞70 °T,乳酸菌活菌数＞1×108 CFU/mL,发酵乳组织状态、滋味、气味等感官指标良好,可作为生产发酵乳的优良乳酸菌菌种进行开发利用。     

HPLO法测定发酵乳中Y-氨基丁酸条件的优化

本文优化了乳酸菌发酵乳中7-氨基丁酸（GABA）的HPLC检测方法。以三氟乙酸．水溶液为提取液,通过60℃水浴、10000r／min离心10min等方法去除样品中的杂质,对乳酸菌发酵乳制品中的GABA进行提取。通过调整流动相的洗脱方式、流动相比例与pH、柱温等条件,使用专用氨基酸分析柱、恒温柱温箱、自动进样器和仪器自动衍生程序,建立了一种高效快速检测发酵乳制品中GABA的方法。该方法对GABA的检出限LOD（S／N=3）为0．005gg／mL（质量浓度）,定量限LOQ（S／N=10）为0．02gg／mL（质量浓度）。线性范围是0．005-500lag／mL（质量浓度）,相关系数R2=l。该方法具有准确度高、快速、环保、经济等特点。采用该方法对功能食品样品、红曲米样品、乳酸菌发酵液样品中的GABA进行检测,均能得到满意的效果,证明该法具有较广泛的适用性。     

酸度计法快速检测牛奶中残留的β-内酰胺酶

为了快速、准确地检测牛奶制品中残留的β- 内酰胺酶的含量,利用β- 内酰胺酶分解青霉素产酸使牛奶pH 值下降的原理,对人工添加了β- 内酰胺酶的牛奶制品与青霉素反应后pH 值的下降规律进行研究。得到牛奶中残留的β- 内酰胺酶与青霉素反应的较适宜条件,从而获得快速检测牛奶制品中残留的β- 内酰胺酶的方法。结果确定牛奶制品中残留的β- 内酰胺酶与青霉素反应的适宜条件为温度33℃、底物质量浓度10mg/mL,检测时间仅为60min。此方法对液态纯牛奶中β- 内酰胺酶的最低检出限为8.92U/mL。     

牦牛奶酪中乳酸菌对抗生素的药敏性

分析牦牛奶酪中乳酸菌对常用抗生素的药敏性。采用纸片扩散法测定分离自牦牛奶酪的39 株乳酸菌对8 种常用抗生素的药敏性。结果表明：39 株乳酸菌都有耐药性,主要对万古霉素、新霉素、链霉素和萘啶酮酸有抗性,抗性菌株分别达到了36 株（92.3%）、32 株（82.1%）、38 株（97.4%）和39 株（100%）,菌株的耐药性有一定的种间差异,部分菌株有多重耐药性。     

用阻抗分析法快速检测牛奶中抗生素残留的研究

研究立足于牛奶中抗生素的快速检测,用嗜热乳酸链球菌作为指示菌,通过“阻抗分析仪”的自动检测、分析,根据DT时间的产生,判断牛奶中抗生素的残留情况。试验表明,方法操作简单、快捷,结果易判断,全部检测过程可在2 h之内完成。该方法的检测灵敏度与GB方法相类似,可检测牛奶中的青霉素为0.04U/mL。