液相色谱-串联质谱法对牛肉中掺假成分的相对定量分析

以物种特异性多肽为研究对象,采用液相色谱-串联质谱技术实现牛肉制品中牛肉与猪肉、鸡肉含量的相对定量分析。将纯牛肉按照10%、50%和80%比例分别与纯猪肉、鸡肉混合,并通过自制肉制品对物种特异性多肽进行验证和相对定量分析,其线性相关系数均达0.99以上;同时对市售的10 种牛肉制品进行测定,构建了基于物种特异性多肽的相对定量方法。结果表明,该方法可以快速且有效地对牛肉制品进行鉴别及相对定量分析,为深加工肉制品的真伪鉴别和相对定量分析提供新思路。     

利用多重PCR方法检测牛肉中的掺假肉

应用多重PCR方法鉴别牛肉中掺杂其他肉类。通过查阅相关文献,确定牛肉、猪肉、鸡肉、鼠肉的特异性片段设计引物。牛肉样品通过基因提取试剂盒提取组织DNA,然后加入相应特异性牛肉、猪肉、鸡肉、鼠肉引物和反应试剂,采用多重PCR法同时检测牛肉中掺杂鸡肉、猪肉、鼠肉任意三种肉类混合样品。试验建立的复式PCR方法特异性强,操作简便,对于牛肉中掺杂鸡肉、猪肉、鼠肉的检出限均达到1%(W/W)掺杂量。     

液相色谱-串联质谱法测定牛排产品中大豆蛋白含量

建立液相色谱-串联质谱技术测定牛排产品中大豆蛋白含量的方法。首先利用高分辨质谱结合Unitprot数据库,对大豆特异性多肽进行鉴别及筛选,获得可用于大豆准确定性的多肽序列信息,并利用skyline软件将多肽序列转换为离子对信息;其次利用液相色谱-串联质谱(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)对大豆蛋白特异性多肽进行确证,构建大豆蛋白LC-MS/MS定性判别方法;进一步开展用于定量多肽的筛选研究,最终筛选到线性和回收率较好的定量多肽共3条,分别为GSDLVNVR、VSDDEFNNYK、LVFCPQQAEDDK,线性相关系数均达到0.99以上,加标回收率为81.7%～115.8%,精密度小于13%,检出限为0.15%,定量限为0.5%;同时对市售28个牛排进行大豆蛋白含量的测定,构建LC-MS/MS方法测定牛排中大豆蛋白含量的方法。结果表明,该方法特异性好,准确度高,同时可推广应用至其他肉制品。     

非标记蛋白定量方法在掺假肉鉴别中的应用

目的建立一种非标记蛋白定量法鉴别牛肉或羊肉中是否掺假。方法采用四极杆串联飞行时间高分辨质谱分析各种肉类蛋白酶解之后的样品,找到每种肉类特异的肽段,再用串联四极杆质谱测定特异肽段的定量结果,判定样本中是否有这种肉类存在。结果在测定的牛肉、羊肉、猪肉、鸡肉和鸭肉样本中,均找到每种肉类的特异肽段5～7条,从每种肉中选择3条肽段进行定量分析,可以很好地鉴别出牛羊肉中掺杂的其他肉类。结论该方法操作简便,结果可靠,灵敏度高,可用于在牛肉或羊肉中掺杂其他肉类的鉴别。     

分子印迹液相色谱串联质谱法检测鸡肉中金刚烷胺残留

目的建立一种金刚烷胺分子印迹聚合物的制备方法及其用于鸡肉中金刚烷胺残留的液相色谱-串联质谱(high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,HPLC-MS/MS)检测方法。方法样品经甲醇-1%三氯乙酸(50:50,V:V)提取,过分子印迹聚合物层析柱净化。采用0.1%甲酸-乙酸铵溶液(A)和甲醇(B)作为流动相进行梯度洗脱,质谱采用反应监测模式(multiple reactions monitoring,MRM)对金刚烷胺的定量离子和定性离子进行监测。结果金刚烷胺在2、5、10μg/kg添加水平的回收率为82.0%~100.2%,相对标准偏差小于5.8%(n=6),方法最低定量限为2.0μg/kg。结论该方法快速、准确、灵敏,适合测定鸡肉中金刚烷胺药物残留。     

LC-MS/MS技术在食品中农药多残留分析的应用进展

液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)技术在食品中多类农药的高通量、高效率筛查和确证分析方面发挥了重要作用。本文对基于四级杆滤质器的LC-MS/MS技术近年来在食品中农药多残留分析方面的应用进展进行了综述,重点讨论了液相色谱-低分辨串联质谱(三重四级杆串联质谱和四级杆线性离子阱串联质谱)以及液相色谱-高分辨串联质谱(四级杆飞行时间串联质谱和四级杆静电场轨道阱串联质谱)在多类农药多残留分析中的应用。     

高效液相色谱-串联质谱法同时测定保健食品中淫羊藿苷、金丝桃苷、补骨脂素

目的建立高效液相色谱-串联质谱法(high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,HPLC-MS/MS)测定保健食品中淫羊藿苷、金丝桃苷、补骨脂素的分析方法。方法样品经70%甲醇提取后,采用0.1%甲酸(A)和乙腈(B)作为流动相进行梯度洗脱,质谱离子源选用电喷雾离子(electron spray ionization,ESI+)源,采用多离子检测模式(multiple reaction monitoring,MRM)对定量离子和定性离子进行监测,在液相色谱-串联质谱仪上测定。结果在15 min内完成3种目标化合物的分离分析。3种功能成分在0.25、0.5和5 mg/kg添加水平的回收率为84.3%~95.0%,相对标准偏差为0.67%~2.11%(n=7),方法检出限分别为0.05、25、10μg/kg。结论该方法快速、准确、灵敏,适合保健食品中淫羊藿苷、金丝桃苷、补骨脂素的同时检测。     

克伦特罗残留的分析方法研究

本文建立了用液相色谱串联质谱(LC/MS/MS)定量分析动物组织中克伦特罗残留的方法。使用三级四极串联质谱(MS/MS)的多反应监测(MRM)技术,正离子采集模式,监测转换离子对m/z277→259,以MRM离子流峰面积作为定量依据。方法线性范围:0.14～60.00μg/L(γ=0.99985),定量检测限:0.07μg/kg,在猪肉中加入克伦特罗标准样品的回收率在90%以上,样品一次分析时间为3min。此法灵敏、快速、准确,可应用于动物组织中各种药物残留的分析。     

UPLC-MS/MS对鸡肉中6种磺胺类药物的分析

鸡肉样品经过固体基质分散,固液萃取,快速溶剂萃取仪浓缩,复溶;采用超高压高效液相色谱串联三重四级杆质谱检测器(UPLC-MS/MS)同时分析鸡肉中的6种磺胺类药物(磺胺甲嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺喹恶磷、磺胺间二甲氧嘧啶)。质谱采用电喷雾离子源,正离子电离模式(ESI+)和多反应扫描监测模式(MRM)进行测定,以各成分的保留时间、定性定量离子对及定性定量离子对相对离子比来定量分析。结果表明,6种磺胺化合物的浓度线性范围为1~200 ng/m L,空白样品加标回收范围为5~100μg/kg,检出限为0.05~0.10μg/kg。该方法前处理简单快捷、仪器分析快速且灵敏度高、结果准确、重复性好;不仅适用于鸡肉且适用于各种禽畜肉样品的品质监测,而且适合大批量样品的快速检测分析。     

HPLC-MS/MS法测定猪肉和鸡肉中12种磺胺残留

采用高效液相色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)法同时测定猪肉、鸡肉中磺胺类药物残留。猪肉、鸡肉样品中的磺胺类药物残留用乙腈提取,均质离心后,上清液用旋转蒸发器蒸发浓缩至近干,残渣用流动相(乙腈和0.01mol/L的乙酸铵溶液, 12+88)溶解,并用正乙烷去脂,样品溶液供液相色谱串联质谱仪测定,以外标法定量,采用多反应监测方式和正离子扫描方式测定。结果表明:12种磺胺类药物在10～200 ng/mL范围内线性关系良好,相关系数r高于0.997 3,检出限为2μg/kg,定量限为10μg/kg;猪肉和鸡肉空白样品中12种磺胺药物3个加标水平(2, 8和20μg/kg)的平均回收率分别为94.2%～133.4%和89.1%～112.2%, RSD分别为2.07%～6.11%和2.46%～5.87%。猪肉和鸡肉中磺胺嘧啶易被检出,其次是磺胺甲氧哒嗪、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺-6-甲氧嘧啶。该方法操作简便、灵敏度高,适用于猪肉、鸡肉中12种磺胺类药物残留的测定。     

高效液相色谱- 串联质谱法测定动物源食品中喹乙醇代谢物残留量

建立动物源性食品中喹乙醇代谢残留标识物3-甲基喹喔啉-2-羧酸残留量的高效液相色谱串联质谱法。样品均质后,经Protease蛋白酶进行过夜酶解,加入盐酸酸化,离心,过滤后采用阴离子交换固相萃取柱Oasis MAX进行净化和富集。分析样品经Kinetex C18色谱柱分离,在高效液相色谱-串联质谱多反应监测模式下进行定性、定量分析,采用正离子扫描。6种测定样品中3-甲基喹喔啉-2-羧酸定量下限均为0.5μg/kg,鳗鱼、虾、鸡肉、猪肉、牛肉和猪肝在0.5、1.0、4.0μg/kg和10.0μg/kg四个添加水平的平均回收率在60.7%～107%之间,相对标准偏差(n＝10)在4.59%～14.9%之间。本方法分析速度快、灵敏度高、重现性好,各项技术指标均满足国内外相关法规要求,适用于动物源性食品中喹乙醇代谢物3-甲基喹喔啉-2-羧酸残留的确证检测。     

应用微滴式数字聚合酶链式反应定量检测牛肉制品中的猪源性成分

参照GB/T 25165—2010《明胶中牛、羊、猪源性成分的定性检测方法 实时荧光聚合酶链式反应法》,以牛的生长激素（growth hormone,GH）基因和猪的朊蛋白（prion protein,PRNP）基因2 种核基因为靶基因合成特异性引物和探针。理论推导单位质量牛肉的GH基因与猪肉PRNP基因拷贝数之比为一固定值,通过微滴式数字聚合酶链式反应（droplet digital polymerase chain reaction,ddPCR）方法对该固定值进行检测和验证,并以该固定值对牛肉/猪肉人工混合样本和市售牛肉制品中的猪肉成分进行定量检测。结果表明：该方法具有良好的准确性及可重复性;牛肉中掺杂猪肉质量分数在5%～99%范围内时,检测结果绝对误差小于1.28%,变异系数小于6.5%,猪肉成分的回收率为99.09%～102.80%;20 份牛肉制品中,4 份检出猪肉成分,其中3 份的相对含量为29.19%～98.15%,1 份为0.12%（低于本方法检出限5%）。因此,ddPCR方法可以较好地应用于牛肉制品中掺杂猪肉成分的定量检测。     

多重位点特异性PCR快速检测牛肉中常见掺假动物源性成分

目的:基于动物线粒体cytb基因的多态性位点,建立一种特异性多重PCR体系检测牛肉、猪肉和鸡肉的方法。方法:提取肉类的基因组DNA,利用不同物种mtDNA cytb基因序列的SNP位点的差异,设计特异性引物。进行多重PCR扩增,利用扩增产物片段大小不同,检测牛肉中常见的掺假动物源性成分。通过灵敏性试验,确定最低检测量。结果:实验设计的引物特异性良好,在同一反应体系中,在同一退火温度52℃条件下,牛肉DNA扩增后产生149 bp的特异性条带,猪肉DNA扩增片段为261 bp,鸡肉DNA扩增片段为554 bp,未发生非特异性扩增。且检测的最低浓度达到100 pg/μL,具有高度的灵敏性和适用性。结论:根据动物线粒体cytb基因的差异性位点,开发的多重PCR体系,可一次性地同时检测牛肉、猪肉和鸡肉,可快速、灵敏、高通量地分析食品中掺假动物成分的来源。     

Determination of Heterocyclic Amines in Meat Matrices Using Enhanced Matrix Removal‐Lipid Extraction and Liquid Chromatography–Tandem Mass Spectrometry

A simple, fast, and efficient method, “enhanced matrix removal of lipids” (EMR‐lipid), was proposed, optimized, and validated for identifying five polar heterocyclic amines (HCAs) in meat samples that ranged from high‐protein (beef and chicken) to high‐fat (pork bacon) matrices. The protocol involves an initial solid–liquid phase extraction followed by a rapid dispersive solid‐phase extraction using EMR‐lipid sorbents and salting‐out partitioning. Acetonitrile containing formic acid at two levels (1% and 2%) efficiently extracted HCAs from different meat matrices. Liquid chromatography–tandem mass spectrometry (MS/MS) with selective reaction monitoring mode was developed for qualitative and quantitative analysis. The highest MS/MS responses and better peak separation of analytes were achieved by adjusting mobile phases to pH 3.0 with instrumental detection limits between 0.01 and 0.05 ng/mL. Good linearity of standard curves was obtained in both pure solvents and postspiked meat extracts between 0.5 and 50.0 ng/mL. The validation results showed good precision, accuracy, and sensitivity for detecting HCAs in spiked meat samples. Satisfactory recoveries of four HCAs were achieved: 65% to 111% in beef, 71% to 106% in bacon, and 42% to 77% in chicken. Matrix effects were also assessed and showed less than –20% of ion suppression in bacon extract, while a medium to high signal suppression was observed in beef (–37% to –55%) and chicken (–28% to –52%). This optimized EMR‐lipid method provides acceptable results and advantages for determining trace level HCAs in complex meat matrices.     

基于多元统计分析的牛排掺假定量判别及差异分析

结合市场对食品中不同成分的定量分析的需求，模拟不同比例混合样品，利用高分辨质谱进行数据采集及分析，分别考察主成分分析、偏最小二乘判别分析和正交偏最小二乘判别分析（orthogonal partial least squares-discrimination analysis，OPLS-DA）统计方法对不同混合比例的样品数据进行分析。相比之下，OPLS-DA模型具有更好的判别效果。通过进行S-Plot分析，分别筛选出25?条猪源多肽及牛源多肽，经线性拟合分析，其中牛源的10?条多肽和猪源的6?条多肽的线性相关系数R2大于0.99，并开展了真实性样品的验证实验，证明筛选的多肽可用于预计样品中的成分含量。这项研究建立了一种量化牛排的方法，并为筛选差异显著性的定量多肽提供新思路。     

Detection of meat species using TaqMan real-time PCR assays

Species-specific real-time PCR (TaqMan) assays were developed for detection of beef, pork, lamb, chicken and turkey. Assays were developed around small (amplicons <150 base pairs) regions of the mitochondrial cytochrome b (cytb) gene. Speciation was achieved using species-specific primers. For detection purposes, two TaqMan probes were developed; the first was specific to the mammalian species (beef, lamb and pork), the second to the poultry species (chicken and turkey). Normal end-point TaqMan PCR conditions were applied; however, PCR was limited to 30 cycles. Applying the assays to DNA extracts from raw meat admixtures, it was possible to detect each species when spiked in any other species at a 0.5% level. The absolute level of detection, for each species, was not determined; however, experimentally determined limits for beef, lamb and turkey were below 0.1%.     

Practical Molecular Detection Method of Beef and Pork in Meat and Meat Products by Intercalating Dye Based Duplex Real-Time Polimerase Chain Reaction

In this study, a rapid, specific, and low-cost duplex-detection technique of pork and beef was developed by a real-time polimerase chain reaction assay based on fluorescence. Deoxyribonucleic acid was extracted from variable mixtures of pork and beef in sausage and industrial products to develop the duplex assay using the GIDAGEN^® Multi-Fast DNA Isolation Kit. Identification of genomes was accomplished in the same tube by their distinctive melting peak, which was 87.5°C for pork and 80.5°C for beef, respectively. The detection limit of the method was 0.01 ng/µL deoxyribonucleic acidor 0.001% target pork and beef in sausage. The results showed that the intercalating dye based duplex real-time polimerase chain reaction is a potentially sensitive, reliable, and practical assay for the detection of meat species adulterated with beef and pork.     

可视化LAMP检测常见肉制品中猪肉成分

根据GenBank中公布的猪线粒体色素细胞b基因序列设计6 条特异性环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）引物,通过简化线粒体DNA提取步骤,优化反应体系,以常见的牛、羊、鸡、鸭、马、驴肉为阴性对照验证该方法的特异性,掺假率梯度稀释以验证该LAMP法的最低检测限,建立常见肉制品中猪肉成分的可视化LAMP检测方法。结果表明：该方法提取目的基因操作简单、稳定,该可视化LAMP检测法以4-(2-吡啶偶氮)-间苯二酚钠盐为指示剂,能准确检测出常见肉类中猪肉是否掺杂,检测结果肉眼可见,灵敏度为10 pg/μL。