食品过敏原巴西坚果环介导等温扩增检测方法的建立与应用

根据巴西坚果2S白蛋白基因序列,利用设计软件Primer Explorer Version 4设计并筛选了食品过敏原巴西坚果的环介导等温扩增引物,对反应体系和反应条件进行了优化,建立了巴西坚果的环介导等温扩增检测方法,结果判断可采用实时荧光法和荧光染料终点显色法。以澳洲坚果、开心果、碧根果等17种常见坚果来验证方法的特异性;将巴西坚果DNA进行梯度稀释后验证方法的灵敏度;将0.5%、1%和1.5%3个浓度梯度的巴西坚果DNA重复检测20次来验证方法的稳定性。结果表明,本方法能够特异、灵敏、稳定地检测食品中的巴西坚果成分,检测低限为0.5%。此外,对7种市售食品样品的检测结果表明,该方法与食品标签标示的过敏原成分结果吻合率为100%,假阳性率和假阴性率均为0%。     

食品过敏原大豆成分LAMP实时浊度检测法的建立

根据过敏原大豆的保守内源基因Lectin的序列,设计6条特异性LAMP引物,利用实时浊度仪对反应体系中扩增产物的实时监控筛选出最佳引物,建立食品中过敏原大豆成分的环介导等温扩增(LAMP)检测方法,并对该方法的特异性、灵敏度、稳定性进行了评价。结果表明:该方法能够特异性检出食品中的过敏原大豆成分,特异性高,灵敏度达0.1%(w/w)。对含有大豆成分为10%、1%、0.1%、0%(w/w)的样品分别进行20次重复实验,其稳定性好,假阳性和假阴性率为0%。本实验建立的LAMP方法适用于特异性快速检测食品中的过敏原大豆成分。     

环介导等温扩增法检测食品过敏原大豆成分

目的 建立食品过敏原大豆成分的环介导等温扩增(LAMP)分析方法。方法 根据大豆的内源管家基因Lectin基因设计6条过敏原大豆的特异性引物(两条内引物, 两条外引物和两条环引物), 建立LAMP检测方法。结果 环介导等温扩增法在63 ℃条件下, 40 min内可检出过敏原大豆成分, 该方法能够有效对大豆成分进行快速检测, 具有较强的特异性, 灵敏度可达0.01%(w/w)大豆粉。结论 该方法特异性强, 灵敏度高, 可以快速、准确检测食品中过敏原大豆成分。     

食品过敏原羽扇豆成分的环介导等温扩增 检测方法

目的 建立食品过敏原羽扇豆成分的环介导等温扩增(LAMP)检测方法。方法 根据羽扇豆的ITS基因设计羽扇豆的特异性引物,进行特异性、灵敏度、稳定性测试,建立LAMP检测方法。结果 本文建立的食品过敏原羽扇豆成分LAMP检测方法能有效对羽扇豆成分进行快速检测,具有较强的特异性和稳定性,灵敏度可达0.001%(w/w)羽扇豆粉。结论 该方法特异性强,灵敏度高,可以快速、准确检测食品中过敏原羽扇豆成分。     

转基因大豆GTS 40-3-2品系特异性环介导等温扩增法检测方法的建立与应用

根据外源插入序列与大豆内源基因边界序列,用设计软件Primer Explorer Version 3设计并筛选了转基因大豆GTS 40-3-2品系的环介导等温扩增引物,并进行了反应体系和反应条件的优化,建立了转基因大豆GTS 40-3-2品系特异性环介导等温扩增检测方法。对该方法进行了特异性、灵敏度、稳定性评价,结果显示:该方法能够特异、稳定、灵敏地检测大豆及其制品中的转基因大豆GTS 40-3-2成分,检测低限达到0.5%。此外,对12份实际样品的检测结果表明,该方法与实时荧光PCR方法的检测性能相当,结果吻合率为100%,假阳性率和假阴性率均为0。     

小麦成分环介导等温扩增现场快速检测方法的建立和应用

目的建立环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法现场快速检测小麦过敏原成分的分析方法,有助于食品安全突发事件现场和食品企业生产过程中的样品检测小麦成分。方法运用LAMP建立食品过敏原小麦成分LAMP现场快速检测方法,采用实时浊度仪和显色法进行结果判断,并进行反应条件优化。结果本方法特异性强,对35个对照样品无交叉反应;方法的灵敏度高,检测限可达到0.01%小麦;方法稳定性好,对0.1%和0.01%小麦样品重复检测结果稳定。通过对市场采集70份样品检测结果显示,该方法与食品标签标示的过敏原成分结果一致。结论本方法操作简单,检测时限短,结果判断准确,可用于过敏原小麦成分的快速检测。     

食品过敏原羽扇豆成分的环介导等温扩增检测方法

目的建立食品过敏原羽扇豆成分的环介导等温扩增检测方法(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)。方法根据羽扇豆的ITS基因设计羽扇豆的特异性引物,进行特异度、灵敏度、稳定性测试,建立LAMP检测方法。结果本文建立的食品过敏原羽扇豆成分LAMP检测方法能有效对羽扇豆成分进行快速检测,具有较强的特异度和稳定性,灵敏度可达0.001%(w:w)。结论该方法特异度强、灵敏度高,可以快速、准确检测食品中过敏原羽扇豆成分。     

环介导等温扩增技术快速检测食品过敏原牡蛎成分

目的建立环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)方法快速检测食品中的过敏原牡蛎成分。方法根据国家生物技术信息中心的牡蛎线粒体序列,通过Primer Explorer version 5.0软件设计引物并筛选出LAMP特异性扩增引物。并进一步对反应体系优化,对该方法的灵敏度、特异性以及稳定性进行验证。对10种牡蛎阳性样品、14种阴性样品、4类牡蛎相关食品进行检测。结果该方法可以检测出含牡蛎成分0.1%, DNA浓度为0.01 ng/μL的样品。在实验时间上大幅缩短,反应可在25～45 min内结束,并且可以在微量体系下完成,对于食品相关产品的检出率为100%。结论该方法操作简单、成本较低、特异性高、灵敏度好,适用于食品中过敏原牡蛎成分的检测。     

等温扩增技术在食品中沙门氏菌检测中的应用

目的针对沙门氏菌肠侵袭蛋白基因设计适合交叉引物等温扩增法及环介导等温扩增法的特异性引物及探针,并进行应用评估。方法用19株沙门氏菌,35株近源菌进行特异性试验;通过定量DNA、纯菌液计数检测进行检测低限验证,与环介导等温扩增法进行比较;对6类18种食品根据ISO 5725-2:1994标准要求,以现行国家标准为基准方法对2种等温扩增法进行灵敏度、特异性、假阳性率、假阴性率及相对准确度等5方面验证。结果交叉引物等温扩增法与环介导等温扩增法具有相同的特异性,检测灵敏度较高于环介导等温扩增法,与基准方法比较的各项性能指标符合ISO的要求。结论该方法不需要复杂仪器,可作为食品中沙门氏菌快速定性检测方法使用,对口岸快速筛查、基层或偏远经济不发达地区顺利开展检测具有实际意义。     

食品中芥末过敏原成分LAMP检测方法的建立

目的：建立食品过敏原芥末成分环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）检测方法,并与实时荧光-聚合酶链式反应（real-time polymerase chain reaction,RT-PCR）检测方法比对。方法：针对白芥的主要过敏原基因Sin A1,设计LAMP引物并建立反应体系,在特异性和灵敏度方面与RT-PCR检测方法比对。结果：建立的LAMP检测方法,经特异性验证,与所测试的13 种植物,无交叉反应。通过添加实验,方法的检测灵敏度为0.5%,与RT-PCR方法检测灵敏度相当。检测了25 份实际样品,检测结果与RT-PCR检测结果一致。结论：建立的食品过敏原芥末成分LAMP检测方法简单经济,检测结果可靠,可有效缩短检测时间,适用于芥末过敏原成分
的检测,具有良好的应用前景。     

A novel real-time polymerase chain reaction method for the detection of macadamia nuts in food

A real-time PCR-based method for the detection of macadamia nuts (fruits of Macadamia integrifolia or M. tetraphylla or their hybrids) in food products is described. The method consists of DNA isolation by chaotropic solid phase extraction and subsequent PCR with macadamia-specific primers and a TaqMan fluorescent probe. The primers and the probe were targeted to the gene encoding for vicilin precursor. The method was positive for M. integrifolia and M. tetraphylla and negative for 16 other plant species used in food industry, including peanuts, walnuts, hazelnuts, almonds, pistachio nuts, cashew nuts, Brazil nuts, and chestnuts. The DNA-based detection limit of the method was 1.45 pg. Using a series of model samples with defined macadamia nut contents, a practical detection limit of 0.02% (w/w) macadamia nuts was determined. Practical applicability of the PCR method was tested by the analysis of 14 confectionery samples. For all of the samples, results conforming to the labeling were obtained. The presented PCR method is useful for relatively fast, highly selective, and moderately sensitive detection of macadamia nuts in food samples.     

环介导等温扩增技术检测食品中酸土环脂芽孢杆菌

目的：利用环介导等温扩增技术建立食品中酸土环脂芽孢杆菌快速检测方法。方法：针对酸土环脂芽孢杆菌16S序列设计特异引物,再优选反应体系,用显色法检测实验结果。结果：该方法能够在63 ℃条件下1 h内检出食品中酸土环脂芽孢杆菌,所设计的引物有良好的特异性;灵敏度达6.7 CFU/mL（弱阳性）。结论：该方法具有高效、特异性强和敏感性高等特点,可满足酸土环脂芽孢杆菌快速检测筛选的要求。     

食品中牛奶过敏原成分LAMP检测方法的建立

目的 建立食品过敏原牛奶成分LAMP检测方法,并与实时荧光PCR(real-time PCR)检测方法比对。方法 针对牛线粒体细胞色素b(cyt-b)基因设计LAMP引物并建立反应体系,在特异性和灵敏度方面与real-time PCR检测方法比对。结果 本研究建立的LAMP方法检测9份不同品牌的牛奶和羊奶及其加工制品,没有出现交叉反应,具有良好的特异性。通过添加试验方法的检测灵敏度为0.5 %,与real-time PCR方法检测灵敏度相当。检测了69份实际样品,检测结果与real-time PCR检测结果一致。结论 本研究建立的食品过敏原牛奶成分LAMP检测方法简单经济,检测结果可靠,可有效缩短检测时间,适用于过敏原牛奶成分的检测,具有良好的应用前景。     

澳洲坚果各部位蜀黍苷含量的测定

为检测澳洲坚果果仁、花、叶、壳和青皮各部位的蜀黍苷含量,并为澳洲坚果各部位的开发利用提供依据,以苦杏仁苷为内标物质,采用高效液相色谱法,Diamonsil C₁₈(150 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,柱温35℃,自动进样器进样量5 μL,总流速1.0 mL/min,乙腈(A)-0.1%甲酸水溶液(B)为流动相,使用蒸发光散射检测器(ELSD)进行检测。结果表明:蜀黍苷和苦杏仁苷标准品的浓度比(X)与对应的峰面积比(Y)所作标准曲线方程为Y=0.465389X2+0.349685X-0.000520968,决定系数R2=0.9977,RSD为2.60%。方法的平均回收率为97.93%±2.35%,RSD为2.39%。对澳洲坚果各部位蜀黍苷含量进行测定发现,澳洲坚果花中蜀黍苷含量最高,达(49.92±0.96)mg/g,叶次之,果仁中蜀黍苷含量最低,仅为(0.64±0.01)mg/g。且不同品种青皮中蜀黍苷含量亦不同。HPLC-ELSD内标法测定蜀黍苷快速简便,准确度高,重复性好,成本较低,测定结果可靠。澳洲坚果花、叶中蜀黍苷含量较高,使用时应适当考虑脱除其中的蜀黍苷。澳洲坚果仁中仅含微量蜀黍苷,在安全使用范围之内。     

基于液相色谱-质谱联用技术检测食物过敏原研究进展

食物过敏是目前重要的食品安全问题,检测食物过敏原对保护过敏患者具有重要意义。检测食物基质中痕量的过敏成分依赖于可靠的分析方法。液相色谱-质谱联用技术具有高灵敏性、高分辨率、高自动化等特点,被广泛应用于食物过敏原蛋白质的研究中。本文主要阐述了液相色谱-质谱联用技术在单一过敏食物中过敏原蛋白质的检测方面和在复杂基质中多个食物过敏原蛋白质的检测方面的应用,并简要概述了提高液相色谱-质谱联用技术检测过敏原蛋白精确度的措施,指出液相色谱-质谱联用技术在检测食物过敏原方面还需要继续深入研究。     

Compositional analysis and roasting behaviour of gevuina and macadamia nuts

This study compares the composition of macadamia and gevuina nuts following natural abscission and air-drying of intact nuts and compares chemical and sensory properties on roasting gevuina nuts using a reported macadamia roasting process. The markedly higher fat content of macadamia (75% vs. 43%) reflected a higher percentage of protein, moisture, ash and carbohydrate in gevuina nuts. Gevuina nuts also had lower energy and pH values than macadamia. Water activities were similar. Both oils were around 80% monounsaturated, but differed widely in positional isomerism. On roasting, macadamia nuts developed sweet, nutty, buttery notes along with brown colour development (measured using L *, a *, b * values) after 20 min at 135 °C while gevuina nut colour and aroma took at least 30 min, where the aroma was more hazelnut-like. Extractable volatiles were significantly higher for macadamias following roasting.     

环介导等温扩增方法在食品中沙门菌检测的应用和评价

将环介导等温扩增检测方法应用于食品中沙门菌的检验,并在检测方法特异性、灵敏度等方面与实时荧光PCR和传统检测方法进行比较。方法 针对沙门菌属高度保守的fimY基因设计环介导等温扩增检测引物并优化反应体系,在特异性、灵敏度和实际样品检测等方面与实时荧光PCR及传统检测方法比对。结果 本研究建立的LAMP方法检测沙门菌93株和非目标菌31株,具有良好的特异性。在纯培养、无需增菌情况下,其检测灵敏度为6.4×10²cfu/ml,与实时荧光PCR方法相当。食品基质添加试验中,环介导等温扩增方法检测低限为2cfu/25g样品;对45份实际食品样品检测结果表明,该方法实际样品检出率为11.1%,与实时荧光PCR及传统方法检测结果一致。结论 本研究建立的沙门菌环介导等温扩增检测方法具有良好的特异性,检测灵敏度与实时荧光PCR相当,适用于沙门菌的快速筛选。     

日本食物过敏原的管理及对我国的启示

随着我国食物过敏问题对消费者和食品企业的影响越来越严重,食物过敏原的管理和控制问题亟待解决。日本是世界上第一个建立强制性食物过敏标识并加以立法保护的国家,现已形成完善的食物过敏原标签管理系统。日本食物过敏原法规的形成过程、约束范围及食物过敏原标签的标注方式、不规范标注的处罚措施和过敏原成分的检测方法,对中国制定符合本国国情的食物过敏原强制性管理法规和建立相关的检测技术具有启示作用。