四种蛋白酶酶解对桦褐孔菌多糖的α-葡萄糖苷酶抑制活性影响

为了探究桦褐孔菌高温水提粗多糖(High temperature water-extracted polysaccharides,HIOP)中结合蛋白质组成键型与其α-葡萄糖苷酶抑制活性的关系,用4种不同的蛋白酶对HIOP进行酶解,测定蛋白酶水解后对其分子量组成及α-葡萄糖苷酶抑制活性的影响。结果显示,与原HIOP在10μg/m L时的α-葡萄糖苷酶抑制率83.72%相比,经中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶酶解处理后的HIOP,α-葡萄糖苷酶抑制率最低分别为53%、65%、6.5%和7.1%,其中胃蛋白酶和胰蛋白酶酶解处理显著降低了HIOP的α-葡萄糖苷酶抑制活性,表明HIOP中结合蛋白在HIOP的α-葡萄糖苷酶抑制活性中有一定作用。结合四种蛋白酶的作用效果与作用键型推测,HIOP中结合蛋白的活性中心可能含有芳香族氨基酸、酸性氨基酸、赖氨酸或精氨酸,破坏此类肽键,α-葡萄糖苷酶抑制活性明显降低,而四种蛋白酶酶解均未使HIOP分子量发生较大改变,说明四种蛋白酶酶解仅影响了HIOP与α-葡萄糖苷酶活性中心结合的部位。     

番石榴叶黄酮与多糖提取及其降血糖活性研究

从番石榴叶中提取总黄酮以及多糖,测定其对α-葡萄糖苷酶以及猪胰液α-淀粉酶抑制活性以评估其降血糖活性。结果表明番石榴叶中提取的黄酮类以及多糖类化合物对这2种酶都具有较好的抑制活性,其中黄酮和多糖对蔗糖酶的抑制率分别为63.5%和29.3%,对麦芽糖酶的抑制率分别为47.7%和20.6%,对α-淀粉酶的抑制率分别为54.4%和31.9%。此外,所提取的总黄酮以及多糖对α-葡萄糖苷酶以及猪胰液α-淀粉酶的抑制活性存在协同作用,两者混合的酶抑制活性更好,其中黄酮和多糖的混合物对蔗糖酶,麦芽糖酶以及α-淀粉酶的抑制率分别为75.8%,53.5%和60.1%。     

黄精总皂苷提取工艺优化及其对α-淀粉酶及α-葡萄糖苷酶抑制活性

以黄精总皂苷得率为评价指标,通过单因素试验对纤维素酶添加量、果胶酶添加量、料液比、酶解pH、酶解温度以及酶解时间进行研究,采用响应面对提取条件进行优化,并以阿卡波糖为阳性对照,探究不同浓度下黄精总皂苷的α-淀粉酶及α-葡萄糖苷酶抑制活性。结果表明,最佳提取条件为:纤维素酶添加量0.4%、果胶酶添加量5.0%、料液比1:16 g/mL、酶解pH为5.0、酶解温度45℃、酶解时间2.0 h,总皂苷得率4.06%。当黄精总皂苷浓度为3.000 mg/mL时,其对α-葡萄糖苷酶最高抑制率可达74%,接近于阿卡波糖(0.5 mg/mL)的82%;当黄精总皂苷浓度为2.000 mg/mL时,其对α-淀粉酶最高抑制率可达82%,超过阿卡波糖(0.5 mg/mL)的80%。本研究使用的复合酶法提高了黄精总皂苷得率并证实了其具有一定的α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶抑制活性。     

罗非鱼鳞明胶的制备及其酶解产物活性研究

以罗非鱼鱼鳞为原料,通过热水提取鱼鳞中的明胶,利用多种蛋白酶对明胶进行酶解,测定其不同酶解产物的抗氧化性、血管紧张素I转换酶(ACE)抑制活性、α-葡萄糖苷酶(AG)抑制活性等生物活性。实验结果表明:100℃热水或120℃热水提取明胶1.5h的得率分别为20.2%和37.9%。6种蛋白酶(木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、酸性蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶)水解明胶后,胰蛋白酶水解液和碱性蛋白酶水解液的羟自由基清除力为76.7%和76%,高于Vc的65.6%;除中性蛋白酶对DPPH自由基没有清除力以外,其余5种蛋白酶均对DPPH自由基有清除力,但是低于Vc;胃蛋白酶水解液对α-葡萄糖苷酶的活性抑制作用最强,为67.1%,而中性蛋白酶、碱性蛋白酶和胰蛋白酶水解液对α-葡萄糖苷酶没有抑制作用。6种蛋白酶的水解产物均有的ACE抑制活性,没有抗凝血活性。     

双酶协同增加青稞慢消化淀粉含量的工艺优化

以萌芽黑青稞粉为原料,研究β-淀粉酶协同α-葡萄糖苷酶增加青稞慢消化淀粉含量及其体外降糖活性。通过单因素试验、体外模拟消化法和Box-Behnken响应面试验,确定最优工艺条件,并通过α-淀粉酶和α-葡糖苷酶抑制率的测定,评价其体外降糖活性。结果表明,双酶协同增加青稞慢消化淀粉含量的酶解最优条件为β-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶添加量150 U/g青稞粉、酶解时间8 h、酶解温度50℃、青稞粉浓度10%。此条件下青稞慢消化淀粉含量达到最高,为33.62%。体外降糖活性测定结果显示,与原粉相比酶改性青稞粉的α-淀粉酶抑制率增加了62.97%,α-葡萄糖苷酶的抑制率增加了52.46%,表明酶解粉的体外降糖活性明显提高。     

高大毛霉液体发酵培养基的优化及产酶特性研究

采用正交实验确定高大毛霉(MHC-7)最佳发酵培养基组成为:黄豆粉3%、可溶性淀粉0.4%、硫酸镁0.2%、磷酸二氢钾0.2%、蔗糖0.3%和黄泔水.通过对MHC-7胞内蛋白酶、α-淀粉酶、α-半乳糖苷酶、谷氨酰胺酶、纤维素酶、脂肪酶活力测定,结果表明,产蛋白酶、α-淀粉酶、α-半乳糖苷酶和谷氨酰胺酶的峰值时间分别是36、48、42、48h,纤维素酶和脂肪酶在72h内酶活力一直呈上升趋势.     

不同提取方式对铁皮石斛多糖及体外降血糖的影响

以铁皮石斛为原料,选用传统热水提取法、酶法提取、闪式提取法、超声波提取法、冻融提取法5种提取方式在各自最佳参数上提取铁皮石斛粗多糖,以多糖得率、平均分子质量、多糖纯度、多糖黏度、α-葡萄糖苷酶抑制率和α-淀粉酶抑制率为指标对5种提取方式进行综合评估。结果表明:冻融提取法所得铁皮石斛多糖得率和平均分子质量最高,多糖得率高达37.1%,其对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶抑制活性相对最高,这是由于冻融辅助法较好地保留了多糖的分子结构及其生物活性。     

酶解鹰嘴豆制备α-葡萄糖苷酶抑制肽的工艺研究

以鹰嘴豆为原料,以其酶解产物对α-葡萄糖苷酶的抑制率和水解度为指标,比较中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和风味蛋白酶对鹰嘴豆的酶解效果,并进一步对碱性蛋白酶的酶解工艺参数进行响应面法优化。结果表明碱性蛋白酶的酶解效果最好,响应面法优化得到碱性蛋白酶酶解鹰嘴豆制备α-葡萄糖苷酶抑制肽的最佳工艺条件为:酶解时间5.1 h,酶解温度57℃,底物浓度5.2%,p H 10.0,加酶量4 000 U/g。在该工艺条件下,鹰嘴豆蛋白水解度为14.51%,酶解产物对α-葡萄糖苷酶的抑制率可达32.79%。     

酶解制备苷元型大豆异黄酮

以大豆异黄酮糖苷为原料,酶解制备苷元型大豆异黄酮。以水解率和苷元得率为指标对几种来源的β-葡萄糖苷酶、β-半乳糖苷酶、纤维素酶进行筛选,确定最适酶解用酶。通过单因素实验对酶添加量、底物质量浓度、酶解温度、pH、酶解时间进行优化。结果表明,最佳酶解工艺条件为：采用β-葡萄糖苷酶（300 U/g）,酶添加量7%,底物质量浓度1.6 mg/mL,酶解温度56 ℃,pH 4.8,酶解时间6 h。在最佳工艺条件下,大豆异黄酮糖苷的水解率及苷元得率分别达到96.84%和99.74%。     

冠突散囊菌发酵罗汉果渣过程中功能性成分及抗氧化活性的变化

采用冠突散囊菌固态发酵罗汉果渣,对罗汉果渣总皂苷、多酚、总黄酮及粗多糖的含量变化以及与其β-葡萄糖苷酶、纤维素酶、α-淀粉酶及蛋白酶活性的相关性进行分析,同时研究其发酵过程中抗氧化活性的变化。结果表明,发酵过程中罗汉果渣总皂苷、多酚、总黄酮及多糖的含量都呈先增加后减少的趋势,分别在第6、8、6和6天达到最大值11.36、3.08、10.42和8.34 mg/g,,是未发酵组的1.42倍、2.37倍、2.53倍及1.90倍。β-葡萄糖苷酶、纤维素酶、α-淀粉酶及蛋白酶活性分别在第8、6、8和8天达到最大值57.91、153.06、69.42和85.30 U/g,总皂苷、总黄酮和粗多糖含量的变化与纤维素酶活性和蛋白酶活性具有显著正相关性,多酚含量变化和β-葡萄糖苷酶、纤维素酶、α-淀粉酶及蛋白酶活性具有显著正相关性。发酵过程中,罗汉果渣的抗氧化活性呈先增加后降低的趋势,其DPPH、ABTS自由基清除能力及总还原力分别在第8、8和6天达到最大,且与未发酵组相比具有显著性差异（P<0.05）。因此,冠突散囊菌发酵罗汉果渣能有效提升其功能性成分含量,增强其抗氧化活性,对罗汉果渣资源利用的绿色循环和可持续化具有重要意义。     

化橘红柚皮苷对α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用

为探究化橘红柚皮苷对α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用和清除DPPH自由基能力,采用体外α-葡萄糖苷酶抑制模型,测定化橘红柚皮苷对α-葡萄糖苷酶的抑制能力及清除DPPH自由基能力,并分析其对α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用类型。结果表明,化橘红柚皮苷对α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用优于阿卡波糖,柚皮苷主要以剂量依赖性、时间依赖性的方式抑制α-葡萄糖苷酶的活性,其对α-葡萄糖苷酶的半抑制浓度(IC_(50))为0.008 mg/mL,阿卡波糖的IC50为0.026 mg/mL,且其对α-葡萄糖苷酶的抑制作用表现为竞争性、可逆抑制,同时0.08 mg/mL浓度的柚皮苷具有较好的DPPH自由基清除能力。基于化橘红柚皮苷具有一定的抗氧化活性及对α-葡萄糖苷酶具有较强的抑制作用,可将其进一步用于天然抗氧化剂和α-葡萄糖苷酶抑制剂的开发。     

双酶法制备马鹿茸降血糖肽工艺优化及其对α-葡萄糖苷酶的抑制效果

为探索制备马鹿茸降血糖肽的最佳工艺条件,以α-葡萄糖苷酶抑制率为指标,从碱性蛋白酶、风味蛋白酶、中性蛋白酶和胰蛋白酶中筛选出两种酶,根据其体外降血糖效果确定酶的作用顺序,再以水解度、α-葡萄糖苷酶抑制率和蛋白质回收率为指标进行单因素试验和正交试验,优化降血糖肽制备工艺条件。结果表明:碱性蛋白酶和风味蛋白酶比中性蛋白酶和胰蛋白酶更适合用于制备马鹿茸降血糖肽。采用碱性蛋白酶-风味蛋白酶顺序对马鹿茸进行水解,所得酶解产物的α-葡萄糖苷酶抑制率、蛋白质回收率和水解度较高,分别为21.11%、39.12%、19.88%。通过单因素试验和正交试验确定双酶酶解最佳工艺条件为先用碱性蛋白酶在p H 8.0、60℃、底物质量分数12%、加酶量5 000 U/g条件下酶解3 h,再用风味蛋白酶于p H 6.5、45℃、底物质量分数5%、加酶量6 000 U/g条件下酶解1 h。双酶分步水解终产物的α-葡萄糖苷酶抑制率受质量浓度的影响,当质量浓度为3 mg/m L时,α-葡萄糖苷酶抑制率可达94.09%,IC50值为1.82 mg/m L。碱性蛋白酶-风味蛋白酶双酶分步水解马鹿茸可获得高α-葡萄糖苷酶抑制率的降血糖肽。     

雅津蛋白桑多糖的分离纯化及生物活性研究

采用纤维素酶法提取桑叶多糖,通过单因素试验和正交试验,确定最优提取工艺参数;并采用Sephadex G-100型葡聚糖凝胶进行初级纯化,比较纯化前后多糖的抗氧化能力和α-葡萄糖苷酶抑制活性。结果表明,纤维素酶法提取的最优工艺为提取液pH 6.0、酶解温度50℃、酶浓度1.0%、酶反应时间50min;纯化后的桑叶多糖具有更高的总抗氧化能力、DPPH·和·OH清除能力;但纯化后的桑叶多糖对α-葡萄糖苷酶抑制效果低于纯化前的。优选得到的纤维素酶法提取桑叶多糖工艺具有较好的提取效果,且纯化后的桑叶多糖具有更强的抗氧化活性。     

耐高温腐乳毛霉发酵过程中酶活力变化的研究

在腐乳前发酵试验中对蛋白酶、α-半乳糖苷酶、纤维素酶、脂肪酶、α-淀粉酶、谷氨酰胺酶、糖化酶、果胶酶活的研究.结果表明:MHC-7摇瓶发酵培养最佳时间是34～38 h,MHC-7在豆坯上发酵培养最佳时间是32～34 h.在腐乳后发酵45天左右,各种酶活力不断下降,而谷氨酰胺酶酶活力持续增长使腐乳鲜味一直增长.当蛋白酶(65.4 U/g)、α-半乳糖苷酶(35.8 U/g)、脂肪酶(50.1U/g)、α-淀粉酶(57.3 U/g)时腐乳已基本成熟.     

核桃多肽制备酶解关键技术研究

以核桃仁为原料,以水解度和对α-淀粉酶抑制率为评价指标,正交设计研究核桃蛋白酶解中相关的单酶水解、多酶水解、酶添加顺序、复合酶最佳配方等关键因子。结果表明,单酶对核桃蛋白的水解度大小依次为:碱性蛋白酶中性蛋白酶≈酸性蛋白酶胃蛋白酶胰蛋白酶,而酶解产物对α-淀粉酶抑制率大小依次为:酸性蛋白酶中性蛋白酶碱性蛋白酶胃蛋白酶胰蛋白酶,并发现依次添加单酶比同时添加的效果更好。综合考虑,先加中性蛋白酶再加碱性蛋白酶的添加方式最佳,可使核桃蛋白水解度达到40%左右,同时还保证酶解产物对α-淀粉酶抑制率较大,可达到85.9%。     

响应面法优化蚕蛹蛋白源α-葡萄糖苷酶抑制肽酶解条件

以蚕蛹蛋白为原料,使用中性蛋白酶、酸性蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶对其进行酶解,以α-葡萄糖苷酶活性抑制率为评价指标,筛选具有最佳α-葡萄糖苷酶抑制活性的酶品种。通过酶解温度、时间、p H值、酶底比和水底比来选出最佳单因素酶解条件,再通过部分因子试验和中心试验设计的响应面优化法进行酶解条件优化。结果最佳酶解工艺条件:酸性蛋白酶,酶解温度36.4℃,p H 3.79,酶解时间4.6 h,酶底比(质量分数)2%,水底比15 m L/g。验证试验的酶解产物质量浓度在5.0 mg/m L时,α-葡萄糖苷酶抑制率为(65.4±1.3)%。预测值与实际验证值准确性达到97.9%,所得模型具有极好的准确性。     

亚麻籽饼粕蛋白提取工艺优化及其水解物抑制α-淀粉酶活性研究

该研究以亚麻籽加工副产物-亚麻籽饼粕为原料制备α-淀粉酶抑制活性肽。采用响应面优化法对亚麻籽蛋白提取工艺进行优化,利用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶对所提取亚麻籽蛋白进行酶解,采用3,5-二硝基水杨酸法（3,5-dinitro salicylic acid,DNS）来测定α-淀粉酶活性,比较不同蛋白酶酶解产物的α-淀粉酶抑制活性。根据优化结果与实际条件调整,亚麻籽蛋白的提取条件为pH 9.5,料液比为1∶20（g/mL）,温度为50℃,一次浸提时间为120 min以及二次浸提时间为60 min。测得最佳试验条件下亚麻籽饼粕蛋白的提取率为83.27%。α-淀粉酶抑制活性表明,经碱性蛋白酶酶解后得到的酶解产物具有较高的活性,其α-淀粉酶的抑制活性为27%。     

蛋白桑叶中蛋白质提取工艺优化及6种蛋白酶酶解物体外降血糖活性分析

为开发利用蛋白桑叶中蛋白质资源,对其蛋白质提取工艺及酶解物体外降血糖活性进行研究。本研究以蛋白桑叶为原料,采用超声辅助碱提酸沉法提取蛋白桑叶蛋白质。通过单因素实验和响应面法优化提取工艺,以α-葡萄糖苷酶抑制率为评价指标,分析不同蛋白桑叶蛋白酶解产物体外降血糖活性。结果表明,蛋白桑叶中蛋白质的最佳提取工艺为：氢氧化钠浓度0.125 mol/L、提取温度40℃、提取时间40 min和液料比37:1 mL/g。在此优化条件下,得到蛋白质提取率实际值为49.59%±0.45%,所得蛋白质等电点为pH3.5,吸水性为6.49±0.49 g/g,吸油性为2.59±0.06 g/g,乳化活性为7.40±0.17 m2/g,乳化稳定性为72.48%±3.03%。研究考察了蛋白桑叶蛋白质的复合蛋白酶酶解物、风味蛋白酶酶解物、碱性蛋白酶酶解物、胰蛋白酶酶解物、中性蛋白酶酶解物、木瓜蛋白酶酶解物体外降血糖活性,其中中性蛋白酶酶解物对α-葡萄糖苷酶抑制效果最佳,其IC₅₀=3.52 mg/mL。本研究认为,此蛋白桑叶蛋白质提取工艺稳定,中性蛋白酶解肽具有较高的体外降血糖活性,为进一步开发...     

桦褐孔菌菌丝体多糖提取工艺优化及其降血糖能力测定

以桦褐孔菌（Inonotus obliquus）菌丝体为试验材料,多糖提取率为评价指标,采用Box-Behnken 响应面法从提取时间、液料比和提取温度3 个因素优化桦褐孔菌菌丝体多糖的提取工艺,并研究粗多糖对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶活性的影响。结果表明,桦褐孔菌菌丝体多糖的最佳提取条件为提取温度97 ℃、液料比51 ∶1（mL/g）、提取时间1.9 h、提取3 次,在此条件下多糖提取率为（8.02±0.45）%。体外酶抑制试验表明,桦褐孔菌菌丝体多糖浓度为10 mg/mL 时,对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的抑制率分别为（77.64±1.78）%和（39.20±1.17）%,二者的半抑制浓度（half maximal inhibitory concentration,IC50）分别为3.07 mg/mL 和17.20 mg/mL,对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制作用明显,表明其具有较好的降血糖能力。     

五味子多糖提取工艺优化及其对α-葡萄糖苷酶抑制活性分析

以五味子为原料,采用单因素实验探究超声功率、提取温度、复合酶添加量和提取时间对五味子多糖得率的影响。在此基础上,通过正交试验优化超声辅助复合酶提取五味子多糖工艺。随后,基于酶抑制和荧光光谱探索五味子多糖对α-葡萄糖苷酶的抑制活性。结果表明,超声辅助复合酶提取五味子多糖最优工艺参数组合为:超声功率200 W、提取温度30 ℃、复合酶添加量0.20%、提取时间40 min,五味子多糖得率为（8.12%±0.10%）。五味子多糖对α-葡萄糖苷酶抑制率的IC₅₀为27.15 μg/mL,并以竞争性与非竞争性相混合的方式抑制α-葡萄糖苷酶的活性,并能同时引起α-葡萄糖苷酶发生荧光猝灭,该研究结果为五味子的进一步开发提供理论依据。