桑不同药用部位降血糖有效成分及作用机制研究进展

桑(morus alba L.),属于桑科,俗称白桑。是一种很古老植物,因其丰富的营养和治疗价值,所以自古以来备受推崇。桑的入药部位主要有桑枝、桑叶、桑白皮、桑葚,不同药用部位均具有较强的降血糖活性,现代药理学研究表明其降血糖活性与生物碱、黄酮、多糖类成分有关。本文将对桑不同药用部位有效降血糖成分及机制进行简要概述,为桑资源的合理开发提供依据。     

何首乌对α-葡萄糖苷酶的抑制活性

采用索氏提取法对何首乌(RPM)和首乌藤(CFPM)的不同部位进行提取,以96微孔板法测定了其对α-葡萄糖苷酶的抑制作用。对何首乌不同溶剂提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用进行了研究,并首次对首乌藤不同溶剂提取物对α-葡萄糖苷酶抑制作用进行研究。结果发现,何首乌各溶剂提取物均具有较好的α-葡萄糖苷酶抑制作用。何首乌和首乌藤的甲醇、乙酸乙酯和石油醚提取物的IC50值由小到大的顺序为:RPMM(3.83 mg/L)、RPME(28.85 mg/L)、RPMP(62.61 mg/L)、CFPMP(212.42 mg/L)、CFPME(882.14 mg/L)、CFPMM(1 247.80 mg/L),各提取物(除CFPMM)的抑制活性均大于阳性对照Acarbose(1 081.27 mg/L)。研究结果表明,何首乌和首乌藤均具有一定的α-葡萄糖苷酶抑制作用,可以通过体内实验进一步研究两者的降血糖活性,均具有良好的潜在开发价值。该文报道工作的新颖性,已为河南大学图书馆2009年6月24日出具的第CX200906241号《科技查新报告》所证实。     

海洋微生物来源的α-葡萄糖苷酶抑制剂的筛选及性质研究

建立了α-葡萄糖苷酶抑制剂的体外筛选模型。10株海洋微生物经摇床培养得到发酵液,经大孔树脂吸附、甲醇洗脱得到粗提物;以阿卡波糖为阳性对照,用比色法（PNPG法）对粗提物进行α-葡萄糖苷酶抑制活性测定,并对产生活性代谢产物的菌株做进一步研究。结果发现：有6株菌株的代谢产物均具有不同程度的α-葡萄糖苷酶抑制作用,其中菌株N-1的代谢产物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用最强,每毫升N-1样品液中含有的活性代谢产物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用相当于5mg的阿卡波糖对α-葡萄糖苷酶的抑制作用;该活性产物具有较强的酸碱耐受性及温度耐受性,在pH值1～14、50～100℃时稳定性较好;初步分析活性代谢产物的成分并非蛋白质、氨基酸、糖类及皂苷类物质。     

桑叶黄酮抑制酪氨酸酶活性的动力学研究

采用超声波辅助法,以体积分数为60%的乙醇水溶液从新疆桑叶粉末中提取桑叶黄酮。以L-多巴为底物,采用酶动力学方法研究该提取物对酪氨酸酶的抑制作用。实验结果表明,桑叶黄酮提取物对酪氨酸酶有较强的抑制作用,其IC50为0.2 g·L-1。其对酪氨酸酶的抑制作用表现为可逆效应,抑制类型为混合型抑制,对游离酶的抑制常数(KI)和对酶-底物络合物的抑制常数(KIS)分别为366和873 mg·L-1。DPPH实验显示新疆桑叶黄酮提取物具有一定的抗氧化作用,对DPPH自由基氧化作用相对活性的IC50为25 mg·L-1,与VC效果相当。     

感应草多糖的化学组成与生物活性研究

对感应草多糖的化学组成与生物活性进行研究,采用水提醇沉法、脱色脱蛋白透析处理,得到粗多糖、脱色多糖和精制多糖,测定多糖的主成分含量,采用薄层色谱法(TLC)及柱前衍生化-高效液相色谱法(HPLC)分析多糖的单糖组成,测定多糖对DPPH·和ABTS~+·的清除能力、还原能力以及对α-葡萄糖苷酶和DPP-Ⅳ酶的体外抑制作用。感应草多糖由5种单糖组成,对DPPH·和ABTS~+·均有清除作用,具有还原能力,对α-葡萄糖苷酶和DPP-Ⅳ酶均有抑制作用。相关性分析表明,多糖的糖含量、糖醛酸含量、还原糖含量和蛋白质含量与其抗氧化活性、α-葡萄糖苷酶抑制活性均无显著相关性。感应草多糖具有抗氧化活性和α-葡萄糖苷酶及DPP-Ⅳ酶抑制活性。     

朱砂七提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用

分别提取朱砂七鞣质和朱砂七多糖,以对硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷(pNPG)为底物,考察朱砂七提取物对α-葡萄糖苷酶活性的影响.结果发现,两种提取物对α-葡萄糖苷酶均具有抑制作用,其中朱砂七鞣质的抑制作用较朱砂七多糖更强;朱砂七鞣质和朱砂七多糖对α-葡萄糖苷酶活性的最大抑制率分别为91.3％和41.18％,IC50值分...     

山胡椒抑制体内外α-糖苷酶活性研究

对山胡椒抑制酵母α-葡萄糖苷酶和大鼠小肠α-葡萄糖苷酶活性进行了研究。利用96微孔板法检测其α-葡萄糖苷酶抑制活性。结果表明,抑制酵母α-葡萄糖苷酶实验中,山胡椒石油醚部位(IC50=229.70μg/mL)、乙酸乙酯部位(IC50=259.10μg/mL)和正丁醇部位(IC50=165.80μg/mL)活性低于阳性对照Acarbose(IC50=1081.27μg/mL);抑制大鼠小肠α-葡萄糖苷酶实验中,仅有乙酸乙酯部位(IC50=418.17μg/mL)具有活性,阳性对照Acarbose未检测出其IC50。实验证明,山胡椒各提取部位具有较好抑制酵母α-葡萄糖苷酶活性,但只有乙酸乙酯部位具有良好的大鼠小肠α-葡萄糖苷酶抑制活性。     

金盏银盘提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用研究

对金盏银盘醇提取物用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇进行萃取,测定各部分的酶抑制活性,并初步对金盏银盘酶抑制的动力学进行研究。结果表明:乙酸乙酯部位具有较高的α-葡萄糖苷酶抑制活性,其抑制成分在35～55℃具有较高的稳定性,最佳作用浓度为45μg/mL,且抑制作用迅速。     

ARTP诱变黑曲霉高产β-葡萄糖苷酶的研究

通过ARTP技术操作快速获得突变菌株,提取纤维质中的β-葡萄糖苷酶产菌,进行产酶液体发酵并提取粗酶液,结果可见35～80℃时底物与酶液反应,得酶活性最大数值100%,β-葡萄糖苷酶促反应最为适宜的温度65℃。测定酶活性,最大100%,β-葡萄糖苷酶酶促反应最为适宜pH为4.5。50℃进行酶活性测量,得到100%。实验得出,β-葡萄糖苷酶120min保温之后酶活性可达61.6%。酶液稀释,测量酶活性,最大数值100%。β-葡萄糖苷酶最为稳定状态的ph值为3.0～l0.0,在ph值低于11.0时,β-葡萄糖苷酶活性下降,相对活性90.6%。β-葡萄糖苷酶最为适宜的反应温度为65℃。5mmol/L浓度之下得出不同金属离子,测量酶活性,得100%。Mn~(2+)对酶活性促进作用最强。Cu~(2+)抑制作用最强,此次研究证明β-葡萄糖苷酶pH较为稳定,热稳定性较好,应用价值较大。     

一种转葡萄糖苷酶基因的克隆表达及其生物催化合成α-熊果苷

通过一步法克隆试剂盒将来自野油菜黄单胞菌的转葡萄糖苷酶基因与表达载体pET28a同源重组,构建质粒pET28a-agl,并转化到不同感受态细胞中,筛选出高效表达转葡萄糖苷酶的基因工程菌E.coli BL21 Gold(DE3)plysS pET28a-agl,以催化合成α-熊果苷。利用IMAC亲和层析,获得转葡萄糖苷酶用于其酶学性质的研究。催化合成α-熊果苷的较佳反应条件为:转葡萄糖苷酶的质量浓度0.272 5 g/L,对苯二酚质量浓度11 g/L,麦芽糖浓度1.1 mol/L,磷酸盐缓冲液浓度100 mmol/L(pH=6.5),30℃下摇床反应3 h。研究发现,反应产物α-熊果苷对转葡萄糖苷酶反应有轻微的抑制作用;1 mmol/L K~+对转葡萄糖苷酶的相对酶活有提高作用,1 mmol/L Cu~(2+)几乎能完全抑制该酶活性。     

植物乳杆菌来源的α-葡萄糖苷酶抑制剂的分离纯化

通过薄板层析、硅胶柱层析等方法对植物乳杆菌ST-III发酵豆浆中的α-葡萄糖苷酶抑制剂进行了分离纯化,通过质谱鉴定确定其分子量。结果表明,经分离纯化,得到两种α-葡萄糖苷酶抑制剂组分F1和F2,其分子量分别为271.1和255.1,对α-葡萄糖苷酶抑制作用的IC50分别为0.41 mg/m L和0.65 mg/m L。结果显示植物乳杆菌ST-III发酵豆浆是一种优良的α-葡萄糖苷酶抑制剂来源,具有潜在的抗高血糖作用。     

植物乳杆菌来源的α-葡萄糖苷酶抑制剂的分离纯化

通过薄板层析、硅胶柱层析等方法对植物乳杆菌ST-III发酵豆浆中的α-葡萄糖苷酶抑制剂进行了分离纯化,通过质谱鉴定确定其分子量。结果表明,经分离纯化,得到两种α-葡萄糖苷酶抑制剂组分F1和F2,其分子量分别为271.1和255.1,对α-葡萄糖苷酶抑制作用的IC50分别为0.41 mg/m L和0.65 mg/m L。结果显示植物乳杆菌ST-III发酵豆浆是一种优良的α-葡萄糖苷酶抑制剂来源,具有潜在的抗高血糖作用。     

新疆药桑叶中五种活性成分的薄层色谱鉴别

目的:建立新疆药桑叶中同时鉴别五种活性成分的薄层色谱方法。方法:分析不同薄层板、检视方式、展开剂、显色剂对五种活性成分分离的影响。结果:在366nm下以V(甲苯):V(乙酸乙酯):V(甲醇):V(甲酸)=10:3:5:3.5为展开剂在硅胶G高效板上展开,1%三氯化铝为显色剂,药桑叶中芦丁、槲皮素、异槲皮苷、紫云英苷和绿原酸五种成分均得到有效的分离,斑点圆整、清晰,比移值在0.2~0.8之间,符合薄层层析要求。结论:此试验为新疆药桑叶的质量控制提供快速的鉴别方法。     

黄茶多糖的降糖活性研究

利用水提醇沉的方法将黄茶用热水提取后再用70%和90%乙醇沉淀得到70和90部位的粗多糖,进一步脱蛋白、透析、浓缩、冻干后得到的多糖分别命名为YT70和YT90。通过测定黄茶多糖在体外对α-葡萄糖苷酶以及α-淀粉酶的抑制率来考察其降血糖活性,结果表明YT70和YT90均具有一定的降糖活性,并且能选择性抑制α-葡萄糖苷酶。     

五种中草药水溶性多糖对α-葡萄糖苷酶活性的影响

从山茱萸、知母、甘草、地榆及诃子中提取水溶性多糖,并通过酶抑制动力学反应考察其对α-葡萄糖苷酶活性的影响。酶动力学反应结果表明:地榆多糖对α-葡萄糖苷酶有激活作用;知母多糖对α-葡萄糖苷酶的活性随时间的变化先激活后抑制;山茱萸多糖、甘草多糖及诃子多糖均对α-葡萄糖苷酶有抑制活性,其中抑制活性最好的是甘草多糖,其抑制率为72.5%;其各自的影响机理还有待进一步研究。     

腐殖SBR工艺中β-葡萄糖苷酶和脂肪酶活性的研究

为考察腐殖生态基填料对活性污泥中β-葡萄糖苷酶和脂肪酶活性的影响,在常温下将内置和外置腐殖生态基填料的SBR工艺(HS-SBR)与传统SBR工艺(cSBR)进行对比研究,探讨不同反应器中β-葡萄糖苷酶和脂肪酶活性变化规律,以期从酶学角度为腐殖生态基的推广和使用提供更多的理论基础。研究表明:内置、外置HS-SBR反应器内β-葡萄糖苷酶的活性在整个运行过程中均高于c SBR反应器,其中内置、外置HS-SBR反应器中β-葡萄糖苷酶在运行过程中的平均活性分别比c SBR反应器高出2.58%和7.08%;内置、外置HS-SBR反应器内脂肪酶的活性在整个运行过程中均高于c SBR反应器,其中内置、外置HS-SBR反应器中脂肪酶在运行过程中的平均活性分别比c SBR反应器高出23.22%和32.79%。总体来看,添加腐殖生态基可以提高活性污泥中β-葡萄糖苷酶和脂肪酶的活性,且外置腐殖生态基填料的方式对β-葡萄糖苷酶和脂肪酶活性的强化作用更为明显。     

芳香环修饰的5-苯基-2,4-戊二烯酰哌啶的合成和活性研究

本文以巴豆酸、哌啶盐酸盐、苯甲醛衍生物为原料,通过酰卤化、酰胺化、羟醛缩合等反应,合成了芳香环修饰的5-苯基-2,4-戊二烯酰哌啶。实验通过质谱(MS)、核磁共振(1H NMR)等手段对化合物的结构进行表征。分子对接实验筛选出化合物4d与α-葡萄糖苷酶依赖于氢键和疏水作用形成相互作用。实验证明化合物有4d对α-葡萄糖苷酶具有一定的抑制作用。     

氟啶虫胺腈对桑蓟马的田间防效和家蚕的安全性评价

[目的]明确50%氟啶虫胺腈WG对桑蓟马的田间防效和对家蚕的安全性。[方法]采用喷施法测定其对桑蓟马的田间防效;食下毒叶法评价药后不同时间的桑叶对家蚕的安全性。[结果]50%氟啶虫胺腈WG以2333~500 mg/L药后3 d对桑蓟马的防效为59.10%~96.32%,其防效均优于对照药剂40%辛硫磷EC 400 mg/L,且对桑树生长无不良影响。50%氟啶虫胺腈WG药后13 d对家蚕3、4龄发育历期、眠蚕体质量、全茧量、茧层量、茧层率、蛹体质量与清水对照相比无显著性差异。[结论]50%氟啶虫胺腈wG以333~500 mg/L可有效防治桑蓟马,对家蚕的安全间隔期为13 d以上。     

两相体系中β-葡萄糖苷酶催化栀子苷水解制备京尼平

京尼平是一种天然生物交联剂,且具有多种生理活性。本文以β-葡萄糖苷酶催化栀子苷水解制备京尼平为目标体系,证明了京尼平对β-D-葡萄糖苷酶具有竞争性抑制作用;考察了β-D-葡萄糖苷酶在不同有机相-水体系中的稳定性,发现其在正辛醇-水、正己醇-水体系中的稳定性均较好;测定了栀子苷在正辛醇-水和正己醇-水体系中的分配系数kD,gardenoside分别为0.17和0.76,而京尼平的分配系数kD,genipin为42.57和37.75;分别在水、正辛醇-水和正己醇-水体系中进行栀子苷水解制备京尼平的反应,当底物浓度为0.25μmol·ml-1时京尼平收率分别为89.17%、93.96%、90.16%;进一步提高底物浓度为2.0μmol·ml-1时,正辛醇-水体系中京尼平收率高达91.9%,较水相体系(79.7%)提高了12.2%。本文的研究结果证明了采用正辛醇-水两相反应体系可部分解除产物抑制,提高产物收率,并简化后续的产物分离。     

嗜热真菌β-葡萄糖苷酶基因克隆表达与调控的研究进展

β-葡萄糖苷酶是一种糖苷水解酶,可水解纤维二糖生成两分子的葡萄糖。该酶在纤维素糖化水解过程中起关键性作用,是纤维素酶代谢途径中的限速酶。嗜热真菌因其极端的生长环境,是耐高温酶的主要来源,嗜热真菌来源的β-葡萄糖苷酶种类日益丰富。构建了含13种嗜热真菌β-葡萄糖苷酶的进化树,并对嗜热真菌中β-葡萄糖苷酶的来源、嗜热真菌β-葡萄糖苷酶基因的克隆与表达、及已知的β-葡萄糖苷酶调控因子进行了综述。